PCR检测尿样中分枝杆菌DNA对结核病诊断之评价

背景:赞比亚卢萨卡大学教学医院胸科门诊及日本国际合作署分子实验室及日本长崎大学热带病学研究所内科。目的:在非洲采用两种常用PCR方法检测尿样中的分枝杆菌DNA作为肺结核快速诊断价值的评估。设计:预先收集培养阳性的肺结核病人和健康对照者的尿样进行分析。方法:收集63名培养阳性的活动性肺结核病人和63名健康对照者的尿样,从尿沉渣中提取DNA,并应用2种成熟的PCR方法,即Sechi法和Githui法鉴定结核分枝杆菌DNA,确定这二种方法的敏感性和特异性。结果:Githui法的敏感性和特异性分别是55.6％(35/63)和98.4％(62/63),Sechi法的敏感性和特异性分别为28.6％(18/63)和98.4％(62/63),63名病人中共有50名(79％)HIV血清阳性,Githui法检测尿结核分枝杆菌DNA的阳性检出率高于13名HIV阴性者的检出率(32/50=64％,3/13=23％; P=0.05)。结论:Githui法和Sechi法的敏感性均尚不足以被推荐作为临床上常规检测结核分枝杆菌DNA的方法。在非洲采用PCR方法做检测尿样中结核分枝杆菌DNA而用于临床实际仍需要进一步改善。同时,肺结核病人尿样中的分枝杆菌DNA存在与否也需进一步研究。     

山东地区肾综合征出血热患者基因诊断分型研究

采用逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR) ,对山东地区 60例肾综合征出血热 ( HFRS)患者的临床标本进行扩增 ,采用酶切分析鉴定扩增产物的特异性。结果 :60例标本均呈 型或 (和 ) 型阳性 ,扩增片段的大小与理论值一致。表明山东地区流行的 HFRS 型和 型毒株同时存在 ,以 型为主 ;RT-PCR是一项较特异、敏感的基因分型方法     

1例特殊的疑似狂犬病死亡病例的实验室检测和确诊

目的采用实验室检测方法确诊一例特殊的疑似狂犬病病例。方法利用荧光抗体(FA)试验、双抗体夹心ELISA和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对一例死亡的疑似狂犬病人的脑组织和此脑组织经乳鼠脑内接种传代后的鼠脑组织分别进行检测和分析。结果死亡病人脑组织的直接FA试验和双抗体夹心ELISA检测为阴性,但RT-PCR检测结果为阳性。将该病人脑组织经乳鼠传代后对鼠脑组织用上述三种方法检测的结果均为阳性。对该街毒株的RT-PCR产物中的核蛋白基因序列进行测定,用Mega3.1软件进行分子进化关系分析,证实所分离的街毒株为基因Ⅰ型狂犬病病毒,与以往在该地区所分离的街毒株有较近的遗传关系。结论该病例可确诊为狂犬病死亡病例,其主要和决定性的死因为狂犬病,但并发的肺部感染可能加速了死亡的进程。WHO认为FA技术是狂犬病诊断的金标准,但本病例说明,在某些复杂情况下,只有将多种实验室检测方法联合运用才能确诊狂犬病,而且病毒分离和RT-PCR可能比FA试验更敏感。     

城市中心区的结核病分子流行病学与传统流行病学

背景:分子流行病学在近期的结核病传播中的重要性得到了加强,但同时也发现了一些与传统流行病学的显著区别。 目的:1.在城市中心区的结核病高流行区(163/100000)和有成簇危险的人群中用RFLP法确定成簇病例的百分比。2.比较传统接触者追踪法(CCT)与RFLP法的作用。 分析:1997-1998年间巴塞罗纳市Ciutat Vella区收集的培养阳性的165例标本,利用IS6110和pTBN12(PGRS)序列进行RFLP分析:对251例公布的病例中的171例(68.1％)进行了接触者追踪调查。通过计算比值比(OR)、使用95％的可信区间(CI)评价它们之间的联系。多变量的分析采用逻辑回归。结果:通过RFLP分析,发现76例(46.0％)的分离株在IS6110和PGRS序列上有成簇现象,通过传统接触者追踪法(CCT),在858名接触者中,发现了30名新病人,57名病人存在关联。就RFLP和CCT调查结果来看,主要危险因素为静脉吸毒(IVDU)。44名独居者病例未包括在传统接触者追踪中,50％的病例用RFLP分析存在成簇。RFLP和CCT法的符合率为8/13(61.5％);5例不符合者为新近的非洲移民。在随后的RFLP分析中15/55例病例发现有流行病学关联。 结论:成簇病例的百分率很高。CCT在发现新病例时很有用,但在追踪传播路径时存在缺陷。CCT的覆盖面需要在被忽视的个体及与RFLP结果的符合率方面提高。     

1株汉坦病毒的分离及其S基因片段的克隆和序列分析

目的对浙江省肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)疫区-龙泉,新分离到的毒株的S基因片段进行克隆并进行序列测定及分析,以确定毒株的型别和基因变异程度,为进一步研究病毒进化和变异提供了有利条件。方法采用直接免疫荧光检测疫区鼠肺HV抗原。将HV抗原阳性的鼠肺标本接种Vero-E6细胞,分离病毒。参考GenBank发表的汉坦病毒核蛋白基因序列,设计合成一对引物,提取分离株细胞培养物的总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增新毒株S片段基因,并克隆入载体,纯化后进行核苷酸序列测定及分析。结果成功分离到的新毒株S片段的全基因序列共1 700个核苷酸,只有一个开放读码框架,共编码429个氨基酸。新毒株与HTN型毒株比较,核苷酸同源率为85.7%~91.9%。与SEO型毒株比较,核苷酸同源率为71.2%~75%,表明该毒株为HTN型毒株。结论浙江HFRS疫区新分离汉坦病毒株可以定型为HTN型毒株,可能为新的亚型。     

90例病毒性胃肠炎患者粪便中诺如病毒检出情况分析

目的 了解病毒性胃肠炎患者中诺如病毒感染情况. 方法 收集北京市2007年2月5~17日共计90例病毒性胃肠炎患者的粪便标本,应用逆转录聚合酶链反应法 (RT-PCR) 和酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测粪便中诺如病毒核酸或抗原,并对RT-PCR阳性标本的PCR产物进行克隆测序. 结果 90例病毒性胃肠炎患者的粪便标本中,35例 (38.89%) RT-PCR为诺如病毒核酸阳性,序列分析结果显示,诺如病毒GⅡ型34例 (97.14%),GⅠ型1例 (2.86%);90例中,39例 (43.33%) 为ELISA检测诺如病毒抗原阳性.以RT-PCR检测结果作为金标准进行比较,ELISA的灵敏度和特异度分别为97.14% (34/35) 和90.91% (50/55) . 结论 诺如病毒是病毒性胃肠炎的主要病原,以GⅡ型流行为主.ELISA快速、简便,其灵敏度和特异度较高,可作为诺如病毒感染的初筛试验.     

急性弛缓性麻痹病例中EV71感染情况及病毒特征分析

目的 分析近10年来福建省急性弛缓性麻痹(AFP)病例中EV71感染情况及病毒变异特征。方法 应用描述流行病学分析AFP病例中EV71感染病例流行病学特征及临床表现特点,分析EV71病毒VP1区核苷酸与氨基酸同源性阐析病毒变异特征与趋势。结果 根据EV71分离阳性数及AFP病例报告率推算,2003-2012年6月福建省15岁以下儿童EV71相关AFP病例平均发病率为2.24/1 000万,2008年以来呈上升趋势。AFP病例或其健康接触者分离的EV71病毒散在分布于9个设区市,以5-6月份多发,76.0%(19/25)为3岁以下儿童,男童为女童1.5倍。90.91%(20/22)的病例在麻痹前有发热,以单侧肢体麻痹(63.6%,14/22)为主,5例麻痹前有典型的手足口病表现,发病60d随访时2例仍残留麻痹。25例病毒株均属于C4基因型,除2003年分离毒株为C4b亚型外,其余均属于C4a亚型,2009-2011年病毒株间同源性高,与2008年安徽阜阳的代表株间同源性也较高,可能具有同一来源,并呈流行态势。结论 利用完善的AFP监测系统,分析EV71相关AFP病例发病情况及分离株病毒的特征可以从另一侧面反映EV71流行强度及趋势。     

陕西延安地区肾综合征出血热流行情况研究报告

目的 明确陕西延安地区为肾综合征出血热疫源地及病毒基因型别。方法 择有疫情报告地,进行人群疫情调查及健康人群特异性抗体检测;用夹夜法捕鼠,调查鼠种及鼠密度,采集鼠肺、血标本。人血、鼠血分别用IFA和ELISA法检测IgG抗体;鼠肺采用RT-PCR检测汉坦病毒(HV)RNA,测定PCR产物并与HV代表株76-118和Seoul序列进行比较。结果 对延安市防疫站2001年统计的7例HFRS患者进行流行病学调查,均属在当地感染;检测延安市洛川县交口河镇245例人血标本HV特异性IgG抗体,阳性50例,人群隐性感染率为20.41％。22份鼠肺及鼠血标本,IFA抗HV IgG阳性3例,ELISA阳性5例。从一只鼠血抗体阳性的鼠肺中检测到HV RNA,序列测定符合Seoul S片段序列(94％)。结论 延安市洛川县交口河镇为HFRS疫源地及新疫区,洛川交口河镇健康人群、褐家鼠、小家鼠中有HV感染,病毒型别为SEO型。     

白城市洮北区首例肾综合征出血热流行病学调查

目的：核实诊断肾综合征出血热(HFRS)临床病例、疫情，确认疫源地，查找疫源动物。方法：运用了流行病学横断面调查方法。结果：在疫点内调查30人，其中5人HFRS IgG抗体阳性，隐性感染率为16．67％。捕到褐家鼠19只，其中2只HFRS病毒抗原阳性，带毒率为10．53％。结论证实白城市HRFS 临床病例及疫情存在，可以确认家鼠型HFRS疫源地。     

糖尿病患者1,5-脱水葡萄糖醇、糖化血清蛋白、血糖、糖化血红蛋白与胰岛素水平相关性及其诊断价值

目的探讨糖尿病患者1,5-脱水葡萄糖醇(AG)、糖化血清蛋白(GSP)、血糖(Glu)、糖化血红蛋白(HbA1c)与胰岛素水平相关性及其诊断价值。方法利用生化检测法、发光免疫检测法,检测30例确诊(按照WHO标准)为糖尿病的患者的1,5-AG、GSP、Glu、HbA1c及胰岛素水平,将其设为观察组;并且以同样的方法检测30例正常健康者的1,5-AG、GSP、Glu、HbA1c及胰岛素水平,将其设为对照组,观察比较这两组患者中检验项目的差别,总结彼此之间的相关性以及对糖尿病临床诊断所起到的作用。结果观察组患者的GSP、1,5-AG、HbA1c以及胰岛素水平明显高于对照组(P<0.05);观察组患者的Glu检测水平明显低于对照组;糖尿病患者Glu与GSP、1,5-AG、HbA1c及胰岛素之间均呈负相关。结论糖尿病患者1,5-AG、GSP、Glu、HbA1c及胰岛素之间具有较好的相关性,对糖尿病临床诊断具有重要的指导意义,能够真实、客观地反映出病变情况。     

酶斑点杂交法与双抗体夹心法检测汉坦病毒感染的比较

目的将酶标抗汉坦病毒NP抗原单链抗体应用于酶斑点杂交法和双抗体夹心法,检测汉坦病毒感染,探索价格低廉早期HFRS诊断试剂。方法以戊二醛偶联辣根过氧化物酶和抗汉坦病毒NP抗原单链抗体,制备酶标单链抗体,并应用于酶斑点杂交法和双抗体夹心法中,检测56份早期HFRS患者血清及66份阴性对照血清。结果56份HFRS患者血清中,双抗体夹心法检测出29例阳性,阳性率为51.79%,酶斑点杂交法检测出28例阳性,阳性率为50.00%,两方法检测66例阴性对照血清,结果均为阴性。统计学处理,两方法差异不显著。结论以酶标抗汉坦病毒NP抗原单链抗体制备的酶斑点杂交和双抗体夹心诊断试剂,均为稳定性好、假阳性率低、造价低廉、诊断可靠的诊断试剂。     

免疫-PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体方法的建立

目的　建立高灵敏性和高特异性的免疫 -PCR方法检测肾综合征出血热 (HFRS)患者血清中抗核衣壳蛋白抗体。方法　用汉坦病毒 ( 76 - 118株 )重组核衣壳蛋白为抗原包被聚苯乙烯微滴度板 ,与经ELISA法和临床均已确诊为HFRS患者的血清进行抗原抗体特异性反应 ,以链霉亲和素为桥梁将生物素标记的抗体与生物素标记的DNA指示分子相连 ,PCR扩增DNA指示分子 ,通过检测指示分子DNA来反映肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的水平 ,并与传统的ELISA法进行比较。结果　免疫 -PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的敏感性是ELISA法的 2 5 0 0 0倍 ;30例HFRS阳性患者血清免疫 -PCR检测均为阳性 ,2 0例甲型肝炎阳性血清和 2 0例正常人血清免疫 -PCR检测均为阴性。结论　免疫 -PCR方法敏感性高 ,特异性强 ,有可能作为一种高敏感性的检测方法用于HFRS的临床辅助诊断     

三种肾综合征出血热诊断方法的比较

目的探索一种更为敏感而特异的肾综合征出血热特异性抗体的检测方法。方法采用免疫-PCR、ELISA和IFAT三种方法检测130份HFRS患者血清中抗HFRS-IgG抗体。结果免疫-PCR方法的灵敏度为78．5％，特异性为100％；ELISA法和IFAT法的灵敏度分别为47．7％和49．2％。结论免疫-PCR方法的敏感性高于ELISA法和IFAT法．是适用于肾综合征出血热特异性抗体检测的好方法。     

应用捕获ELISA检测肾综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体

目的 检测紧综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体,研究早期诊断方法。方法：用MacELISA法检测不同病日HFRS病人尿液中特异性IgM抗体。结果：HFRS病人尿夜中特异性IgM抗体总阳性率为76.47%,第3病日即可出现阳性,7－9病日阳性率可达83.87%,与同期HFRS病人血清抗体检测对比无显著性差异（P＞0.05）。结论：用MacELISA检测HFRS尿液中特异性IgM抗体敏感性高,特异性强,适合早期诊断。     

Key differentiating features between scrub typhus and hemorrhagic fever with renal syndrome in northern China

Both scrub typhus and hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) are severely epidemic in northern China and often present with acute undifferentiated fever. To correctly distinguish the two diseases at an early stage, we collected and compared clinical and routine laboratory data of 46 patients with confirmed scrub typhus and 49 patients with confirmed HFRS presenting to the outpatient departments of three town hospitals in northern China. Most patients with HFRS but none of the patients with scrub typhus had hemorrhagic manifestations. Retro-orbital pain, lumbar back pain, flank tenderness, proteinuria, and occult blood in urine often occurred in patients with HFRS. However, skin eschar, regional lymphadenopathy, and maculopapular rash were more commonly found in patients with scrub typhus. In addition, platelet counts in patients with HFRS were significantly lower than in patients with scrub typhus. These findings will be useful for physicians to distinguish scrub typhus from HFRS.     

2007年浙江丽水地区汉坦病毒的分离与型别鉴定

目的对2007年从浙江省丽水地区肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)疫区鼠肺分离的汉坦病毒进行型别鉴定和分子生物学特性研究。方法将汉坦病毒抗原阳性的鼠肺标本接种Vero-E6细胞,分离汉坦病毒。提取病毒总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒S基因全片段,克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析,应用DNA STAR软件分析比较,确定病毒型别。结果从疫区7份阳性鼠肺中分离到2株汉坦病毒,经汉坦病毒单克隆直接荧光血清检查和基因序列测定,结果为汉滩型(HTN)病毒,2株病毒与国际标准株76-118(HTN型)和80-39(SEO型)S片段核苷酸的同源性分别为84.7%、84.6%和64.2%、64.0%。结论浙江省丽水地区可能存在以HTN型病毒为主的肾综合征出血热自然疫源地。     

辽宁省鼠类感染肾综合征出血热的病原学及分子生物学检测比较

目的了解辽宁省鼠间带毒、鼠密度及鼠种构成与汉坦病毒的分子特征。方法采用夹夜法对鼠密度、鼠种构成及鼠带毒率进行监测,用间接免疫荧光方法检测HFRS抗原,用Vero-E6细胞对病毒进行传代分离,RT-PCR方法对阳性毒株进行基因分型及测序分析。结果鼠密度在春秋季各出现一个高峰,村内鼠密度高于村外鼠密度,褐家鼠为优势鼠种。带毒率无显著性差异,各鼠种间带毒率无显著性差异。5株病毒,有2个遗传分支,4株为HV的SEO型,1株为HTN型,4株SEO型HV基本位于系统发生树的同一进化枝上;1株HTN型HV,与汉滩病毒标准株76-118接近。结论辽宁省每年存在春秋季两个鼠密度高峰,带毒率同季节及鼠种无关。辽宁省是以SEO型HV为主的SEO和HTN混合型疫区,且SEO型汉坦病毒变异较小。     

连续性肾脏替代治疗与间断性血液透析在重症肾综合征出血热治疗中的应用

目的回顾性观察连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy,CRRT)与间断性血液透析(intermittent hemodialysis,IHD)在重症肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)患者中的应用。方法依据临床分型标准,将2008年1月—2012年8月在我中心行血液净化治疗的147例重症HFRS患者分为重型组和危重型组;参照中华医学会ICU血液净化指南,对纳入患者行CRRT或IHD治疗,比较2组行CRRT或IHD治疗的病死率、并发症发生率和急性期的实验室指标。结果重型组患者均存活;危重型组患者行CRRT与IHD后的病死率比较差异无统计学意义(P=0.124);危重型组行CRRT的比例明显高于重型组(P0.001)。病程中存在重叠期的重症患者,行CRRT初始治疗的例数明显多于行IHD的例数,但其生存率比较差异无统计学意义(P=1.000)。CRRT组患者病情较IHD组重,其疾病本身的肾外并发症也较IHD组常见。结论 CRRT可广泛应用于危重型HFRS患者的救治。CRRT可有效减轻水负荷,稳定机体的血流动力学状态,将有助于使危重患者平稳地渡过急性期。     

大鼠效力试验模型对肾综合征出血热灭活疫苗的敏感性

目的　研究实验大鼠效力试验模型对肾综合征出血热灭活疫苗的敏感性。方法　用不同剂量、不同浓度肾综合征出血热灭活疫苗免疫大鼠 ,然后采用直接免疫酶斑减少中和试验检测血清汉坦病毒中和抗体 (NA)。结果与讨论　采用每剂 0 12 5ml的疫苗免疫大鼠可产生有效的免疫应答 ;疫苗应采用原液免疫 ,不宜做稀释 ;大鼠可作为疫苗效力评价的实验动物。