强直性脊柱炎患者HLA-B27位点等位基因相关抗原的表达

目的：探讨强直性脊柱炎（AS）患者HLA-B27位点等位基因相关抗原的表达。方法：采用补体依赖性微量淋巴细胞毒法检测418例脊柱关节炎（SpAS）患者和30例正常对照HLA-B27相关抗原。结果：418例SpAS患者73例被确诊为AS,Bw6、B27（47）、B27和B7/B27/B73/B81抗原阳性率分别为31%、28%、25%和22%。在AS中,B27阳性组与B27阴性组间有不同分布,两组B27（47）、B27、B7三种等位基因有统计学意义（P〈0.01）。在66例B27阳性组中,除B13与Bw6成负相关外,Bw4与B27（47）、B7与B27之间等均成明显的正相关。结论：在AS患者中,B13与Bw6、B60/61/47/48/81（13）,B7与B27,Bw4与B27（47）,Cw1与B42B45表达联锁失衡,B27并不是AS易感的唯一因素,其他基因位点可能起增强（如Cw1及Cw2）或抑制（如B13）AS发生的作用。     

细胞因子对HLA-B27启动子的调节作用及其在强直性脊柱炎发病机制中的意义

目的： 构建含HLA-B27启动子的HeLa稳定转染细胞株，观察7种细胞因子对HLA-B27启动子及其上游NF-κB及ISRE顺式作用元件活性的调节作用，探讨强直性脊柱炎（AS）等B27相关疾病的发生机制。方法:转染HeLa细胞，抗生素筛选单克隆构建含HLA-B27启动子的稳定转染细胞株。构建HeLa-B27稳定细胞株和HeLa-NF-κB稳定细胞株，在瞬时转染pISRE-luc的HeLa细胞中加入白细胞介素1α（IL-1α）、 白细胞介素1β（IL-1β）、 肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素α（IFN-α）、干扰素β（IFN-β）、 干扰素γ（IFN-γ）和转化生长因子β（TGF-β），观察7种细胞因子对B27启动子及其上游NF-κB和ISRE作用元件的调节作用。另外在HeLa-B27 稳定细胞株培养液中同时加入3种细胞因子单克隆抗体和相应细胞因子，观察其对启动子活性的调节作用。结果:TNF-α、IFN-α、IFN-β 和 IFN-γ 均能明显增强HeLa细胞B27启动子活性。细胞培养96 h 后，IFN-β为最强的启动子诱导剂（5.4倍，P<0.05）；细胞培养8 h 内，TNF-α、IL1-α 和 IL1-β,可诱导NF-κB的活性增加30倍左右（P<0.05），IFN-α 和IFN-β 可诱导ISRE的活性增加12倍左右（P<0.05），抗TNF-α 抗体对于I类IFN 增加的B27 启动子活性没有明显的抑制作用。结论：TNF-α和IFN 可通过结合于B27 启动子中各种转录因子结合元件调控HLA-B27启动子的转录活性，IFN-β 可能在强直性脊柱炎等B27 相关的脊柱关节病的发病机制中起着重要作用。     

细胞来源和培养液成分对大鼠神经前体细胞增殖和分化的影响

在成功建立体外分离培养大鼠胚胎脑和脊髓神经前体细胞(neuron precursor cells,NPCs)的基础上,本研究设计了三种培养液组合:DF/N2、DF/B27和DF/(N2+B27),观察在不同培养液成分对胚胎脑和脊髓NPCs增殖和分化的影响。结果显示:与NF/N2組和DF/B27组相比,脑来源的NPCs在DF/(N2+B27)中增殖最快、最稳定(P<0.01),而脊髓来源的NPCs在三种培养液组合中的增殖速度无明显差异。脑和胚胎15 d脊髓来源的NPCs在DF/B27和DF/(N2+B27)中分化为神经元的比例明显高于DF/N2组合(P<0.01);取自胚胎15 d的脊髓NPCs分化为神经元和少突胶质细胞的比例均显著高于胚胎16 d的NPCs(P<0.05)。以上结果提示:(1)在培养液中同时添加N2和B27不仅可以提高体外培养的NPCs的增殖速度,同时可显著增加神经元分化的比例;(2)NPCs的分化潜能可因NPCs来源(脑或脊髓)和发育阶段的不同而有差异。     

人甲状旁腺激素N端肽中一个含有B细胞新表位的hPTH13-27片段的研究

目的研究并证明人甲状旁腺激素（hPTH）N端肽内的hPTH^13-27片段是一个新的B细胞抗原表位。方法计算机辅助分析预测hPTH^1-37和hPTH^1-84多肽片段内hPTH^13-27抗原表位的特征;制备大鼠抗hPTH^13-27-KLH多克隆抗体;酶联免疫测定（ELISA）研究hPTH^13-27抗原表位和抗体的免疫特征。结果蛋白质结构分析预测在hPTH^13-27区域含有B细胞抗原表位。hPTH^13-27单表位多克隆抗体制备成功。ELISA分析证明hPTH^13-27片段含有B细胞抗原表位,与抗体的结合效果依次为：抗hPTH^13-27抗体〉抗hPTH^1-84抗体〉抗hPTH^1-37抗体。hPTH^13-27片段与固相板结合对免疫原性影响不大。抗hPTH^13-27抗体与含hPTH^13-27片段的多肽结合良好;与不含hPTH^13-27片段的多肽无交叉反应。结论hPTH^13-27可能是制备hPTH N端肽抗体的核心表位片段。     

HLA—B27和强直性脊椎炎

HLA－B27与强直性脊椎炎呈强关联,但它在强直性脊椎炎中作用仍不祥,对HLA－B27分子的结构特征、抗原肽与B27亚型以及CTL细胞对抗原肽－B27复合体表位识别进行深入的研究,有助于了解其在强直性脊椎炎发病中的确切作用,本文拟就有关方面的研究进展作一综述。     

HLA-B27等位基因和亚型与强直性脊柱炎关系研究进展

大量的研究证明,强直性脊柱炎(AS)是与人类白细胞抗原(HLA)相关性最强的疾病。AS的发病与HLA-B27阳性密切相关,并与B7、B13、B40等几个等位基因有一定关系。HLA-B位点有42个等位基因,其中HLA-B27具有高度多态性,含有22个以上的亚型,不同亚型的碱基序列间只有个别差异。B27亚型在AS患者中的分布因地区和种族上的差别而不同,在中国主要以B2704和B2705为主,但以B2705分布最广。这几年大量的人B27转基因鼠实验证明AS与B27的关联性。     

HLA-B27抗血清筛选

<正>HLA-B27是人类白细胞B位点上的一个抗原,它与强直性脊柱炎（anky losing spondy litis,AS）的发病密切相关。国内外许多研究表明AS患者中95％以上为HLA-B27阳性,而正常人群中仅4％～6％左右为阳性。HLA-B27抗原检测现已作为临床诊断强直性脊柱炎的重要标志之一。目前国内大多数实验室仍采用血清学方法来检测B27抗原,因而制备一套特异性好,效价高的HLA-B27抗血清是至关重要的。我们在三年时间内收集了 3 000份产后血,进行筛选。     

大鼠大脑皮层神经干细胞培养方法比较

目的:比较不同培养基对大脑皮层神经干细胞增殖的影响,以寻找培养神经干细胞的有效方法。方法:体外分离生后24 h SD大鼠大脑皮层细胞,使用DMEM/F12+B27+bFGF、Neurobasal+B27+bFGF和Neuro-basal+B27三种培养条件,分别用悬浮培养法和贴壁培养法对细胞进行培养。免疫细胞化学技术分别以Nestin、β-TubIII和GFAP标记神经干细胞、神经元和星形胶质细胞。结果:在悬浮培养情况下,三种培养条件均诱导所培养的细胞形成神经球,经染色鉴定神经球中的细胞均表达Nestin;其中DMEM/F12+B27+bFGF培养的神经干细胞增殖速度最快(P<0.01),Neurobasal+B27培养的神经干细胞增殖效率最高(P<0.01)。在贴壁培养情况下,经染色鉴定,部分细胞表达β-TubⅢ或GFAP。结论:大脑皮层神经干细胞不适合贴壁培养,DMEM/F12+B27+bFGF条件适合大脑皮层神经干细胞体外增殖。     

IL-27通过调节淋巴细胞亚群参与干燥综合征

目的探讨IL-27对淋巴细胞亚群的调节作用,为阐明IL-27在干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)中的作用和机制提供依据。方法观察比较干燥综合征(non-obese diabetic,NOD)鼠与Il-27基因敲除干燥综合征(Il-27-/-NOD)鼠病情指标;留取鼠颌下腺组织切片并进行HE染色;采用流式细胞术检测2组鼠脾脏淋巴细胞亚群。结果与NOD鼠相比,Il-27-/-NOD鼠唾液流量下降,脾脏指数、颌下腺腺体数目明显减少;脾脏调节性T细胞(Treg)显著降低;滤泡辅助性T细胞(Tfh)和B细胞显著上调。结论Il-27缺失后鼠的干燥综合征症状加重,脾脏Treg下降,Tfh和B细胞增加,这些发现提示IL-27可能通过改变淋巴细胞亚群参与干燥综合征的发病。     

HLA-B27亚型及其与强直性脊柱炎关系的研究进展

强直性脊柱炎(AS)是与mA关联最强的疾病.HLA-B27由22个以上同种异型基因型(亚型B*2701～B*22)组成,不同亚型核苷酸序列之间只存在个别位点的差异,其亚型具有分布不同的种族和人种流行情况,以B*2705分布最广.近年来建立了大量的AS动物模型,人类B27转基因鼠实验证实B27分子是AS的原发关联成分,这种带有B27等位基因的实验动物可发生类似人类AS疾病.目前倾向于以关节源性肽假说来解释HLA-B27在AS发病中的作用.     

小鼠p27Kip1基因的克隆及与外周B细胞凋亡和生存的关系

目的：克隆小鼠的p27^kip1基因，并以此为探针分析p27^kip1在外周血B细胞中的表达，以及其在抗原受体和CD40介导的抑制和促进增殖信号中的作用。方法：从培养的B细胞中提取总RNA，用RT-PCR扩增并克隆p27^kip1基因，用流式细胞仪检测B细胞凋亡，用Northern blot观察p27^kip1mRNA的表达水平。结果：成功地克隆了小鼠的p27^kip1基因，发现抗原受体交联在引起外周血B细胞凋亡之前，出现p27^kip1表达上调，若同时激活CD40则使p27^kip1表达降低，B细胞也免于凋亡用针对p27^kip1的反义寡核苷酸处理，可阻断抗原受体交联引起的外周血B细胞凋亡。结论：p27^kip1可能在抗原受体信号介导的B细胞凋亡和CD40信号介导的B细胞生存中发挥一定的作用。     

海南地区HLA-B27及其亚型与强直性脊椎炎相关性研究

目的 通过检测海南地区20个AS患者家族的HLA-B27基因,以获得HLA-B27抗原以及基因亚型的分布情况.方法 B27抗原检测和基因亚型检测均采用序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSR)技术.结果 B27阳性者患AS的概率为57.7%,其中男女比例约为3.61,AS患者中HLA-B27阳性者占93.2%,阳性与阴性的患病比例高达141.AS患者一级亲属HLA-B27阳性率52.7%,患病率21.6%,HLA-B27阳性者其后代仍为阳性的概率55.4%;基因分型均为HLA-B2704亚型.结论 海南地区HLA-B27阳性和As发病率均与性别有关,并具有家族遗传性,HLA-B27基因亚型为132704.     

PCR-SSP法和血清学法检测强直性脊椎炎患者HLA-B27的比较

本研究采用血清学技术及聚合酶链一序列特异性引物（PCR-SSP）技术检测45例临床怀疑为强直性脊椎炎患者标本的HLA-B27。PCR-SSP以已知含/不含B27基因的DNA验证。结果为:24例采用PCR-SSP检测具有B27基因,其中19例与血清学结果一致,1例血清学结果阴性,4例血清学结果可疑;21例PCR-SSP检测无B27基因,其中1例与血清学结果一致,3例血清学结果可疑。上述结果经重复试验可信。与血清学技术比较,PCR-SSP具有可以用陈旧少量血标本试验,省时,判定结果客观等优点。     

二种加样量对流式细胞术检测HLA-B27^＋/HLA-B7^-结果的差异

人类白细胞抗原HLA—B27检测已作为强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）诊断的重要指标,但HIA—B27与HLA—B7有交叉反应,产生假阳性。因此现有流式细胞术检测时常需满足HLA—B27阳性同时HIA—B7阴性细胞的表达水平及平均荧光强度（median fluorescence intensity, MFI）来判断该指标是阳性还是阴性。     

HLA—B27亚型及其与强直性脊柱炎关系的研究进展

强直性脊柱炎（AS）是与HLA关联最强的疾病。HLA－B27由22个以上同种异型基因型（亚型：B*2701-B*22)组成，不同亚型核苷酸序列之间只存在个别位点的差异，其亚型具有分布不同的种族和人种流行情况，以B＊2705分布最广。近年来建立了大量的AS动物模型，人类B27转基因鼠实验证实B27分布是AS的原发关联成分，这种带有B27等位基因的实验动物可发生类似人类AS疾病。目前倾向于关节源性肽假说来解释HLA－B27在AS发病中的作用。     

CD27-CD70在淋巴细胞中的作用

CD27及其配体CD70属于肿瘤坏死因子-肿瘤坏死因子受体超家族,是一对共刺激分子,在T、B、NK细胞的活化、增殖中起重要作用,而且CD27通过CD70可精确地调节免疫应答的程度和持续的时间.CD27被认为是CD4+CD25+细胞(Tr)的一个标记,可以鉴别调节性和非调节T细胞;CD27在B细胞上的表达可促进生发中心的形成并存在于记忆性B细胞上.CD27分子参与调节NK细胞的增殖与活化,可能与NK细胞的自然免疫监视及NK细胞主动攻击表面表达CD70的病毒感染细胞及突变细胞密切相关.而体内体外试验均表明CD70是B细胞上的一个抑制信号,CD70可抑制浆细胞的形成,且树突状细胞上CD70的功能不能被其它共刺激分子所替代.CD27-CD70有可能成为自身免疫性疾病又一个新的治疗靶点.     

脊柱关节炎的发病机制与治疗新进展

脊柱关节炎（SpA）是指包括强直性脊柱炎（AS）、反应性关节炎,赖特综合征、银屑病关节炎、与炎性肠病相关的关节炎、幼年脊柱关节炎以及分类未定脊柱关节炎在内的一组互相关联的、与HLA-B27（简称B27）有不同程度关联的炎性关节疾病。已知遗传与环境因素均参与发病,但确切的病因与发病机制尚不明了。本文介绍遗传因子B27如何参与SpA发病的最新研究结果,如游离的B27重链的作用、调控细胞对细菌入侵的反应方式、B27可能改变早期的细胞信号转导以及末折叠蛋白反应理论等;还介绍近4年来在国外广泛应用的抗肿瘤坏死因子（TNF）-α疗法。有证据显示,抗TNF治疗不仅可明显控制活动性或SpA对抗炎药、病情缓解药治疗无效的SpA患者的症状。改善关节功能,而且可以延缓疾病的放射学进展。     

miR-27a调节NF-κB2的表达并抑制哮喘小鼠气道炎症反应

目的探究miR-27a对哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法将雄性Balb/c小鼠随机分成正常对照组(control组)、哮喘模型组(OVA组)、哮喘+miR-27a模拟物组(miR-27a组)、哮喘+anti-miR-27a组(anti-miR-27a组)和哮喘+miR-27a对照组(scramble),每组8只。除正常对照组外,其余各组小鼠用卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型;3组哮喘模型处理组通过鼻滴的方式从激发前1 d开始给予4 mg/kg相应的药物干预。实验第28天时检测气道高反应性和肺灌洗液(BALF)中细胞总数及分类计数,HE和PAS染色检测肺组织病理学变化,real-time PCR检测肺组织中miR-27a、NF-κB2、白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-13和干扰素(interferon,IFN)-γmRNA的表达,Western blot检测肺组织中NF-κB2蛋白的表达,ELISA检测BALF中细胞因子的表达。结果哮喘模型组中miR-27a的表达降低,miR-27a模拟物增加了miR-27a的表达,anti-miR-27a明显降低了miR-27a的表达。与OVA组相比,miR-27a模拟物处理后,小鼠的气道高反应性和BALF中炎性细胞总数、分类计数均明显降低(P0.05),肺组织病理学变化减轻,NF-κB2 mRNA的表达无明显变化,但其蛋白表达明显减少(P0.05),IL-4和IL-13 mRNA和蛋白表达均降低(P0.05),IFN-γ的表达升高(P0.05);与OVA组相比,anti-miR-27a组中NF-κB2 mRNA表达也无显著变化,其余检测指标的变化与miR-27a模拟物的作用相反。结论 miR-27a抑制OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症可能与其靶向NF-κB2的表达进而影响NF-κB信号通路的激活相关。     

少儿强直性脊柱炎与幼儿类风湿性关节炎HLA-B27亚型的鉴别诊断

目的：探讨HLA－B27等位基因亚型与少年强直性脊柱炎和幼年类风湿性关节炎的关联。方法：用PCR－SSP方法对74人HLA－B27等位基因亚型进行研究，其中少年强直性脊柱炎32例，幼年类风湿性关节炎28例，5个家系中患者的父亲或母亲5例，正常对照组9例，并进行关联分析。结果：本组人群的HLA－B27等位基因由HLA－B*2704、*2705、*2702、*2707 4种亚型组成，其中少年强直性脊柱炎患者HLA－B27等位基因亚型频率为B*2704 56.25%、B*2705 40.63%、B*2702 3.13%；幼年类风湿性关节炎HLA－B27等位基因亚型频率为B*2705 60．7％、B*2704 28．57％、B*2702 3．57％及B*2707为7．14％；少年强直性脊柱炎与幼年类风湿性关节炎结果比较，HLA－B*2704基因频率在少年强直性脊柱炎组高于幼年类风湿性关节炎组（RR＝3．21，P＜0．05）。结论：少年强直性脊柱炎与HLA－B*2704等位基因亚型关联。对HLA－B27等位基因亚型的检测可成为少年强直性脊柱炎和幼年类风湿性关节炎鉴别诊断中一个有价值的实验指标。     

p38 MAPK-HSP27信号通路在内毒素致大鼠肺损伤中的作用

 目的：观察p38丝裂原激活蛋白激酶（p38 MAPK)-热休克蛋白27（HSP27）信号通路在急性肺损伤病理过程中的变化规律。方法：健康雄性Wistar大鼠（300~320 g）随机分成正常对照组（A组）、急性肺损伤组（B组）及急性肺损伤+SB203580组（C组）。通过腹腔注射内毒素建立急性肺损伤大鼠模型,分别于实验开始后的0、2、4、6、8 h处死各组大鼠。检测支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及BALF中蛋白含量。苏木素-伊红（HE）染色检查肺组织病理变化及免疫荧光方法检测内皮细胞内F-actin和G-actin,计算肺湿干重比值（W/D）。检测肺组织中磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）及磷酸化HSP27（p-HSP27）的含量。 结果：B组在实验后2 h BALF中蛋白水平和肺W/D开始明显增加,给予内毒素后8 h肺泡上皮肿胀,肺泡壁增宽,肺泡间质和肺泡腔水肿明显,肺泡内炎症细胞、红细胞和蛋白渗出明显增多,表现出急性肺损伤的病理改变。在给予了p38 MAPK抑制剂SB203580后的C组BALF中蛋白水平及肺W/D分别比B组明显减少,肺泡内炎症细胞、红细胞和蛋白渗出、间质与肺泡水肿均较B组减轻。B组均在实验后2 h血清及BALF中TNF-α和IL-6的浓度开始增加,p-p38 MAPK及p-HSP27的肺内表达开始增加,与A组相比有显著差异。B组实验后8 h的F-actin的表达明显比A组实验后0 h及8 h的增加,给予p38 MAPK抑制剂SB203580的C组肺p-HSP27 和F-actin的表达分别比B组明显减少。结论：内毒素可以通过激活p38 MAPK-HSP27信号通路引起急性肺损伤;阻断该信号通路可以减轻肺损伤。