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1.
目的:观察ING4基因转染人卵巢癌OVCAR细胞后对细胞的生长抑制效应。方法:采用ING4的重组腺病毒载体(Ad-ING4)感染人卵巢癌细胞株OVCAR,用RT-PCR法检测ING4在OVCAR细胞中的表达;MTT法和流式细胞技术检测ING4基因表达对OVCAR细胞的生长抑制和凋亡效应;Western印迹法检测ING4对OVCAR细胞中bax、bcl-2、Ki67表达的影响。结果:在OVCAR细胞中ING4基因的表达对OVCAR细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡;Western印迹法检测结果提示卵巢癌组织中ING4基因表达下降的同时,Ki67表达下调,Bax表达上调,Bcl-2的表达下调。结论:转染ING4基因可抑制OVCAR人卵巢癌细胞的增殖,可通过改变Bax,Bcl-2等凋亡相关基因的表达诱导细胞凋亡。 相似文献
2.
目的:探讨靶向SAT B1(special AT-rich sequence-binding protein-1)基因的短发夹RNA (short hairpinRNA,shRNA)对肺癌A549细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:构建靶向SATB1基因的shRNA重组质粒SATB1-shRNA,采用脂质体法将其转染至A549细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中SATB1、Bcl-2、Bax mRNA和SATB1、Bcl-2、Bax、caspase 3蛋白的表达水平FCM检测A549细胞的凋亡率.结果:成功构建了SATB1-shRNA重组质粒;SATB1-shRNA转染A549细胞后,SATB1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达下调,Bax mRNA和Bax、caspase 3蛋白表达上调(p<0.05).SATB1-shRNA转染组细胞凋亡率[(14.18±1.59)%]较对照组[(1.84±0.57)%]明显增加(P< 0.01).结论:SATB1-shRNA可显著下调肺癌A549细胞中SATB1基因的表达水平并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2基因表达所引起的级联效应有关. 相似文献
3.
目的:探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控Bax基因在端粒酶阳性的腺样囊性癌细胞-SACC-83中表达的特异性,以及Bax对SACC-83细胞增殖的影响.方法:脂质体介导pACTERT-Bax质粒载体转染SACC-83和端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞(HEL),通过RT-PCR检测Bax表达,MTT法检测Bax基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:hTERT启动子调控Bax基因在SACC-83细胞中明显表达,对该肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用(相对活性58.90%),且诱导细胞凋亡比例增加(11.62%);而在HEL细胞中hTERT启动子未能诱导Bax基因表达,对该细胞的增殖和凋亡无明显影响.结论:hTERT启动子可以诱导Bax基因在SACC-83中特异性表达及诱导细胞凋亡,同时还能消除Bax基因对正常细胞的潜在毒性. 相似文献
4.
目的:构建Livin靶向小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,观察其诱导大肠癌细胞的凋亡效应.方法:构建Livin靶向siRNA重组表达栽体并转染结肠癌细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测Livin的表达,MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞的凋亡效应.结果:经酶切鉴定和测序结果证实,Livin靶向sirNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞Livin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为30.18%和28.88%,P<0.05,肿瘤细胞的生长受到明显抑制,细胞凋亡率为(13.36±1.45)%,P<0.05.结论:Livin靶向siR-NA重组表达载体构建成功,能有效抑制Livin基因表达并能显著诱导肿瘤细胞凋亡. 相似文献
5.
HBx基因转染胆管癌QBC939细胞对其凋亡的影响及作用机制的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨乙型肝炎病毒x基因(hepatitis B virus x, HBx)转染胆管癌QBC939细胞引起凋亡及其发生的可能机制.方法:将构建有HBx基因的真核表达载体pcDNA3-x采用脂质体转染法瞬时转染QBC939细胞, RT-PCR及Western 印迹法鉴定HBx在QBC939细胞中的表达;DAPI染色后荧光显微镜镜下观察细胞核的改变,结合FCM法检测细胞的凋亡;以未转染和转染空质粒pcDNA3的QBC939细胞为对照,Western印迹法检测Bax、Bak、Bid、Bcl-XL、CytC、p65的表达;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;RT-PCR法检测Fas和c-myc在mRNA水平的表达;双荧光素酶报告系统分析细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)的转录活性.结果:RT-PCR及Western印迹法检测均证实转染后的QBC939细胞中有HBx的表达;DAPI显示转染细胞核呈现固缩且边缘化等细胞凋亡特征性的改变;FCM检测结果显示,转染HBx组与对照组相比,凋亡细胞数量明显增多;Western 印迹法检测结果显示,Bcl-2家族中Bax表达升高,Bcl-XL下降,p65在核内的表达水平升高,细胞质中细胞色素C( cytochrome C)表达升高;RT-PCR结果显示,Fas和c-myc的mRNA水平均高于对照组;JC-1染色法结果显示ΔΨm下降;双荧光素酶报告系统分析提示NF-κB的转录活性升高.结论:成功将HBx基因转入QBC939细胞中,HBx可能是通过调节Fas/FasL死亡受体途径,Bcl-2家族引起的线粒体路径及NF-κB的激活、c-myc等凋亡相关基因的表达而引起QBC939细胞的凋亡. 相似文献
6.
目的探讨肿瘤相关新基因pp4519在肺癌细胞系、人肺癌及癌旁组织中表达差异及其初步生物学功能.方法合成肿瘤相关新基因pp4519特异性多肽,免疫家兔制备兔源性多克隆抗体;从体外细胞集落形成试验,生长曲线,裸鼠体内成瘤试验,半定量RT-PCR,蛋白印迹,免疫细胞化学及免疫组化检测pp4519基因的表达差异,以及转染肺癌细胞系的细胞凋亡检测等方法研究pp4519基因对体内外细胞生长和生物学功能的影响.结果 SPC-A1肺癌细胞系的体外集落形成试验表明,pp4519基因转染组集落形成数明显少于空载体组(P<0.05);转染pp4519基因的肺癌细胞系的裸鼠体内成瘤试验结果表明该基因对SPC-A1细胞系的成瘤有明显抑制作用(P<0.01);瞬时转染细胞的流式细胞凋亡检测结果表明该基因具有促进SPC-A1细胞凋亡的作用;半定量RT-PCR,蛋白印迹检测结果表明肺癌及癌旁组织中pp4519 RNA和蛋白表达无明显差异(P>0.05),但免疫组化结果显示PP4519在人肺癌癌旁组织中的表达略高于肺癌.结论 pp4519是一个具有抑制肺癌细胞生长功能的新基因. 相似文献
7.
目的:构建ABCE1基因的pEGFP重组表达载体pEGFP-C1-ABCE1,并将其转染至小细胞肺癌细胞(NCI-H446),观察其表达,并检测转染前后细胞增殖情况.方法:RT-PCR扩增ABCE1基因cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-C1重组获得重组表达载体pEGFP-C1-ABCE1.经酶切,电泳,DNA测序鉴定后应用Fugene-HD将重组表达载体pEGFP-C1-ABCE1及空载体pEGFP-C1分别转染NCI-H446细胞,观察pEGFP-C1-ABCE1和pEGFP-C1在小细胞肺癌细胞的表达,MTT法检测转染ABCE1基因对小细胞肺癌细胞增殖的影响.结果:ABCE1基因cDNA片段成功重组到pEGFP-C1载体中.经酶切和DNA测序验证,插入载体的cDNA片段为ABCE1基因.荧光显微镜观察转染pEGFP-C1- ABCE1的NCI-H446细胞绿色荧光蛋白主要在胞浆表达而转染pEGFP-C1的NCI-H446细胞绿色荧光蛋白在胞浆及胞核均有表达.MTT实验提示转染pEGFP- C1-ABCE1的细胞与转染pEGFP-C1和未转染的同类细胞相比增殖能力明显增加.结论:成功构建了pEGFP-C1-ABCE1真核细胞重组表达载体,并将该载体转染入小细胞肺癌细胞,该载体的绿色荧光主要在NCI-H446细胞胞质表达,提示ABCE1基因可能主要在胞质表达.该基因与小细胞肺癌的增殖活性有关. 相似文献
8.
PPARγ基因静默抑制肝癌HCCLM3细胞增殖并诱导其凋亡 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)基因静默对肝癌细胞增殖与凋亡的影响.方法:构建靶向PPARγ的短发夹状RNA真核表达载体并转染HCCLM3细胞,采用RT-PCR、Western印迹法检测HCCLM3细胞中PPARγ的表达;MTT法检测细胞增殖;TUNEL法及FCM法检测细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测PCNA、野生型p53的表达.结果:shPPARγ转染组PPARγmRNA表达下调80.5%.转染后48 h,pshPPARγ组细胞增殖抑制率为71.5%;40 h时,PCNA阳性率为(23.8±7.2)%;TUNEL法检测凋亡率为(24.2±4.7)%,FCM法检测凋亡率为(23.2±4.2)%,2种方法的检测结果一致;shPPARγ转染组细胞被阻滞干G0/G1期,G2/M期细胞减少,与阴性对照和空白对照组比较(P<0.01)差异有统计学意义,且野生型p53表达增加.结论:PPARγ基因静默能诱导HCCLM3细胞凋亡,抑制增殖;与促进野生型p53表达相关. 相似文献
9.
目的:探讨肝细胞核因子4γ(hepatocyte nuclear factor 4 gamma,HNF4G)对于胆囊癌细胞增殖、迁移、细胞周期和凋亡等的影响及相关作用机制。方法:分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测胆囊癌GBC-SD、NOZ和ZJU-0430细胞中HNF4G mRNA和蛋白的表达水平。采用慢病毒感染的方法在GBC-SD、NOZ和ZJU-0430细胞中构建HNF4G基因沉默或过表达的稳转细胞株。随后,分别采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测HNF4G基因沉默或过表达对胆囊癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室实验检测对胆囊癌细胞迁移能力的影响,FCM法检测对细胞周期和细胞凋亡的影响。最后,再用蛋白质印迹法检测改变HNF4G基因表达水平对细胞周期相关蛋白Cyclin A2和Cyclin B1、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、上皮-间充质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug,以及ErbB2/PI3K/AKT信号通路中ErbB2和磷酸化AKT蛋白表达水平的影响。结果:实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测... 相似文献
10.
目的:探讨反义人高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因转染对人胰腺癌细胞的凋亡诱导作用及对Bcl-2/bax mRNA表达水平的影响.方法:应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达栽体pcDNA3.1/anti-HMGB1,脂质体介导转染人胰腺癌细胞pane1,G418筛选获得阳性克隆.RT-PCR方法检测HMGB1、Bcl-2和Bax表达水平,MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果:成功构建pcDNA3.1/anti-HMGB1真核表达裁体,转染pcDNA3.1/anti-HMGB1可使pancl细胞HMGB1和Bcl-2 mRNA表达水平显著降低,P<0.01;Bax mRNA的相对表达量明显升高,P>0.05;与对照组相比,Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著升高,P<0.05.肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制,P<0.01;并出现G1期阻滞和凋亡细胞百分率增加.结论:反义HMGB1基因转染能抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,是胰腺癌基因治疗的策略之一. 相似文献
11.
目的:探究青藤碱(SIN)诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响;Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达;用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果:SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性;SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强;SIN与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡(P〈0.05)。结论:SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物。 相似文献
12.
目的:研究慢病毒介导的β4整合素(integrinβ4,ITGB4) shRNA对人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:采用实时荧光定量-PCR (real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测ITGB4在不同人NSCLC细胞中的表达水平;慢病毒介导ITGB4 shRNA抑制NSCLC H460SM细胞中ITGB4的表达,再用RFQ-PCR和蛋白质印迹法检测ITGB4的表达水平,评价基因沉默效率;裸鼠随机分为3组,皮下分别接种H460SM-NS细胞(对照组)、稳定表达ITGB4 shRNA的H460SM-68和H460SM-71细胞.每隔1d测量裸鼠体质量和肿瘤大小,比较各组裸鼠肿瘤生长情况.处死裸鼠,剥离肿瘤,测量肿瘤大小和质量.结果:ITGB4在大多数人NSCLC细胞中均有表达,其中大细胞肺癌H460SM和NCI-H460细胞中ITGB4表达量明显高于NCI-H661细胞(P<0.01),H460SM细胞中ITGB4表达水平明显高于亲本NCI-H460细胞(P<0.01):ITGB4 shRNA转染组细胞中ITGB4的表达水平明显低于阴性对照组细胞(P<0.01); ITGB4 shRNA转染组皮下移植瘤生长速度明显低于阴性对照组(P<0.01).结论:ITGB4表达可能与人NSCLC细胞的致瘤、侵袭、转移的表型有关;抑制ITGB4的表达,可以抑制人NSCLC细胞H460SM裸鼠皮下移植瘤的生长. 相似文献
13.
eIF2β, a subunit of translation‐initiation factor EIF2, is a potential therapeutic target for non‐small cell lung cancer 下载免费PDF全文
Ichidai Tanaka Mitsuo Sato Toshio Kato Daiki Goto Tomohiko Kakumu Ayako Miyazawa Naoyuki Yogo Tetsunari Hase Masahiro Morise Yoshitaka Sekido Luc Girard John D. Minna Lauren A. Byers John V. Heymach Kevin R. Coombes Masashi Kondo Yoshinori Hasegawa 《Cancer science》2018,109(6):1843-1852
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目的:研究青藤碱(sinomenine,SIN)对人肺癌NCI-H460细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用及其机制。方法:四甲基偶氮噻蓝(MTT)法检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,TdT酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNNEL)方法观察细胞的凋亡,罗丹明123(Rhodamine123)染色流式细胞仪检测线粒体膜电位(ΔΨm)。结果:SIN对NCI-H460细胞株生长具有抑制作用并诱导凋亡。AnnexinV/PI双染检测细胞的凋亡可见随SIN浓度增加,细胞凋亡增加呈浓度依赖性。TUNNEL阳性的凋亡细胞呈棕黄色,细胞核片段化改变。罗丹明染色检测线粒体膜电位的结果提示在SIN作用于NCI-H460细胞48h后,线粒体膜电位下降,SIN浓度越高,膜电位下降越显著。结论:SIN具有明显的细胞毒作用,能诱导NCI-H460细胞凋亡,SIN通过线粒体途径诱导NCI-H460细胞凋亡。 相似文献
15.
Specific inhibition of K-ras expression and tumorigenicity of lung cancer cells by antisense RNA 总被引:10,自引:0,他引:10
A human lung cancer cell line (H460a) with a homozygous spontaneous K-ras mutation was transfected with a recombinant plasmid that synthesizes a 2-kilobase genomic segment of the K-ras protooncogene in antisense orientation. Translation of the mutated K-ras mRNA in H460a cells was specifically inhibited, whereas expression of H-ras and N-ras was unchanged. A 3-fold growth inhibition occurred in H460a cells when expression of the mutated ras p21 protein was down-regulated by antisense RNA. However, cells remained viable despite the absence of K-ras expression. The growth of H460a tumors in nu/nu mice was substantially reduced by expressed K-ras antisense RNA. 相似文献
16.
目的 利用RNAi技术抑制Bcl-2基因的表达,联合放疗后观察其对非小细胞肺癌NCI-H460株细胞周期及细胞增殖状态的影响。方法 利用以pCYU6/GFP/Neo为载体的Bcl-2/shRNA重组质粒转染非小细胞肺癌NCI-H460细胞株,采用Western blot方法检测Bcl-2基因蛋白表达水平的变化,继而给予直线加速器6 Gy X线照射,采用MTT法和流式细胞术检测RNA干扰及照射后对NCI-H460细胞增殖和细胞周期的影响。结果 成功转染并经筛选获得阳性转染成功的细胞(HT),荧光显微镜下可见发绿色荧光的NCI-H460细胞,证明转染成功;Western blot检测显示Bcl-2蛋白表达水平显著降低;X线照射6 Gy,24 h及48 h后转染有义序列组细胞增殖情况较无义序列组及未转染组明显降低;流式细胞术显示转染有义序列细胞组经照射后24小时G2/M期分布比例增高,48小时后G2/M期分布比例显著减低。结论 RNAi技术可以有效的抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞Bcl-2基因表达,联合放疗后NCI-H460细胞的增殖率及细胞周期发生改变,起到一定的放射增敏作用。 相似文献
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目的:探讨血小板因子4(CXCL4)对人非小细胞肺癌H460细胞顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:体外诱导法建立顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞株H460/DDP,并鉴定其生物学特性。采用CCK-8法分别检测H460及H460/DDP对顺铂的耐药性。qRT-PCR及Western Blot检测亲本细胞株H460及顺铂耐药株H460/DDP中CXCL4的mRNA及蛋白表达水平。通过CCK-8法检测过表达或者敲低CXCL4后亲本细胞株H460或顺铂耐药株H460/DDP对顺铂的敏感性。最后利用Western Blot及qRT-PCR法探讨CXCL4抵抗非小细胞肺癌化疗敏感性的调控机制。结果:成功构建了非小细胞肺癌顺铂耐药株H460/DDP(H460/DDP IC50=55.005 μg/ml),CCK-8结果提示顺铂耐药株H460/DDP与亲本细胞株H460细胞的增殖速度没有明显差异(P>0.05);顺铂耐药株H460/DDP中,CXCL4 mRNA及蛋白水平均显著增高(P<0.000 1);在亲本细胞株H460中稳定过表达CXCL4能显著降低其对顺铂的敏感性(P<0.000 1),而于顺铂耐药株H460/DDP中敲低CXCL4能显著增加H460/DDP对顺铂的敏感性(P<0.000 1);Western Blot及qRT-PCR结果显示,CXCL4能激活Wnt/β-catenin 信号通路,促进下游基因MYC、CyclinD1、MMP-7、CDK4的表达。结论:CXCL4通过调控Wnt/β-catenin 信号通路促进非小细胞肺癌对顺铂的耐药性。 相似文献
18.
目的:探讨慢病毒介导α6整合素(integrinα6,ITGA6)shRNA对人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H460SM细胞生长和侵袭的影响。方法:实时定量PCR和Western blotting检测ITGA6在9种NSCLC细胞中的表达。慢病毒介导ITGA6 shRNA感染H460SM细胞后,实时定量PCR和Wesern blotting检测H460SM中ITGA6的表达,显微镜下观察H460SM细胞形态的变化,MTS法检测细胞增殖,软琼脂实验检测H460SM细胞锚定非依赖性生长,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,迁移和侵袭实验检测H460SM细胞体外迁移和侵袭能力。结果:ITGA6在7种人NSCLC细胞中均有表达,H460SM细胞中ITGA6表达水平明显高于亲本H460细胞[(8.75±0.09)vs(5.78±0.26),P<0.01]。慢病毒介导ITGA6shRNA稳定感染H460SM细胞后的H460SM-75、H460SM-76细胞中,ITGA6表达水平明显低于阴性对照组H460SM-NS细胞[(0.11±0.04)、(0.22±0.04)vs(1.00±0.01),P<0.01]。H460SM-75、H460SM-76细胞增殖活性与H460SM-NS细胞无差异(P>0.05),且凋亡率、细胞增殖指数、G0/G1期细胞的比例也无差异(P>0.05)。H460SM-75、H460SM-76细胞的克隆形成率明显低于H460SM-NS细胞[(18.87±1.47)%、(18.85±1.11)%vs(20.81±1.38)%,P<0.05],迁移率[(43.92±0.41)%、(24.10±0.33)%vs(100.00±0.50)%,P<0.01]和侵袭率[(7.04±2.96)%、(4.68±0.27)%vs(100.00±6.74)%,P<0.01]也明显低于H460SM-NS细胞。结论:抑制ITGA6的表达可以抑制NSCLC细胞锚定非依赖性生长、迁移和侵袭,但不影响NSCLC细胞增殖和凋亡。 相似文献
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目的:探讨miR-93/Eph受体A4(EphA4)分子轴通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H460 和H1299 细胞增殖和迁移的影响。方法:用qPCR 检测H460 和H1299 细胞中miR-93 表达水平。分别在H460 细胞中转染miR-93 模拟物(mimics)和EphA4 过表达质粒、在H1299 细胞中转染miR-93 抑制剂(inhibitor)后,用MTT、Transwell 实验检测miR-93 对转染细胞增殖和迁移的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93 与EphA4 之间的靶向调控关系。用Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、EphA4、ERK和p-ERK 蛋白的表达水平,用MTT、Transwell 实验检测同时过表达miR-93 和EphA4 对H460 细胞增殖和迁移的影响。结果:miR-93 在H1299 细胞中表达水平高于H460 细胞(P<0.01)。过表达miR-93 促进H460 细胞增殖和迁移(均P<0.01),敲低miR-93 抑制H1299 细胞增殖和迁移(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-93靶向调控EphA4,过表达miR-93明显下调H460细胞中EphA4 mRNA和蛋白表达水平(均P<0.05),过表达miR-93 通过靶向EphA4 并激活ERK通路促进H460 细胞的增殖和迁移(均P<0.01)。结论:miR-93 促进NSCLC细胞增殖和迁移,其机制可能与靶向调控EphA4 并激活ERK通路有关。 相似文献