人前列腺特异抗原基因启动子中一个调节序列的初步分析

人前列腺特异抗原（ＰＳＡ）基因受雄激素调节，其雄激素应答元件（ＡＲＥ）位于－１７０附近。为确定雄激素对该基因的诱导作用是否受ＡＲＥ上游序列的影响，把ＰＳＡ启动子不同长度的ＤＮＡ片段与无启动子的ＣＡＴ报告基因相连，然后与雄激素受体表达质粒共转染人前列腺细胞ＰＣ－３。结果表明：ＡＲＥ上游（－４０６～－３７１）的一段３６ｂｐ的ＲＦ３６序列可促进雄激素对ＰＳＡ基因的诱导作用。进一步用该ＤＮＡ片段和ＰＣ－３细胞核蛋白进行区带转移测定，发现ＰＣ－３细胞中某些调节蛋白可与该序列结合，暗示该蛋白可能通过与雄激素受体的相互作用影响雄激素对ＰＳＡ启动子的诱导作用。     

分子伴侣基因的克隆及表达

用聚合酶链反应方法从大肠杆菌染色体ＤＮＡ中扩增得到２０００ｂｐ的ＤＮＡ片段，并克隆到ＰＧＥＭ３ｚｆ（＋）载体中，经限制性图谱分析和部分ＤＮＡ序列测定，证实２０００ｂｐ的ＰＣＲ产物为ＧｒｏＥ基因全部编序列。将ＰＣＲ产物构建在ＰＬＰＲ启动子控制下的ＰＢＶ２２０表达质粒中，转入大肠杆菌ＤＨ５ａ，经４２℃热诱导，获得ＧｒｏＥ基因的表达产物，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现分子量约６００００（ＧｒｏＥＬ）及１５００     

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性

目的 鉴定朊蛋白（ＰｒＰ）基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增人ＰｒＰ基因外显子Ⅰ及其上游序列，序列鉴定后插入ＣＡＴ报道质粒ｐＢＬ－ＣＡＴ６，分别转染ＨｅＬａ、ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞系，检测ＣＡＴ表达值；提取三种细胞蛋白，以条带移动实验检测细胞转录激活因子ＳＰ１含量。结果 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列为ＧＣ富含，带有多个ＳＰ１可能性综合位点，但无明显ＴＡＴＡ盒；瞬时转染结果显示这段序列可诱导２～３倍的ＣＡＴ表达增强；定量移动条带实验证明ＨｅＬａ细胞中含有较高浓度的ＳＰ１，而ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞中ＳＰＩ含量极低。结论 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列具有启动子样功能，为弱的非ＴＡＴＡ盒启动子；不同组织来源的细胞中ＳＰ１含量不同，在神经细胞系Ｓｈ－ｓｙ５ｙ中人ＰｒＰ基因外显子Ｉ     

中国株白喉杆菌白喉毒素全基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）从一中国株中型白喉产毒杆菌的β噬菌体基因组中克隆出１０６５碱基对的白喉毒素全基因编码序列，将ＰＣＲ产物直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ／载体系统，经有关限制性内切酶消化，核苷酸序列分析表明，成功的克隆出白喉毒素全基因编码序列。利用上下游引物中导人的ＮｄｅＩ和ＢａｍＨＩ位点，将白喉毒素基因插入原核表达载体ＰＥＴ－３ａ，从而构建出白喉毒素表达载体ＰＥＴ／ＤＴ。以ＢＬ２１（ＤＥ３）为工程菌，用ＩＰＴＧ诱导Ｔ７启动子进行表达，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，在５８０００处可见一产物条带，表达量可达菌体蛋白的２５％，经豚鼠毒性实验和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ实验表明，表达产物与白喉杆菌分泌的毒素有相同的免疫学及生物学活性。     

登革2型病毒NGC株E基因在NIH3T3细胞中的表达？…

目的 构建登革２型病毒Ｅ基因的真核表达载体,实现登革病毒Ｅ蛋白的真核表达。方法 采用逆录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增登革２型病毒（ＮＧＣ株）包膜糖蛋白Ｅ基因全长片段,克隆人真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的Ｐｃｍｖ启动子下游,构建重组真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｅ,用脂质体转染法转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞,表达产物以免疫荧光、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹进行分析检测。结果 成功构建了重组真核表达质粒ｐｃＤＮ     

Egr-1启动子基因调控FLT3配基基因表达的实验研究

目的 探索辐诱导基因调控序列启动造血生长因子基因表达及观察其对造血恢复的作用。方法 本实验将逞有Ｅｇｒ－１调控序列启动的ＦＬＴ３配基（ＦＬ）和ＥＧＦＰ双以子基因表达载体（Ｅｇｒ－ＥＦ）转染骨髓基质细胞系ＨＦＣＬ（称ＨＦＣＬ／ＥＦ）,用ＲＴ－ＰＣＲ鉴定细胞内目的基因的ｍＲＮＡ表达,采用ＦＡＣＳ观察ＥＧＦＰ绿色荧光表达的阳悸细胞;用ＥＬＩＳＡ方法检测ＨＦＣＬ／ＥＦ细胞培养上清ＦＬ的含量;观察ＨＦＣＬ／     

人白介素1受体拮抗剂的cDNA克隆和原核表达

从活化的正常人外周血单核细胞中提取总ＲＮＡ，经逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）获得了人白介素１受体拮抗剂（ＩＬ－１Ｒａ）ｃＤＮＡ。经过ＤＮＡ测序分析，发现该片段和国外发表的ＩＬ－１ＲａｃＤＮＡ序列一致，将该目的基因插入ｐＢＶ２２０载体，并转入大肠杆菌ＨＢ１０１中，经热诱导表达重组蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后发现，菌体超声裂解后，在可溶性上清中有一Ｍ１７０００的特异带，约占菌体可溶性总蛋白的８０％以上     

表达人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞可抑制人血 …

目的 研究转染人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞抗补体的细胞毒作用。方法 从人胎盘组织提取总ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到人膜辅助因子蛋白基因全长ｃＤＮＡ,将其克隆到带有巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩＥ启动子的ｐＣＩ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体和以ｐＣＩ－ｎｅｏ为基础构建成的带有人ＥＦ－１α启动子的ｐＥＦ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体上,得到质粒ｐＣＩ－ｎｅｏ为基础构建成的带有人ＥＦ－１α启动子的ｐＥＦ－ｎｅｏ哺     

人睫状神经营养因子在基因在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人睫状神经营养因子（ｈＣＮＴＦ）基因，并大大肠杆菌宿主系统中高效表达出具有生物活性的ｈＣＮＴＦ蛋白。方法 从人外周神经组织总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增得到编码人ＣＮＴＦ的全长ｃＤＮＡＡ片段，此片段经回收和纯化后克隆进ＰＧＥＭ－５Ｚｆ（＋）质粒载体，并进行了ＤＮＡ序列分析，然后进一步亚克隆进Ｔ７启动子表达载体，用ＩＰＴＧ在大肠杆菌主中诱导ｈＣＮＴＦ蛋白表达，并以体外培     

CAAT／增强子结合蛋白在IL—6调节血管紧张素原基因表达中的作用

目的血管紧张素原是血管活性多肽－血管紧张素Ⅱ的唯一前体，又是急期蛋白之一。因此，研究ＩＬ－６调节血管紧张素原基因表达对阐明人体感染时血浆血管紧张素Ⅱ水平增加致高血压有重要意义。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术检测了ＩＬ－６刺激的肝癌细胞Ｈｅｐ３Ｂ中血管紧张素原ｍＲＮＡ，并且进一步通过ＤＮＡ－蛋白质电泳泳动漂移、ＤＮＡ重组和瞬时转染技术分析了人血管紧张素原基因５′端侧翼序列－５６８位置的一个ＩＬ－６反应元件同源序列（ＨＡＧＩＬ－６ＲＥ）。结果ＩＬ－６使血管紧张素原ｍＲＮＡ明显提高，位于血管紧张素原基因启动子中的ＨＡＧＩＬ－６ＲＥ结合于转录因子ＣＡＡＴ／增强子结合蛋白（Ｃ／ＥＢＰ）；将多拷贝的ＨＡＧＩＬ－６同ＴＫ核心启动子连接，再与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）基因融合，构成异源表达载体，转染ＨｅｐＧ２细胞，发现ＩＬ－６增强Ｃ／ＥＢＰα的作用活性。结论Ｃ／ＥＢＰ在ＩＬ－６诱导血管紧张素原基因表达中具有调节作用。     

Genotypic analysis of genes associated with transmission and drug resistance in the Beijing lineage of Mycobacterium tuberculosis

The Beijing genotype of Mycobacterium tuberculosis is an endemic lineage in East Asia that has disseminated worldwide. It is a major health concern, as it is geographically widespread and is considered to be hypervirulent. To elucidate its genetic diversity in Taiwan, phylogenetic reconstruction was performed using 338 M. tuberculosis Beijing family clinical isolates. Region-of-difference analysis revealed the strains from Taiwan to be distributed among six subgroups of a phylogenetic tree. Synonymous single nucleotide polymorphisms at 10 chromosomal positions were also analysed. Among the 338 isolates analysed for single-nucleotide polymorphisms by using mass spectrometry, the most frequent strain found was ST10 (53.3%), followed by ST19 (14.8%) and ST22 (14.5%). Tests of drug resistance showed that the sublineages ST10, ST19 and ST26 were over-represented in the multidrug-resistant population. The presence of mutations in putative genes coding for DNA repair enzymes, which could confer a mutator phenotype to facilitate spreading of the pathogen, did not demonstrate an association with multidrug resistance. Therefore, the DNA repair genes may be involved in transmission but not in drug resistance.     

BEIJING GENOTYPE AND OTHER PREDOMINANT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS SPOLIGOTYPES OBSERVED IN MASHHAD CITY,IRAN

Purpose: The purpose of this study was to understand the molecular epidemiology of tuberculosis in Khorasan province of Iran was studied by spoligotyping 113 Mycobacterium tuberculosis isolates. The spoligotyping results were in comparison to the word Spoligotyping Database of Institute Pasteur de Guadeloupe (SpolDB4). Spoligotyping data from Iran has rarely been described and there is limited information on the major circulating clades of M. tuberculosis in Iran. Materials and Methods: Spoligotyping was performed on 113 M. tuberculosis isolates from Mashhad patients between November 2004 and September 2005. Results: The study found 57 spoligopatterns. 17 clusters and 32 true orphan genotype. The biggest cluster with 13 isolates had not been previously reported. The Beijing genotype was seen in eight (7.1%) isolates. Conclusions: Genotyping and Spoligotyping gives a unifying framework for both epidemiology and evolutionary analysis of M. tuberculosis populations.     

2010年北京市出生缺陷医院监测与人群监测资料分析

目的通过对有北京市特色的出生缺陷医院监测与人群监测模式下的监测资料进行分析评价,探索更适合北京市的出生缺陷监测模式。方法选取北京市开展出生缺陷人群监测试点地区(西城区和怀柔区)在2010年度的出生缺陷人群监测资料与医院监测资料进行描述性分析。结果出生缺陷医院监测与人群监测在出生缺陷检出率及疾病谱上存在差异,围产期地区性医院监测基本可反映同期同地区人群出生缺陷发生水平,将监测期限延至生后1岁对全面了解出生缺陷尤其严重影响功能的非体表缺陷的真实发生情况有重要意义。结论出生缺陷医院监测与人群监测模式各有利弊,可将资源优化整合并适当延长人群监测期限。     

北京地区更年期妇女抑郁症状调查

目的：了解北京地区更年期妇女抑郁症状发生情况及相关因素。方法：在北京地区十八个区(县)采取分层整群概率比率的方法抽取7232名40—65岁更年期妇女，对其抑郁症状发生情况采用Zung抑郁自评表进行调查。结果：6786份有效资料进入分析。其中，有抑郁症状者223例，发生率3．65％；抑郁症状与各种更年期症状的发生、妊娠次数多少(特别是流、早产次数)、已绝经时间长短、高血压、骨折、与丈夫关系不和睦、吸烟等因素有明显正相关性；但与精神病家族史无关。结论：更年期抑郁症状严重影响妇女健康，应采取有针对性的措施，以减少抑郁症状对更年期妇女的干扰，避免更严重的精神疾患发生。     

Analysis of rpsL and rrs mutations in Beijing and non-Beijing streptomycin-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from Singapore

The Beijing genotype of Mycobacterium tuberculosis has frequently been found to be associated with drug resistance. Mutation analysis of the genes encoding 16S rRNA (rrs) and ribosomal protein S12 (rpsL) revealed a high frequency (97/102; 95.1%) of alterations in streptomycin-resistant M. tuberculosis isolates from Singapore, with rpsL K43R being the most common rpsL mutation (82/92; 89%), which was significantly associated with Beijing strains compared to non-Beijing strains (odds ratio = 10.88, 95% confidence interval = 3.48–34.1). This is the first study to report the association of Beijing strains with the rpsL K43R mutation in STR-resistant M. tuberculosis isolates with de novo resistance, as determined by clustering analysis.     

A novel method for the rapid and prospective identification of Beijing Mycobacterium tuberculosis strains by high-resolution melting analysis

Genotypic analysis of Mycobacterium tuberculosis (MTB) has enabled the definition of several lineages. The Beijing family, which is considered highly virulent and transmissible, has been associated with resistance in certain settings and involved in severe outbreaks, making it one of the most closely-monitored lineages. Therefore, rapid prospective identification of Beijing MTB strains could be relevant. In the present study, we evaluate a real-time PCR followed by high-resolution melting (HRM) based on the identification of a single nucleotide polymorphism (SNP) in the Rv2629 gene which defines Beijing lineage (A191C for Beijing genotype and A191A for non-Beijing genotype). This combined methodology efficiently differentiated Beijing and non-Beijing strains in 100% of the isolates from a collection of reference strains without requiring specific DNA probes. Additionally, HRM was able to assign a Beijing/non-Beijing genotype in 90.9% of the respiratory specimens assayed. Its applicability was tested on a Peruvian sample of circulating MTB strains, in which it identified 10.7% as belonging to the Beijing genotype; this proportion reached 20% in the North Lima area. HRM analysis of the A191C SNP is a rapid, reliable, and sensitive method for the efficient prospective survey of high-risk Beijing MTB strains, even in developing settings where MTB culture is often not available.     

北京城乡居民人群中的吸烟问题：3000个家庭的流行病学研究

目的：了解９０年代初北京城乡居民吸烟状况及与吸烟有关的因素。方法：采用对３０００户计７０７７人的流行学调查。结果：显示北京市城乡居民的吸烟率为２２５８％，烟草依赖率为６４６％，几乎占吸烟人数的１／３。男性吸烟率为４１４６％，女性吸烟率为５３５％。农村地区吸烟率高于城市（２５９０％和１９７５％）。５０岁以上的女性吸烟率有上升的趋势。每日吸烟达２０支以上的重度吸烟者近于１／２。在对烟草价格选择上，以低廉价格为最多（８６３２％）。有１／３吸烟依赖者戒烟后出现渴求吸烟，焦虑、易怒、瞌睡、头痛及胃肠不适等症状。     

顺铂对LLC－PK_1细胞增殖的影响及硒的保护效应

本研究观察了顺铂（ＣＤＤＰ）对猪肾近曲小管上皮细胞（ＬＬＣ－ｐＫ＿１）增殖与ＤＮＡ合成代谢的影响以及亚硒酸钠与硒代蛋氨酸的保护作用。结果表明，ＣＤＤＰ对ＬＬＣ－ｐｋ＿１细胞具有明显的毒性作用，在５～１５０μｍｏｌ／Ｌ范围内，ＣＤＤＰ与ＬＬＣ－ｐＫ＿１细胞作用１２ｈ，对细胞增殖已呈明显的抑制作用，其ＩＣ＿（５０）为１０９．５μｍｏｌ／Ｌ；作用２４ｈ时，其抑制效应更加明显，并存在剂量效应关系。ＬＬＣ－ｐｋ＿１细胞ＤＮＡ合成代谢对ＣＤＤＰ更为敏感，作用３ｈ，ＤＮＡ合成就受到明显的抑制，其ＩＣ＿（５０）为１２０．５μｍｏｌ／Ｌ。ＣＤＤＰ与ＬＩＣ－Ｐｋ＿１细胞作用３ｈ，对ＲＮＡ及蛋白质合成也具有明显的抑制作用。Ｎａ２ＳｅＯ３与Ｄ，Ｌ－ＳｅＭｅｔ两种不同硒化合物，当硒与ＣＤＤＰ的浓度比为１：１０时，Ｎａ２ＳｅＯ３未显示对ＣＤＤＰ的ＤＮＡ合成抑制作用有何保护作用，而Ｄ，Ｌ－ＳｅＭｅｔ则在一定程度上能减轻ＣＤＤＰ对ＬＬＣ－ｐｋ＿１细胞ＤＮＡ合成的抑制作用，但Ｄ，Ｌ－ＳｅＭｅｔ提前或与ＣＤＤＰ同时加入，其保护作用没有明显差异。     

北京警察的压力源及相关因素探讨

目的:考察北京警察面对的压力源状况,探索各种压力源、应对方式和社会支持等因素对警察心理健康水平的影响。方法:以SCL-90问卷、北京警察压力源问卷(自编)、特质应对方式问卷和领悟社会支持量表对北京市2312名警察进行调查。结果:警察面临的压力来自四个方面:工作生活(3.54±0.91)、领导管理(2.87±0.88)、人际关系(3.01±0.98)、个人能力(3.04±0.86)。男性的压力源问卷评分大于女性(四个方面的评分分别为:3.5±0.9/3.2±0.9,2.9±0.9/2.8±0.9,2.8±0.9/2.4±1.0,2.9±0.9/2.4±0.8,t=2.0~8.4,P<0.05或0.000,总分3.0±0.8/2.7±0.8,t=6.9,P<0.001)。不同年龄段警察的压力源问卷总评分及各因子分差异均有显著性(P=0.000),以36-45岁年龄段警察的评分最高(总分3.0±0.8);回归分析发现除个人能力维度外,其他压力源得分越高,SCL-90得分越高(P<0.001);社会支持越多,SCL-90得分越低(β=-0.18,P<0.001);应对方式越积极,SCL-90得分越低(β=-0.31,P<0.001)。此外,压力源和社会支持的乘积项也能显著预测SCL-90得分(P<0.001)。结论:提高警察的心理健康水平可以从调节警察的压力源、增加警察的社会支持等角度入手。     

北京鸭红细胞膜G—蛋白与磷酯酶C的偶联及腺苷受体的调节

GDP、GTP和GTPγS激活北京鸭红细胞膜上的磷酯酶C,在10~(-7)～10~(-4)mol/L的范围内,使磷酸肌醇产量增加。其中GTPγS作用最强,分别使IP_2和IP_3增强550％和580％。GTP与GDP的效力相近,使IP_2增加140％和150％;IP_3增加230％和330％。A-嘌呤能受体激动剂6-N-cyclohe-xyladenosine(CHA)对抗ATP通过P-嘌呤能受体激活的磷酯酶C,使其活性下降60％。CHA的这种作用可被其特异拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dimethylxanthine对抗。以上结果表明鸭红细胞是研究受体、G-蛋白及磷酯酶C偶联的良好模型。表明不同嘌呤能受体在调节磷酯酶C中的相反作用。