丹参酮ⅡA对ApoE~(-/-)小鼠肝脏脂质沉积及铁死亡相关蛋白表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积及铁死亡相关蛋白表达的影响。方法:32只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮ⅡA高剂量(60 mg/kg)组、丹参酮ⅡA低剂量(30 mg/kg)组和辛伐他汀组,另取8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。模型组及各治疗组均给予高脂饲料喂养,空白组给予普通饲料喂养。造模4周后丹参酮ⅡA高、低剂量组及辛伐他汀组分别给予相应的药物灌胃,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃。8周后全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE染色和油红O染色观察小鼠肝组织形态及脂质沉积;试剂盒检测肝组织活性氧簇(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;免疫组化检测肝脏p53和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达;Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统及RT-qPCR检测肝脏铁死亡相关因子GPX4、xCT/SLC7A11、p53和铁蛋白重链1(FTH1)蛋白及mRNA的表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高(P0. 05或P0. 01),HDL-C含量无明显变化;肝组织脂肪空泡清晰可见;GSH水平降低,ROS水平显著升高(P0. 01);p53蛋白及mRNA的表达增高,GPX4、xCT/SLC7A11和FTH1蛋白和mRNA的水平显著降低(P0. 05或P0. 01)。与模型组相比,丹参酮ⅡA高、低剂量组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著下降,HDL-C含量无明显改变;肝组织脂滴变小且脂肪变性程度明显减轻;GSH水平增高,ROS水平降低(P0. 01);GPX4、xCT/SLC7A11和FTH1蛋白及mRNA的水平显著升高,p53蛋白及mRNA的表达显著降低(P0. 05或P0. 01)。结论:丹参酮ⅡA能够降低ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积和脂质过氧化损伤,可能与干预肝细胞铁死亡相关蛋白作用有关。     

阿托伐他汀通过RXRα介导的抗氧化应激效应抑制高脂喂养糖尿病ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的形成

目的:观察阿托伐他汀(Atorv)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病高脂喂养载脂蛋白E敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响,探讨阿托伐他汀在糖尿病合并高脂饮食条件下对抗动脉粥样硬化的机制。方法:C57小鼠8只作为对照,34只高脂喂养的ApoE-/-小鼠随机分为3组:ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-组和STZ-ApoE-/-+Atorv组。STZ腹腔注射建立糖尿病动物模型,测定小鼠空腹血糖、血脂水平,HE染色图像分析测定胸主动脉斑块面积;免疫杂交检测主动脉及细胞内NADPH氧化酶亚基gp91phox蛋白水平;Fenton反应Griess显色法测定血清及胸主动脉匀浆上清液活性氧(ROS)水平。I型胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),流式细胞术检测内皮细胞内ROS的水平,光泽精分析法测定NADPH氧化酶活性。采用干扰RNA和质粒转染的方法评价类视黄醇X受体α(RXRα)在Atorv抑制氧化应激中的作用。结果:(1)与C57组相比,ApoE-/-组小鼠胸主动脉斑块面积显著增加[(215.88±34.19)μm2vs 0μm2,P0.01],2组间空腹血糖水平无显著差异,血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox表达水平显著缩小(P0.05);(2)与ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-组胸主动脉斑块面积进一步增加[(314.13±35.72)μm2vs(215.88±34.19)μm2,P0.05],血糖水平升高,血清TC、LDL-C、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平进一步增加(P0.05);(3)与STZ-ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-+Atorv组胸主动脉粥样斑块面积显著降低[(217.47±24.56)μm2vs(314.13±35.72)μm2,P0.05],血糖、血清TG、HDL、TC、和LDL-C无显著变化,血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平亦显著降低(P0.05);(4)高糖(25 mmol/L)干预后,HUVECs内ROS含量、gp91phox蛋白水平及NADPH氧化酶活性明显增加(P0.05),阿托伐他汀(10-8~10-6mol/L)显著降低高糖环境下HUVECs胞内ROS含量、gp91phox表达及NADPH氧化酶活性,且具有浓度依赖性;(5)将RXRαsiRNA转染至HUVECs之后,阿托伐他汀(10-6mol/L)对高糖环境下ROS生成及NADPH氧化酶活性的抑制效应显著减弱,RXRα质粒转染使RXRα过表达后,阿托伐他汀(10-6mol/L)抑制ROS生成及NADPH氧化酶活性的作用明显增强(P0.05)。结论:阿托伐他汀通过抑制高糖环境下机体的氧化应激反应对抗动脉粥样硬化;核受体RXRα介导阿托伐他汀的抗氧化应激效应。     

人参皂苷Rd通过下调NF-κB信号改善小鼠动脉粥样硬化炎症反应北大核心CSCD

目的探究人参皂苷Rd在ApoE-/-小鼠中抗动脉粥样硬化(AS)的潜在机制。方法将ApoE-/-小鼠随机分为6组(n=8):对照组、模型组、阿托伐他汀钙(ATV)组、人参皂苷Rd治疗组(5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg)。给小鼠喂食西式饮食6周,然后同时给予人参皂苷Rd治疗6周。采集血样进行脂质分析、炎症因子水平检测和氧化应激水平检测。采集胸主动脉,分别进行苏木素-伊红(HE)和油红O染色,Western印迹检测蛋白表达。结果人参皂苷Rd显著抑制了AS病变的发展和脂质积累,显著降低总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。人参皂苷Rd下调促炎标志物的表达,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β。此外,人参皂苷Rd处理降低了丙二醛(MDA)活性并增强了超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。人参皂苷Rd处理也显著抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达,并抑制核因子-κB(NF-κB)通路的异常激活。结论人参皂苷Rd通过抑制NF-κB通路激活对AS发挥抗炎和抗氧化作用。     

过表达SIRT1对动脉粥样硬化小鼠炎症反应的治疗效果

目的探讨SIRT1过表达对动脉粥样硬化小鼠炎症反应的治疗效果及其作用机制。方法 42只ApoE-/-小鼠随机分为模型组和SIRT1 OE组,以14只相同遗传背景C57BL/6J野生型小鼠作为空白对照组,制备SIRT1过表达慢病毒细胞系及动脉粥样硬化小鼠模型,采用Western blot检测SIRT1过表达对NF-κB p65乙酰化水平的而影响;采用双荧光素酶报告基因分析SIRT1过表达对荧光素酶活性的影响;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管内皮黏附因子(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)血清含量;采用HE染色观察小鼠主动脉血管的病理变化。结果与SIRT1 NC组细胞相比,SIRT1 OE组细胞SIRT1基因表达水平显著上升,NF-κB p65乙酰化水平明显下降,荧光素酶活性明显下降,差异有统计学意义(P0.05);与模型组小鼠相比,SIRT1 OE组小鼠TC、TG、LDL-C血脂含量,IL-6、TNF-1α、MCP-1及VCAM-1等炎性因子血清浓度均显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。病理结果显示模型组小鼠组主动脉血管内膜增厚,可见泡沫样细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块病灶;SIRT1 OE小鼠主动脉血管泡沫化程度明显缓解,动脉粥样硬化程度得到抑制(P0.05)。结论 SIRT1可通过抑制NF-κB p65乙酰化水平降低NF-κB活性,从而减轻小鼠动脉粥样硬化炎症反应。     

动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢相关的PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路及炎症因子的变化和化瘀祛痰方在其中的作用

目的:观察动脉粥样硬化(AS)小鼠肝脏脂质代谢相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)/肝X受体α(LXR-α)/ATP结合盒转运体G1(ABCG1)通路和炎症因子的变化,以及化瘀祛痰方在其中的作用,探讨化瘀祛痰方对肝脏脂质代谢及炎症反应的影响及作用机制。方法:将24只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组和辛伐他汀组,8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。除正常对照组给予基础饲料外,其余各组给予高脂饲料。造模12周后,灌胃给药,化瘀祛痰方组与辛伐他汀组给予相应药物,正常对照组与模型组给予等体积的生理盐水。8周后用全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE和油红O染色观察肝脏组织病理及脂质的变化情况;ELISA法检测肝脏游离脂肪酸(FFA)、TG、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量;Western blot法检测PPAR-γ、LXR-α和ABCG1的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著上升(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01);肝脏脂肪变性,细胞变大,脂质沉积明显,FFA和TG含量显著上升(P<0.01),炎症因子TLR4、TNF-α和IL-1β的含量显著增加(P<0.01),脂质代谢通路相关因子PPAR-γ、LXR-α和ABCG1的蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,服用辛伐他汀和化瘀祛痰方可使小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著下降(P<0.05或P<0.01),HDL-C含量显著上升(P<0.01);肝脏脂肪变性减轻,脂质沉积不同程度降低,FFA和TG含量显著下降(P<0.05或P<0.01),TLR4、TNF-α和IL-1β含量显著降低(P<0.01),PPAR-γ、LXR-α和ABCG1的蛋白表达显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论:化瘀祛痰方可能通过调控肝脏PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路及减弱肝脏TRL4介导的炎症反应来达到抗AS的作用。     

小陷胸汤对高血脂小鼠血脂及免疫功能的影响

为探讨小陷胸汤对高脂血症(hyperlipidemia, HLP)小鼠血脂及免疫功能的影响及其作用机制,准备36只C57BL/6小鼠,通过高脂饲料喂养8周建立HLP模型,随机分为对照组,模型组,小陷胸汤低(0.03 g/mL)、中(0.06 g/mL)、高(0.12 g/mL)剂量组和阳性对照组(2.5 mg/kg洛伐他汀),每组6只。处死小鼠后,称量肝脏、脾脏,计算肝脏指数和脾脏指数;全自动生化分析仪测定小鼠血清总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平;FACS检测CD40~+/CD40L~+细胞和Th1、Th2百分比;ELISA检测各组小鼠血清CRP表达量。结果显示:与对照组相比,模型组小鼠肝脏指数和脾脏指数升高(均P0.05);CRP、TC、TG和LDL-C水平上升,HDL-C水平下降(均P0.05);CD40~+/CD40L~+细胞、Th1百分比增加,Th2百分比减少(均P0.05)。与模型组比较,中剂量组和高剂量组小鼠肝脏指数和脾脏指数降低;CRP、TC、TG和LDL-C水平下降,HDL-C水平上升;CD40~+/CD40L~+细胞、Th1百分比减少,Th2百分比增加(均P0.05)。由此,小陷胸汤可降低HLP小鼠血脂水平,减轻机体炎症反应水平并提高免疫功能。     

人参皂苷Rb1对高脂血症大鼠肝脏细胞焦亡的影响及其可能机制

目的:观察人参皂苷Rb1对高脂血症大鼠肝脏细胞焦亡的影响,探讨其对肝脏脂质沉积的影响及作用机制。方法:将32只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组和辛伐他汀组。除正常组给予基础饲料外,其余各组给予高脂饲料。造模4周后,灌胃给药,对照组与模型组给予相应体积的生理盐水,人参皂苷Rb1与辛伐他汀组给予相应药物。8周后全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量; HE染色观察肝脏组织病理变化;Western blot法与RT-qPCR法检测肝脏细胞焦亡相关因子NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18和GSDMD的蛋白及mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著上升(P0.01),HDL-C含量显著降低(P0.05);肝脏脂肪变性肝细胞布满视野;NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18和GSDMD mRNA和蛋白的表达显著升高(P0.01)。人参皂苷Rb1可使血清TC、TG和LDL-C含量显著下降(P0.05),HDL-C含量显著上升(P0.01);脂肪变性程度明显减轻,脂滴少而小;NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18和GSDMD mRNA和蛋白的表达显著降低(P0.05或P0.01)。结论:人参皂苷Rb1可能通过降低肝细胞焦亡相关因子的表达而减轻高脂血症大鼠肝脏损伤和脂质沉积。     

西格列汀联合依折麦布抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的:观察西格列汀联合依折麦布对高脂饮食诱导的apoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响,并初步探讨其作用机制.方法:50只6周雄性apoE-/-小鼠随机分为5组:对照组、高脂喂养组、西格列汀组、依折麦布组和联合治疗组.采用生化检测仪检测小鼠血糖和血脂水平;油红O染色法观察小鼠主动脉斑块沉积情况;免疫酶联反应测定炎症因子血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemoattractant protein-l,MCP-1)和TNF-α含量水平;Western印迹检测主动脉NF-1cB p65蛋白表达水平.结果:与单用西格列汀或依折麦布相比,两种药物联用可更显著抑制高脂喂养所诱导的小鼠总胆固醇(total cholesterol,TC)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)水平的升高(P＜0.05),增加高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的含量(P＜0.05).同时,西格列汀联用依折麦布进一步减少小鼠主动脉斑块的沉积,降低VCAM-1,MCP-1,TNF-α含量和NF-1cB p65蛋白表达水平的增加(P＜0.05).结论:西格列汀联合依折麦布能进一步调节血脂代谢,抑制炎症因子表达和NF-κB信号激活,减少血管脂质沉积,从而更好地起到延缓动脉粥样硬化的作用.     

高脂高胆固醇膳食对小鼠PPARα基因表达及机体胆固醇水平的影响

目的:探讨高脂高胆固醇膳食对肝脏PPARα基因表达及机体胆固醇水平的影响。 方法:7-8周龄健康C57小鼠75只，随机分为5组，分别饲以相应配方饲料。 结果:与胆固醇膳食（Chol）相比，胆固醇＋多不饱和脂肪酸膳食（Chol＋PUFA）可增加(P<0.01)小鼠血清总胆固醇(TC)，增加的部分主要集中在HDL-C，降低肝脏胆固醇含量（P<0.01）；胆固醇＋单不饱和脂肪酸膳食（Chol＋MUFA）小鼠血清TC不变，肝脏胆固醇含量降低（P<0.01）；胆固醇＋饱和脂肪酸（Chol＋SFA）膳食可明显增加(P<0.01)小鼠血清TC，增加的部分主要集中在LDL-C，增加肝脏胆固醇含量（P<0.01）；此外，Chol+PUFA 膳食组小鼠肝脏PPARα mRNA和蛋白表达均高于Chol组（P<0.01），Chol+MUFA和Chol+SFA膳食组小鼠肝脏PPARα mRNA表达均明显低于Chol组（P<0.01）。 结论:在胆固醇基础上添加PUFA可诱导PPARα mRNA和蛋白的高表达,添加MUFA、SFA则抑制PPARα mRNA的表达；PPARα基因表达的改变可能进一步影响机体胆固醇水平。     

紫薯花色苷提取物对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化和高脂血症的作用

目的:研究紫薯花色苷提取物对Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化和高脂血症的作用。方法:将8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠随机分为对照组、高脂饮食组、花色苷低剂量组、花色苷高剂量组和立普妥组,共5组(n=10),除对照组小鼠饲喂普通饲料外,其它4组在饲喂高脂饲料8周后,再给予蒸馏水、紫薯花色苷提取物(1. 67 mg·kg~(-1)·d~(-1)和8. 35 mg·kg~(-1)·d~(-1))或立普妥(阿托伐他汀钙,2 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃8周。心脏取血检测小鼠血清的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;油红O和HE染色评估主动脉根部斑块面积和肝脏的脂肪变性程度; RT-q PCR方法检测主动脉和肝脏中炎症因子的表达。结果:与对照组比较,高脂饮食组小鼠血清的TC、LDL-C和HDL-C水平明显升高(P 0. 01),动脉的斑块面积明显增大(P 0. 01),肝脏的脂肪变性明显,白细胞介素1β(IL~(-1)β)、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(MCP~(-1))的表达增加(P 0. 01),而过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的表达降低(P 0. 05);高剂量紫薯花色苷提取物可以明显降低TC、TG和LDL-C水平(P 0. 01),减少动脉的斑块面积(P 0. 01),减轻肝脏的脂肪变性程度,同时还可以降低IL~(-1)β、IL-6和MCP~(-1)的表达(P 0. 05),提高PPAR-α的表达(P 0. 05)。结论:紫薯花色苷提取物可调节血脂,降低炎症细胞因子表达,从而抑制动脉粥样硬化的发展和高脂血症引起的肝组织脂肪变性。