广西2004-2008年狂犬病高发因素分析

目的分析广西2004-2008年狂犬病流行病学特征和2006--2008年健康犬脑带毒检测结果,探讨广西狂犬病高发因素及相关性。方法收集分析2004--2008年广西疾病监测信息系统和全国狂犬病监测系统资料,DFA和RT-PCR法检测2006--2008年健康犬脑标本。结果2004—2008年间广西共报告狂犬病2463例,年发病率0．98／10万。疫情波及95个县,高发县数量减少,低发县数量增多,中西部地区疫情增长迅速。病例四季没有显著高峰。高发人群为农民、儿童和散居儿童,〈20岁和≥40岁发病较多。病例犬伤占83．79％;病例多为Ⅲ级暴露,占78．5％;受伤部位上下肢占83．17％,头面颈部占10．56％。67．88％的病例未处理暴露伤口,18．31％注射狂犬疫苗,3．63％Ⅲ级暴露病例注射被动免疫制剂;潜伏期的中位数为60d。2006--2008年健康犬脑狂犬病毒RT—PCR检测阳性率分别为1．92％、0．93％和0．89％。结论暴露后处置未能规范实行、地域内存在大量的狂犬病毒感染的健康犬是广西狂犬病高发的两个重要因素。     

2011年云南楚雄地区狂犬病疫情分子流行病学研究

目的 针对2011年发生于云南楚雄地区的狂犬病疫情开展分子流行病学调查分析.方法 通过直接免疫荧光试验(DFA)和RT-PCR方法对采集样本进行检测.采用DNAstar中MegAlign软件和MEGA 3.1软件Neighbour-joining(NJ)方法分别进行病毒样本N基因的同源性分析和系统进化分析.结果 在23份脑组织或脑脊液标本中,11份实验室检测结果为阳性,阳性率为47.8％.核蛋白(N)基因同源性结果表明,来自犬只的病毒样本与基因Ⅰ型Asia 1a亚型病毒同源性最高,核苷酸同源性为99.2％ ～ 99.4％之间,与Asia 2c基因亚型病毒核苷酸同源性为88.5％～89.6％.进化树分析结果表明,本研究分离到的病毒样本与Yunnan-ZT07处于同一进化分支内.结论 引发本次疫情的狂犬病毒属于基因Ⅰ型Asia 1a亚群,且此次疫情可能与2007年云南昭通流行毒株Yunnan-ZT07的输入关系密切.     

湖南3县(市)狂犬病病毒分子生物学研究

目的研究湖南省狂犬病高发区和无病例区动物携带狂犬病的分子生物学特征。方法用直接免疫荧光法检测犬唾液及犬、猫脑标本，以RT．PCR法复核阳性进行遗传学分析。结果武冈市和洞口县送检的82只和17只犬中，分别有12只和1只检测到狂犬病毒抗原与核苷酸阳性，阳性率分别为14．63％和5．88％。凤凰县67份大脑标本未检测出病毒。28份猫脑组织标本也未检测出狂犬病毒。用RT-PCR法扩增阳性大脑组织（编号为Wg13，Dk13）的狂犬病毒N基因，两株病毒之间核苷酸与氨基酸的同源性分别为99、4％及99．1％；Wg13株与中国疫苗株CTN株和aG株的核苷酸同源性（氨基酸）分别为89．4％（98．2％）、86．1％（95．1％）；Dk13株与中国疫苗株CTN株和aG株的核苷酸同源性分别为89．1％（98．0％）、86．1％（94．9％）。与其他国家分离到的狂犬病毒相比，两株病毒与印度尼西亚的同源性最大，分别为92．8％、93．2％，而与印度、日本及斯里兰卡等其他国家同源性相对较小。结论两株狂犬病毒均为I型狂犬病毒。其N基因的核苷酸序列与当前使用的疫苗株相比，两株病毒与CTN疫苗株分在同一组，同源性较大。     

中国狂犬病高发地区狂犬病毒磷蛋白基因特点分析

目的 调查研究中国狂犬病高发地区狂犬病毒磷蛋白P基因遗传变异情况,分析其结构特点.方法 测定广西、贵州、湖南的人、犬脑组织标本狂犬病毒P基因核苷酸序列,进行序列的同源性比较和种系发生分析.结果 P基因核苷酸和推导氨基酸序列同源性分别为82.1%~100%和87.5%~100%;三省区毒株明显区别于其他国家地区分离株;PP主要功能位点未发生影响P基因生物学功能的变异.结论 三省区狂犬病毒同属于基因1型,具有共同的进化途径和基因结构特点;病毒分布具有独特的中国地域性特征;中国湖南省个别毒株可能和泰国毒株来源于共同的狂犬病毒.     

重庆市2004—2007年狂犬病疫情分析

目的分析狂犬病的疫情形势,为制定防治方案提供依据。方法应用传染病疫情信息报告病例数据调查犬只密度变化及犬伤人等因素,分析疫情变化特征和流行因素。结果2004—2007年．全市共报告狂犬病病例227例,病例数由2例增加至191例,发病率和死亡率由0．0065／10万上升至0．6161／10万,逐年显著上升2。5．8倍,病死率为100．0％;1—85岁之间均有病例发生,以25～64岁居多（48．9％）,其次是学龄儿童（17．2％）和65岁以上人群（15．9％）;病例职业以农民为主（57．7％）,其次是学生（21．1％）;发病区县由1个增加至30个,疫情由东向西蔓延,由农村进入城区。调查了6个县8470户2004—2006年的犬密度,由1．0只／户显著上升至2．3只／户,免疫犬仅占20．0％;犬伤人率由0．97％显著上升至4．44％。结论重庆市狂犬病病例不断增多,疫情地区不断扩大,疫情形势严峻。周边省份疫情、犬密度增大、犬伤人率增加等是狂犬病流行的重要因素,应加强犬的“灭、管、免”等措施。     

广州市1997—2007年狂犬病流行状况与防制对策

目的分析广州市狂犬病的流行趋势及特征，探讨疫情回升的原因，提出预防控制措施。方法收集广州市1997—2007年的疫情报告资料及病例个案调查表进行分析。结果1997—2007年广州市共报告44例狂犬病，其中男32例，女12例，发病年龄最小7岁，最大80岁，发病人群以农村居民和学生为主，夏秋季节多发。1997—2004年仅发生9例，而近3年上升至35例，2007年达到最高峰。共14例。病例主要分布在增城市，但近年向邻近的萝岗、黄埔等地区扩散。结论农村地区养犬数多，犬只免疫有效率低，人用狂犬病疫苗及免疫球蛋白价格过高，群众防病意识淡薄等是疫情回升的主要原因。落实狂犬病综合防制措施，控制传染源，提高农村地区犬只免疫保护率是降低狂犬病发病率最根本的措施。     

2006-2010年清远市狂犬病流行特征与防制策略分析

目的了解清远市狂犬病流行病学特征,探讨预防控制策略。方法收集2006-2010年清远市狂犬病个案调查及疫情报告资料进行统计分析。结果 2006-2010年清远市共报告狂犬病280例,年发病率介于1.24/10万～2.11/10万之间,病死率100%,发病率呈逐年上升趋势;疫情以清远北部农村地区较为严重,10月为全年发病最高峰,≥50岁人群报告发病占52.14%,职业以农民和学生为主;90.09%的病例由犬伤引起,59.05%的病例未对伤口进行任何处理,93.53%的病例未注射狂犬病疫苗。结论近年来清远市狂犬病疫情由较偏远的县（市）向市内中心区域迅速扩散,农村是重点防控地区,加强宣传教育以及落实狂犬病综合防制措施是今后的工作重点。     

贵州省一例犬伤致人患狂犬病的病原学及病毒基因分析

目的 从病原学角度证实贵州省凯里市一起犬伤人致儿童死亡病例为狂犬病所致,了解狂犬病病毒的基因特征.方法 采用dFA实验初步检测犬和患儿脑组织狂犬病病毒抗原,以RT-nested PCR检测狂犬病病毒核酸,测定狂犬病病毒N基因全长序列,根据同源性比较及系统进化树进行分子流行病学分析.结果 dFA与RT-nested PCR检测显示犬脑和人脑组织标本均为狂犬病病毒抗原和核酸阳性.经测序拼接均得到长度为1353 bp的核苷酸序列,同源性分析显示犬脑组织(GZD)和人脑组织(GZH)检出的狂犬病病毒N基因核苷酸与推导的氨基酸同源性均为100％,与我国各省已报道的狂犬病病毒基因1型流行毒株及疫苗株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.4％～99.6％和98.2％～100％,与我省往年报道的毒株N基因核苷酸和推到的氨基酸同源性最高.此外,在与疫苗株的比较中,与CNT株的核苷酸和氨基酸同源性最高.进化树分析显示犬脑和人脑组织标本狂犬病病毒N基因亲缘进化关很近,同属于基因1型狂犬病病毒.结论 从病原学和病毒分子生物学证实了贵州省一起犬伤人致儿童死亡病例为狂犬病所致,其病原为狂犬病病毒基因1型,与疫苗毒株中的CNT毒株的亲缘进化关系最近,该起病例可能为我省境内传播,因此,应加强我省狂犬病疫区的防制工作.     

中国狂犬病N基因分子流行病学调查研究

目的通过分析近年中国狂犬病病毒流行株N基因特征和遗传变异状况,探讨我国狂犬病的流行分布与狂犬病病毒遗传变异间的关系。方法对不同流行地区、不同宿主动物来源的狂犬病标本,进行病毒N基因编码区下游720个核苷酸序列测定、序列同源性比较和种系发生分析。结果获得相应区段的狂犬病病毒核苷酸序列34份;核苷酸序列同源性87．5％～100％,推导的氨基酸序列同源性93．3％～99．6％,核苷酸序列的变异主要为同义突变。结论34个病毒标本都属于基因Ⅰ型狂犬病病毒且具有地域性特征。我国狂犬病高发病地区狂犬病病毒来源多样化,且病毒呈现从高发病地区向周边地区的传播和扩散,野生动物与家养动物之间,本国动物与外国动物之间,可能均存在着狂犬病病毒的交叉感染和相互传播。     

一种狂犬病实验室诊断用单克隆抗体制备新路线的探索

目的 探索采用合成肽作为免疫原制备狂犬病实验室诊断用单克隆抗体的可行性.方法 以狂犬病病毒CVS-11核蛋白355-369位B细胞线性抗原表位合成肽与钥孔戚血蓝蛋白（Keyhole Limpe hemocyanin,KLH）大分子耦联后免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体.采用间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）和间接荧光试验（indirect fluorescent assay,IFA）筛选和鉴定杂交瘤细胞株.结果 经过对杂交瘤细胞株上清的间接ELISA和IFA筛选获得阳性杂交瘤细胞株2B1D11,该杂交瘤细胞株产生的抗体经纯化后在IFA中可以有效检出感染犬脑组织和BHK-21细胞的狂犬病病毒.结论 采用合成肽作为免疫原制备狂犬病实验室诊断用抗体在技术上是可行的.     

Recent emergence of the Arctic rabies virus lineage

The rabies viruses that circulate in Arctic countries and in much of northern and central Asia are phylogenetically closely related and collectively referred to as the Arctic/Arctic-like (AL) lineage. The emergence and spread of this lineage is of significant interest given that rabies remains a serious zoonotic disease in many parts of Asia, especially in India where the prevalence of dog rabies leads to frequent human exposures and deaths. Previous molecular epidemiological studies of rabies viruses in India identified the AL lineage as the type circulating across much of the country. To further explore the relationship of Indian and Arctic rabies viruses, a collection of samples recovered from Rajasthan state in northern India was characterised at the N gene locus. Combination of these data with a larger collection of samples from India, central/northern Asia and the Arctic has permitted detailed phylogenetic analysis of this viral lineage and estimation of its time-frame of emergence. These analyses suggest that most current Indian viruses emerged from a common progenitor within the last 40 years and that the entire Arctic/AL lineage emerged within the last 200 years, a time-frame in accord with historical records of the invasion of Canada by the Arctic clade.     

International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques

Interlaboratory trials on rabies diagnosis were organised in 2009 and in 2010 by the European Union Reference Laboratory (EURL) for rabies. In 2009, two panels of virus samples were sent to participating laboratories to compare results on reference diagnosis techniques and on RT-PCR. A single panel was sent in 2010 to test FAT (fluorescent antibody test), RTCIT (rabies tissue culture infection test) and RT-PCR techniques. The virus panels included the RABV, EBLV-1, EBLV-2 and ABLV strains. Results revealed that laboratories produced the highest proportion of concordant results using RT-PCR (90.5%) and FAT (87.1%), followed by RTCIT (70.0%) and MIT (35.0%) in 2009 and in FAT (85.0%) and RT-PCR (80.6%) followed by RTCIT (77.3%) in 2010. Errors were only observed in bat strains (i.e. none in the RABV strain) for the RT-PCR or FAT techniques, highlighting the need to improve diagnosis most specifically in such strains. RT-PCR was the technique showing the lowest rate of false negative results in either trial year, while RTCIT and MIT (performed in 2009 only) were the techniques with the lowest proportion of false positive results. Nevertheless, the FAT technique represented a good compromise with both satisfactory sensitivity and specificity, as only a few false positive (1.6% in 2009, 5.8% in 2010) and false negative results (1.6% in both 2009 and 2010) were detected. The analysis of technical questionnaires describing the protocols used by participating laboratories revealed variation in the methods used that may induce inconsistencies in the results. In this study, the number of readers for FAT slide examination was identified as a factor affecting significantly the results of laboratories, suggesting that two independent readers are necessary for routine rabies diagnosis. Our findings highlight the need for all rabies diagnostic laboratories to improve harmonisation of procedures.