氧化应激对体外神经元一氧化氮释放量的影响

目的：探讨氧化应激对神经元产生一氧化氮（NO）的影响及其NO对神经元的作用机理。方法：对分离培养的新生SD大鼠大脑皮质神经细胞分别进行缺氧、低浓度H₂O₂、缺氧+超氧化物歧化酶（SOD）和H₂O₂+SOD处理,用比色法检测培养上清液中NO、丙二醛（MDA）含量和乳酸脱氢酶（LDH）、SOD活性。结果：与对照组比较,缺氧组和H₂O₂组的NO、LDH、MDA含量均显著高于对照组,SOD活性显著低于对照组,NO含量与SOD活性变化呈负相关。预先给予终浓度为200×10³U/L的SOD,然后再对分离培养的神经细胞进行缺氧、低浓度H₂O₂处理,可使神经细胞的NO、LDH和MDA释放量明显减少,各组间NO含量与LDH、MDA含量呈正相关。结论：氧化应激使神经元NO产生增多,NO与氧自由基对神经细胞的损伤有联同作用。SOD具有清除氧自由基和减轻NO对神经元的损伤作用。     

腺苷对体外培养的海马缺糖缺氧神经元的保护作用

目的:观察缺糖缺氧对大鼠海马培养神经元的影响及腺苷的保护作用。方法:取培养12d的海马神经元, 分为对照组和腺苷组, 同时于缺糖缺氧环境中培养0.5-4h后取出, 立即更换原神经元培养液在常氧下继续培养24h。于不同时间取出, 收集培养液, 测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量, 用图像分析仪测定神经元胞体面积, 并用4%台盼蓝染色, 计算神经元存活百分率。同时用原位末端标记(TUNEL)法检测神经元凋亡。结果:缺糖缺氧后海马神经元胞体肿胀, 体积变大, LDH渗出含量增多, 神经元存活率减少。恢复糖和氧供应后24h, 海马神经元LDH渗出含量进一步增多, 细胞存活率进一步减少, 凋亡神经元百分率明显增多。经腺苷预处理的海马神经元缺糖缺氧后, 神经元LDH渗出明显少于对照组, 神经元胞体面积增大程度轻于对照组, 神经元存活率明显高于对照组。缺糖缺氧0.5-3h再恢复氧和糖供应后24h, 腺苷组凋亡神经元百分率亦明显低于对照组。结论:缺糖缺氧可引起海马神经元严重损伤, 神经元损伤程度与神经元存活率、LDH渗出含量的改变呈对应变化。腺苷能减少缺糖缺氧后神经元的损伤, 减少缺糖缺氧后神经元凋亡, 提示腺苷对缺糖缺氧海马神经元具有一定的保护作用。     

蒺藜皂苷对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡及细胞内钙变化的作用

目的： 观察蒺藜皂苷(TTLS)对缺氧/复氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡及细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法： 原代培养大鼠皮层神经元，建立缺氧/复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。比色法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放漏出率；Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙平均荧光值变化。结果： 缺氧3 h复氧12 h可诱导出皮层神经元凋亡，引起细胞内钙离子浓度增高,高于对照组（P<0.01）。蒺藜皂苷(0.025 g/L)能明显降低缺氧/复氧诱导的神经元凋亡，并可降低细胞内钙浓度,与模型组比较有显著差异（P<0.01）。结论： 蒺藜皂苷可降低由缺氧/复氧诱导的皮层神经元的凋亡，减轻细胞损伤，这种作用机制可能与其抑制神经细胞内钙超载有关。     

慢性低O2高CO2大鼠神经细胞凋亡与脑MDA、NOS的水平变化

目的：探讨慢性低O₂高CO₂脑神经细胞凋亡与MDA、NOS关系。方法：将SD大鼠分为正常对照组（C组）和低O₂高CO₂4周组（E组），采用原位末端标记（TUNEL）、流式细胞技术检测凋亡细胞，并测脑组织MDA、NOS水平。结果：①E组脑MDA、NOS水平高于C组（P<0.01）；②E组大脑皮质、海马、丘脑等部位见神经细胞凋亡；神经细胞凋亡百分率为11.51%，并与MDA和NOS水平呈正相关（r=0.652, P<0.05和r=0.716, P<0.05）。结论：慢性低O₂高CO₂时氧自由基和一氧化氮生成增加是神经细胞凋亡形成的重要机制之一。     

人参皂苷Re对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的：探讨人参皂苷Re 对人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞缺氧复氧损伤的保护作用。 方法：采用缺氧复 氧法制备SH-SY5Y 细胞损伤模型,分为对照组、模型组、Re 6.25 μg/mL 组和Re 12.50 μg/mL 组。采用MTT 法测定细胞存活率,四甲基罗丹明甲酯（TMRM）染色评估细胞线粒体膜电位变化,DAPI 染色观察细胞凋亡 率,并进一步采用免疫印迹检测各组细胞核因子NF-E2 相关因子2（Nrf-2）、Bax 和p53 的蛋白表达。 结果：人 参皂苷Re 对SH-SY5Y 细胞活力无显著影响;缺氧复氧条件下,细胞存活率显著降低,而人参皂苷Re 在6.25、 12.50 μg/mL 浓度下预保护可显著提高细胞存活率。缺氧复氧损伤后,人参皂苷Re 6.25、12.50 μg/mL 能显著提 高SH-SY5Y 细胞的线粒体膜电位水平和抑制SH-SY5Y 细胞的凋亡率。人参皂苷Re 能够提高Nrf-2 的蛋白表达, 抑制Bax 和p53 蛋白的表达。结论：人参皂苷Re 可以抑制缺氧复氧损伤细胞的凋亡和氧化损伤,对缺氧复氧诱导 的神经细胞具有显著的保护作用。     

预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其发生机制,探索新的防治措施。方法:将血管内皮细胞分为:(1)缺氧组;(2)热应激组;(3)预热应激+缺氧组;(4)对照组。用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,以台盼兰染色法测定细胞死亡率,用Griess化学法测定细胞培养液中NO₂^-含量,以观察细胞NO生成量。结果:缺氧血管内皮细胞LDH的释放量和细胞死亡率显著大于对照组,39℃预热应激可使其分别降低29.47%和33.67%,41℃预热应激对缺氧细胞无明显保护作用。缺氧使血管内皮细胞NO生成量显著降低。39℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著高于缺氧组,41℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著低于对照及相应的缺氧组;血管内皮细胞NO生成量与细胞LDH释放量及细胞死亡率呈显著负相关。结论:一定强度的预热应激可以对缺氧血管内皮细胞产生保护作用。细胞NO产生增多在这种保护作用机制中可能具有重要作用。     

银杏叶提取物对缺氧复氧诱导大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的保护作用

应用原代分离培养的Wistar胎鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧模型。研究银杏叶提取物对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：采用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率。原位末端标记法检测DNA断裂;光镜及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：银杏叶提取物能改善神经细胞亚微结构的变化。减少凋亡细胞数,使缺氧复氧诱导神经细胞凋亡百分率明显下降。结论：银杏叶提取物对缺氧复氧所引起的胎鼠大脑皮层神经细胞凋亡有明显抑制作用。     

TLR7基因沉默通过NF-κB炎症通路对缺氧缺糖再给氧诱导的大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的 探讨Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)基因对缺氧缺糖再给氧诱导的大鼠海马神经细胞凋亡的影响及机制.方法 根据TLR7mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,转染入大鼠海马神经细胞中,实验分为4组:对照组(Control)、缺氧缺糖再给氧模型组(Model)、TLR7基因沉默组(Model+TLR7-siRNA)、转染阴性对照组(Model+NC).qRT-PCR检测沉默TLR7基因情况,Hoechst33258染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR7、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量.结果 与Control组相比,Model组和NC-TLR7组TLR7基因及蛋白表达水平明显增加,Caspase-3、NF-κ B蛋白表达水平及细胞凋亡率明显增加;与Model组相比,Model+TLR7-siRNA组TLR7基因及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、NF-κB蛋白表达及细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).结论 沉默缺氧缺糖再给氧诱导的大鼠海马神经细胞TLR7基因抑制细胞的凋亡,与下调Caspase-3、NF-κB表达有关.     

红景天甙对缺氧/缺糖损伤的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

目的:观察红景天甙对SH-SY5Y 细胞缺氧/缺糖损伤时细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位和活性的变化,探讨其对神经细胞线粒体膜电位的影响。方法:应用细胞培养,四唑盐比色实验( MTT )检测细胞线粒体活性,流式细胞术检测细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。结果: SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2、4、6、12 h后,细胞内[Ca²⁺]i和细胞凋亡百分率明显高于对照组, 均有显著差异(P<0.01);细胞经缺氧/缺糖处理后,线粒体膜电位和活性明显低于对照组,2 h时分别为29.17%(P<0.01),38.80% (P<0.01), 12 h时分别为56.72%(P<0.01), 63.58% (P<0.01);红景天甙能显著降低细胞内[Ca²⁺]i,抑制细胞凋亡的发生,提高线粒体膜电位和活性,与缺氧/缺糖损伤组相比均有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论:红景天甙可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关。     

人参皂苷Rg_2对体外培养的海马缺氧神经元的预防保护作用

为观察人参皂苷Rg_2对缺氧大鼠海马神经元的保护作用,选取Wistar大鼠海马神经元体外培养14d,随机分为对照组、5μmol/L尼莫地平组(尼莫地平组)、Rg_20.025mmol/L组(Rg_21组)、Rg_20.050mmol/L组(Rg_22组)。将相应药物加入到培养液中孵育4h后,建立急性缺氧细胞模型。采用流式细胞仪检测各组神经元缺氧后的细胞凋亡情况,用酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量,并对所得结果加以比较。结果发现,离体条件下人参皂苷Rg_2可显著增强海马神经元的活性,降低其凋亡率及死亡率;提高细胞上清液中超氧化物歧化酶的活性,降低MDA及NO的含量,且呈量效比例关系。以上结果提示,人参皂苷Rg_2在体外有抗缺氧损伤的作用。其作用机制可能是通过抑制细胞凋亡、提高抗氧化酶的活力、清除自由基而发挥作用。     

环加氧酶-2在大鼠原代皮质神经细胞缺氧损伤中的作用

目的:观察环加氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在原代培养的大鼠皮质神经细胞缺氧-再给氧损伤中的作用以及COX-2特异性抑制剂NS398的保护作用。方法: 原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为对照组(未处理组)、缺氧再给氧组、COX-2特异性抑制剂NS398+缺氧再给氧组。用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生存率,用Western印迹法检测COX-2蛋白质的表达,用DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡情况。结果: 培养的大鼠原代皮质神经细胞经缺氧再给氧处理后,COX-2蛋白质表达水平明显高于对照组及缺氧再给氧+NS398组(P＜0.05);缺氧再给氧+NS398予处理组神经细胞生存率明显高于单独缺氧再给氧组(P＜0.05和P＜0.01),DNA凝胶电泳显示DNA断裂显著减轻。结论:COX-2参与缺氧再给氧后神经细胞凋亡的病理过程,COX-2特异性抑制剂明显减轻缺氧再给氧后神经细胞的损伤,保护神经细胞免遭缺氧诱导的细胞凋亡。     

黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3 mRNA的表达

目的： 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因c-Jun氨基末端激酶3(JNK3)mRNA表达的影响。方法：取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组：正常对照组、黄芪注射液原液对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组和黄芪注射液组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液组及黄芪注射液原液对照组进行缺糖缺氧0.5 h再复氧复糖,并于复氧复糖后0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h采用原位杂交和RT-PCR方法检测海马神经元JNK3 mRNA的表达。结果：正常对照组大鼠海马神经元核膜完整,细胞突起明显,有少许细胞胞浆黄染;缺氧缺糖/复氧复糖组大鼠海马神经元胞核体积增大、突起回缩,大量细胞胞浆黄染,胞核内有黄色颗粒,海马JNK3 mRNA阳性神经元数目在各个时点均比正常对照组明显增多（P<0.05）;黄芪注射液原液对照组神经元形态变化和海马JNK3 mRNA阳性神经元数目均与缺氧缺糖/复氧复糖组相一致（P>0.05）;黄芪注射液组大鼠海马神经元有轻微核皱缩,可见部分神经元胞浆黄染,除120 h时点之外,海马JNK mRNA阳性神经元数目在各个时点均比缺氧缺糖/复氧复糖组明显减少（P<0.05）。缺氧缺糖/复氧复糖组在0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h海马神经元JNK3 mRNA平均灰度值均较正常对照组明显增加（P<0.05）;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液原液对照组各时点JNK3 mRNA的平均灰度值无明显变化（P>0.05）,而黄芪注射液组除120 h之外在各个时点JNK3mRNA的平均灰度值均明显降低（P<0.05）。结论：黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因JNK3 mRNA表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡。     

线粒体渗透转换孔在肿瘤坏死因子α诱导的抗心肌缺氧/复氧损伤中的作用

目的：研究肿瘤坏死因子α（TNFα）诱导的抗心肌缺氧/复氧损伤的保护作用是否与抑制线粒体渗透转换孔的开放有关。 方法： 采用离体大鼠心脏灌流方法，结扎冠状动脉左前降支30 min和复氧120 min复制局部缺氧/复氧损伤模型，测定心肌梗死面积、冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）含量及各项心室力学指标。 结果： 与单纯缺氧/复氧组相比，1×104 U/L TNFα预处理明显降低心脏缺氧/复氧后的梗死面积和复氧期冠脉流出液中LDH含量，促进左室发展压、左室做功和左室舒张末压力的恢复。线粒体渗透转换孔开放剂atractyloside和钙激活钾通道阻断剂paxilline减弱了TNFα的作用。 结论： TNFα诱导的抗心肌缺氧/复氧损伤的保护作用可能与其抑制线粒体渗透转换孔的开放及促进钙激活钾通道的开放有关。     

转录因子ZFP580在缺氧预处理抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

 目的：通过观察缺氧预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及锌指核转录因子ZFP580表达的改变,探讨ZFP580的作用及机制。方法：培养大鼠H9c2心肌细胞,分为3组：（1） 缺氧/复氧(H/R)组：H9c2心肌细胞换用模拟缺血溶液(pH=6.2)缺氧(95% N2 + 5% CO2)培养3 h,复氧培养2 h;（2） 缺氧预适应(HPC)组：H9c2心肌细胞经3个循环的短暂缺氧(10 min)/复氧(20 min)处理后,进行同上H/R实验;(3) 对照(C)组：正常培养的H9c2心肌细胞。通过MTT染色及LDH水平判定HPC的作用。Western blotting方法观察心肌细胞中转录因子ZFP580表达及ERK1/2磷酸化情况,以及ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059对ZFP580表达的影响。分别构建高/低表达ZFP580的慢病毒载体并转染H9c2心肌细胞,经H/R实验后利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况,Western bloting方法观察caspase-3活化情况。结果：HPC能显著改善H/R处理后H9c2心肌细胞存活率降低和LDH漏出的现象。Western blotting结果显示,HPC组心肌细胞中ZFP580表达及ERK1/2磷酸化程度较H/R处理组明显上升,且PD98059预处理明显抑制HPC诱导的ZFP580的表达上调。慢病毒介导的基因转染实验发现,ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/R损伤后凋亡率降低且细胞中活化caspase-3表达下降。结论：HPC可引起心肌细胞中转录因子ZFP580表达上调,ZFP580作为ERK1/2通路的下游靶分子发挥抗心肌细胞凋亡的作用。ZFP580表达上调可能作为内源性保护机制之一介导了HPC的细胞保护作用。     

肝细胞生长因子减轻皮质神经元的缺氧/复氧损伤

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧/复氧诱导大鼠皮质神经元凋亡的保护。方法分离培养SD大鼠皮质神经元,经HGF(15、30和60μg/L)预处理后经缺氧/复氧诱导凋亡,用MTT比色法检测细胞存活率;用Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测神经元的凋亡;用比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和caspase-3活性变化。结果与正常对照组相比,缺氧/复氧组神经元的细胞存活率显著下降,细胞凋亡率和caspase-3活性升高(均P<0.05);而HGF预处理12 h可显著逆转缺氧/复氧所致的细胞存活率降低、凋亡率增加、LDH活性上升、caspase-3活性升高的改变(均P<0.05),且这些效应与HGF剂量正相关。此外,HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通路抑制剂LY294002阻断。结论HGF减轻缺氧/复氧所诱导的神经元凋亡可能与其激活神经元的PI3K/Akt信号通路、减少caspase-3表达有关。     

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3表达的影响

 目的：观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元c-jun氨基末端激酶(c-jun N terminal kinase,JNK3)表达的影响。方法：取原代培养8d的大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组(模型组)、黄芪注射液组和溶媒对照组。模型组缺氧缺糖0.5h再复氧复糖,各组于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120h用免疫组化法和免疫印迹法检测海马神经元JNK3的表达。结果：除120h之外,模型组JNK3阳性神经元数目和蛋白平均吸光度值在各个时间点均比对照组明显增多(P<0.05);黄芪注射液组JNK3阳性神经元数目和蛋白平均吸光度值均比模型组明显减少(P<0.05)。结论：黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3表达,并因此抑制神经元的凋亡。     

NRG-1 对缺氧复氧心肌细胞凋亡及氧化损伤的影响

目的:探讨神经调节蛋白1(NRG-1)对缺氧复氧环境下的心肌细胞凋亡及氧化损伤影响及机制。方法:以心肌细胞(HCM)为研究对象,构建缺氧复氧心肌细胞模型,在缺氧前加入0.8 mg/ L 的NRG-1。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧簇(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blot 检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的Akt(p-AktThr308 )、cleaved caspase-3 的蛋白水平。结果:心肌细胞缺氧复氧后细胞吸光度(A)从0.66±0.03 降低至0.36±0.04,细胞凋亡率从(4.62±0.97)% 升高至(29.07±3.43)%,ROS 水平从69.29±7.96升高至280.84±20.52,LDH、MDA 水平也升高,SOD、p-Akt/ Akt 水平均下降。而NRG-1 处理后的细胞吸光度(A)从0.36±0.04升高至0.47依0.05,细胞凋亡率从(29.07±3.43)%下降至(19.76±3.41)%,ROS 水平从280.84±20.52 下降至128.23±12.32,LDH、MDA 水平也下降,SOD、p-AktThr308 / Akt 水平均升高。结论:NRG-1 能够部分抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化损伤,影响心肌细胞中p-Akt/ Akt 的水平。     

黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元Caspase-3表达

目的 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因Caspase-3表达的影响.方法 取原代培养8d的大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组.除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5h再复氧复糖.各组于复氧复糖后0h、0.5h、2h、6h、24h、48h、...