间充质干细胞源性外泌体抑制LPS诱导的星形胶质细胞氧化应激

目的:探讨间充质干细胞外泌体(MSC-Exo)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠海马星形胶质细胞氧化应激的作用机制。方法:通过超速离心法提取人脐带间充质干细胞培养上清中的MSC-Exo,通过扫描电镜和Western Blot分析鉴定;使用MSC-Exo处理LPS诱导的分离培养的新生小鼠星形胶质细胞,并分为对照组(control)、LPS处理组(LPS)和LPS+MSC-Exo联合处理组(LPS+MSC-Exo);用细胞免疫荧光染色检测各组细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、和核因子κB家族蛋白RelA(p65)的变化,用Western Blot方法检测星形胶质细胞中血红素氧化酶(HO-1)及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)的变化。结果:与control组比较,LPS组中Nrf2和p65核转移增多,HO-1表达量明显升高(P<0.05),而Keap1表达量明显下降,NF-κB信号p-p65/p65的比值明显升高(P<0.05)。与LPS组比较,MSC-Exo抑制了Nrf2和p65核转移,HO-1表达量明显降低,而Keap1表达量明显升高,NF-κB信号p-p65/...     

白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤后体外小胶质细胞极化的影响

目的 探讨白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤（OGD/R）后小胶质细胞极化的影响。方法 对体外培养的N9小胶质细胞进行氧糖剥夺150 min，复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组和白藜芦醇预处理24 h组。细胞计数盒-8(CCK-8)法检测细胞活力，硫代巴比妥酸（TBA）和水溶性四唑盐（WST-1）法分别检测细胞上清液中丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶（SOD）活性，免疫荧光法检测核因子-E2-相关因子2（Nrf2）的核移位，Western blotting和Real-time PCR法检测CD206、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）和苯醌还原酶（NQO1）蛋白和mRNA表达水平。 结果 OGD/R损伤后，白藜芦醇组细胞活力、SOD活力、CD206、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白或mRNA表达均显著高于对照组（P<0.05,n=3），而MDA含量和iNOS蛋白或mRNA表达均显著低于对照组（P<0.05,n=3），白藜芦醇组Nrf2 蛋白较对照组明显移位到细胞核。 结论 白藜芦醇预处理可能通过增强Nrf2的激活，调控M1/M2型小胶质细胞极化，从而减轻OGD/R后小胶质细胞的氧化应激损伤。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎小鼠肺组织的影响北大核心CSCD

目的:基于核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎(MPP)小鼠肺组织的影响。方法:将60只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为对照组、MP组、si-NC组和si-H19组。si-NC组、si-H19组鼻腔分别滴入阴性对照siRNA、lncRNA H19 siRNA。除对照组外,其余组鼻腔滴入MP菌液构建MPP模型,对照组滴入等量培养基。1次/d,连续3 d。同时构建支原体感染A549细胞模型,将A549细胞分为对照组、MP组、si-NC组、si-H19组、pcDNA-NC组和pcDNA-H19组。各组分别转染对应的RNA及质粒。除对照组外,其余组使用MP菌液感染A549细胞。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变;qRT-PCR检测肺组织和细胞中lncRNA H19 mRNA的表达;ELISA检测肺组织和细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;免疫组化染色观察小鼠肺组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达;细胞单克隆形成、MTT法及Annexin V-FITC/PI染色检测细胞增殖、凋亡能力;Western blot检测肺组织和细胞中Nrf2、HO-1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达。结果:支原体感染肺炎小鼠实验中:与对照组相比,MP组、si-NC组双肺塌陷呈灰白色,镜下肺泡大量增生,内有充血及炎症细胞浸润;lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组情况较MP组肺部损伤有所改善,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9蛋白水平降低,CyclinD1、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05)。同时支原体感染A549实验与支原体感染小鼠肺组织实验结果一致。与对照组相比,MP组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组细胞增殖能力提高,凋亡能力降低,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平降低,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05);过表达lncRNA H19后,pcDNA-H19组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平升高,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05)。结论:lncRNA H19在支原体感染肺炎小鼠肺组织中表达上调,敲降lncRNA H19能够减轻小鼠肺部炎症反应,促进细胞增殖并抑制其凋亡,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

Nrf2/ARE信号通路在吗啡预处理减轻盐酸多柔比星诱导心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用机制

目的　探讨核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）/抗氧化反应元件（antioxidant response element,ARE）信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭（heart failure,HF）大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）中的作用机制。 方法　首先制作HF模型大鼠并将其随机分为sham组,模型组,MFC组,MOA组和OAD组,同时设立正常组;HF模型鼠予以结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min构建为MIRI模型,其中MFC组术前经吗啡预处理,OAD组术前经Nrf2/ARE信号通路抑制剂预处理,MOA组术前经Nrf2/ARE信号通路抑制剂+吗啡预处理。TUNEL检测细胞凋亡率,Western blot检测Nrf2和HO-1表达。 结果　与正常组相比,模型组细胞凋亡率、Nrf2和HO-1表达升高;与模型组相比,MFC组细胞凋亡率降低,Nrf2和HO-1升高;与MFC组相比,MOA组细胞凋亡率升高,Nrf2和HO-1表达降低;与模型组相比,OAD组细胞凋亡率升高,Nrf2和HO-1表达降低;差异均具有统计学意义（P<0.05）。 结论　在HF导致的MIRI大鼠模型中,吗啡预处理能激活Nrf2/ARE通路,抑制细胞凋亡。     

Nrf2对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞中IKKs表达的影响

目的:探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)刺激后人支气管上皮细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)的表达与IκB激酶家族(I kappa B kinases,IKKs)的关系。方法:培养人支气管上皮细胞,分为正常对照(control)组、CSE组、15-脱氧-前列腺素J2(15-deoxy-prostaglandin J2,15dPGJ2)预处理后CSE刺激(15d-PGJ2+CSE)组和Nrf2 siRNA转染后CSE刺激(Nrf2 siRNA+CSE)组。首先通过CSE刺激人支气管上皮细胞,再通过15d-PGJ2预处理和Nrf2 siRNA转染的方法来增加和降低Nrf2的水平,并用RT-PCR法及Western blot法观察各组细胞Nrf2与IKKs的表达。结果:支气管上皮细胞在CSE的刺激下,Nrf2和IKKα/β的mRNA表达水平均明显升高,蛋白表达水平亦明显增高(P0.05)。在支气管上皮细胞中,15d-PGJ2预处理可增加Nrf2的表达,而Nrf2 siRNA可成功抑制Nrf2的表达。Nrf2表达增加伴有IKKα/β表达明显降低;而Nrf2表达被抑制后,IKKα/β表达明显增加(P0.05)。这些变化在转录水平和翻译水平是一致的。结论:Nrf2能抑制CSE诱导的人支气管上皮细胞中IKKs的表达。     

基于Nrf2通路姜黄素抑制卡介苗感染巨噬细胞氧化应激

目的：基于Nrf2通路探讨姜黄素对卡介苗（BCG）感染巨噬细胞氧化应激的抑制作用。方法：以THP-1源性巨噬细胞建立感染模型,分为4组：对照组、BCG组、BCG+姜黄素组、BCG+姜黄素+ML385组。采用活性氧（ROS）检测试剂盒,荧光显微镜下观察各组细胞ROS荧光强度;采用比色法检测细胞还原型谷胱甘肽（GSH）含量;Western blot检测Nrf2及其下游靶基因NQO1、HO-1的蛋白表达;MTT法检测各组细胞增殖率。结果：BCG感染显著增强ROS荧光强度,降低细胞GSH含量（P<0.01）,抑制Nrf2及其下游靶基因NQO1、HO-1的蛋白表达,抑制细胞增殖（P<0.01）;而姜黄素可显著减弱ROS荧光强度,提高GSH水平（P<0.05）,促进Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达及细胞增殖（P<0.01）;Nrf2抑制剂ML385则逆转了姜黄素的上述作用。结论：姜黄素可以通过增加Nrf2的表达,诱导下游抗氧化分子的转录从而减轻BCG诱导的巨噬细胞氧化应激。     

天麻素调控Nrf2信号通路在癫痫中的抗炎作用

目的:探讨天麻素调控nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)信号通路在癫痫中的抗炎作用及发挥神经保护作用的新机制。方法:100只SD大鼠,随机分为5组:空白对照组,模型组,50 mg/kg天麻素治疗组,100 mg/kg天麻素治疗组,200 mg/kg天麻素治疗组。模型组构建氯化锂-匹罗卡品SD大鼠癫痫模型,治疗组采用天麻素进行干预。Racine分级标准判断模型是否构建成功,免疫印迹法及免疫荧光染色的方法检测Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达含量。结果:与空白对照组相比,模型组小胶质细胞中抗氧化蛋白Nrf2和HO-1表达略有上调,炎症因子iNOS表达显著增加;经天麻素预处理的治疗组小胶质细胞中Nrf2和HO-1蛋白表达较模型组增加,而炎症因子iNOS的表达减少。结论:天麻素可能通过调控Nrf2/HO-1经典抗氧化信号通路,降低炎症因子iNOS的表达,从而在癫痫中发挥神经保护作用。     

香烟烟雾提取物通过蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1表达

 目的：探讨蛋白激酶C（PKC）-红系衍生的核因子相关因子2 (Nrf2)对香烟烟雾提取物（CSE）诱导的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法：通过CSE刺激雄性SD大鼠气道上皮细胞,使用PKC抑制剂RO318220和Nrf2 siRNA,将细胞分为对照组、CSE 3 h组、RO318220组、Nrf2 siRNA组和RO318220+Nrf2 siRNA组,用Western blotting法分别检测HO-1、Nrf2和p-PKC蛋白表达,免疫细胞化学法观察HO-1蛋白表达,逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HO-1 mRNA表达,免疫荧光法检测Nrf2蛋白定位,测定HO-1活性。结果：暴露CSE 3 h后,Nrf2蛋白主要表达在胞核, 胞核蛋白表达增强,p-PKC蛋白、HO-1的mRNA和蛋白高表达,HO-1活性增强。预先给予RO318220,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1的mRNA和蛋白表达均明显减弱,HO-1活性显著降低。预先用siRNA沉默Nrf2,胞浆和胞核的 Nrf2蛋白表达均减弱,HO-1活性、mRNA和蛋白水平明显降低。RO318220联合Nrf2 siRNA处理后,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表达均明显降低,HO-1活性明显降低。结论：CSE通过PKC激活Nrf2,诱导Nrf2核转位,从而上调HO-1的表达水平。     

Nrf2/HO-1在肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中的表达变化

目的:检测不同疾病阶段肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠脊髓内Nrf2及HO-1表达变化,以探究抗氧化应激能力变化与ALS发病的关系。方法:应用免疫荧光双重标记和Western Blot技术检测Nrf2及其下游调节蛋白HO-1在ALS发病早期(95 d)、发病晚期(122 d)脊髓中的表达差异。结果:与同窝别野生型鼠相比较,免疫荧光双重标记结果显示:95 d、122 d ALS鼠脊髓腰段内Nrf2~+/GFAP~+星形胶质细胞增多;虽与同时间点同窝别野生型鼠比较,ALS转基因鼠脊髓中Nrf2蛋白表达略有升高,但差异无统计学意义。HO-1蛋白表达在ALS早期95 d趋势与Nrf2相同,前角神经元内表达较多;至122 d转基因鼠脊髓内HO-1~+表达多集中于星形胶质细胞内,且脊髓内HO-1蛋白总量较同窝别野生型鼠显著升高(P0.05)。结论:ALS运动神经元退变可能与星形胶质细胞激活后Nrf2及HO-1参与的氧化应激机制有关。     

Nrf2过表达对乙醇刺激下肝星状细胞激活与增殖及合成I型胶原的影响

 目的：探讨核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法：采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空载质粒瞬时转染,将细胞分为正常对照组、乙醇刺激组、乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组和乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组。采用RT-PCR及Western blotting方法对HSC-T6中Nrf2、I型胶原及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达水平进行检测,采用MTT法对HSC-T6细胞增殖水平进行检测,采用流式细胞术对HSC-T6细胞周期分布进行检测。结果：(1) 荧光显微镜下观察显示pEGFP-Nrf2质粒成功转染HSC-T6,转染后48h Nrf2 mRNA及蛋白表达水平较其余组显著升高（P＜0.05）。(2) 乙醇刺激组与乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组之间细胞增殖水平、I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,均明显高于正常对照组（P＜0.05）,细胞周期分布G1期比例下降,S期比例升高（P＜0.05）,而乙醇刺激+ pEGFP-Nrf2质粒组细胞增殖水平及I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平与乙醇刺激组及乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组相比均显著下降（P＜0.05）,细胞周期分布G1期比例显著上升,S期比例显著下降（P＜0.05）,呈G1/S期阻滞。结论：Nrf2过表达可显著抑制乙醇对HSC-T6 I型胶原及α-SMA mRNA及蛋白表达的促进作用,使HSC-T6细胞周期发生G1/S期阻滞,抑制乙醇诱导的HSC-T6增殖水平的升高,提示其对乙醇诱导的HSC-T6细胞活化具有负性调控作用。     

PPARγ激动剂罗格列酮通过抑制炎症反应减轻肝移植大鼠围术期肠损伤

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对自体原位肝移植大鼠围术期肠组织中PPARγ表达、NF-κB激活及肠损伤的影响。方法:SD大鼠40只,随机分为对照(control)组、假手术(sham)组、原位自体肝移植(OALT)组、罗格列酮(0.3 mg/kg,iv)预处理(ROS+OALT)组。建立自体原位肝移植模型,在肝脏再灌注后8 h时取肠组织,观察肠组织病理学变化,检测肠组织PPARγ蛋白表达、NF-κB核转运激活情况、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)浓度以及血清二胺氧化酶(DAO)和脂肪酸结合蛋白2(FABP2)水平。结果:与sham组相比,OALT组大鼠肠黏膜存在明显的病理学损伤,肠黏膜病理Chiu’s评分明显增高,血清DAO和FABP2升高(P0.05)。罗格列酮预处理后,大鼠肠黏膜损伤减轻,肠黏膜病理Chiu’s评分降低,血清DAO和FABP2降低,肠组织PPARγ表达明显上调,NF-κB p65亚基核转位减少,肠组织IL-6和TNF-α浓度降低。结论:自体原位肝移植大鼠围术期炎症反应明显,存在明显的肠道损伤;PPARγ激动剂罗格列酮明显上调PPARγ表达,抑制肠道的炎症反应,减轻自体原位肝移植大鼠围术期的肠损伤。     

Heme oxygenase 1 plays role of neuron-protection by regulating Nrf2-ARE signaling post intracerebral hemorrhage

The NF-E2 related factor 2 (Nrf2) could be activated in intracerebral hemorrhage (ICH), and trigger the expression of ARE regulated heme oxygenase 1 (HO-1) subsequently. This study aims to explore neuroprotection of HO-1 protein in regulating the Nrf2-ARE signaling pathway in ICH. In this study, the femoral artery injection method was used to establish the ICH model. The zinc porphyrin-9 (ZPP-IX) was used to inhibit the HO-1 expression in ICH rats. The ICH rats were randomly divided into 3 groups, ICH group, ZPP-IX (10 mg/kg) + ICH group and DMSO (10 mg/kg) + ICH group. Neurological scores were evaluated for the 3 groups. Double immunofluorescence staining method was employed to observe the co-expression of HO-1, Nrf2, NF-κB and TNF-α and CD11b in glia cells. Western blot and RT-PCR assay were used to detect the total Nrf2, binding Nrf2, HO-1, NF-κB and TNF-α expression. The results indicated that ZPP-IX could aggravate the neurological dyafunstions of ICH rats. The HO-1 level in ZPP-IX group was significantly decreased compared to the ICH group (P < 0.05). The binding-Nrf2 protein was significantly increased in ZPP-IX group compared to ICH group (P < 0.05). The NF-κB and TNF-α level were significantly increased in ZPP-IX group compared to ICH group (P < 0.05). The ZPP-IX significantly inhibited the HO-1 and Nrf2, and enhanced NF-κB and TNF-α co-expressing with the CD11b compared to the ICH group (P < 0.05). In conclusion, HO-1 protein regulates the Nrf2-ARE pathway in ICH model by inhibiting the Nrf2 entering nucleus and activating the NF-κB and TNF-α expression.     

人参皂苷Rg1对小鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤及Nrf2/HO-1途径的影响

 目的：观察人参皂苷Rg1对小鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤的影响,并从核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路研究其作用机制。方法：C57BL/6小鼠随机分组,连续给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉造成脑缺血20 min,再灌注24 h。以具有抗氧化应激损伤作用、治疗缺血性脑血管病有效的药物依达拉奉作为阳性对照药。取脑组织行海马CA1区神经细胞病理学测定,RT-PCR法测定Nrf2和HO-1 mRNA表达,Western bloting测定脑组织胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白含量。结果：(1)缺血再灌注24 h后,神经细胞出现病理性损伤,细胞存活率显著降低。人参皂苷Rg1和依达拉奉可使神经细胞损伤明显减轻,细胞存活率显著升高。(2)脑缺血再灌注24 h,脑组织Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA表达增强,同时脑组织胞核和胞浆中Nrf2蛋白含量增加,核转位率升高,HO-1蛋白表达增强。人参皂苷Rg1和依达拉奉均能降低脑组织胞浆Nrf2蛋白含量,升高胞核Nrf2含量,使Nrf2核转位率升高,并使脑组织HO-1 mRNA和蛋白表达显著增加。依达拉奉的作用强于人参皂苷Rg1,但两药对脑组织Nrf2 mRNA表达无显著影响。结论：人参皂苷Rg1具有抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径、促进Nrf2合成和核转位、从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达有关。     

Wnt3a减轻黑素细胞iMC65氧化应激损伤

目的探讨Wnt3a对氧化应激损伤的i MC65黑素细胞的保护作用及机制。方法将黑素细胞分成对照组,Wnt3a组,H2O2处理组,Wnt3a干预组,750μmol/L的H2O2作用模拟黑素细胞的氧化应激损伤。MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞产生活性氧(ROS),荧光素酶报告基因检测Nrf2/ARE通路的激活,Western blot检测Nrf2/ARE通路的相关蛋白表达。结果与对照组相比,H2O2处理组的细胞活性明显下降(P0.01),凋亡比率明显上升(P0.01),ROS的产生明显增加(P0.01)。而Wnt3a干预组能显著缓解H2O2处理组细胞活性的降低(P0.05)、降低凋亡比率(P0.05),减少ROS的产生(P0.05)。Wnt3a也能上调Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论 Wnt3a可以保护氧化应激状态下的黑素细胞,其机制可能与激活Nrf2/ARE有关。     

PI3K/Nrf2通路在内毒素休克兔肾损伤中的作用

 目的: 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/核因子E2相关因子2(PI3K/Nrf2)信号通路在内毒素休克兔急性肾损伤中的作用。方法: 健康清洁级雄性新西兰大白兔50只,随机分为5组(每组10只):对照组(C组)、内毒素休克模型组(L组)、渥曼青霉素+内毒素休克组(WL组)、渥曼青霉素组(W组)和二甲基亚砜组(D组)。W组、WL组经耳缘静脉注射渥曼青霉素0.6 mg/kg,D组注射二甲基亚砜0.08 mL/kg,C组和L组注射等容量生理盐水。30 min后,L组和WL组静脉注射脂多糖5 mg/kg(溶于2 mL生理盐水),C组、W组和D组注射等容量生理盐水。注射脂多糖或生理盐水后6 h处死兔,取肾组织进行肾损伤评分(HSK),测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿α1-微球蛋白(α1-MG)浓度,检测肾组织MDA含量及SOD活性,检测肾组织Nrf2和HO-1的mRNA总Akt蛋白、p-Akt蛋白、总Nrf2蛋白、p-Nrf2蛋白、核Nrf2蛋白和HO-1蛋白水平。结果: 与C组、W组及D组比较,L组和WL组HSK、BUN、Cr、α1-MG及MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织Nrf2和HO-1的mRNA、p-Akt蛋白、Nrf2总蛋白、p-Nrf2蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的水平上调(P<0.05)。C组、W组和D组之间上述指标差异无统计学显著性。与L组比较,WL组HSK、BUN、Cr、α1-MG及MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织Nrf2和HO-1的mRNA、p-Akt蛋白、Nrf2总蛋白、p-Nrf2蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的水平降低(P<0.05)。结论: PI3K/Nrf2通路激活是内毒素休克诱发兔急性肾损伤时机体的适应性调节反应机制之一。     

18α-GA激活Nrf2对成体神经干细胞的影响

目的:明确18α-甘草次酸(18α-GA)对核因子E2相关因子2(Nrf2)的激活作用,观察上调Nrf2对成体神经干细胞(a NSCs)增殖和分化能力的影响,探讨维持a NSCs活力的有效途径。方法:体外培养新生、成年和老年小鼠的侧脑室室膜下区神经干细胞(NSCs),观察随年龄增长NSCs中Nrf2的表达变化。以18α-GA作用a NSCs,用real-time PCR和Western blot实验比较18α-GA组与DMSO对照组a NSCs的Nrf2表达变化。构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的Nrf2-shRNA慢病毒载体(LV)感染a NSCs,用real-time PCR和Western blot实验检测shRNA对Nrf2的沉默效率。将a NSCs按照干预条件不同分为DMSO组、18α-GA组、LV-GFP组和LV-Nrf2-shRNA组,运用Brd U掺入实验、Tuj1免疫荧光染色、CCK-8实验、Hoechst 33342/PI双染色和活性氧簇(ROS)水平测定等方法评价18α-GA是否通过激活Nrf2对a NSCs的增殖、分化、细胞活力、细胞凋亡以及氧化应激水平产生影响。结果:随年龄增长,成年和老年小鼠a NSCs的Nrf2 mRNA表达水平较新生小鼠NSCs显著降低(P0.01),但a NSCs的ROS水平显著高于新生小鼠NSCs(P0.05)。应用18α-GA后,a NSCs的Nrf2 mRNA与蛋白表达水平较DMSO组明显升高(P0.01),并且a NSCs的Brd U阳性率也显著增加(P0.01)。2 mg/L 18α-GA作用后,a NSCs的Tuj1阳性率和细胞活力较DMSO组显著升高(P0.05),而凋亡率和ROS水平显著下降(P0.05和P0.01)。但是,敲减a NSCs的Nrf2并应用18α-GA干预后,LV-Nrf2-shRNA组Brd U阳性率、Tuj1阳性率以及细胞活力均较LV-GFP组显著下降(P0.05),ROS水平却显著上升(P0.05)。结论:18α-GA可能通过激活Nrf2提高a NSCs的抗氧化能力,促进a NSCs增殖和分化,维持a NSCs潜能。     

氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡相关蛋白及Nrf2信号通路的影响

目的:探讨氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3表达水平的影响及其可能的机制。方法:体外培养小鼠肾小球系膜细胞,实验分为正常对照组(C组,5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(G组,5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖)和高糖+富氢水组(HH组,25 mmol/L葡萄糖+富氢水),培养48 h。采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)的蛋白水平;RT-PCR检测HO-1和NQO-1的mRNA表达;超氧化物阴离子荧光探针二氢乙啶检测活性氧簇(ROS)的水平;总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-8法)检测SOD活性。结果:与C组比较,H组Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平增加,Bcl-2蛋白表达减少(P0.05),而HH组上述蛋白表达水平与C组的差异均无统计学显著性;与H组比较,HH组的Bax和cleaved caspase-3蛋白下调,Bcl-2蛋白上调(P0.05)。H组细胞内的ROS水平较C组明显增高,SOD活性较C组明显降低(P0.05),而HH组的SOD活性与C组比较差异无统计学显著性;HH组细胞内的ROS水平较H组明显降低,SOD活性明显高于H组(P0.05)。与C组比较,H组的Nrf2蛋白以及HO-1和NQO-1 mRNA及蛋白表达均减少(P0.05);HH组的Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白以及HO-1和NQO-1的mRNA表达均明显高于H组(P0.05)。结论:氢分子可抑制高糖状态下肾小球系膜细胞促凋亡蛋白的表达,同时诱导其抗凋亡蛋白的表达,其机制可能与激活Nrf2信号通路有关。