自身抗体与重症肌无力的研究新进展

重症肌无力（MG）主要是由乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）介导的细胞免疫依赖补体参与的,针对神经肌肉接头突触后膜上乙酰胆碱受体的自身免疫性疾病。近年来对MG的发病机制作了大量的研究,发现自身抗体在MG的发病中有重要作用,如AChR抗体、阿理阿若碱（RyR）抗体和肌肉特异性酪氨酸激酶（MuSK）抗体等。由于MG病人血清中所含抗体的不同其临床特点不同,在发病机制中的作用也有差异,因而治疗MG前分析抗体水平可以提供更合理的治疗方式,通过抗体水平随访治疗效果。     

细胞内抗体及其应用

细胞内抗体是指在细胞内合成并作用于细胞内组分的抗体，也称内抗体。若在抗体基因的Ｎ端或Ｃ端加入引导序列就能使抗体表达定位在亚细胞部位、如胞浆、线粒体、内质网或细胞核部位，细胞内抗体可以提供一种其他方法不能做到的研究分子功能的方法。由于内抗体可抑制病毒制和抑制生长因子受体或癌蛋白，因此有作为基因治疗的前景。     

不孕不育妇女四项自身免疫抗体的研究

目的　探讨自身免疫抗体与不孕不育的关系。方法　ELISA法检测了 172例不孕妇女。结果　原发不孕和继发不孕组阳性率明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,原发不孕组AOVAb(2 4 .7% )与AhCGAb(13.3% )有显著性差异 (P <0 .0 1) ,继发不孕组AEMAb((18.6 % )与AhCGAb(10 .2 % )、AOVAb(2 2 % )间有显著性差异 (P〈0 .0 1) ,原发不孕与继发不孕组间四项自身抗体均无差异 (P >0 .0 5 )。结论　自身抗体在不孕人群中有较高的发生率 ,应引起重视。     

噬菌体抗体库技术研究进展

应用ＰＣＲ技术从生物个体内扩增出整套抗体轻、重链Ｖ区基因，克隆λ噬菌体或噬粒表达载体系统，构建抗体表达文库，通过抗原亲和吸附→洗脱→繁殖（Ｐａｎｎｉｎｇ）从中筛选富集多种目的克隆，制备相应单克隆抗体。本文就此项技术研究新进展作一简要介绍。     

噬菌体展示技术在全人源性抗体发现中的应用北大核心CSCD

噬菌体展示技术是目前应用最广泛的体外抗体筛选技术，它以噬菌体为载体，将外源抗体库基因插入到噬菌体衣壳蛋白基因中，在噬菌体表面表达衣壳蛋白的同时也展示了抗体分子。抗体药物因靶向优势在肿瘤免疫和病原生物感染中都发挥着重要作用，是其成为医药研发领域热点的重要推动力。因此，本文对噬菌体展示技术的研发背景、基本原理、抗体库构建类型及抗体展示片段类型进行综述，并对基于噬菌体展示的全人源性抗体的最新进展和应用前景进行了展望。     

抗体组学和抗体组药物研究进展与展望

抗体组学是在基因组学和蛋白组学基础上,结合鼠、兔、人杂交瘤技术及基因工程抗体技术,经过抗体靶标高通量筛选、建立大规模抗体库、大规模高通量筛选、优化,最终应用于研究、诊断及治疗的抗体一门新兴学科。抗体组药物以高通量、整体化、信息化和系统化为特点,大大提高了抗体药物的研发速度,缩短了药物的研发周期;由于抗体组药物的筛选利用了基因芯片、蛋白芯片和组织芯片等高通量技术,减少了研发成本和风险,同时既可获得广谱的抗体药物,又可获得个性化的抗体药物。本文通过对抗体组学、抗体组药物研究的进展介绍与展望,回顾了单克隆抗体技术的发展,提出目前抗体组药物靶标筛选、抗体及全人抗体库制备、高效抗体组药物筛选和抗体组药物优化等技术的重要意义,介绍了转基因小鼠技术、噬菌体显示技术和人-人杂交瘤技术制备人及全人抗体的方法,并对当前抗体组药物的研发现状及药物市场进行分析。作为生命科学的主要发展方向,抗体组药物将成为治疗肿瘤、传染性疾病、自身免疫性疾病新的研究热点。     

新型单克隆抗体

本文综述了单克隆抗体(McAbs)技术的最新进展。结合细胞杂交和基因工程的优势,开展了新型McAbs的研究,包括双功能抗体、嵌合抗体、新效能抗体及单域抗体(single domain antibodies)(dAbs)等。本文重点介绍了dAbS的制备、生物学性质及优缺点。制备dAbs新技术的出现是基于单独的重链可变区与抗原结合发生特异性反应,这种结合的紧密程度与整个抗体所起作用完全一致。这一重大发现是利用多聚酶链反应(PCR)促使目的基因在体外扩增的结果。使有可能从数以几十亿计的重链基因中,选择和复制编码具有结合位点的重链基因,并护它在细菌中克隆化,以产生不同的重链片段。每一克隆能制造由真核细胞生产转变为细菌生产,制造工艺较为简单,制造时间大大缩短(仅需数天),将结束了200年来由动物免疫产生抗体的历史。由于dAbd体积小(俗称小抗体),可以攻击实体瘤内的癌细胞和堵塞病毒上的深“峡谷” 位点,发挥整个抗体难以达到的效能。研制dAbs可能成为研究新药(生物弹头)和新的诊断制剂的基础,也可能为攻克病毒打开缺口。我们相信,随着单域抗体的崛起和不断完善,其应用前景是不可限量的,这将使McAbs技术的发展与应用更趋完善。     

人源性抗地高辛单链抗体(scFv)及diabody的获取

目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗地高辛单链抗体(scFv),并构建双价抗体(diabody)。方法:以固相化的Dig对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选,4轮后挑取集落,用ELISA法鉴定其特异性,并对抗Dig阳性抗体基因进行DNA指纹分析及测序分析。选取活性好的抗体基因进行改造,构建diabody。结果:在抗体库的筛选过程中可见到明显的富集现象,获得4株可与Dig特异性结合的人源单链抗体,经DNA指纹分析及测序分析证明为不同抗体基因,分泌抗Dig抗体的阳性克隆的可变区基因轻链均属于λ第1亚群,重链基因分别属于第3和第4亚群。选取4号克隆进行基因改造,构建diabody的表达载体,获得活性较好的diabody。结论:利用噬菌体抗体技术获得了人源性抗Dig的抗体,并改造成应用前景较好的diabody,为临床诊断及治疗洋地黄类药物的中毒提供了具有实用价值的人源抗体。     

不规则抗体影响血型鉴定95例特异性分析

目的 通过对95例影响血型鉴定的不规则抗体特异性的分析,探讨不规则抗体影响患者血型鉴定的特点.方法 对2013年1月至2014年12月间45157例申请输血患者进行血型鉴定及不规则抗体筛查,对其中不规则抗体筛查结果阳性并干扰血型反定型的样本进行16系谱细胞抗体鉴定,明确抗体类型及其特异性.通过筛查献血员红细胞表面抗原选择与抗体对应抗原阴性的红细胞制备反定型细胞进行血型鉴定,以排除不规则抗体对血型反定型的干扰.以不规则抗体对应抗原阴性红细胞做交叉配血试验,进一步验证血型鉴定结果.结果 95例样本(男27例,女68例)因MNSs、RH、Lewis、P、Duffy、Kidd、Kell血型系统的不规则抗体干扰血型鉴定.其中不规则抗体产生最多的是MNS系统55例,占57.89％;其次为RH系统10例,占10.53％;Lewis系统8例,占8.42％;P系统2例,占2.11％;Duffy系统1例,占1.05％;Kidd系统1例,占1.05％;Kell血型系统1例,占1.05％;MNS系统与RH系统联合2例,占2.11％;未鉴定出抗体特异性15例,占15.79％.95例样本中IgM类76例,占80％,IgG类19例,占20％.结论 影响血型鉴定的不规则抗体以IgM类为主,少量高效价的IgG类抗体也可影响血型鉴定.     

基因工程抗体研究进展

王琰,男,５４岁,教授,解放军海军总医院中心实验科主任,北京医科大学临床肿瘤学院及基础医学院免疫学系兼职教授,第三军医大学兼职教授,主要从事抗体工程研究。抗体是机体内最复杂的分子,以其特有的基因结构和重组形成了巨大的多样性,可结合任何一种抗原,不仅为...     

构建抗体微阵列过程中抗体固定的策略

抗体微阵列作为蛋白组学研究的一个技术平台．可以高通量并行检测多种蛋白质。由于抗体结构的特殊性，将抗体固定于固相载体表面已成为构建抗体微阵列构成中的关键步骤。本文就近年来用于构建抗体微阵列的几种抗体固定的方式及其优缺点进行综述。     

拟输血患者血型不规则抗体检测结果的回顾性分析北大核心CSCD

目的探讨拟输血患者血型不规则抗体的检出及分布情况,以指导临床合理安全用血。方法应用盐水法、抗人球蛋白法和微柱凝胶技术对58 565例拟输血住院及急诊患者进行血型不规则抗体检测,对阳性结果进一步采用谱细胞进行抗体特异性鉴定。结果共检出不规则抗体阳性351例,检出率为0.60%(351/58 565)。鉴定出特异性抗体282例,检出率为0.48%(282/58 565);自身抗体36例,检出率为0.06%(36/58 565);无法鉴定抗体特异性共33例,占0.06%(33/58 565)。不同性别患者不规则抗体的检出率比较:女性患者222例,阳性率为0.73%(222/30 582)显著高于男性患者129例,阳性率为0.46%(129/27 983)。结论拟输血患者有必要进行不规则抗体筛查和特异性鉴定,避免免疫性输血反应的发生。     

大容量人源天然噬菌体抗体文库的建立

随着噬菌体展示技术的发展,抗体库的构建方案日趋成熟,使人们可以从人源噬菌体抗体库中淘选到全人源化的基因工程抗体１。为抗病毒、抗肿瘤以及自身免疫性疾病等的治疗,开辟了新的途径２。为了获得供临床治疗应用的低抗原性、高亲和性抗体,必须构建库容量大、具有多样性的人源抗体库３,对于未经免疫的天然抗体库,则要求更高４。但在这方面,尤其是优化抗体库的多样性问题上,还存在一些难点。为此,我们从取材开始,对抗体库构建过程中的每个环节进行了严格的控制,从而极大地提高了抗体库的多样性,获得了具有较高代…     

蛋白酪氨酸磷酸酶抗体在糖尿病分型诊断中的价值

糖尿病主要依据其病因学的不同而进行分型，其中1型糖尿病是一种免疫介导的疾病，患者血清中可检测到针对胰岛B细胞的自身抗体，是存在免疫损害的有力佐证。目前临床上主要以胰岛细胞抗体（ICA）、谷氨酸脱羟酶抗体（GADA）、胰岛素自身抗体（IAA）联合检测作为糖尿病分型辅助的诊断。     

抗地高辛人源小分子抗体的构建

目的:将从大容量噬菌体抗体库中筛选得到的人源抗地高辛单链抗体进行分泌表达,并构建Diabody(双体抗体).方法:将抗地高辛的噬菌体抗体转染HB2151菌(无琥珀抑制基因的宿主菌),IPTG诱导,制备抗地高辛的可溶性单链抗体.选取活性较好的克隆进行基因改造,构建Diabody表达载体,并分泌表达,表达Diabody进行Western blot鉴定.结果:经ELISA结合活性测定,得到了结合活性较高的抗地高辛的可溶性单链抗体;基因改造后,经ELISA及Western blot测定证实获得了结合活性较好的抗地高辛Diabody.结论:实验获得了分泌表达活性可靠的人源性抗地高辛抗体,并改造成应用前景较好的Diabody,为临床诊断及治疗洋地黄类药物中毒提供具有实用价值的人源小分子抗体.     

抗IgE抗体的诱导及其对血清IgE水平的抑制

用ＩｇＥＦｃε片段和钥孔血蓝蛋白聚合物（ＫＬＨ－ＩｇＥ）免疫小鼠，产生了内源性抗ＩｇＥ抗体，同时伴有血清ＩｇＥ含量下降。这种状况在新生小鼠可保持１２周，而在同剂量ＫＬＨ－ＩｇＥ免疫的成年小鼠体内只能保持４周。以５倍剂量免疫成年小鼠，诱导出较高水平的抗ＩｇＥ抗体，ＩｇＥ水平也显著被抑制，并保持１２周，同时，ＩｇＥ分泌细胞数也显著减少。提示诱导产生的内源性抗ＩｇＥ抗体既可加速体内ＩｇＥ抗体的清除，也可抑制ＩｇＥ抗体的产生。     

噬菌体抗体库技术

噬菌体抗体库(surface display phage antibody library)技术用PCR扩增出抗体的全套可变区基因,通过噬菌体表面表达技术(surface display),把Fab段或单链抗体(single chain Fv,ScFv)表达在噬菌体表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体。这一技术将表型和基因型联系在一起,使识别抗原的能力和进行再扩增的能力结合在一起,是一极为高效的表达、筛 选体系,使单抗的制备根本改观,在生物技术领域极具潜能。