巨噬细胞源性生长因子对培养的动脉平滑肌细胞细胞周期进程的影响

以兔腹腔巨噬细胞条件培养基作为生长因子的来源，用流式细胞计及显微分光光度计测定细胞群体内单个平滑肌细胞内DNA含量，结合相差显微镜观察，研究其对培养的平滑肌细胞细胞周期进程的影响。结果表明，用贫血小板血清培养基使平滑肌细胞生长受抑制时，细胞周期进程既受阻于G0／G1期，亦受阻于G2期；条件培养基可促进平滑肌细胞从G0／G1期进入S期和由G2期进入M期。     

大黄素对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和cyclin D1表达的影响,探讨大黄素抑制平滑肌细胞增殖的作用机制。方法 取对数增长期的平滑肌细胞同步于G0期,药物组:加入含37.5mg·L-1大黄素10％胎牛血清的培养液,对照组:仅加入10％胎牛血清的培养液;作用12、24、36、48 h后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期时相和cyclin D1表达的测定。结果 与对照组比较,药物组在各相同时间点C0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,且随着时间的延长差值增大,cyclin D1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期。结论 大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调,cyclin D1表达,从而阻滞细胞周期进程。     

阿司匹林对高糖和高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨阿司匹林对高糖和高胰岛素诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及相关机制。方法：组织贴块法培养原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞, 用高糖和高胰岛素诱导细胞增殖。实验设对照组、高糖和高胰岛素组(HGI)、HGI +阿司匹林（0.5,1.25,2.50 mmol/L）组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定VSMCs增殖;一氧化氮(NO)试剂盒检测培养基上清液NO含量;流式细胞仪检测细胞周期。结果：阿司匹林呈剂量依赖性地抑制高糖和高胰岛素诱导的动脉VSMCs增殖,最大抑制作用出现在2.50 mmol/L阿司匹林培养5 d时(P<0.01);阿司匹林（2.50 mmol／L）干预可使高糖和高胰岛素导致下降的NO含量上升 (P<0.01);与高糖和高胰岛素组比较,阿司匹林(2.50 mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的VSMCs所占比例显著升高(P<0.05),而DNA合成期(S 期)细胞所占比例显著降低(P<0.05)。结论：阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制高糖和高胰岛素诱导的动脉VSMCs的增殖,抑制细胞在G0/G1期,促进动脉平滑肌细胞NO的产生。     

麝香保心丸对内皮素-1诱导原代培养的人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察麝香保心丸(SXBXW)对内皮素-1(ET-1)诱导原代培养的人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖作用的影响。方法:建立ET-1刺激原代培养人脐动脉VSMCs增殖的细胞模型,设对照组、ET-1组、ET-1+SXBXW0.25g/L组、ET-1+SXBXW0.5g/L组、ET-1+SXBXW1.0g/L组和ET-1+SXBXW2.0g/L组,采用MTT法测定ET-1和SXBXW对细胞增殖的影响;用台盼蓝拒染和乳酸脱氢酶检测方法观察不同浓度的SXBXW对VSMCs的毒性作用;用流式细胞术观察ET-1和SXBXW对VSMCs增殖周期的影响。结果:与对照组相比,ET-1可显著促进VSMCs的增殖,一定剂量的SXBXW能够有效地抑制ET-1诱导的VSMCs细胞增殖,呈剂量依赖性;SXBXW抑制细胞增殖,但对活细胞数目和乳酸脱氢酶释放量均没有影响,提示对VSMCs无毒性作用。ET-1能够刺激VSMCs从G1期进入S期,从而促进细胞增殖,而SXBXW能抑制这一作用。结论:SXBXW能够有效抑制ET-1诱导的VSMCs增殖作用,其作用机制可能与其抑制细胞周期从G1期进入S期有关。     

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠脾细胞周期与凋亡的影响

目的：研究合成含CpG基序的寡脱氧核苷酸（CpGODN）对重组乙型肝炎表面抗原（rHBsAg）免疫小鼠脾淋巴细胞细胞周期及细胞凋亡的效应。方法：采用BALB／c小鼠作为免疫实验动物，经后腿胫骨前肌免疫两次，FACS法检测脾细胞的细胞周期与细胞凋亡。结果：FACS检测结果显示，加CpGODN各组与不加CpGODN相应组比较，脾细胞细胞周期明显由G0／G1期向S期转化；细胞凋亡则呈现降低趋势。结论：CpGODN可以有效刺激免疫小鼠脾淋巴细胞细胞周期由G0／G1期向S期转化，并且有抑制细胞凋亡的效应。     

骨桥蛋白反义核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

背景:骨桥蛋白在血管损伤后新生内膜中的表达明显上调,而且能促进血管平滑肌细胞和外膜细胞的增殖、迁移。目的:探索骨桥蛋白反义核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:培养大鼠A10主动脉血管平滑肌细胞,通过MTT比色法测定骨桥蛋白反义核苷酸对平滑肌细胞增殖的影响,流式细胞仪测定骨桥蛋白反义核苷酸对平滑肌细胞周期分布的影响;通过RT-PCR方法检测血管平滑肌细胞转染骨桥蛋白反义核苷酸对增殖细胞核抗原表达的影响。结果与结论:骨桥蛋白反义核苷酸对血管平滑肌细胞的增殖有明显的抑制作用,随时间延长对细胞增殖抑制率下降。骨桥蛋白反义核苷酸主要作用于G1/S限制点,能阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期推进,从而将血管平滑肌细胞阻滞于G0/G1期,抑制血管平滑肌细胞的增殖。血管平滑肌细胞转染骨桥蛋白反义核苷酸后,增殖细胞核抗原的表达水平均较对照组降低(P0.05)?因此,得出骨桥蛋白反义核苷酸通过阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期推进,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,进而抑制血管内膜增生。     

红景天多糖对骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓细胞周期的影响

目的观察红景天多糖对骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓细胞周期的影响，并探讨其造血调控作用机制。方法用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、流式细胞术（FCM）分别检测红景天多糖对骨髓抑制贫血小鼠外周血、骨髓有核细胞、骨髓细胞周期的影响。结果中剂量和高剂量红景天多糖能明显升高外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）及骨髓有核细胞（BMCs）数，但对血小板的作用不明显。高剂量组可促进骨髓G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化，增殖指数（PI）也明显升高。结论红景天多糖可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞通过G1期的限制点，进入细胞增殖周期，加速骨髓G0／G1期细胞向S期细胞、S期细胞向G2／M期细胞的转化，促进骨髓造血细胞增殖，提高外周血象，促进骨髓造血功能的恢复。     

大豆异黄酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化的影响

目的:观察大豆异黄酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化的影响。方法:采用酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞,传至第3～6代,加入含不同浓度(0、0.1、0.2、0.4、0.8μmol/L)大豆异黄酮的DMEM培养基作用24 h,采用MTT法检测大鼠血管平滑肌细胞增殖率,采用RT-PCR法检测平滑肌22α(SM22α)mRNA、骨桥蛋白mRNA的表达,采用Western blot法检测SM22α、骨桥蛋白的表达。结果:0.1～0.8μmol/L的大豆异黄酮随浓度增加其抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用增强(P<0.05);SM22αmRNA及SM22α蛋白表达增加,骨桥蛋白mRNA及骨桥蛋白表达降低,各组间有明显差异(P<0.05)。结论:大豆异黄酮抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,同时使大鼠血管平滑肌细胞从合成表型向收缩表型转化。     

同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和增殖的影响,以期为Hcy作为动脉粥样硬化(AS)独立危验因子的分子机制提供证据。方法:体外培养大鼠血管平滑肌细胞,用不同浓度的Hcy作用于细胞24h后:(1)MTT法测定细胞的增殖率;(2)流式细胞术检测细胞周期;(3)半定量RT-PCR法检测平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;(4)透射电镜观察VSMCs的形态学特征,确定其表型转换特征。结果:Hcy可导致细胞增殖率增加;G0/G1期细胞逐渐减少,S期细胞逐渐增多;SM22α mRNA表达下调,Hcy浓度增至1000μmol/L时差异显著;透射电镜显示,高浓度Hcy作用后VSMCs胞浆中内质网、高尔基复合体明显增多、胞核大、染色质疏松。结论:Hcy促进VSMCs增殖的同时可促进其表型的转化。     

不同浓度血清对大鼠骨髓基质细胞生长的影响

目的：探讨不同浓度血清对大鼠原代培养骨髓基质细胞(BMSCs)功能的影响，寻求培养所需的适宜血清浓度。 方法： 利用MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪分析细胞生长周期及细胞凋亡的变化，PCR-ELISA法分析细胞端粒酶活性的改变。 结果： ①血清能明显促进BMSCs增殖，表现为G0/G1期细胞减少，S期细胞增加，群体细胞倍增时间缩短。②在组成BMSCs的Ⅰ型和Ⅱ型细胞发育生长过程中，血清对Ⅱ型细胞的增殖无明显促进作用；对Ⅰ型细胞，血清能明显促进细胞增殖。③短时间内血清对于BMSCs端粒酶活性无明显影响。 结论： ①对于BMSCs中不同类型的细胞采用的培养条件应因类而异。②血清对Ⅰ型细胞的增殖具有明显促进作用。③血清并不能促进Ⅱ型细胞增殖，但在短时间内对其分化亦无明显影响。     

抑制肌球蛋白轻链激酶活性对内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡失衡的影响

目的:观察抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖与凋亡失衡的影响。方法:细胞分成3组:对照组;内皮素-1组;内皮素-1+肌球蛋白轻链激酶抑制剂组(ET-1+M组)。干预72 h后,免疫印迹法测定细胞内MLCK表达水平;甘油凝胶电泳和免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平,MTT比色法及[3H]-TdR掺入法检测PASMCs的增殖情况,流式细胞仪检测PASMCs的细胞周期变化及凋亡率。结果:同对照组比较,ET-1刺激后肺动脉平滑肌细胞MLCK蛋白表达显著增强、MLC磷酸化上调、增殖增多、凋亡率明显降低(均P0.05);加入MLCK抑制剂干预后,MLCK表达明显下降(P0.05)、MLC去磷酸化显著增强、逆转了ET-1对PASMCs增殖及凋亡的影响。结论:抑制MLCK能显著逆转内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的失衡。     

阿司匹林抑制内皮素-1诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的 探讨阿司匹林（Aspirin）对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖的干预作用及可能机制。方法 经差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为7组：对照组、ET-1组、阿司匹林组、ET-1+ 阿司匹林1、2、5和10 mmol·L-1组。用四氮唑盐（MTT）法测定CFs数目,流式细胞仪检测CFs细胞周期,液体闪烁计数仪测定CFs 3H-脯氨酸掺入率,硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO含量。结果 与对照组相比,10-7 mol·L-1 ET-1能显著促CFs增值及[3H]-Proline掺入率,降低CFs生成NO2-/NO3-的量（均P < 0.01）,1～10 mmol·L-1 阿司匹林呈浓度依赖性的缓解上述变化（均P < 0.05）; ET-1能显著提高S期细胞百分率（P < 0.01）,10 mmol·L-1 阿司匹林抑制ET-1诱导S期细胞百分率上升（P < 0.01）。结论 阿司匹林抑制ET-1诱导的CFs增殖及胶原合成可能和NO生成有关。     

脱氧核酶抑制人脐动脉平滑肌细胞增殖

目的：观察增殖细胞核抗原（PCNA）基因特异性的10-23脱氧核酶（DNAzyme）对人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）增殖的影响。 方法： 设计合成针对PCNA基因起始密码AUG的DNAzyme，应用脂质体转染法将其转入体外培养的HUASMC。检测DNAzyme干预HUASMC 2 d后［3H］-TdR的掺入量；通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析HUASMC的增殖；采用流式细胞仪检测细胞周期。 结果： 1.0 μmol/L DNAzyme干预HUASMC 2 d后，［3H］-TdR的掺入量低于对照组（P<0.05）。1.0 μmol/L的DNAzyme和反义寡聚核苷酸（ASODN）组处理2、3和5 d后，MTT比色吸光度值低于对照组（均P<0.01）。DNAzyme对细胞增殖的抑制呈剂量依赖性。细胞干预2 d后，DNAzyme、ASODN和对照组的G0/G1期细胞的比率分别为73.8%、54.7%和41.1%。 结论： 针对PCNA的DNAzyme能有效抑制HUASMC的体外增殖。     

重组ACE2抑制人脐动脉平滑肌细胞Profilin-1表达及增殖

 摘要 目的：探讨重组血管紧张素转换酶2（ACE2）基因对血管平滑肌细胞前纤维蛋白-1（Profilin-1）表达及细胞增殖的影响。方法：培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC），用重组ACE2基因（rACE2）干预，进行血管紧张素II（Ang II）刺激实验，分别用MTT法、实时定量PCR及Western blot检测HUASMC增殖与Profilin-1表达。 结果：与对照组相比，经Ang II（100 nmol /L）刺激6 h后，HUASMC中Profilin-1 表达明显增高（3.50±0.30 vs. 1.00±0.10, P<0.05）。而重组ACE2基因干预显著抑制上述增加（1.73±0.12 vs. 3.50±0.30, P<0.05）。结论：ACE2基因过表达可明显逆转HUASMC中Ang II诱导的Profilin-1表达上调。     

半边莲生物碱抑制内皮素-1诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖

目的：探讨半边莲生物碱(LCLA)对内皮素-1（ET-1）诱导人脐动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖的抑制效应及其作用机制。 方法： 采用细胞计数、［3H］-TdR掺入、流式细胞术、免疫细胞化学染色及Fura-3/AM 荧光探针标记方法检测VSMC增殖；并用台盼蓝拒染、乳酸脱氢酶（LDH）检测方法观察LCLA对VSMC的毒性反应。 结果： LCLA(100、200和400 mg/L)、BQ-123(10-6mol/L)、ST(10-7mol/L)均抑制ET-1所诱导的VSMC增殖（均P＜0.05）：明显降低VSMC的细胞数目、［3H］-TdR掺入量、S期和G2/M期的数目百分比，增加G0/G1期的数目百分比；减弱细胞内增殖细胞核抗原（PCNA）的表达强度和Ca2+荧光强度；LCLA的抑制作用存在明显的剂量依赖关系，但对VSMC存活率和LDH释放量均没有影响。 结论： LCLA浓度依赖性地抑制ET-1所诱导的人脐动脉VSMC增殖，其机制与降低VSMC内Ca2+含量有关。     

Effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

Objective:To explore the effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration and on the proliferation of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells induced by endothelin-1(ET-1) in vitro. Methods:A cell culture model, [3H]-thymidine([3H]-TdR) incorporation test and confocal microscope were used to observe proliferation and intracellular free calcium concentration([Ca2+]i) of rabbit PASMC induced by ET-1 in vitro. Results:The value of [3H]-TdR incorporation in ET-1 group was increased 1.468 times higher than that in control group. Iptakalim at the concentration of 10-7mol/L,10-6 mol/L,10-5 mol/L lowered [3H]-TdR incorporation by (19.8±4.6)%, (41.2±9.5)%, (54.7±10.1)%, respectively, compared with the value of the cells treated with ET-1(P＜0.01); The intracellular fluorescence intensity of PASMC in ET-1 group was increased from 73.70±10.12 to 143.84±28.23, significantly higher than that in control group(P＜0.01); whereas with Iptakalim,the fluorescence intensity(FI) was only increased from 74.30±10.20 to 86.03±9.82, significantly lower than that in ET-1 group(P＜0.01). Conclusion:Iptakalim inhibited proliferation of PASMC and decreased intracellular free calcium concentration of cultured rabbit PASMC induced by ET-1.     

陡脉冲对恶性肿瘤细胞增殖及细胞周期的影响

观察了陡脉冲对恶性肿瘤细胞生长抑制作用及其细胞周期的影响。人卵巢腺癌 SKOV3细胞受不同剂量的陡脉冲作用后 ,分别制作细胞生长曲线和应用流式细胞术检测肿瘤细胞增殖及其对细胞周期的影响。经陡脉冲作用后的癌细胞的生长受到不同程度的抑制 ,随着陡脉冲剂量的增加 ,癌细胞的死亡率和抑制效应更加显著 ;陡脉冲选择性作用于肿瘤细胞 DNA合成、分裂期 ,出现 G0 / G1 期阻滞 ,抑制肿瘤细胞的增殖 ,陡脉冲剂量较大的实验组和对照组间比较有显著性 (P<0 .0 1)。陡脉冲对恶性肿瘤细胞具有杀伤和抑制作用 ,为其用于肿瘤治疗提供依据。     

Nrf2过表达对乙醇刺激下肝星状细胞激活与增殖及合成I型胶原的影响

 目的：探讨核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法：采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空载质粒瞬时转染,将细胞分为正常对照组、乙醇刺激组、乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组和乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组。采用RT-PCR及Western blotting方法对HSC-T6中Nrf2、I型胶原及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达水平进行检测,采用MTT法对HSC-T6细胞增殖水平进行检测,采用流式细胞术对HSC-T6细胞周期分布进行检测。结果：(1) 荧光显微镜下观察显示pEGFP-Nrf2质粒成功转染HSC-T6,转染后48h Nrf2 mRNA及蛋白表达水平较其余组显著升高（P＜0.05）。(2) 乙醇刺激组与乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组之间细胞增殖水平、I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,均明显高于正常对照组（P＜0.05）,细胞周期分布G1期比例下降,S期比例升高（P＜0.05）,而乙醇刺激+ pEGFP-Nrf2质粒组细胞增殖水平及I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平与乙醇刺激组及乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组相比均显著下降（P＜0.05）,细胞周期分布G1期比例显著上升,S期比例显著下降（P＜0.05）,呈G1/S期阻滞。结论：Nrf2过表达可显著抑制乙醇对HSC-T6 I型胶原及α-SMA mRNA及蛋白表达的促进作用,使HSC-T6细胞周期发生G1/S期阻滞,抑制乙醇诱导的HSC-T6增殖水平的升高,提示其对乙醇诱导的HSC-T6细胞活化具有负性调控作用。