细胞凋亡在脑死亡供体肾中的研究进展

细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下,受基因严格调控的细胞自杀现象。与细胞凋亡有关的酶和基因的表达在脑死亡供体(DBD)中可以发生改变,且与脑死亡(BD)过程中免疫反应有着密切的联系。细胞凋亡可能是一条引起BD捐献供体肾损伤比较重要的途径。文章主要从细胞凋亡相关基因B淋巴细胞瘤/白血病基因2(Bcl-2)和白细胞介素-18(IL-18)、高迁移率族蛋白(HMGB1)、β-葡萄糖醛酸酶(GUSB)、蛋白酶caspase 3(CASP 3)、分化群95(CD95 or FAS)和肿瘤基因p53的表达及细胞凋亡与免疫之间的关系这两大方面来探讨细胞凋亡在BD捐献供体肾中的作用,希望能够从细胞凋亡的角度来改善DBD肾的质量。     

脑死亡供体肾损伤的相关分子研究进展

脑死亡供体(DBD)捐献供肾作为一种特殊供体,用此供体行肾移植过程前后肾脏所受损伤的程度、机制、通路等势必与活体及尸体供体肾移植有不同之处。在分子水平,如补体成分、Toll样受体等的表达,对再灌注损伤有举足轻重的作用。文章就近年来DBD肾损伤中涉及的分子机制的研究进展作一综述。     

脑死亡器官捐献移植过程中的问题

背景：采用国际标准的供肾来源,即脑死亡无偿肾脏捐献可缓解目前肾移植中供肾的严重短缺问题。近年脑死亡无偿器官捐献及移植已在中国成功开始实施,但在脑死亡无偿器官捐献肾移植方面的报道较少。 目的：探讨脑死亡器官捐献肾移植在中国的可行性及保证移植成功的必要条件。 方法：总结2007-01/2010-07脑死亡器官捐献肾移植12例患者的经验和体会,包括供者/供肾的评估、供肾的摘取与保存、肾移植情况、移植后受者肾功能及并发症、住院时间、生活质量等。 结果与结论：12例脑死亡器官捐献肾移植受者中10例在移植后2~5 d肾功能恢复正常,移植后14~21 d出院;2例出现肾功能延迟恢复,分别于移植后10,15 d肾功能正常,移植后第28天出院。在2~42个月随访过程中,8例患者肾功能均正常,尿蛋白阴性,已从事正常工作,生活质量良好;2例出现蛋白尿,但肾功能正常;1例肾功能正常,肝功能异常,经治疗好转;1例在术后3个月死于严重肺部感染。提示,脑死亡器官捐献肾移植在中国可以得到开展;脑死亡供者必须有满意的血流动力学和尿量及良好的肾功能才能作为理想的肾移植供体;选择最佳移植时机,重视移植后系统性随访,才能确保脑死亡无偿器官捐献肾脏移植成功。     

细胞凋亡及其相关基因蛋白在阿霉素肾病中的作用

目的：探讨细胞凋亡及其相关基因蛋白在阿霉素（ADR）肾病发病中的作用及机制。 方法：复制ADR肾病模型，用超氧化物歧化酶（SOD）干预，用原位末端标记法、免疫组化法、原位杂交法分别检测细胞凋亡、基因蛋白表达、野生型p53 mRNA，同时测定肾皮质匀浆丙二醛（MDA）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。结果：模型组皮质部肾小球、近曲及远曲肾小管细胞凋亡数和c-Myc蛋白及野生型p53转录水平、近曲和远曲肾小管细胞Bax蛋白表达、肾皮质MDA水平明显高于对照组（P<0.01），肾皮质GSH-Px活性、近曲和远曲肾小管细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组（P<0.01）；SOD组肾小球和近曲、远曲肾小管细胞凋亡数明显少于模型组（P<0.01）。结论：ADR肾病病鼠的发病与肾小球、近曲和远曲肾小管细胞凋亡有关，氧自由基（OFR）可能通过上调诱导细胞凋亡的基因蛋白表达，下调抑制细胞凋亡的基因蛋白表达而引起细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导Raji细胞凋亡过程中端粒酶活性和hTERT、bcl-2基因表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）诱导Raji细胞凋亡并初步探讨端粒酶活性、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及bcl-2基因表达之间的关系。 方法： 通过姬姆萨染色来观察细胞的凋亡；以RT-PCR分析bcl-2、hTERT基因的mRNA表达水平；利用半定量多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测As2O3处理Raji细胞前后端粒酶活性的改变。 结果： 2 μmol/L As2O3能诱导Raji细胞凋亡，2 μmol/L As2O3作用于Raji细胞8 h、12 h、24 h hTERT mRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异（P＜0.05）， 12 h、24 h bcl-2 mRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异。2 μmol/L As2O3作用48 h后，Raji细胞中端粒酶活性即出现下降，作用72 h、96 h，端粒酶的活性明显受到抑制，吸光度分别为0.829、0.328、0.291，分别与空白对照组比较有显著差异（P＜0.05）。结论： As2O3诱导Raji细胞凋亡过程中，端粒酶活性下调与hTERT、bcl-2基因mRNA表达下降有关。     

大鼠残肾细胞凋亡及凋亡相关基因的动态表达及意义

目的： 研究在5/6肾切除大鼠不同时段残肾组织中肾实质细胞凋亡及相关基因Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA、蛋白质的动态表达变化及其意义。 方法: SD大鼠5/6肾切除后,分别在1周、2周、4周、8周、12周、16周、26周、40周采集标本，普通光镜、电镜观察残肾病理改变、TUNEL法检测肾脏细胞凋亡、RT-PCR和Western blotting检测残肾组织凋亡相关基因mRNA和蛋白质的变化、免疫组织化学进行蛋白质定位，分析凋亡、增殖与肾小球硬化和间质纤维化的相关关系。 结果: 5/6肾切除后大鼠残肾出现进行性肾小球硬化及间质纤维化病变。肾增殖与凋亡水平高于对照组，肾实质凋亡细胞以肾小管上皮细胞和肾间质细胞为主。肾小球凋亡指数与肾间质炎细胞浸润和24 h尿蛋白呈显著正相关(r=0.788、r=0.822,P<0.01);肾小管凋亡指数与血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白、炎细胞浸润指数呈显著正相关（r=0.824、0.794、0.883、0.948，P<0.01）。促凋亡相关基因Bax、caspase-3、caspase-8、caspase-9mRNA及相应蛋白质明显增加且表达一致，在病变过程中呈波浪式上调，高峰分别在4周和40周，这些变化与肾间质炎细胞浸润指数的变化呈显著正相关（P<0.01）；抑制凋亡因子Bcl-2表达与对照组比较无明显差异。 结论: 细胞凋亡参与肾小球硬化、肾小管萎缩及间质纤维化的过程，肾间质炎细胞的浸润更促进残肾凋亡的发生。     

肿瘤抑制因子RUNX3对人胃癌细胞中凋亡相关基因表达的影响

 目的：研究肿瘤抑制因子人类Runt相关转录因子3(RUNX3)对人胃癌细胞BGC823中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（bcl-2）、bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（caspase-8）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（caspase-9）表达的影响,以揭示RUNX3促进胃癌细胞凋亡的作用机制。方法：首先构建人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1- Runx3,将pcDNA3.1-Runx3及空载体pcDNA3.1分别转染BGC823细胞48 h后,提取细胞的总RNA和蛋白质,应用逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)和蛋白免疫印迹（Western blotting）分别检测转染不同载体的细胞内RUNX3的表达情况,然后用RT-PCR和Western blotting检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达及蛋白的表达,β-actin作为内对照。结果：我们成功构建了人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1-Runx3,将其转染BGC823细胞后,RT-PCR和Western blotting结果均显示：转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中RUNX3的表达水平明显高于转染空载体pcDNA3.1的细胞(P<0.05);转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中bcl-2基因的表达水平明显降低,caspase-3、caspase-9基因的表达水平明显增加(P<0.05)。结论：在BGC823细胞中,RUNX3通过下调bcl-2,上调caspase-3、caspase-9的表达促进细胞的凋亡。     

MicroRNA-29a对大鼠心肌细胞Bcl-2和Mcl-1表达的调控作用及其机制

 目的：探讨microRNA-29a（miR-29a）对大鼠心肌细胞(CM细胞)B细胞白血病/淋巴瘤-2（Bcl-2） 和髓样细胞白血病-1（Mcl-1）表达的调控机制。方法：体外培养新生Sprague-Dawley大鼠CM细胞和人胚肾细胞株293T。合成大鼠miR-29a的拟似物（mimic）和抑制剂（inhibitor）。用脂质体Lipofectamine RNAiMAX转染miR-29a mimic进入CM细胞，转染 48 h后分别用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Bcl-2和Mcl-1 mRNA和蛋白的表达变化。构建Bcl-2 和Mcl-1 的萤光素酶报告基因载体（DNA质粒），转染293T 细胞(DNA质粒和miRNA共转染)和CM细胞（miRNA和 DNA 质粒先后转染），双萤光素酶报告基因系统检测萤光素酶的表达变化。结果：CM细胞转染miR-29a mimic 48 h后，Bcl-2 和Mcl-1 mRNA和蛋白的水平均下调（P<0.05）。双萤光素酶报告基因系统显示，在293T细胞中，miR-29a可特异抑制带有 bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达（P<0.05），在CM细胞中，抑制内源性的miR-29a水平能促进bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达。结论：抗凋亡基因bcl-2和mcl-1是miR-29a的靶基因。miR-29a可能通过作用于Bcl-2和Mcl-1实现对心肌细胞凋亡的调控作用，具体效应仍待进一步阐明。     

DDAH2抑制低氧诱导大鼠心肌细胞H9c2(2-1)凋亡

 目的 探讨过表达二甲基精氨酸二甲胺水解酶-Ⅱ（DDAH2）对低氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用和是否通过内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活化来保护心肌细胞。方法 低氧诱导大鼠心肌细胞H9c2(2-1)36h从而诱导凋亡,同时转染DDAH2真核细胞表达质粒,用WST-1细胞毒试验和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测eNOS磷酸化。结果 低氧组心肌细胞存活率显著性降低;过表达DDAH2基因使低氧下心肌细胞存活率明显地上升。DDAH2过表达组心肌细胞凋亡率为17.38%±1.52%,显著性低于低氧组（27.34%±1.33%）（P<0.05）。转染DDAH2基因可以显著上调低氧组心肌细胞的eNOS磷酸化水平;过表达DDAH2基因的低氧组用eNOS抑制剂L-NAME干预后,凋亡水平明显上升。结论 过表达DDAH2基因上调eNOS磷酸化抑制低氧所致的大鼠心肌细胞H9c2（2-1）凋亡。     

HPV18型E2蛋白高表达对巨噬细胞凋亡及其分泌功能的影响

目的:研究HPV18 E2及其N端(TAD)、C端(DBD)与GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞(MΦ)凋亡及分泌活性的影响,为进一步研究E2蛋白在HPV18致癌机制中的作用奠定实验基础.方法:通过PCR从现有真核表达载体pEGFP-C1/E2上分别扩增出TAD、DBD基因片段,并构建真核表达载体pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD.将3种真核表达载体及pEGFP-C1分别转染MΦ,用倒置荧光显微镜观察它们的表达与定位,并以抗GFP抗体为一抗作Western blot检测它们的表达.通过3种融合蛋白在MФ内的瞬时高表达,在转染48 h后分别检测各组细胞培养基中TNF-α和IL-1β的含量,并收集MΦ经染色以及流式细胞术(FCM)观察检测其凋亡.结果:GFP-E2融合蛋白主要表达于细胞核,细胞质内也有表达,而GFP-DBD融合蛋白仅表达于细胞核内,GFP-TAD仅表达于细胞质.GFP-E2、GFP-TAD融合蛋白在MΦ内高表达后MΦ凋亡率上升,细胞因子TNF-α和IL-1β分泌量增加,且GFP-TAD作用强于GFP-E2.而EGFP-DBD无此作用.结论:HPV18 E2及其TAD与EGFP融合蛋白瞬时高表达可诱导MΦ凋亡并上调其分泌细胞因子TNF-α和IL-1β.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。