miR-203a-3p抑制人肝癌细胞系增殖

目的 探索miR-203a-3p对人肝癌细胞系增殖和凋亡的分子调节机制。方法 RT-qPCR检测临床肝癌(HCC)组织及肝癌细胞系中miR-203a-3p的表达;建立miR-203a-3p过表达的HepG2细胞模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;平板集落形成实验检测集落形成;细胞划痕实验检测细胞迁移;表达谱芯片检测mRNA水平;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;Western blot检测TGF-β1表达。结果 miR-203a-3p在HCC组织中低表达(P<0.05),与肿瘤分期呈负相关(P<0.05);HepG2细胞中过表达miR-203a-3p可显著降低细胞增殖速率(P<0.05)、迁移能力(P<0.05)、克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);TGF-β1表达降低(P<0.05),而TGFβR1表达升高(P<0.05);细胞培养上清中TGF-β1含量降低(P<0.05);细胞内TGF-β1的蛋白降低(P<0.05);加入TGF-β1重组蛋白可减轻miR-2...     

miR-216a-5p通过抑制HMGB1降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移

目的探讨miR-216a-5p对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法用Western blot检测胃癌和癌旁组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达,RT-qPCR检测miR-216a-5p的表达。用人工合成的miR-216a-5p模拟物和其抑制物转染胃癌细胞系MGC-803。MTT检测细胞增殖,划痕法检测细胞迁移。双荧光素酶报告实验和Western blot检测miR-216a-5p和HMGB1之间的靶向关系。结果与癌旁组织相比,HMGB1在胃癌组织中高表达,miR-216a-5p在胃癌组织中低表达(P0.05)。miR-216a-5p模拟物上调胃癌细胞miR-216a-5p的表达水平,抑制细胞的增殖和迁移;miR-216a-5p抑制物下调miR-216a-5p的表达水平,促进胃癌细胞的增殖和迁移(P0.05)。miR-216a-5p可作用于HMGB1的3′UTR并抑制其表达。结论 miR-216a-5p通过靶向抑制HMGB1的表达降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移。     

荷瘤小鼠卵巢癌细胞miRNA和髓源性抑制细胞的检测及相关性分析

目的检测卵巢癌荷瘤小鼠癌组织miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平和外周血和脾脏中髓源性抑制细胞(MDSC)的数量,并分析它们的相关性。方法 12例卵巢癌荷瘤小鼠的癌组织和癌旁组织,实时荧光定量PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平,流式细胞术检测上述荷瘤小鼠中外周血和脾脏中MDSC的表达。采用Spearman法分析MDSC和microRNA的相关性。结果与正常小鼠相比,荷瘤小鼠外周血和脾脏中的MDSC明显增加。miR-21a-5p、miR-218-5p和miR-222-3p在癌组织中含量高于癌旁组织,相反miR-155a-5p和miR-494-3p在癌组织中的表达低于癌旁组织。miR-222-3p与MDSC的数量无相关性,miR-494-3p的水平与MDSC的数量负相关,miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p在癌组织与癌旁组织的表达差值与MDSC的数量呈正相关。结论卵巢癌荷瘤小鼠癌组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-494-3p水平和外周血及脾脏中MDSC的数量有一定的相关性。     

miR-101-3p和SOX2在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系

目的 分析miR-101-3p和SOX2在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法 本研究选取在2014年7月至2016年7月于大连市妇女儿童医疗中心妇科手术中取得的85例宫颈鳞癌组织标本作为研究组，并选取癌旁组织作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中miR-101-3p和SOX2 mRNA表达水平。采用免疫组化法检测宫颈鳞癌组织中SOX2蛋白表达水平；采用Pearson相关性分析miR-101-3p和SOX2表达水平的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-101-3p和SOX2与预后的关系。采用COX回归分析影响宫颈鳞癌患者预后的危险因素。结果 研究组miR-101-3p表达水平显著低于对照组(P<0.05)，研究组SOX2表达水平显著高于对照组(P<0.05)。宫颈鳞癌组织的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05)。根据Pearson相关性分析得知，宫颈鳞癌组织中miR-101-3p和SOX2表达水平呈负相关(r=-0.480,P<0.05)。miR-101-3p和SOX2表达水平与肿瘤直径、FIGO分期...     

miR-133a-3p 通过抑制氧化还原因子1 抑制肝癌细胞恶性生物学行为

目的:通过多种实验途径探讨miR-133a-3p通过调节氧化还原因子1(Ref-1)对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2017年2月～2018年12月来本院就诊的肝癌手术患者的癌组织和癌旁相邻正常组织标本,用qRT-PCR检测miR-133a-3p在癌组织和癌旁相邻正常组织中以及在肝癌细胞系HepG2、Huh-7、SK-Hep1、SMMC-7721和肝正常细胞Hep-3B中的表达;构建miR-133a-3p-mimics(miR-mimics组、miR-NC转染质粒组和正常对照组(Control),qRT-PCR检测转染前后miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测HepG2细胞转染前后增殖能力变化;细胞划痕和Transwell实验分别检测转染前后HepG2细胞的迁移和侵袭能力变化;RNA转录组测序检测HepG2细胞转染前后转录组RNA表达差异并作通路富集分析;qRT-PCR检测筛选RNA-seq中RNA表达差异较大的基因;qRT-PCR和Western blot检测Ref-1在HepG2细胞转染前后中的表达。免疫组化和qRT-PCR分别检测Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达;最后HepG2细胞同时转染了miR-mimics和Ref-1 miR-inhibitors,进行联合干预,随后CCK-8、细胞划痕和Transwell分别检测了联合干预后细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。结果:miR-133a-3p在肝癌患者癌组织中的表达显著低于癌旁组织,同时其在肝癌细胞HepG2中的表达最低;qRT-PCR结果表明miR-mimics可有效促进miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示miR-133a-3p过表达后可以显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为;RNA-seq结果显示HepG2转染前后Ref-1的表达差异最大;qRT-PCR和Western blot结果显示HepG2转染成功后,Ref-1表达随miR-133a-3p的过表达而降低。免疫组化和qRT-PCR结果显示Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达均显著高于阴性对照组;联合干预后HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学抑制作用更加强烈。结论:miR-133a-3p可能通过抑制Ref-1表达从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

miR-30a-5p启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝损伤中的作用

目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为对照(control)组、同型半胱氨酸(Hcy)组和Hcy+5-氮杂胞苷(AZC)组。全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;微板法测定肝细胞ALT和AST水平;小鼠肝脏石蜡切片行HE染色观察肝脏损伤情况;细胞活力染色检测肝细胞活力;RT-qPCR法检测小鼠肝脏组织和肝细胞中miR-30a-5p的表达;Pearson相关性分析肝脏miR-30a-5p表达与血清ALT和AST水平的相关性;巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测小鼠肝脏组织以及肝细胞中miR-30a-5p启动子区DNA甲基化水平的变化。结果:与CBS+/+对照组相比,CBS+/-组小鼠血清的Hcy、ALT和AST水平显著升高(P<0.05);HE染色显示肝细胞肿胀,可见核碎裂、溶解;肝脏miR-30a-5p表达明显降低(P<0.01);小鼠肝脏组织中miR-30a-5p的表达与血清ALT和AST的水平呈负相关(r2=0.4557,P=0.0003;r2=0.4626,P=0.0003);miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01)。在细胞水平,与control组相比,Hcy组的ALT和AST水平升高(P<0.05,P<0.01),细胞活力显著降低,肝细胞miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01),而使用AZC后miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平降低(P<0.05),miR-30a-5p的表达上调(P<0.05)。结论:miR-30a-5p启动子区DNA高甲基化可能在肝损伤中发挥重要作用。     

miR-203a-5p通过抑制丝裂原活化蛋白激酶1的表达调控人牙周膜干细胞的炎性反应

目的检测炎性人牙周膜干细胞(hPDLSCs)中miR-203a-5p及丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的表达水平,探讨二者间的靶向关系对牙周炎炎性反应的调控作用。方法分离培养及流式细胞计量术鉴定hPDLSCs;将hPDLSCs分为:对照组、LPS刺激组、miR-203a-5p模拟物转染组及miR-203a-5p抑制剂转染组,用RT-qPCR检测miR-203a-5p及MAPK1 mRNA表达,Western blot检测MAPK1蛋白表达,双荧光报告系统验证miR-203a-5p与MAPK1的靶向关系。结果干细胞表面标志物CD73及CD90阳性;LPS刺激组miR-203a-5p的表达明显上调(P0.05);miR-203a-5p模拟物及LPS使miR-203a-5p的表达明显上调(P0.05),同时MAPK1 mRNA及蛋白的表达下调(P0.05);miR-203a-5p抑制物使miR-203a-5p的表达量下降(P0.05),同时MAPK1 mRNA及蛋白的表达增加(P0.05);miR-203a-5p与MAPK1具有靶向作用。结论 miR-203a-5p通过靶向下调MAPK1基因的表达来调控牙周炎的炎性反应过程。     

IL-8通过下调miR-199a-3p对肾癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的研究IL-8、miR-199a-3p对肾癌细胞迁移、侵袭及上皮间质化的影响并探讨其作用机制。方法运用ELISA检测肾癌组织及癌旁正常组织中IL-8的表达;qRT-PCR检测肾癌组织及癌旁正常组织中miR-199a-3p的表达;将IL-8+miR-199a-3p组(转染miR-199a-3p mimics并与IL-8共处理)、IL-8+miR-con组(转染Negative control mimics并与IL-8共处理)均用脂质体法转染至786-0细胞,再用IL-8(100μg/L)处理;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭;Western blot检测各组细胞中Ecadherin、N-cadherin、p-Smad1的蛋白表达。结果与癌旁正常组织相比,肾癌组织中IL-8表达显著升高,miR-199a-3p表达显著降低(P0.05),且IL-8可呈浓度依赖性抑制miR-199a-3p表达;过表达miR-199a-3p可明显抑制IL-8对786-0细胞迁移、侵袭的促进作用,且可抑制IL-8对786-0细胞中E-cadherin、N-cadherin、p-Smad1蛋白的表达。结论 IL-8可促进肾癌细胞的迁移侵袭及上皮-间质转化,其机制可能与下调miR-199a-3p有关,这将可为肾癌的高效治疗提供依据。     

miRNA-542-3p对胃腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的研究microRNA-542-3p(miR-542-3p)在人胃腺癌细胞系及组织中的表达水平及对胃腺癌细胞侵袭转移的影响。方法通过RT-PCR检测miR-542-3p在人正常胃粘膜上皮细胞GES-1及人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中的表达水平;同时应用RT-PCR检测miR-542-3p在50组患者胃腺癌和癌旁组织中的表达差异。体外实验通过外源转染miR-542-3p的模拟物和抑制剂,分别于24,36,48h检测SGC-7901的转染效率,选取最佳转染时间。应用划痕实验和Transwell评估细胞侵袭转移能力的变化。结果胃腺癌细胞系SGC-7901和BGC-823中miR-542-3p的表达水平低于其在GSE-1中的表达水平(P0.05);miR-542-3p在癌组织中表达低于癌旁组织(P0.05)。24 h后,miR-542-3p模拟物组侵袭转移能力显著低于对照组(P0.05),而miR-542-3p抑制剂组侵袭转移能力显著高于对照组(P0.05)。结论miR-542-3p在多种人胃癌细胞和胃腺癌组织中呈低表达,miR-542-3p抑制胃腺癌SGC7901细胞的侵袭转移能力。     

下调lncRNA DNM3OS通过靶向miR-193a-3p增强人直肠癌细胞系SW-480的放疗敏感性

目的 探讨lncRNA DNM3OS对直肠癌SW-480细胞的增殖、凋亡以及放射敏感性的影响及分子机制.方法 选取30例直肠癌患者癌组织及癌旁组织,RT-qPCR检测DNM3OS和miR-193a-3p的表达水平;将抑制DNM3OS的表达载体、过表达miR-193a-3p载体转染至SW-480细胞,将DNM3OS与抑制...     

circUBAP2靶向miR-2467-3p对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：探索circUBAP2靶向miR-2467-3p对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响。方法：qRT-PCR测定43例肝癌组织中circUBAP2和miR-2467-3p表达。在肝癌Huh-7细胞中转染si-NC(si-NC组)、si-circUBAP2(si-circUBAP2组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-2467-3p模拟物（miR-2467-3p组），或共转染si-circUBAP2+anti-miR-NC(si-circUBAP2+anti-miR-NC组)、si-circUBAP2+anti-2467-3p(si-circUBAP2+anti-2467-3p组)，CCK-8和平板克隆实验测定细胞活性与克隆形成，Western blot测定cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达，流式细胞术测定细胞凋亡。双荧光素酶报告实验确定circUBAP2与miR-2467-3p的靶向关系。结果：43例肝癌组织中circUBAP2表达比癌旁组织升高，miR-2467-3p表达比癌旁组织减少（P<0.05）。circUBAP2和mi...     

卵巢浆液性癌中miR-203和miR-595表达与预后的关系

目的探讨卵巢浆液性癌组织中miR-203、miR-595表达与患者临床病理特征、预后的关系,并分析其对卵巢浆液性癌预后的预测价值。方法收集卵巢浆液性癌的手术组织样本(癌组织和癌旁正常组织),应用RT-PCR技术检测组织样本中miR-203、miR-595的表达;分析癌组织中miR-203、miR-595表达与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-203、miR-595表达与患者预后的关系;Cox回归模型分析卵巢浆液性癌的预后影响因素;受试者工作特征曲线分析miR-203、miR-595表达对卵巢浆液性癌预后的预测价值。结果与癌旁正常组织相比,卵巢浆液性癌组织中miR-203表达增加(P0.05),miR-595表达降低(P0.05)。miR-203表达与淋巴结转移、FIGO分期相关(P均0.05);miR-595表达与组织学分级、淋巴结转移、FIGO分期相关(P均0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,miR-203高表达组、miR-595低表达组患者的预后较差(P均0.05)。Cox回归模型分析结果显示:淋巴结转移、较高FIGO分期、miR-203高表达、miR-595低表达是卵巢浆液性癌预后的独立危险因素(P均0.05)。受试者工作特征曲线结果表明,miR-203、miR-595有较好的预测卵巢浆液性癌预后的价值,CA125、miR-203、miR-595联合检测的灵敏度、特异度分别为0.990、0.867。结论卵巢浆液性癌组织中miR-203高表达,miR-595低表达,且均与较差临床病理特征、不良预后相关;miR-203、miR-595可能是卵巢浆液性癌患者预后预测的潜在指标。     

卵巢癌患者miR-497、miR-125a-5p的表达及与其临床特征和生存率的关系

目的:分析卵巢癌患者癌组织中微小RNA-497(miR-497)和微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)的表达情况及其临床意义。方法:选取2018-06—2019-12在本院手术治疗的96例卵巢癌患者作为研究对象,将手术切除的卵巢癌组织作为试验组,癌旁(>2cm)正常组织为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-497和miR-125a-5p的表达情况;比较不同临床病理特征卵巢癌患者miR-497和miR-125a-5p表达水平的差异;分析卵巢癌患者三年生存率与miR-497和miR-125a-5p水平的关系;分析影响卵巢癌患者生存率的危险因素。结果:试验组miR-497和miR-125a-5p的表达量均明显低于对照组(P<0.01);与Ⅰ-Ⅱ期卵巢癌患者相比,Ⅲ-Ⅳ期患者miR-497、miR-125a-5p表达水平均较低(P<0.01),与无淋巴结转移患者相比,淋巴结转移者miR-497、miR-125a-5p表达水平均较低(P<0.05);miR-497、miR-125a-5p低表达组生存率均明显低于高表达组(P<0.05);COX回归分析显示miR-497低表达及miR-125a-5p低表达是影响卵巢癌患者生存率的独立危险因素。结论:卵巢癌患者癌组织中miR-497和miR-125a-5p表达下调,其表达水平与卵巢癌患者三年生存率密切相关。     

基于miR-155 / SOCS1 轴研究复方甘草酸苷治疗特应性皮炎小鼠的作用 机制

目的:基于miR-155/SOCS1轴研究复方甘草酸苷治疗特应性皮炎(AD)小鼠的作用机制。方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、miR-155 agomir组、miR-155 agomir阴性对照组、复方甘草酸苷组、复方甘草酸苷+miR-155 agomir组。除对照组外,其余各组小鼠采用耳背涂布卡泊三醇(MC903)溶液法建立AD小鼠模型。观察各组小鼠耳部临床特征并进行皮炎评分;HE检测各组小鼠耳组织病理情况;ELISA检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IgE水平,qRT-PCR法检测各组小鼠耳部出现组织中miR-155、SOCS1 mRNA水平;Western blot检测各组小鼠耳部组织中SOCS1蛋白表达。结果:与对照组比,模型组小鼠耳部出现明显红斑、充血红肿、耳组织表皮层增生、棘细胞层变厚、毛细血管扩张、组织水肿充血、大量炎症细胞浸润等症状,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平升高(P0.05),SOCS1 mRNA及蛋白水平降低(P0.05)。与模型组相比,miR-155 agomir组小鼠上述症状加重,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平升高(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达降低(P0.05);miR-155 agomir阴性对照组小鼠各指标差异无统计学意义(P0.05);复方甘草酸苷组小鼠上述症状减轻,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平降低(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。与miR-155 agomir组相比,复方甘草酸苷+miR-155 agomir组小鼠上述症状减轻,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平降低(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。与复方甘草酸苷组相比,复方甘草酸苷+miR-155 agomir组小鼠上述病理症状加重,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平升高(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达降低(P0.05)。结论:复方甘草酸苷可通过下调miR-155表达、上调SOCS1表达减轻AD小鼠炎症反应。     

miR-216a-5p通过JAK2靶向抑制肝癌细胞的增殖和侵袭

目的明确miR-216a-5p在调控肝细胞癌(HCC)中的生物学作用及其可能机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测92例HCC患者的肿瘤组织及对应癌旁组织中miR-216a-5p的表达情况。并采用CCK8和Transwell试验检测miR-216a-5p对HCC细胞增殖和侵袭能力的影响。采用荧光素酶、蛋白质印迹和qRT-PCR检测肝细胞癌中miR-216a-5p的表达与JAK2表达的相关性。结果发现miR-216a-5p在HCC中的表达显著降低,并与多种临床病理特征(肿瘤多样性、组织学分化、巴塞罗那分期)相关。低表达miR-216a-5p的HCC患者预后不良。双荧光素报告系统分析证实JAK2是miR-216a-5p的直接下游靶基因。并且过表达JAK2抵消了miR-216a-5p对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论 miR-216a-5p可能是一种新的潜在的肝癌治疗靶点。     

LncRNA Gm15621通过调控miR-133a/SOCS2轴抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症

目的探讨lncRNA Gm15621和miR-133a在类风湿关节炎滑膜组织中的表达及其与滑膜组织中成纤维样滑膜细胞炎症调控的关系。方法于2018年1月到2018年12月收集53例类风湿关节炎滑膜组织和20例正常滑膜组织,通过qPCR技术检测不同患者滑膜组织Gm15621和miR-133a的表达情况,免疫印迹法检测滑膜成纤维细胞SOCS2等蛋白的表达情况。结果类风湿关节炎患者滑膜组织Gm15461表达水平是正常滑膜组织的(43.06±2.48)%,miR-133a表达水平是正常组织的(2.94±0.13)倍;类风湿关节炎患者滑膜组织Gm15621表达水平与血清TNF-α(r=-0.441,P=0.001 1),IL-6(r=-0.442,P=0.0017)和IL-1β(r=-0.532,P<0.001)呈负相关,与滑膜组织中miR-133a(r=-0.629,P<0.001)表达呈负相关。荧光素酶报告基因显示:Gm15621和SOCS2都是miR-133a的靶基因,且miR-133a靶向抑制成纤维样滑膜细胞Gm15621和SOCS2,Gm15621抑制成纤维样滑膜细胞中miR-133a的表达。在体外,SOCS2敲低可以显著上调成纤维样滑膜细胞中TNF-α,IL-6和IL-1β的表达。结论类风湿关节炎患者滑膜组织中Gm15621低表达,miR-133a高表达,并且Gm15621通过抑制成纤维样滑膜细胞中miR-133a的表达促进SOCS2的表达,最终发挥抑制炎症因子表达的效果。     

miR-27a-3p通过阻断Wnt3a/β-catenin途径抑制大鼠肺纤维化

目的探讨微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对博莱霉素A5所致大鼠肺纤维化(PF)的影响及分子机制。方法雄性SD大鼠45只,随机分为对照组、miR-27a-3p激动剂(miR-27a-3p agomir)组和miR-27a-3p拮抗剂(miR-27a-3p antagomir)组,每组15只。经气管内注入博莱霉素A5建立PF模型,给药后次日分别予生理盐水、miR-27a-3p agomir、miR-27a-3p antagomir尾静脉注射,每3 d注射1次,共9次。第28天收集血液,ELISA检测血清1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)水平;处死大鼠,取肺组织,HE染色和Masson染色评价PF病变程度,实时荧光定量PCR检测miR-27a-3p、1型胶原蛋白(Col1)、Col3的mRNA水平,Western blot法检测Col1、Col3、Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平。结果miR-27a-3p agomir处理明显增加肺组织miR-27a-3p表达,miR-27a-3p antagomir则降低miR-27a-3p表达,提示miR-27a-3pagomir/antagomir转染效率较高。与对照组相比,miR-27a-3p agomir显著减轻大鼠肺泡炎症和PF程度,而miR-27a-3p antagomir则明显加重大鼠肺泡炎症和PF程度。miR-27a-3p agomir组血清P1CP、P3NP水平降低、下调肺组织Col1、Col3、Wnt3a、β-catenin水平,miR-27a-3p antagomir组则作用相反。结论 miR-27a-3p通过抑制Wnt3a/β-catenin信号通路,下调Col1、Col3表达,发挥抗PF作用。     

lncRNA TDRG1通过调节miR-101-3p促进结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)睾丸发育相关基因1(TDRG1)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制是否与微小RNA-1010-3p(miR-101-3p)相互作用有关。方法:收集40对CRC组织及相应的癌旁组织。采用RT-qPCR方法检测TDRG1和miR-101-3p在CRC组织及CRC细胞系中的表达。采用CCK-8法、集落形成实验和Transwell法评价TDRG1的体外功能。采用生物信息学和双萤光素酶报告分析方法探讨TDRG1和miR-101-3p之间关系。将shRNA和miRNA抑制剂转染CRC细胞,探讨其作用机制。结果:与匹配的癌旁组织相比,在CRC组织中观察到TDRG1的表达水平显著增加(P0.05),而miR-101-3p的表达水平显著降低(P0.05)。Pearson相关分析显示,CRC组织中TDRG1与miR-101-3p呈负相关(r=0.624,P0.01)。使用萤光素酶测定法确认了miR-101-3p作为TDRG1的靶点结合。与人正常结肠细胞NCM460相比,TDRG1在CRC细胞系(HT-29、SW480和LoVo)中明显上调(P0.05)。敲减TDRG1的表达抑制了SW480细胞的活力和集落能力(P0.05),并且迁移和侵袭细胞数量显著减少(P0.05),而转染miR-101-3p抑制剂可减轻敲减TDRG1表达引起的改变。结论:TDRG1通过调节miR-101-3p促进CRC细胞的增殖、侵袭和迁移,提示TDRG1可能是CRC治疗的一个潜在靶点。     

miR-133a-3p靶向调控CD2AP基因减轻RSV感染的人支气管上皮细胞系16-HBE损伤

目的探讨miR-133a-3p对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡、炎性反应的影响及其对CD2相关蛋白(CD2AP)的调控作用。方法收集59例支气管哮喘儿童的支气管黏膜组织标本为AsP组,同时选取59例支气管扩张非哮喘儿童的支气管黏膜组织标本为NC组,用RT-qPCR法检测组织中miR-133a-3p、CD2AP的表达量;RSV感染支气管上皮细胞(16-HBE)建立细胞损伤模型(RSV组),分别将miR-NC、miR-133a-3p mimics、si-NC、si-CD2AP、pcDNA-NC、pcDNA-CD2AP、miR-133a-3p mimics与pcDNA-NC、miR-133a-3p mimics与pcDNA-CD2AP转染至感染RSV的16-HBE细胞;用RT-qPCR法与Western blot法分别检测细胞中miR-133a-3p、CD2AP的表达量;用ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1α的水平;用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-133a-3p与CD2AP的靶向关系;Western blot法检测cleaved-caspase-3蛋白表达量。结果与NC组比较,AsP组支气管黏膜组织中miR-133a-3p的表达水平降低(P0.05),CD2AP mRNA的表达水平升高(P0.05);RSV感染的16-HBE细胞中miR-133a-3p的表达水平降低(P0.05),CD2AP的表达水平及TNF-α、IL-6、IL-1α的水平升高(P0.05),凋亡率及cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P0.05);RSV感染的16-HBE细胞中转染miR-133a-3p mimics或转染si-CD2AP可明显降低TNF-α、IL-6、IL-1α的水平、凋亡率及cleaved-caspase-3蛋白水平(P0.05);双荧光素酶报告实验证实CD2AP是miR-133a-3p的靶基因;共转染miR-133a-3p mimics与pcDNA-CD2AP可明显逆转miR-133a-3p mimics对16-HBE细胞凋亡及炎性反应。结论 miR-133a-3p过表达可通过负向调控CD2AP的表达而抑制RSV感染的支气管上皮细胞炎性反应及凋亡,从而减轻细胞损伤。     

miR-126-3p在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR检测35例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA法和流式细胞术检测,Transwell小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35例癌组织中miR-126-3p相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.028 vs 0.981±0.039,t=10.291,P0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1细胞中miR-126-3p相对表达量最低;与NC组比较,mimic组甲状腺癌细胞TPC-1增殖受到显著的抑制,第3天两组间开始表现出统计学差异(P0.05);与NC组比较,mimic组甲状腺癌细胞TPC-1凋亡显著增加[(15.32±3.20)%vs(8.12±1.17)%,t=4.623,P0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t=8.103,P0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p表达降低,上调miR-126-3p表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR-126-3p可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。