卵巢癌中ETV4基因高表达对患者预后的临床意义

目的　探讨ETV4在卵巢癌中的表达及与预后的关系。 方法　分别利用BioGPS数据库、Oncomine数据库、癌症细胞系百科全书（CCLE）和Kaplan-Meier Plotter数据库分析ETV4基因在正常人体组织中的表达、卵巢癌组织中的表达，以及卵巢癌患者预后生存分析；利用cBioPortal数据库分析ETV4在卵巢癌中基因突变和预后关系。 结果　BioGPS数据库分析结果显示ETV4在正常卵巢组织低表达；Oncomine数据库检索出340项，ETV4表达水平有差异意义的结果32项，其中ETV4表达增高30项，ETV4表达降低2项；对符合设定条件的2项研究进行Meta分析发现，ETV4在卵巢癌组织中呈高表达状态（P<0.05）；CCLE分析结果显示ETV4在卵巢癌细胞中高表达；Kaplan-Meier Plotter数据库结果显示，ETV4高表达组的卵巢癌患者总体生存时间（OS）与无病生存时间（DFS）较低表达组均显著延长（P<0.05）。cBioPortal数据库结果显示ETV4在卵巢癌中基因突变率为2.5%，但对卵巢癌患者的OS与DFS均无显著影响（P>0.05）。 结论　ETV4在卵巢癌组织中高表达，且具有显著延长卵巢癌患者OS与DFS的作用，可作为卵巢癌临床预后的候选标志物；ETV4基因的突变对卵巢癌患者的OS与DFS无显著影响。     

食管鳞癌组织中TIG1基因甲基化及其mRNA表达的研究

 目的：探讨他扎罗汀诱导基因1（tazarotene-induced gene-1, TIG1）基因甲基化及表达与食管鳞癌发生、发展的关系。方法：采用甲基化特异性PCR检测43例食管鳞癌组织、20例癌旁组织和15例正常组织中TIG1基因甲基化状态;实时荧光定量PCR法法检测TIG1 mRNA的表达。结果：食管鳞癌组织TIG1基因启动子甲基化率为25.6%（11/43）,癌旁组织5.0%（1/20）,正常组织中未检测到其甲基化,差异有统计学意义（P<0.05）;其甲基化水平与患者性别、年龄、肿瘤生长部位和分化程度无关（P>0.05）,但与患者TNM分期（P<0.01）及淋巴结转移（P<0.05）有关。鳞癌组织TIG1 mRNA显著低于癌旁组织（P<0.05）及正常组织（P<0.01）,甲基化组织TIGI mRNA表达显著低于非甲基化组织（P<0.01）。结论：甲基化可能是食管鳞癌中TIG1基因失活的重要机制,与患者病理分期及淋巴结转移有关。     

miR-21表达异常与乳腺癌临床病理特征及预后的关系

目的： 应用荧光定量PCR技术研究miR-21表达量与乳腺癌临床病理特征及患者预后的关系。方法: 搜集具有5年以上随访资料的乳腺癌病例113例,从甲醛固定、石蜡包埋（FFPE）乳腺癌(BRCA)及其癌旁组织(NATs)中提取总RNA,应用荧光定量RT-PCR技术检测miR-21在乳腺癌及其癌旁组织中的表达量。结果: 与相应癌旁组织比较,miR-21在乳腺癌组织中表达显著上调（P<0.01）,平均上调倍数为1.74 ± 0.48。miR-21表达上调水平与乳腺癌临床分期(P<0.01)、淋巴结转移（P<0.01)及预后［hazard ratio (HR)=5.476, P<0.01］相关。 Cox多重回归分析显示miR-21相对表达量(HR=4.133, P<0.01)为乳腺癌的独立预后因素之一。结论: miR-21表达上调与乳腺癌患者预后不良有关,其可能是一种潜在的乳腺癌独立预后指标。     

Epsin3在结直肠癌中的差异表达及生物信息学分析

目的 探讨介导内吞作用的衔接蛋白epsin 3（EPN3）在结直肠癌中的表达及意义,为深入研究EPN3的调控模式提供实验依据。 方法 分别运用GEPIA和GEDS数据库分析EPN3在结直肠癌组织和细胞中的表达情况,并通过SMART和cBioPortal数据库分析EPN3基因甲基化和拷贝数变异与其表达水平的关系;利用Metascape数据库对EPN3相关的共表达基因集进行GO富集和通路分析;运用BioPlex蛋白互作数据库分析EPN3在HCT116细胞中的蛋白作用网络。为了对EPN3进一步验证,我们收集13对结直肠癌癌旁组织和癌组织标本,用Real-time PCR检测EPN3 mRNA表达;并通过敲减EPN3观察其对肿瘤细胞增殖、集落形成和迁移能力的影响。 结果 GEPIA、GEDS、SMART和cBioPortal等数据库分析显示,EPN3在结直肠肿瘤组织中高表达(P<0.01)。其表达水平与甲基化和拷贝数变异相关。EPN3相关基因的富集结果显示主要与细胞黏附相关。EPN3与UBB、CCDC130、TNFAIP1、PHGDH、EPN2等构成的蛋白相对作用网络与蛋白泛素化有关。Real-time PCR结果显示,EPN3在癌组织中高表达(P<0.05)。通过沉默EPN3可以抑制HCT116和HT29细胞的增殖、集落形成和迁移能力。 结论 EPN3在结直肠癌组织中高表达,且与细胞黏附和蛋白泛素化等生物学过程有关,敲低EPN3可抑制结直肠癌细胞系HCT116和HT29的增殖、集落形成和迁移等过程。     

一种新的乳腺癌预后标志物——着丝粒蛋白M

目的 着丝粒蛋白M（CENP-M）是组成型着丝粒相关网络（CCAN）蛋白家族的一名重要成员,它可以保证着丝粒、动粒的正确形成和功能行使,在细胞正常分裂中发挥重要作用。但是目前有关CENP-M与癌症的研究很少。因此,本实验旨在探讨CENP-M的表达水平与乳腺癌预后之间的关系。方法 利用Oncomine 数据库、COSMIC数据库、bc-GenExMiner、Kaplan-Meier plotter、cBioPortal、GEPIA和Timer数据库系统,分析CENP-M 的表达和乳腺癌预后情况。结果 与正常组织相比,CENP-M在乳腺癌组织（尤其在侵袭性导管乳腺癌、侵袭性筛状乳腺癌和黏液性乳腺癌）中表达上调;基因突变分析表明,CENP-M表达增加不是由基因序列或拷贝数的改变引起的;CENP-M的表达和乳腺癌不同分型以及Scarff-Bloom-Richarolsn(SBR)分级相关;CENP-M高表达的乳腺癌患者预后较差;乳腺癌中CENP-M的表达和CDC45的表达相关。结论 CENP-M可以作为乳腺癌患者的预后标志物。     

DAPK1基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系

目的：研究乳腺癌组织中死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase 1,DAPK1）启动子甲基化状态及其与临床病理特征之间的关系,并探讨该甲基化状态与DAPK1 mRNA表达的相关性。方法：应用甲基化特异性PCR法检测人乳腺癌组织和相应癌旁正常乳腺组织中DAPK1启动子甲基化状态,分析其与患者临床病理特征的关系,并结合半定量RT-PCR法的检测结果加以分析。结果：43例乳腺癌标本中DAPK1启动子甲基化阳性率为44.1%（20/43）,DAPK1启动子甲基化状态与年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、ER状态、PR状态、Her2状态无关（P〉0.05）,而与有无淋巴结转移、P53是否阳性有关（P〈0.05）。DAPK1启动子甲基化标本中的DAPK1mRNA表达水平低于未甲基化标本,两者差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：乳腺癌中DAPK1基因启动子区高甲基化与其mRNA失表达有关,在乳腺癌发生、发展中可能起重要作用,有可能作为乳腺癌诊断和预后分析的检测指标之一。     

XKRX在结直肠癌的表达和临床意义

目的　探讨XKRX（XK related, X-linked）在结直肠癌组织中的表达和临床意义。 方法　收集TCGA公共数据库中结直肠癌芯片数据,对结直肠癌组织样本中XKRX基因表达数据以及对应的临床资料进行回顾性分析和生存分析。在临床上收取结直肠癌样本,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹（western blot）实验验证XKRX表达水平是否与芯片结果一致,为研究XKRX基因提供新的实验数据。 结果　芯片结果显示XKRX在结直肠癌组织的表达水平明显高于癌旁正常组织（P＜0.0001）。利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测21例结直肠癌临床样本中XKRX表达水平,结果显示结直肠癌组织中XKRX的信使RNA（mRNA）和蛋白质表达水平明显高于癌旁正常组织。XKRX表达与性别（P=0.9034）、年龄(P=0.886)、TMN分期(P=0.3979)、淋巴结转移(P=0.7995)和远处转移(P=0.6032)无明显统计学差异。但XKRX高表达组的生存时间明显低于低表达组（P=0.0075）。 结论　XKRX在结直肠癌组织中表达上调,可能发挥原癌基因的作用,影响结直肠癌的恶性进展,进而降低患者的生存时间,提示患者不良预后。     

RhoC基因沉默对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的：分析RhoC对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法：利用UALCAN和K-M plotter在线数据库预测分析RhoC在OSCC中的表达及其与病理分期分生存率的关系,并结合IHC实验检测OSCC组织中RhoC的表达水平。按照人RhoC基因构建两条小干扰RNA(siRNA)并将细胞进行实验分组。RT-qPCR检测转染后各组细胞RhoC的mRNA表达水平,Western blot法分析实验分组细胞中RhoC、FAK、MAPK、p-FAK、p-MAPK、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达;此外,比较各实验分组细胞的穿膜细胞数和划痕愈合面积分析细胞的侵袭和迁移活动。最终通过构建裸鼠肺转移模型对上述实验进行验证。结果：RhoC在OSCC中高表达,并和病理分期和病理分级等关联性大。RhoC的mRNA和蛋白相对表达量在OSCC中增高（P<0.01）;RT-qPCR及Western blot结果显示,敲减RhoC表达后,RhoC的mRNA和蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,Western blot结果显示p-FAK、p-MAPK、M...     

蛋白激酶WEE1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的　探讨蛋白激酶WEE1在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床指标的相关性,并阐述其在胃癌发生发展中的作用。 方法　使用Oncomine数据库分析WEE1在胃腺癌和胃黏膜组织中的表达差异。选取100例胃腺癌和80例癌旁组织标本,通过免疫组织化学法和组织芯片技术检测WEE1蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达水平。对免疫组织化学结果中染色的比例以及染色程度进行半定量分析,对半定量分析结果与胃癌临床指标进行相关性分析。使用RT-PCR和Western blotting检测WEE1在胃癌和癌旁组织中的mRNA和蛋白表达水平。 结果　WEE1在100例胃癌患者中的阳性率为86%,高表达86例,低表达14例。通过Oncomine数据库分析,蛋白激酶WEE1在胃腺癌中的表达明显高于胃黏膜组织中的表达（P<0.01）。免疫组化、RT-PCR和Western blotting均显示,WEE1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P<0.01）;免疫组化还显示WEE1的表达量随着胃癌组织分期的增加而增加（P<0.01）。 结论　蛋白激酶WEE1在胃癌组织中高表达,提示其可作为胃癌治疗靶点之一。     

乳腺癌中印记基因SLC22A18/TSSC5/BWR1A启动子区甲基化及mRNA表达的研究

目的： 研究印记基因SLC22A18启动子区甲基化对乳腺侵润性导管癌组织中的SLC22A18 mRNA表达的影响，探讨其与临床病理特征之间的关系。方法：实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time quantitative RT-PCR）方法检测40例乳腺侵润性导管癌及其癌旁组织中SLC22A18 mRNA的表达，甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测SLC22A18基因启动子区的甲基化状态。检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-aza-dc）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）作用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231后，对SLC22A18基因启动子区DNA甲基化和mRNA表达的影响。结果：SLC22A18在40例乳腺侵润性导管癌中mRNA表达量低于癌旁组织（0.12±0.10 vs 0.69±1.05，P＜0.01）；40例乳腺侵润性导管癌及对应癌旁组织中，SLC22A18启动子区的甲基化发生率分别为75％和37.5%，差异有统计学意义（P＜0.01）；在40例乳腺侵润性导管癌组织中，甲基化组SLC22A18 mRNA表达量低于非甲基化组（0.11±0.08 vs 0.24±0.18，P＜0.01）。5-aza-dc和5-aza-dc/TSA能不同程度逆转乳腺癌细胞株MDA-MB-231中SLC22A18基因的甲基化状态，并上调SLC22A18基因表达。结论：SLC22A18基因甲基化与乳腺癌发生有一定的关联，SLC22A18基因表达下调与其启动子区CpG岛异常甲基化相关。     

基于癌基因组图谱数据挖掘分析CC亚族趋化因子配体20在食管癌中的表达及临床意义

目的 探讨CC亚族趋化因子配体20(CCL20)在食管癌中的表达及对病程进展和预后的影响.方法 利用癌基因组图谱(TCGA)、UALCAN、GEO等相关数据库分析CCL20基因在食管癌组织与癌旁组织中的表达差异,通过Kaplan-Meier模型探讨CCL20表达水平与预后的关联性;分析CCL20与肥胖、甲基化等之间的关...     

乳腺癌组织中IL-6与PRL表达及其临床意义

目的　探讨白介素-6（interleukin-6,IL-6）和催乳素（prolactin,PRL）在乳腺浸润性导管癌（breast invasive ductal carcinoma,BIDC）组织中的表达及临床意义。 方法　采用免疫组化法对63例乳腺癌及其癌旁组织、17例乳腺纤维瘤中IL-6和PRL的表达进行检测,结合临床病理参数及无事件生存（event free survival,EFS）进行统计学分析。 结果　浸润性导管癌组织中IL-6和PRL阳性率均高于癌旁组织及乳腺纤维瘤组织（P均＜0.05）;癌旁组织中IL-6和PRL的表达高于瘤旁组织（P均＜0.05）;IL-6、PRL的表达均与肿瘤大小、TNM分期相关（P均＜0.05）;IL-6与PRL表达呈显著正相关（rs=0.842,P＜0.05）。EFS显示,IL-6、PRL高表达组患者EFS均低于低表达组患者（分别为IL-6,Log- rank= 5.186,P= 0.023;PRL, Log- rank= 5.743,P= 0.017）。单因素Cox风险模型显示,淋巴结转移、TNM分期高、IL-6阳性表达、PRL阳性表达均对患者的EFS有影响。 结论　检测乳腺癌中PRL和IL-6的表达有利于其预后诊断;通过缓解病人的紧张、促进情绪调节、改善睡眠质量等因素可在一定程度上降低乳腺癌的发生、进展及不良预后的风险。     

NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响

目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达。脂质体介导NDRG1基因瞬时转染高侵袭高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法、流式细胞术观察NDRG1基因转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;细胞体外侵袭实验和迁移实验观察转染后细胞侵袭和迁移能力的变化。结果NDRG1蛋白和mRNA表达分别为:无转移的乳腺癌组织阳性率为100%(14/14)和0·82±0·14,而有转移的乳腺癌组织中为69·2%(9/13)和0·17±0·11,均明显降低;对两株细胞的检测中,高侵袭高转移的MDA-MB-231细胞株中NDRG1mRNA的表达水平(0·14±0·02)明显低于低侵袭低转移的MCF7细胞株(1·51±0·11)。NDRG1基因瞬时转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组和pEGFP-N3组相比,pEGFP-NDRG1-N3转染组中,细胞BrdU掺入率降低,细胞周期G0/G1期比例增高,S期比例明显减低;同时细胞体外侵袭能力下降,而体外迁移能力则差异无统计学意义。结论NDRG1基因的表达与乳腺癌的转移呈负相关关系,提示该基因可望成为早期预测乳腺癌转移的分子生物学标记物之一;NDRG1基因通过脂质体转染高侵袭高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,可抑制肿瘤细胞增殖、降低其侵袭能力,提示其可作为一个候选的肿瘤转移抑制基因,并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因。     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.     

乳腺癌中同源异型盒基因(HOX)A5表达的研究

目的研究乳腺癌组织中同源异型盒基因（HOX）A5mRNA和蛋白表达,并分析其与乳腺癌临床病理参数间的相关性,以探讨HOXA5基因在乳腺癌发生、发展及转移中的作用。方法运用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）技术检测60例乳腺癌（其中54例浸润性导管癌）和24例乳腺良性病变中HOXA5 mRNA表达,免疫组织化学SP法检测HOXA5蛋白表达。统计学办法分析HOXA5攮因表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果（1）乳腺癌中HOXA5 mRNA相对表达量为0．73～193．07,均值为20．85;乳腺良性病变中相对表达量为5．42～81.91,均值为30．94。乳腺癌HOXA5 mRNA表达明显低于良性乳腺病变（P〈0．01）。（2）乳腺癌中HOXA5蛋白表达减少或消失。（3）淋巴结转移阳性乳腺癌病例HOXA5 mRNA表达明显低于转移阴性组,两者间差异有统计学意义（P〈0．05）。HOXA5蛋白在淋巴结转移阳性和阴性乳腺癌中的表达差异具有显著性（P〈0．01）。淋巴结转移阳性的乳腺癌中HOXA5蛋白主要呈弱阳性表达或表达缺失,在淋巴结转移阴性的乳腺癌中主要呈中度至强阳性表达。（4）HOXA5 mRNA和蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分型、浸润性导管癌分级等其他临床病理学参数间未见相关性（P〉0．05）。结论HOXA5基因表达异常可能与乳腺癌有关。HOXA5基因表达抑制可能与乳腺癌淋巴结转移有关。     

胃癌中HSDL2过表达与临床病理特征的相关性

目的探讨羟基类固醇脱氢酶样蛋白2(hydroxysteroid dehydrogenase like 2,HSDL2)在胃癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP两步法检测HSDL2蛋白在90例胃癌和20例正常胃组织中的表达,分析HSDL2蛋白过表达与胃癌临床病理特征的关系,并采用GEPIA数据库进行生存分析。结果HSDL2蛋白主要定位于胃癌细胞SGC-7901和AGS的细胞质中。UALCAN数据库分析结果显示:胃癌组织中HSDL2 mRNA的表达水平明显高于正常胃组织(P<0.05)。HSDL2蛋白在胃癌组织中过表达,强阳性率为58.9%(53/90),显著高于正常胃组织(5.0%,1/20)(P<0.01)。HSDL2蛋白表达与胃癌分化程度、临床分期及肿瘤直径密切相关(P均<0.05),与患者性别、年龄及淋巴结转移无明显相关性。GEPIA数据库分析结果显示,HSDL2蛋白过表达胃癌患者无瘤生存率低于HSDL2蛋白低表达患者(P<0.05)。结论HSDL2在胃癌组织中明显过表达,其表达水平与胃癌的发生、发展及不良预后密切相关,有望成为胃癌患者预后评估的重要指标。     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.