醒脑静注射液对全脑缺血再灌注大鼠血脑屏障ZO-1表达的影响

目的:探讨醒脑静(XNJ)注射液对大鼠全脑缺血再灌注后血脑屏障通透性及紧密连接蛋白1(ZO-1)表达的影响。方法:采用改良Pulsinelli四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。将雄性Wistar大鼠随机分为4组,即假手术组、全脑缺血再灌注模型组、溶剂对照组和XNJ组。每组均在缺血再灌注后24 h、48 h和72 h处理。用干湿重法测定脑组织中水含量,分光光度计法检测脑组织伊文思蓝(EB)含量,Western blot检测大脑皮层的ZO-1蛋白含量。结果:缺血再灌注后24 h,模型组、溶剂对照组和XNJ组的脑组织含水量均显著高于假手术组(P0.05),但在缺血再灌注后48 h和72 h,模型组和溶剂对照组脑组织含水量显著高于XNJ组和假手术组(P0.05)。缺血再灌注后24 h,模型组、溶剂对照组和XNJ组大鼠脑组织内EB含量均高于假手术组(P0.05),缺血再灌注后48 h和72 h,假手术组和XNJ组的EB含量显著低于模型组和溶剂对照组(P0.05)。缺血再灌注后24h,模型组、溶剂对照组和XNJ组大鼠脑皮层中的ZO-1蛋白表达水平显著低于假手术组(P0.05),同样缺血再灌注后48 h和72 h,假手术组和XNJ组皮层中ZO-1蛋白含量显著高于模型组和溶剂对照组(P0.05)。结论:在缺血再灌注后的48 h和72 h,醒脑静注射液对血脑屏障具有保护作用,可能与醒脑静注射液上调ZO-1蛋白的表达有关。     

严重烫伤后脑内ZO-1mRNA表达变化与血脑屏障功能的关系

目的:探讨脑内ZO-1mRNA的表达水平在严重烫伤过程中的动态变化及其与血脑屏障功能的关系。方法:建立30%TBSAⅢ度烫伤模型,Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、烫伤组,其中烫伤组又分为烫伤后1、3、6、12、24h等5组,应用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测ZO-1mRNA基因的表达水平,用化学法测定血脑屏障对伊文氏蓝的通透性,并分析二者的变化趋势。结果:严重烫伤后脑内ZO-1mRNA的表达迅速降低,其中以烫伤后3h降低最为显著。严重烫伤后脑组织内伊文氏蓝含量增高,其中以6h最为明显,大脑、小脑分别为(20±0.58)μg/g、(31.33±1.47)μg/g。结论:严重烫伤后的大脑内ZO-1mRNA的表达下降(P<0.01),伊文氏蓝的含量升高,ZO-1mRNA表达水平降低可能标志着血脑屏障的破坏。     

PJ34对脑缺血再灌注大鼠应用rt-PA后血脑屏障完整性的影响

目的　研究多聚ADP核糖聚合酶-1（poly-ADP ribose polymerase-1,PARP-1）抑制剂PJ34能否改善脑缺血再灌注大鼠应用重组人组织型纤溶酶原激活物（recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA）后的血脑屏障完整性。 方法　将60只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注（ischemia-reperfusion,IR）组、rt-PA组及PJ34组。IR组：采用改良 Zea Longa 线栓法,制备局灶性脑缺血2 h再灌注模型。PJ34组及rt-PA组：缺血2 h拔出鱼线,同时给予尾静脉注射rt-PA 10 mg/kg,腹腔注射PJ34或生理盐水3 mg/kg。进行神经功能缺损评分、伊文氏蓝测定血脑屏障通透性、免疫组化分析MMP-9、Claudin-5、ZO-1的表达。 结果　rt-PA组的神经功能缺损评分、伊文氏蓝含量及MMP-9表达均高于IR组,PJ34组低于rt-PA组,但高于IR组（P<0.05）;rt-PA组的Claudin-5、ZO-1表达低于IR组,PJ34组高于rt-PA组,但低于IR组（P<0.05）。 结论　PJ34通过抑制MMP-9的表达,增加Claudin-5、ZO-1的表达,可以有效改善脑缺血再灌注后应用rt-PA的大鼠血脑屏障完整性。     

内源性硫化氢抑制高肺血流大鼠肺动脉弹力蛋白的表达

目的探讨内源性硫化氢(H2S)对高肺血流所致肺血管重构大鼠肺动脉弹力蛋白的调节作用。方法将雄性SD大鼠随机分为4组:分流组、分流 炔丙基甘氨酸(PPG)组、假手术组和假手术 PPG组,每组8只。分流组及分流 PPG组大鼠经腹主动脉-下腔静脉穿刺建立高肺血流动物模型。4周后,测定大鼠肺动脉平均压(mPAP),显微镜下观察肺血管结构变化;用免疫组化方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)、弹力蛋白、转化生长因子-β(TGF-β)和结缔组织生长因子(CTGF)在肺动脉平滑肌细胞的表达。结果分流 PPG组mPAP较分流组和假手术组明显升高(P<0.05);在分流组,小型肺动脉中肌型动脉和部分肌型动脉所占百分比明显高于假手术组(均P<0.05),非肌型动脉所占百分比明显低于假手术组(P<0.01);在分流 PPG组,小型肺动脉中肌型动脉所占百分比明显高于分流组(P<0.01),非肌型动脉所占百分比明显低于分流组(P<0.01)。分流组肺中,小型肺动脉平滑肌细胞α-SM-actin、弹力蛋白、TGF-β和CTGF含量明显高于假手术组(均P<0.01),分流 PPG组上述指标明显高于分流组(均P<0.01)。结论内源性硫化氢可能通过抑制高肺血流大鼠肺动脉弹力蛋白的表达,调节其肺血管结构重构。     

人脐带间充质干细胞对大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障的保护

背景:人脐带间充质干细胞在创伤性脑损伤后血脑屏障修复过程中发挥着至关重要的作用。目的:探讨人脐带间充质干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠血脑屏障的保护作用及可能机制。方法:①将60只SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤模型组、人脐带间充质干细胞组及抑制剂Sunitinib组,每组15只。除假手术组外,其他3组采用大鼠可控性皮质撞击仪制作创伤性脑损伤模型;②造模后0.5,24,48 h,假手术组、脑损伤模型组大鼠经尾静脉注射1 mL生理盐水,人脐带间充质干细胞组、抑制剂Sunitinib组大鼠经尾静脉注射2×10^9 L^-1人脐带间充质干细胞1 mL,抑制剂Sunitinib组大鼠从造模前1 d开始至处死每天按80 mg/kg的剂量口服PDGFR-β通路抑制剂Sunitinib;③造模后3 d,利用干湿比重法计算各组大鼠脑组织含水量,伊文思蓝法检测血脑屏障的通透性,免疫荧光染色观察GFAP和vWF的表达,Western blot检测血脑屏障相关蛋白及PDGFR-β蛋白的表达。结果与结论:①与假手术组比较,脑损伤模型组的脑含水量、伊文思蓝含量、vWF和GFAP表达明显升高(P<0.05),ZO-1、Oclaudin-5、PDGFR-β蛋白表达明显降低(P<0.05);②与脑损伤模型组比较,人脐带间充质干细胞组的脑含水量、伊文思蓝含量、vWF和GFAP表达明显降低(P<0.05),ZO-1、Oclaudin-5、PDGFR-β蛋白表达明显升高(P<0.05);使用PDGFR-β抑制剂后人脐带间充质干细胞的治疗作用被明显抑制;③结果表明人脐带间充质干细胞可以降低创伤性脑损伤大鼠血脑屏障的通透性,发挥神经保护作用,其作用机制可能是其提高了损伤区PDGFR-β蛋白的表达。     

颈淋巴管阻塞对脑缺血BBB通透性和MMP-9表达的影响

目的:探讨脑梗塞后给予大鼠颈淋巴管阻塞对缺血侧大脑皮质基质金属蛋白酶9表达水平及血脑屏障通透性和脑含水量等的影响。方法:用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,以及行大鼠大脑中动脉阻塞15min后摘除双侧颌下腺的颈浅和颈深淋巴结,造成脑梗塞后颈淋巴管阻塞(MCAO+CLB)模型去检测缺血侧大脑皮质脑含水量、血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶9mRNA表达水平和免疫活性的变化。结果:在不同的时点,上述各指标在MCAO+CLB组大鼠明显高于MCAO组。结论:MCAO后,CLB通过上调梗塞侧皮质MMP-9的表达水平而加重脑水肿和提高血脑屏障通透性。     

DDR1蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤引起血脑屏障破坏中的作用及机制

目的:探讨盘状结构域受体酪氨酸激酶(discoidin domain recetor 1,DDR1)蛋白在局灶性脑缺血致血脑屏障损伤中的作用机制及其病理性意义。方法:成年雄性SD大鼠80只,体重280³20 g,采用随机数字表法,将其随机分为假手术组、缺血再灌注组、siRNA处理组和siRNA错配组,每组5只。采用大鼠大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,缺血120 min再灌注24 h时进行神经行为学评分,随后处死大鼠取脑,分别采用TTC(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride)染色法、干湿比重法、伊文思蓝法测定脑梗死体积、脑组织含水量及血脑屏障的通透性。结果:与假手术组比较,脑缺血再灌注组神经行为学评分降低(P<0.05),脑梗死体积百分比增加,缺血侧脑组织含水量增多(P<0.05),血脑屏障的通透性增大(P<0.01);与局灶性脑缺血再灌注组比较,DDR1-siRNA处理组神经行为学评分升高,脑梗死体积百分比减少,脑组织含水量减少(P<0.05),血脑屏障通透性降低(P<0.01)。结论:DDR1蛋白可能参与了脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的破坏,抑制DDR1的表达可降低血脑屏障的通透性;另外,检测DDR1的表达可作为脑卒中早期诊断和判断预后的分子指标之一。     

川芎嗪对内毒素脂多糖诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其机制

目的:探讨川芎嗪对内毒素脂多糖(LPS)诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其调控机制。方法:利用脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞共培养建立体外大鼠血脑屏障模型,随机分为正常对照组、川芎嗪对照组、LPS干预组和川芎嗪治疗组。采用γ计数仪检测~(125)I-BSA通透量观察体外血脑屏障模型通透性的改变,Western印迹法检测紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)表达量的变化。结果:LPS使体外血脑屏障模型对~(125)I-BSA的通透量明显增加,脑微血管内皮细胞ZO-1蛋白表达下降,川芎嗪治疗组能明显拮抗LPS的上述作用。结论:川芎嗪对LPS诱导的体外血脑屏障通透性增高具有保护作用,其机制与它能影响血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达有关。     

紧密连接蛋白-1、闭锁蛋白、白细胞介素-18在急性重症心肌炎心脏粘膜中的表达

目的 观察急性重症心肌炎大鼠心脏粘膜紧密连接蛋白(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)及白细胞介素(IL)-18的表达变化,探讨急性重症心肌炎时心脏屏障功能损伤的机制.方法 选择SD大鼠60只,随机分为三组,分别为对照组、假手术组、心肌炎组,每组各20只.心肌炎组制作急性重症心肌炎模型,假手术组大鼠麻醉后手术进腹,仅翻动心脏组织.对照组不进行腹部手术.术后24h处死各组大鼠,取心脏组织.光镜下观察心脏组织病理学改变,免疫组化检测各组心脏粘膜ZO-1、Occludin、IL-18蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测各组心脏粘膜ZO-1、Occludin、IL-18 mRNA的表达.结果 光镜下可见心肌炎组心脏黏膜绒毛上皮坏死脱落,血管充血扩张,大量中性粒细胞浸润.对照组、假手术组、心肌炎组ZO-1阳性率分别为85％、70％、15％,心肌炎组ZO-1阳性率低于对照组及假手术组(P＜0.05).对照组、假手术组、心肌炎组Occludin阳性率分别为75％、65％、20％,心肌炎组Occludin阳性率低于对照组及假手术组(P＜0.05).对照组、假手术组、心肌炎组IL-18阳性率分别为15％、15％、80％,心肌炎组IL-18阳性率高于对照组及假手术组(P＜0.05).心肌炎组ZO-1、Occludin mRNA表达水平均低于对照组及假手术组(P＜0.05);,IL-18高于对照组及假手术组(P＜0.05).结论 急性重症心肌炎时,紧密连接相关蛋白Z0-1、Occludin表达降低,IL-18表达增加,可能共同参与了急性心肌炎心脏粘膜屏障功能损伤的病理过程.     

全反式维甲酸对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性和ZO-1表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性和紧密连接蛋白ZO-1的影响。方法选取180只健康雄性大鼠,随机分为假手术组(Sham,60只),缺血再灌注组(I/R,60只)和全反式维甲酸干预组(ATRA,60只),每组又细分为1d、3d和7d三个亚组。采用Zea Longa法制作局灶性脑缺血再灌注模型,伊文思蓝渗透性实验检测血脑屏障通透性变化,免疫组织化学方法法和Western blot方法检测各组大鼠脑组织ZO-1蛋白的表达,Real-time PCR方法检测各组大鼠脑组织ZO-1mRNA的表达。结果缺血再灌注后,EB含量在1d时含量最高,3d时开始逐渐下降,而与相同时间点的I/R组相比,ATRA组EB含量显著降低(P0.01)。与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织ZO-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P0.01),而与相同时间点的I/R组相比,ATRA组大鼠脑组织ZO-1蛋白及mRNA的表达水平均显著升高。结论全反式维甲酸降低大鼠脑缺血再灌注血脑屏障通透性可能与上调脑缺血再灌注后脑组织中ZO-1的表达相关。