香烟烟雾提取物对人外周血单个核细胞IL-8 mRNA表达的影响

目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人外周血单个核细胞(PBMC)IL-8 mRNA表达的影响及其细胞内信号途径。方法 体外应用CSE与健康者PBMC共同培养，用RT-PCR检测IL-8 mRNA的表达，用免疫细胞化学染色法检测核因子κB(NF-κB)的表达；并观察NF-κB抑制剂和酪氨酸蛋白激酶抑制剂对CSE诱导的：PBMC IL-8基因表达的影响。结果 加入CSE培养的人PBMC，IL-8 mRNA的表达增加，作用24h最高，NF-κB活化细胞百分比增加；NF-κB抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂均使CSE诱导的IL-8 mRNA表达水平下降。结论 吸烟使人PBMC的IL-8 mRNA表达水平显著增加，与NF-κB和酪氨酸激酶有关。     

姜黄素抑制肺上皮细胞BEAS-2B真菌产生炎症细胞因子的作用

目的探讨姜黄素(Cur)抑制肺上皮细胞BEAS-2B真菌产生炎症细胞因子的作用。方法黄曲霉菌(AFT)感染肺上皮细胞BEAS-2B后,用不同浓度的姜黄素(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)进行抗炎抑制作用。采用ELISA法检测细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TLR4和NF-κB的表达水平;采用Western blot和Real-time PCR检测重组高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、TLR4和NF-κB蛋白和m RNA表达。结果随着姜黄素剂量的升高,细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TLR4和NF-κB的表达显著降低(P0.05);HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白和m RNA表达明显降低(P0.05)。结论姜黄素调节TLR4/NF-κB信号通路来产生抗炎作用,可以抑制真菌刺激肺上皮细胞BEAS-2B产生炎症细胞因子。     

屋尘螨提取物激活气道上皮细胞EphA2-STAT3/p38 MAPK信号通路介导气道炎症

目的探讨受体酪氨酸激酶肝配蛋白A型受体2(EphA2)对屋尘螨提取物(HDM)诱导气道上皮细胞表达炎症细胞因子的作用及其机制。方法用EphA2小干扰RNA(siRNA)转染气道上皮细胞株16HBE细胞建立EphA2敲减的细胞模型,HDM刺激16HBE细胞后,采用实时定量PCR检测EphA2、白细胞介素6(IL-6)和IL-8 mRNA水平,细胞因子微球检测技术(CBA)检测IL-6、 IL-8、 IL-17A、 IL-17F和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平;Western blot法检测EphA2、磷酸化的EphA2(p-EphA2)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、 p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白水平。STAT3抑制剂Stattic联合HDM或p38 MAPK抑制剂SB203580联合HDM刺激16HBE细胞,实时定量PCR检测IL-6和IL-8 mRNA水平、 CBA检测IL-6和IL-8蛋白水平。结果敲低EphA2显著抑制HDM诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8,降低STAT3及p38 MAPK的总蛋白及磷酸化水平,但对NF-κB p65总蛋白及磷酸化水平均无明显影响。Stattic抑制STAT3表达及活化后,显著抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA和蛋白表达;而SB203580抑制p38 MAPK信号通路后,抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达水平,而对其蛋白水平无影响。结论 HDM通过激活EphA2-STAT3/p38 MAPK通路诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8参与气道炎症。     

没食子酸通过拮抗脂多糖诱导的TLR4/NF-κB活化抑制RAW264.7巨噬细胞炎性反应

目的观察没食子酸对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路的影响。方法将巨噬细胞分为空白对照组、LPS组、LPS联合没食子酸组、LPS联合NF-κB抑制剂吡咯二硫代甲酸(PDTC)组和LPS联合地塞米松(DM)组。处理后的细胞培养24 h,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平,实时定量PCR检测TLR4、NF-κB mNRA水平,Western blot法检测p65、p-p65、TLR4、磷酸化的NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白表达水平。结果 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞后TNF-α、IL-1、IL-6水平升高,没食子酸可降低LPS诱导引起的TNF-α、IL-1和IL-6表达水平升高。LPS刺激后TLR4 mRNA及蛋白表达增加,NF-κB活化,没食子酸可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论没食子酸可通过TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应。     

二烯丙基三硫通过NF-κB抑制脂多糖诱导小鼠肺组织IL-1β表达

目的探讨核因子-κB(NF-κB)在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠IL-1β表达中的作用。方法小鼠随机分为对照组、ALI组、DATS组、DATS预防组和DATS治疗组。RT-PCR检测肺组织中IL-1βmRNA表达。电泳迁移率改变(EMSA)检测肺组织NF-κB活性,Western blot检测肺组织中磷酸化及非磷酸化IκB的表达。结果ALI组小鼠肺组织中IL-1βmRNA表达明显升高(P<0.01),NF-κB活性及磷酸化IκB表达也明显高于对照组(P<0.05)。DATS预防组可显著抑制肺组织中IL-1βmRNA表达(P<0.05)、NF-κB活性及磷酸化IκB表达(P<0.05),但DATS治疗组的抑制效果不明显。结论DATS可通过抑制LPS诱导的IκB磷酸化及随后的NF-κB活化,进而抑制ALI小鼠肺组织IL-1βmRNA表达,这是DATS发挥抗ALI作用的信号传导机制之一。     

沉默NF-κB p65基因下调TNF-α诱导的肺泡上皮细胞的炎症反应

目的建立急性肺损伤体外细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因沉默减轻细胞炎症、保护肺结构细胞的可行性。方法以TNF-α(10 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),运用RNA干扰技术沉默NF-κB p65基因,采用RT-PCR及Westernblotting法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10等炎症因子浓度。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位,上调细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10的浓度;预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低上述各炎症因子浓度(P<0.05)。结论急性肺损伤体外细胞炎症模型构建成功,RNA干扰技术能有效沉默该模型NF-κB p65基因,下调炎症反应水平,保护肺泡上皮细胞,为急性肺损伤免疫调控机制的研究和基因靶向治疗提供实验依据。     

三百棒通过调控TLR4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的：探讨三百棒醇提物(TAAE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7极化趋向以及其对炎症反应的影响。方法：用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的水平;Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的分泌情况;荧光染色双标法观察巨噬细胞的极化状态;免疫荧光染色检测NF-κB定位及表达;Transwell检测TAAE对RAW264.7细胞迁移和趋化性的影响;RT-qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arg-1、NF-κB和TLR4的mRNA水平;Western blot检测iNOS、COX-2、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白水平。使用TLR4通路抑制剂TAK-242进一步验证TAAE对TLR4/NF-κB信号通路的影响。结果：与模型组相比较,TAAE降低LPS诱导的炎症模型RAW264.7细胞中M1型促炎因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)及NO水平,促使M2型抑炎因子(IL-10和Arg-1)分泌...     

人参皂甙RB2 抑制NF-κB 的激活对LPS 诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫调节作用

目的:研究人参皂苷RB2对脂多糖(LPS)诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫功能的影响及相关分子机制。方法:将新生小鼠随机分为四组:健康组(Ctrl);人参皂苷单独处理组(GR2):健康小鼠腹腔注射GR2 50 mg/kg BW; LPS诱导组(LPS):腹腔注射0. 6 mg/kg BW的LPS,连续5 d; LPS+GR2组:模型小鼠腹腔注射人参皂苷50 mg/kg BW。HE染色观察肺组织损伤情况; TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡; Western blot检测Caspase-3和Caspase-9的表达; ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10的含量; Western blot检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和NF-κBp 65的表达水平。结果:LPS组与对照组相比,肺组织出现明显的损伤,肺泡壁明显增厚,出现大量炎性细胞浸润;染色呈阳性的凋亡细胞比率显著提高; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著上调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著上升,IL-10的含量没有明显变化; HMGB1和MIF的表达显著上调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著上调。LPS+GR2组与LPS组相比,肺组织损伤明显得到缓解,多数肺泡结构完整,仅有少量炎性细胞浸润;凋亡细胞的比率显著下降; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著下调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著下降,IL-10的含量没有明显的变化; HMGB1和MIF的表达显著下调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著下调。结论:人参皂苷RB2抑制NF-κB的激活,进而调节LPS诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫反应。     

甘草酸对LPS 诱导的IEC-6 细胞NF-κB 通路及炎症因子表达的影响

目的:研究甘草酸(GA)对脂多糖(LPS)诱导肠上皮细胞IEC-6发生炎症应激的影响,并进一步探讨其炎症调控的作用机制。方法:以IEC-6细胞株为研究对象,实验分Control组、LPS模型组、LPS+GA组、GA组,Western blot法检测TLR4、CD14、MyD88、IκBα、p-IκBα、NF-κB p65表达变化; RT-qPCR和Western blot检测下游炎症基因的mRNA水平及蛋白表达。结果:与Control组相比,LPS诱导后IEC-6细胞中TLR4、CD14、MyD88的蛋白表达水平上调,IκBα的磷酸化水平显著升高及NF-κB p65的核转位增加(P0. 05),同时上调ICAM-1、COX-2、i NOS和IL-6炎症相关基因表达,并减少IL-10表达(P0. 05),甘草酸干预后可显著逆转上述改变,结果均具有统计学意义(P0. 05)。结论:甘草酸能抑制LPS活化的TLR4/NF-κB信号通路,进而下调LPS诱导的促炎基因表达,减轻肠上皮细胞的炎症性损伤。     

过表达SIRT1抑制脂多糖诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及NF-κB信号通路激活

目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及核因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响。方法用LPS处理胰岛β细胞,qRT-PCR和Western blot测定细胞中SIRT1表达变化。用pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染胰岛β细胞,qRT-PCR检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)mRNA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、核因子-κBp65亚型(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果 LPS处理后的胰岛β细胞中SIRT1表达水平降低。pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染可以提高LPS条件下胰岛β细胞中SIRT1表达水平。LPS处理后的胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平升高,凋亡率升高,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达升高。过表达SIRT1可以降低LPS条件下胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平,抑制细胞凋亡,减少细胞中Bax、cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达。结论 SIRT1减少LPS诱导的胰岛β细胞炎症因子表达并下调细胞中NF-κB信号激活水平。     

β-胡萝卜素对脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制

目的:探讨β-胡萝卜素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬细胞24 h后用不同浓度的β-胡萝卜素(20、40、80、160μmol/L)处理细胞3 h,MTT法测细胞活性,荧光定量PCR测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量,ELISA测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量。5μg/ml的LPS和不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC(1、5、10μg/ml)共同处理巨噬细胞24 h,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量,荧光定量PCR、ELISA测炎症因子的表达和分泌。比较LPS+PDTC组和LPS+PDTC+β-胡萝卜素组炎症因子和NF-κB p65蛋白相对表达的变化。结果:与LPS组相比,不同浓度的β-胡萝卜素对LPS刺激的巨噬细胞的细胞活性有提升作用,对炎症因子和NF-κB p65蛋白的表达有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表达可以抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡萝卜素组对炎症因子的抑制作用比LPS+PDTC组明显,且差异显著(P0.05),但两组对NF-κB p65蛋白的表达不明显。结论:β-胡萝卜素可以通过抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表达抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相关的通路。     

虫草素联合谷氨酰胺对LPS诱导的脓毒症大鼠炎症失衡及肝肺病理变化的影响

目的　研究虫草素（cordycepin,Cop）联合谷氨酰胺（glutamine,Gln）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的脓毒症大鼠炎症失衡和肝肺病理变化的影响及其可能机制。 方法　将大鼠按体重随机分为5组：对照组、模型组（LPS组）、LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组,腹腔注射LPS（5 mg/kg）诱导建立脓毒症大鼠模型。ELISA检测外周血中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10的含量;HE染色观察肝肺组织的病理损伤情况;TUNEL染色观察肝肺组织的细胞凋亡情况;Western blot检测肝肺组织中Caspase-3表达水平及NF-κB p65的磷酸化情况 。 结果　LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组均能逆转LPS诱导的促炎因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的高表达和抗炎因子（IL-10）的低表达（P<0.05）,减轻病理损伤,抑制细胞凋亡（P<0.05）,降低凋亡蛋白Caspase-3高表达（P<0.05）,下调NF-κB p65的磷酸化水平（P<0.05）。 结论　在LPS诱导的脓毒症大鼠模型中,虫草素联合谷氨酰胺能有效改善其炎症失衡和肝肺病理变化。     

不可分型流感嗜血杆菌经NF-κB信号通路抑制组蛋白脱乙酰酶活性促进支气管上皮炎症反应

目的:明确不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)对支气管上皮细胞炎症反应的影响,并初步探讨其作用机制。方法:培养人正常支气管上皮细胞BEAS-2B,采用感染复数(MOI)=10的NTHi感染BEAS-2B细胞后,分别采用ELISA和RT-qPCR分别检测细胞上清中白细胞介素8(IL-8)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的表达水平;Western blot检测细胞内IκBα含量以及组蛋白去乙酰化水平,并检测组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的表达以及HDAC的酶活性;电泳迁移率变动分析和染色质共沉淀实验分别测定NF-κB以及IL-8的结合活性。通过NF-κB以及HDAC抑制剂预处理细胞后,检测细胞内GM-CSF和IL-8的表达水平。结果:MOI=10的NTHi感染BEAS-2B细胞后,细胞上清中IL-8和GM-CSF含量及其mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);NTHi感染可显著下调胞浆内总IκBα的表达,增强细胞内NF-κB的DNA结合活性,并显著诱导细胞内组蛋白H3和H4的磷酸乙酰化,促进IL-8和RNA聚合酶II的结合;细胞内HDAC的表达水平及酶活性也显著降低(P<0.05)。NF-κB抑制剂均显著减少细胞内GM-CSF和IL-8的表达水平(P<0.05),而HDAC抑制剂则会促进细胞内IL-8的分泌(P<0.05)。结论:NTHi可通过激活NF-κB信号通路抑制HDAC表达和活性,促进支气管上皮细胞分泌IL-8和GM-CSF,从而加重炎症反应的发生。     

虫草素联合谷氨酰胺对LPS诱导的脓毒症大鼠炎症失衡及肝肺病理变化的影响

目的　研究虫草素（cordycepin,Cop）联合谷氨酰胺（glutamine,Gln）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的脓毒症大鼠炎症失衡和肝肺病理变化的影响及其可能机制。 方法　将大鼠按体重随机分为5组：对照组、模型组（LPS组）、LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组,腹腔注射LPS（5 mg/kg）诱导建立脓毒症大鼠模型。ELISA检测外周血中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10的含量;HE染色观察肝肺组织的病理损伤情况;TUNEL染色观察肝肺组织的细胞凋亡情况;Western blot检测肝肺组织中Caspase-3表达水平及NF-κB p65的磷酸化情况 。 结果　LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组均能逆转LPS诱导的促炎因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的高表达和抗炎因子（IL-10）的低表达（P<0.05）,减轻病理损伤,抑制细胞凋亡（P<0.05）,降低凋亡蛋白Caspase-3高表达（P<0.05）,下调NF-κB p65的磷酸化水平（P<0.05）。 结论　在LPS诱导的脓毒症大鼠模型中,虫草素联合谷氨酰胺能有效改善其炎症失衡和肝肺病理变化。     

法舒地尔(Fasudil)抑制脂多糖诱导的小鼠星形胶质细胞活化和炎性反应及其机制

目的探讨法舒地尔(Fasudil)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞活化和炎症反应及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法体外培养新生C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,细胞分为PBS对照组、1μg/m L LPS刺激组、1μg/m L LPS联合15μg/m L盐酸法舒地尔处理组,Griess法检测培养细胞上清液一氧化氮(NO)的水平,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10和IL-4的水平,免疫荧光细胞化学染色检测星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)及TLR4的表达,Western blot法检测GFAP、TLR4和磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)蛋白水平。结果与PBS组比较,LPS组NO、TNF-α和IL-6水平显著升高,IL-10和IL-4水平降低;法舒地尔能抑制LPS诱导的NO、TNF-α和IL-6的分泌,增加IL-10和IL-4的分泌。法舒地尔处理组星形胶质细胞GFAP表达显著降低,同时TLR4和NF-κB蛋白的水平也降低。结论法舒地尔阻断TLR4/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应。     

SIGIRR过表达抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞NF-κB的活化

目的: 研究单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对脂多糖(LPS)刺激的肺泡上皮细胞核因子-κB信号通路的调节作用。方法: 以LPS刺激人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549。将含有SIGIRR cDNA 全长的真核表达载体瞬时转染A549细胞,使SIGIRR在A549细胞过表达。用双萤光素酶报告系统检测LPS刺激后A549细胞NF-κB的转录活性,用ELISA法检测LPS刺激后细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的水平,对比转染与否对上述因子在A549细胞中释放水平的影响。结果: 在A549细胞中,过表达SIGIRR可显著抑制NF-κB的转录活性,同时抑制LPS诱导的细胞因子IL-1β、TNF-α以及IL-6的表达。 结论: SIGIRR过表达可以抑制LPS触发的肺泡上皮细胞中TLR4信号的转导,从而发挥减轻炎症反应、保护肺泡上皮细胞的作用。     

中药饮片鹿血晶对巨噬细胞的免疫调节作用研究

目的:探讨鹿血晶(DBC)对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7的免疫调节作用及其可能机制。方法:CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术及免疫荧光法检测巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬能力;qRT-PCR法检测炎症因子iNOS、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平;ELISA法检测培养基上清中iNOS、IL-1β、IL-6含量;Western blot法检测转染NF-κB信号通路蛋白表达。结果:鹿血晶能够提高LPS刺激下的RAW 264.7细胞活力(P0.05);鹿血晶能抑制LPS刺激下RAW 264.7细胞的炎症因子表达和释放(P0.05);鹿血晶能够抑制LPS刺激下RAW 264.7细胞内磷酸化IKK-α/β和磷酸化P65蛋白的表达;鹿血晶促进RAW 264.7细胞对大肠杆菌的吞噬能力(P0.05)。结论:鹿血晶能够增强巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力,并且在不影响细胞活力的同时作用于NF-κB信号通路,抑制炎症状态下巨噬细胞炎症因子的表达与释放。     

LRRFIP1基因干扰对脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡的影响

目的探讨富亮氨酸重复序列相互作用蛋白1(LRRFIP1)基因对脂多糖(LPS)诱导的支气管上皮细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法使用LPS处理人支气管上皮细胞株16HBE,并利用Lipofectamine 2000试剂将siLRRFIP1转染到16HBE细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LRRFIP1 mRNA表达;免疫印迹试验(Western blot)检测LRRFIP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、p65、磷酸化p65(p-p65)、IκBα和IκBα和磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达;噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)水平和炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌;流式细胞术检测细胞凋亡。结果LPS诱导的16HBE细胞中LRRFIP1 m RNA、LRRFIP1蛋白表达量、Cleaved caspase-3、Bax、p-p65、p-IκBα蛋白表达量、MDA、LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α水平和细胞凋亡率显著提高(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平、细胞活力、SOD活性和IL-10水平明显降低(P0.05),而p65和IκBα蛋白表达量无显著变化。抑制LRRFIP1明显减少LPS诱导的16HBE细胞中LRRFIP1、Cleaved caspase-3、Bax、p-p65、p-IκBα蛋白表达量、MDA、LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α水平和细胞凋亡率(P0.05),并显著增加CyclinD1、Bcl-2蛋白水平、细胞活力、SOD活性和IL-10水平(P0.05),对p65和IκBα蛋白水平无明显影响。结论抑制LRRFIP1可能通过下调NF-κB信号通路活性及促进脂多糖损伤的支气管上皮细胞的增殖,减轻细胞炎症和氧化应激,并抑制细胞凋亡。     

川芎嗪抑制LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞炎性反应

目的体外探讨川芎嗪(TMP)对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞(HAECⅡ)炎性反应的保护作用及机制。方法体外培养HAECⅡ(A549细胞来源),LPS刺激建立炎性模型,分别加入TMP和前B细胞克隆增强因子(PBEF)抑制剂FK866进行干预。q-PCR和Western blot检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)和PBEF的mRNA和蛋白表达;通过Western blot检测细胞核和细胞质内磷酸化P65蛋白来反映核因子κB(NF-κB)的激活。结果 LPS刺激A549细胞后,TNF-α、IL-1β、IL-8和PBEF mRNA及蛋白表达均较对照组明显增高(P0.001),伴随着细胞核和细胞质磷酸化的P65蛋白增高(P0.001);TMP干预后,上述炎性因子mRNA和蛋白表达下降,磷酸化P65蛋白表达降低(P0.05);FK866干预后,TNF-α、IL-1β和IL-8表达以及磷酸化P65蛋白降低(P0.01)。结论 TMP可能通过降低PBEF的表达,从而抑制NF-κB的激活,减轻肺泡上皮细胞炎性反应。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞A549对TNF-α和LPS的刺激效果研究

目的研究肺泡Ⅱ型上皮细胞A549对TNF-α和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激的反应效果,探讨急性肺损伤体外细胞模型最佳造模方法。方法体外培养的A549细胞分为正常对照组(normal control,NC组),10 ng/ml TNF-α刺激2 h组,10 ng/ml和100 ng/ml LPS分别刺激2、4、8、16 h组。Western blotting检测胞浆IκB-α含量和IκB-α、NF-κB p65磷酸化水平,qRT-PCR检测细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA转录水平,ELISA检测细胞培养上清IL-1β和IL-6质量浓度。结果 TNF-α刺激导致A549细胞大量凋亡或死亡,而LPS刺激对A549细胞生长形态无明显影响,且与LPS的刺激质量浓度和时间无关。TNF-α刺激可明显增加A549细胞内IκB-α和NF-κB p65磷酸化水平(P<0.05),而LPS刺激对A549细胞内IκB-α和NF-κB p65磷酸化水平无明显影响(P>0.05),且与LPS的刺激质量浓度和时间无关(P>0.05)。TNF-α刺激可显著增加A549细胞内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA转录水平和培养上清中IL-1β、IL-6质量浓度(P<0.05),而LPS刺激对上述炎症因子的合成和分泌并无显著影响(P>0.05),且与LPS的刺激质量浓度和时间无关(P>0.05)。结论 TNF-α可以有效刺激A549产生过度炎症反应,而LPS不能刺激A549细胞产生炎症损伤,因此建立急性肺损伤体外细胞模型时可以考虑用TNF-α代替LPS刺激。