条件性免疫反应对大鼠胶原性关节炎的疗效研究

目的 :探讨条件免疫反应对大鼠胶原性关节炎的治疗作用。方法 :建立大鼠胶原性关节炎模型。将模型大鼠分为 5组 :条件免疫反应 (CIR)组 ,以樟脑气味为条件刺激 ,甲氨蝶呤 (MTX) 泼尼松 (Pred)为非条件刺激 ,两者结合 7次 (7天 )后可建立条件免疫反应 ,然后每日再现条件刺激 ,每周条件刺激与非条件刺激结合 1次 ,共 4周 ;MTX Pred组 ,MTX Pred治疗 4周 ;MTX Pred减量组 ,MTX Pred治疗 7天内每天 1次 ,7天后每周 1次 ,共 4周 ;单纯闻樟脑气味组 ,单纯闻樟脑气味 4周 ;空白对照组 ,安慰剂治疗 4周。观察指标为关节炎指数评分、足掌体积、运动平衡能力、踝关节的X线改变、滑膜及肝脏病理改变。结果 :条件免疫反应组与MTX Pred组大鼠的足掌肿胀程度、滑膜炎症反应、运动功能明显改善 ,与MTX Pred减量组、单纯闻樟脑气味组相比较 ,差异显著 (均P <0 0 5 ) ,前两组之间无显著差异 ;条件免疫反应组与MTX Pred组相比 ,肝组织损害明显减轻 (P <0 0 1)。结论 :条件免疫反应可以抑制胶原性关节炎大鼠的足掌肿胀程度、抑制滑膜炎症反应、改善运动功能、减少药物用量 ,从而减轻肝脏损害等毒副作用     

通痹灵对于IL-2及其受体α链影响的体内外研究

从体内体外两个方面 ,研究通痹灵对于CIA大鼠关节滑膜原代细胞分泌IL 2 ,以及通痹灵总碱对于IL 2受体α链CD2 5表达的影响。体内实验采用CIA大鼠动物模型。容积法测量足肿胀度 ,原代滑膜细胞培养、放免法检测培养液上清 ,观察通痹灵对滑膜内IL 2的影响 ;体外实验 ,分离大鼠淋巴细胞 ,佛波醇酯 (PDB )或刀豆蛋白 (ConA )体外刺激 ,双色免疫荧光标记 ,流式细胞仪检测 ,观察通痹灵总碱对CD3+CD2 5 +表达的影响。结果是体内实验 ,通痹灵高剂量可明显减轻CIA大鼠的足肿胀度 ,与MTX比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,通痹灵高、低剂量可明显抑制CIA大鼠滑膜内IL 2的合成 (P <0 0 1) ;体外实验 ,通痹灵总碱显著抑制ConA刺激下的CD3+CD2 5 +的表达 ,而对PDB加ionomycin没有明显作用。提示通痹灵可以通过抑制IL 2合成及ConA激活的IL 2受体α链CD2 5信号转导通路 ,减轻局部关节的炎症 ,为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据     

II型胶原蛋白对CIA大鼠外周血CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞的影响

目的:观察Ⅱ型胶原蛋白对胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg)的影响。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型。采用流式细胞术分别检测正常对照组、模型组、Ⅱ型胶原蛋白治疗组和雷公藤多苷组大鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg的水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠外周血CD4+T细胞亚群中CD25+FOXP3+Treg的水平明显下降(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,Ⅱ型胶原蛋白治疗组大鼠外周血CD25+FOXP3+Treg显著升高(P<0.05或P<0.01);而CD25+FOXP3-T细胞和CD25-FOXP3+T细胞的水平则明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:II型胶原蛋白治疗CIA大鼠的可能途径是升高外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg的水平。     

甲氨喋呤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜骨桥蛋白和整合素αVβ3表达的影响

目的 探讨甲氨喋呤对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及其受体整合素αvβ3表达的影响及其作用机制.方法 建立CIA大鼠模型,分为模型组和甲氨喋呤(MTX)组,后者用MTX进行干预治疗;采用免疫组织化学染色技术检测滑膜组织OPN和整合素αvβ3的表达,ELISA方法检测血清TNF-α水平.结果 ① CIA模型组和MTX组大鼠的滑膜OPN、整合素αvβ3表达均明显高于正常大鼠对照组(均为P<0.01);与模型组比较,MTX组OPN和整合素αVβ3的表达减少(均为P<0.01). ②正常对照组和MTX组大鼠血清TNF-α水平显著性低于模型组大鼠(均为P<0.01).结论 滑膜OPN和整合素αvβ3异常表达在CIA发病中具有重要意义.MTX通过下调滑膜OPN和整合素αvβ3的表达,降低血清TNF-α水平从而达到治疗CIA的作用.     

芬戈莫德对卒中后抑郁大鼠的治疗作用

目的:观察芬戈莫德(FTY720)对卒中后抑郁(PSD)大鼠的治疗效果并初步探索其作用机制。方法:50只SD大鼠依照随机对照方法分为5组,分别为假手术组(sham)、卒中组(MCAO)、卒中后抑郁组(PSD)、氟西汀治疗组(PSD+FLU)以及芬戈莫德治疗组(PSD+FTY)。采取大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,联合慢性不可预见的温和性应激(CUMS)及孤养法建立PSD模型。记录大鼠每周体重,运用敞箱实验和糖水偏好实验评估大鼠的行为学表现; HE染色观察大鼠海马组织形态; ELISA检测大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量; Western Blot检测大鼠海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;流式细胞术检测大鼠外周血T细胞亚群水平。结果:与sham组和MCAO组相比,PSD组大鼠体重、敞箱实验得分及糖水偏好比例显著减低(P 0.05),HE染色显示海马组织CA1和CA3区呈现细胞萎缩和数量减少等现象,大鼠血清及海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著增高(P 0.05),大鼠外周血CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞的数量升高(P0.05);与PSD组相比,PSD+FTY组大鼠体重、敞箱实验得分及糖水偏好比例显著升高(P 0.05); HE染色显示海马组织CA1和CA3区细胞损伤现象减少;大鼠血清及海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著降低(P 0.05);大鼠外周血CD3~+、CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+T细胞的数量均显著减低(P 0.05)。结论:FTY720能够有效改善海马组织损伤进而缓解PSD大鼠的抑郁行为,其机制可能是降低外周血T细胞数量从而进一步降低了血清及海马组织中IL-1β、IL-6与TNF-α水平。     

SIRT1/HIF-1α信号通路介导IL-38改善胶原诱导性关节炎大鼠Th17/Treg失衡

目的 探讨IL-38对胶原诱导性关节炎大鼠Th17/Treg失衡的调节作用,明确SIRT1/HIF-1α信号通路在其中的作用.方法 SPF级SD大鼠40只,随机分为正常对照组(CON组)、CIA模型组(CIA组)、CIA+IL-38(5ng/g)组(IL-38组)和CIA+IL-38(5ng/g)+SIRT1 抑制剂(1 μ g/kg)组(SIRT1i组).观察大鼠后足及关节情况,关节指数评分评估大鼠症状,流式细胞术检测Th17/Treg细胞变化,qRT-PCR检测Th17/Treg相关基因的表达情况,免疫荧光及Western blot检测SIRT1、HIF-1α、myd88、NF-κB的表达变化.结果 IL-38可显著降低大鼠关节炎积分,改善大鼠关节肿胀程度(P＜0.05);IL-38干预后,脾MNCs CD4+CD25+Foxp3+细胞的细胞百分数及Treg/Th17细胞比值较CIA组回升,CD4+IL-17A+细胞的细胞百分数有所回落(P＜0.05);IL-17、IL-21、IL-22、TGF-β 表达下降,IL-10表达升高(P＜0.05);上调SIRT1 表达,下调HIF-1α、myd88、NF-κB的表达(P＜0.05);而SIRT1抑制剂逆转了上述结果.结论 IL-38可通过SIRT1/HIF-1α信号通路调节Th17/Treg失衡对胶原诱导性关节炎大鼠起到保护作用.     

黄芩苷通过PI3K/Akt/mTOR通路参与子痫前期 大鼠免疫状态及炎症反应的调控及机制

目的：研究黄芩苷对子痫前期大鼠免疫状态及炎症反应的调控机制及PI3K/Akt/mTOR 信号通路的影响。 方法：雌性大鼠随机分为对照组、模型组和处理组。处理组和模型组大鼠妊娠13~21 d 时给予L- 精氨酸甲酯,治 疗组大鼠于妊娠17~21 d 时给予黄芩苷注射液,对照组和模型组大鼠具给予等量的生理盐水,3 组均持续给药至 妊娠21 d。妊娠21 d 时,采用电脑尾袖式血压计测定各组大鼠血压;采用全自动生化分析仪测定各组大鼠血清中 尿素氮（BUN）水平;测定大鼠血清中和胎盘中炎症因子白细胞介素（IL）-6、IL-1β 和肿瘤坏死因子-α（TNF-α） 水平;采用蛋白免疫印迹法测定大鼠胎盘组织中Akt 和mTOR 蛋白含量、尿蛋白水平和炎症介质NF-κB和IκB-α 蛋白表达水平;采用RT-qPCR 法测定大鼠胎盘组织中α7nAChR RNA表达水平;采用流式细胞仪测定各组大鼠全 血中T 淋巴细胞的比例。结果：模型组大鼠舒张压、收缩压、BUN和尿蛋白水平显著高于对照组,处理组舒张 压、收缩压、BUN和尿蛋白水平与模型组相比均显著降低;模型组大鼠IL-6、IL-1β 和TNF-α 水平显著高于对照 组,处理组IL-6、IL-1β 和TNF-α 水平与模型组相比均显著降低;模型组大鼠Akt 和mTOR 蛋白表达水平显著低 于对照组,处理组Akt 和mTOR 蛋白表达水平与模型组相比均显著升高;模型组大鼠NF-κB和IκB-α 蛋白表达水 平显著高于对照组,处理组NF-κB和IκB-α 蛋白表达水平与模型组相比均显著降低;模型组与对照组胎盘组织中 α7nAChR RNA表达水平相当,处理组大鼠胎盘组织中α7nAChR RNA表达水平显著高于模型组和对照组;模型 组大鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ 水平均显著高于对照组,CD8+ 水平显著低于对照组;处理组大鼠与模型组相比, CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ 水平均显著降低,CD8+ 水平显著升高。结论：黄芩苷可以通过促进PI3K/Akt/mTOR 信 号通路抑制机体炎症反应,改善机体免疫功能。     

骨痨愈康丸通过JAK/STAT信号通路对类风湿关节炎大鼠滑膜组织的影响

目的：观察骨痨愈康丸（GLYK）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠滑膜组织的影响,探讨GLYK治疗类风湿关节炎的作用机制。方法：将70只Wistar大鼠,随机分为正常对照（control）组、CIA组、甲氨蝶呤（MTX）组、GLYK组、GLYK+Janus激酶（JAK）受体酪氨酸激酶抑制剂AG490(GLYK+AG490)组和AG490组。除control组外,其余5组建立CIA大鼠模型,每组10只。用药4周后,观察各组大鼠踝关节病理形态;ELISA法检测关节液中白细胞介素6(IL-6)、IL-17、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和基质金属蛋白酶3(MMP-3)水平;RT-qPCR与Western blot检测各组大鼠踝关节滑膜组织中JAK2、JAK3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)和SOCS3的mRNA及蛋白表达。结果：CIA组大鼠关节液中IL-6、IL-17、IL-1β、TNF-α和MMP-3的水平、滑膜组织中JAK2、JAK3和STAT3蛋白及相关mRNA的表达较control组显著升高（P<0.01）,SOCS1和SO...     

甘草次酸对胶原诱导性关节炎滑膜成纤维样细胞炎症细胞因子表达和分泌的影响

目的:观察甘草次酸(GA)对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜成纤维样细胞(CIA-FLS)TNF-α、IL-1β表达分泌的影响,并观测与传统治疗药物MTX联合应用后的效果。方法:组织块培养法体外分离纯化CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS细胞。实验分为空白组、MTX组、GA组和GA+MTX组4组,分别对CIA-FLS细胞进行体外药物干预实验。每组分别干预1、3、5 d。Real time qPCR法检测各组CIA-FLS细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平。结果:药物干预1 d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预3 d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),3组组间差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预5 d,CIA-FLS MTX、GA、GA+MTX均可明显抑制TNF-α、IL-1β表达(P<0.05),处理组间差异有统计学意义,按照强弱依次是GA+MTX>MTX>GA(P<0.05)。MTX、GA、GA+MTX抑制TNF-α、IL-1β表达均呈时效依赖性,作用时间延长,抑制作用越明显(P<0.05)。结论:GA、MTX、GA+MTX对CIA-FLS炎症因子TNF-α、IL-1β表达和分泌的抑制作用依次递增,并呈时间依赖性。     

胆碱能抗炎通路在电针预处理调控脑缺血再灌注大鼠小胶质细胞活化状态中的作用

目的:观察电针预处理对大鼠脑缺血再灌注后小胶质细胞活化状态的影响并探讨其机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为7组,分别为假手术组(Sham),脑缺血再灌注组(MCAO),电针(EA)+MCAO组,烟碱型乙酰胆碱受体α7亚单位(α7nAChR)PHA-543,613+MCAO组,溶剂(Vehicle)+MCAO组,α7nAChR抑制剂α-BGT+EA+MCAO组,溶剂+EA+MCAO组。脑缺血再灌注后3 d取材,运用Western Blot技术以及免疫荧光技术检测脑缺血半暗带小胶质细胞经典激活状态(M1型)及选择性激活状态(M2型)特异性标志分子的表达水平。结果:(1)与MCAO组比较,电针预处理组(EA+MCAO)M1型小胶质细胞标志分子iNOS表达下调(P0.05),M2型小胶质细胞标志分子Arginase表达上调(P0.05);(2)α7nAChR激动剂PHA-543,613可模拟电针预处理的作用,使小胶质细胞由M1型向M2型转化;α7nAChR抑制剂α-BGT逆转了电针促进小胶质细胞由M1型向M2型转化的作用。结论:电针预处理可以使脑缺血再灌注后小胶质细胞由M1型向M2型转化,α7nAChR参与了电针预处理对小胶质细胞活化状态改变的过程。