星形细胞肿瘤凝集素组化研究

星形细胞肿瘤凝集素组化研究李劲松徐兴钊丁吉元张霞曲在萍凝集素是一类能特异性地识别和结合单糖或复合糖的蛋白质或糖蛋白，故凝集素可作为一种“探针”广泛用于研究细胞膜或细胞内复合糖的改变。我们应用１２种凝集素，采用ＡＢＣ免疫组化法对４１例成人幕上星形细胞肿...     

肿瘤细胞表面抗原的脱落

肿瘤细胞抗原性的消失,在肿瘤免疫研究领域内是个重要问题。已知异硫氰酸荧光素·刀豆素A(FITC·Con A)能与肿瘤细胞呈特异性结合,也能与二系土拨鼠肿瘤传代细胞10结合,但不能与正常土拨鼠肝细胞结合。将肿瘤传代细胞10悬浮于蒸馏水中10分钟,用吸管反复吸移,按FITC·ConA法进     

肠道对抗原的反应

当口服抗原时,抗原如何刺激IgA抗体呢?这可能与调节IgA应答的T淋巴细胞的特殊解剖分布有关。在研究IgM、IgG和IgE应答时,证实T细胞调节抗体生成(有些是辅助,有些是抑制)的概念。发现刀豆素A(ConA)在致有丝分裂浓度时可刺激T细胞抑制IgM和IgG合成。Elson等报导ConA能刺激小     

表面碳水化合物与表面凝集素是吞噬细胞的识别决定簇

吞噬细胞表面膜糖蛋白与糖脂所含的寡糖链,可与凝集素产生糖特异性联结.由于凝集素与糖的结合是多价的,极易在吞噬细胞和其他细胞之间形成桥,这是非免疫性吞噬现象的机理之一.例如伴刀豆蛋白A(ConA)所介导的巨噬细胞对细菌的糖特异性吸附,以及ConA使鼠腹腔巨噬细胞与鼠红细胞形成稳定玫瑰花结的实验.ConA、WGA(麦胚凝集素)、PNA(花生凝集素)等还具有介导巨噬细胞和肿瘤细胞结合的能力,这些发现提示了对肿瘤监视机制的一种新形式,这种机制可由体内的凝集素介导.     

米诺环素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为10、25和50μmol/L的MNC显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的71.20%±1.08%,分别降低为64.43%±1.39%、53.34%±1.26%和33.65%±1.91%;CFDA-SE染色结果显示,培养48 h和72 h的ConA组T细胞的增殖指数(PI)分别为1.57±0.03和2.06±0.02,各浓度的MNC对ConA刺激的T细胞增殖具有明显的抑制作用,以50μmol/L的MNC抑制作用最明显,48 h和72 h的PI分别为1.01±0.02和1.03±0.01,与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。MNC能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。具有独立于其抗菌活性的抗炎作用。     

染料木黄酮对小鼠T细胞体外活化及增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响,并探讨其机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记技术结合流式细胞术,分析PDB＋Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖相关指数。结果:Gen对ConA刺激组T细胞CD69、CD25表达有明显抑制作用(P＜0.05),且呈剂量依赖关系,而对PDB刺激组T细胞CD69及CD25表达的抑制需要较高浓度(＞50μmol/L);Gen无论对ConA或PDB＋Ion刺激组T细胞增殖均有显著抑制作用(P＜0.01),且均呈剂量依赖关系。结论:Gen可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞体外活化及增殖,其作用机制可能是抑制早期活化相关蛋白酪氨酸激酶活性。     

山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.     

瘤细胞成分在诱生巨噬细胞分泌细胞毒因子中的作用

本文选择K562、YAC—1及LAC—1三种具有较强的诱生巨噬细胞分泌细胞毒因子(简称M?—CF)的瘤细胞,初步分析了瘤细胞上何种部位及何种结构的物质具有这种诱生作用。结果表明:K562细胞膜粗提物同完整的瘤细胞一样具有较强的诱生作用。这种膜上结构或瘤细胞经100℃、20分钟加热处理后仍保持诱生活性;经胰酶或过碘酸钠处理后诱生能力降低;ConA及D-甘露糖能抑制三种瘤细胞的诱生活性。提示瘤细胞膜上存在着活化M?分泌CF的物质,该物质可能是一种含D—甘露糖的糖蛋白分子。     

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的抑制作用

研究芹菜素(apigenin,AP)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,探讨其作用机制,以及将其开发为免疫抑制药物的可能。无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L)的芹菜素预孵育4 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导T细胞活化和增殖,并用MTT法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用。荧光标记抗体双染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期、中期和晚期活化抗原CD69、CD25和CD71的影响;以二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(carboxyfluoresceindiacetate-succinim-idyl ester,CFDA-SE)染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,并应用ModFit软件分析其增殖指数(proliferation index,PI)。结果显示,25~200μmol/L AP对ConA诱导的T细胞CD69、CD25的表达有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系;25μmol/L和50μmol/L的AP抑制CD71的表达,但高浓度(大于100μmol/L)才有显著抑制作用(P<0.01)。各浓度AP对ConA诱导的T细胞增殖均有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系。表明在一定浓度范围内,AP可显著抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外活化及增殖,有望通过进一步研究将其开发成免疫抑制药物。     

双氢青蒿素对小鼠T细胞的免疫抑制作用

目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖情况;利用流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测CD3+T细胞早、中、晚期活化标志CD69、CD25、CD71表达情况;用Fluo-4/AM荧光钙离子探针技术检测细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的变化;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布;运用流式细胞术(FCM)结合三色荧光染色技术检测CD4+CD25highTreg早期活化抗原CD69表达情况。结果:CFDA-SE染色结果显示,DHA能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性;DHA对ConA刺激的CD3+T细胞CD69、CD25的表达有促进作用,而对CD71的表达有抑制作用,均呈剂量依赖性;DHA单独作用不能引起T细胞[Ca2+]i的升高,在ConA的刺激下能引起[Ca2+]i浓度升高;PI染色流式分析结果显示,DHA阻滞细胞于G0/G1期,阻止细胞进入S期和G2/M期;DHA能够下调CD4+CD25highTreg细胞CD69的表达。结论:DHA对小鼠淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

非特异性T细胞替代因子在体内的活力

Kindred和Corley曾证明,在长期混合淋巴细胞反应(MLR)中激活的淋巴细胞,当再次培养时,可释放出一种因子(NSF),它在对同种异体抗原起初次应答反应中,替代特异性T细胞。MLR的上清液和刀豆素A刺激的脾细胞培养上清液在体外具有NSF的活力,能促进T细胞缺陷鼠或裸鼠脾细胞的应答反应。本文探讨这种上清液在体内能否促进裸鼠对T依赖性抗原的反     

用刀豆素A短时间作用人外周血淋巴细胞形成的稳定E花环

人体外周血T淋巴细胞和羊红细胞形成的E玫瑰花环,在37℃长时间孵育下即容易分离,但由“活化的”T细胞所形成的“稳定”E花环却能抵抗37℃长时间的孵育而不致解离。作者最近的研究证实了稳定E花环不但能由外周血淋巴细胞(PBL)长时期接触刀豆素A(ConA)而形成,并且也能由仅仅1小时的短时接触ConA而形成。不过这一现象需要有量的依赖,用最大浓度的     

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法以MTT法检测T细胞药物毒性;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol·L-1时对于CD69的表达以及淋巴细胞48和72h增殖,均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论ICA能抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性,即在最高浓度3.0μmol·L-1时抑制率最强。     

红车轴草提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化的抑制作用

探讨红车轴草提取物(Trifolium pratense Leguminosae extract,TLE)对小鼠T淋巴细胞的体外活化的影响。无菌条件下制备小鼠淋巴细胞悬液;双色荧光抗体染色结合流式细胞术分别分析TLE对小鼠T淋巴细胞在刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)刺激下的体外分化抗原CD69、CD25、CD71表达的影响。终质量浓度为20、30、40 mg/L的TLE对小鼠T淋巴细胞在ConA或PDB刺激下的体外分化抗原CD69、CD25、CD71表达具有明显的抑制作用(P<0.01)。TLE对ConA或PDB刺激的不同时期的小鼠T淋巴细胞的体外活化具有明显的抑制作用。     

桑色素对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究桑色素(morin)对小鼠T淋巴细胞活化、增殖和细胞周期的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)刺激培养的淋巴结来源的小鼠淋巴细胞,再以不同终浓度的morin与T细胞共培养,利用流式细胞术(FCM),检测早期T细胞活化的标志CD69分子的表达,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色检测T细胞的增殖;以碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期。结果:小鼠T细胞培养6 h后,未经ConA刺激的对照组中CD69 T的细胞比率为(2.97±0.12)%,经ConA刺激的CD69 T细胞的比率明显增高,达到(72.52±0.66)%,与对照组相比差别明显(P<0.01)。终浓度为25、50、100μmol/L的morin均下调CD69 T细胞的比率,其中,100μmol/L的morin抑制作用最强,为(48.95±0.81)%,与对照组比较具有统计学意义(P<0.01)。CFDA-SE染色分析显示,ConA组培养48 h和72 h的T细胞的增殖指数(PI)分别为(1.58±0.04)和(1.95±0.02),各浓度的morin对ConA刺激的T细胞增殖,具有明显地抑制作用,以100μmol/L的morin抑制作用最明显。培养48 h的ConA组T细胞的PI为(1.02±0.02)、培养72 h的ConA组T细胞的PI为(1.03±0.01),与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。PI染色后流式细胞术分析的结果表明,ConA组处于S期的T细胞的比率为(27.05±0.39)%,显著高于对照组的比率(5.10±0.07)%。morin组中S期的细胞比率较高。结论:Morin可显著抑制ConA刺激的T细胞活化及增殖;其对增殖的抑制作用主要表现为S期的细胞的阻滞。     

环胞霉素A抑制IL-2基因表达是由于抑制了淋巴细胞特异性因子与IL-2增强子的结合

环胞霉素A(CsA)是一种高效免疫抑制剂,它主要是在基因水平抑制T 细胞合成淋巴因子。本文发现CsA 是通过制淋巴细胞特异性因子与IL-2增强子(enhancer)结合的机制来抑制IL-2基因表达。作者将含有IL-2增强子—胸苷激酶(tk)启动子—CAT 结构基因的质粒转染入E14小鼠淋巴瘤细胞。TPA 和ConA 可诱导E14淋巴瘤表达CAT 基因,CsA 则抑制TPA和ConA 这种作用,而CsA 并不影响5×     

刀豆素A(ConA)对低浓度小鼠脾淋巴细胞的刺激——腹腔渗出细胞的作用

巨噬细胞是活化体外T淋巴细胞的必需辅助细胞。已经证明,不仅抗原、致有丝分裂因子和同种异体细胞活化T细胞需要巨噬细胞,而且细胞毒细胞的发育、许多因子活化B细胞也需巨噬细胞。行使这种功能的巨噬细胞必须是活细胞,但不一定要分裂。巨噬细胞在这些相互反应中的作用机制还不很清楚。作者用液体闪烁测定法观察腹腔渗出细胞(PEC)在刀豆素A(ConA)刺激鼠淋巴细胞培养中的作用。预备试验证明,10~5个淋巴细胞是研究ConA活化的最适浓度。     

抗原及非特异触发剂诱发大鼠肥大细胞释放组胺的比较

<正> 不同的触发剂可通过不同的方式诱导肥大细胞释放组胺。特异性抗原与联结在细胞膜上的IgE抗体交联,导致细胞激活,快速分泌与颗粒有关的介质。除免疫触发外,肥大细胞释放组胺可由抗IgE、钙离子载体A23187、compound 48/80、ConA和碱性多肽等非特异触发剂介导。这些试剂表现出许     

连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响,初步探讨其免疫抑制作用机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM),检测小鼠T淋巴细胞的表达的活化抗原CD69、CD25、CD71的表达情况;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,以FCM分析FS对淋巴细胞体外增殖的影响.结果:终浓度为40、80、160 mg/L的FS均对ConA刺激诱导的T细胞CD69、CD25和CD71的表达有降低作用(P＜0.05).CFDA-SE染色分析显示,上述浓度的FS对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05).结论:FS对ConA诱导的T细胞早、中、后期活化和体外增殖有抑制作用.     

细胞松驰素B和长春碱对癌细胞表面伴刀豆球蛋白A受体原位电泳的影响

本文以原位电泳方法研究肿瘤细胞膜流动性随药物作用的变化,实验用接种7—9天后的小鼠艾氏腹水癌细胞,用0.02％鱼精蛋白将细胞固定在载玻片上,外加直流电场为10伏/厘米,作用时间为30分钟。伴刀豆球蛋白(ConA)受体用自己制成的FITC(异硫氰酸盐)——ConA作荧光标记,