慢性脊髓压迫及减压后骨骼肌细胞凋亡的实验研究

目的：研究大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后骨骼肌萎缩与细胞凋亡的关系以及凋亡相关基因P53的表达意义。方法：45只SD大鼠分成3组，压迫组15只，作成轻、中和重度慢性脊髓压迫损伤；减压组25只，将重度压迫组的压迫装置取出；正常对照组5只，不做任何处理。应用苏木精-伊红染色、终末脱氧核苷酰转移酶介导的原位末端标记法和原位杂交技术研究慢性脊髓压迫及减压后肌细胞萎缩、凋亡的特点。结果：随着压迫程度的增加肌细胞凋亡数量增加，P53mRNA表达增高；减压后肌细胞凋亡数量明显减少，P53mRNA表达减少。结论：慢性脊髓压迫后肌细胞出现凋亡，骨骼肌细胞的凋亡是肌肉失神经萎缩的机制之一，减压可通过抑制细胞凋亡阻止肌肉萎缩。     

慢性压迫性脊髓损伤后骨骼肌形态学及相关蛋白Myogenin和myoD表达的实验研究

目的观察慢性压迫性脊髓损伤后骨骼肌形态学改变及相关蛋白Myogenin和myoD的表达变化。方法50只Wistar雌性大鼠,随机分为正常组、假手术组和慢性压迫组。慢性压迫组置人平头塑料螺钉对大鼠脊髓进行后路渐进性压迫,于2个月后分别压迫到20％、40％、60％左右程度。处死大鼠后取腓肠肌作为标本,分别做成电镜标本及进行Myogenin和myoD的免疫组化染色。结果各压迫组的大鼠腓肠肌细胞肌丝、肌节结构发生退变,并且成肌细胞在数量增多的同时出现凋亡现象;压迫组与正常组、假手术组比较相关蛋白Myogenin和myoD的表达增高（P〈0．05）。结论脊髓压迫性损伤可引起靶器官肌肉的退变,其退变的程度和脊髓受压程度呈正相关,虽然同时存在骨骼肌的增殖反应,但完整的细胞分裂过程少见,这可能是慢性压迫性脊髓损伤后影响功能恢复的原因之一。     

兔慢性颈脊髓压迫减压术后凋亡基因bcl-2和bax的表达

目的:通过观察兔慢性颈脊髓压迫症动物模型脊髓减压术后bcl-2和bax的表达,以期了解脊髓减压术治疗慢性颈脊髓压迫症的作用机制。方法:21只患有慢性颈脊髓压迫症的中国大白兔,改良Tarlov运动功能评分均为3分,随机分为两组:①减压组15只:退出螺钉进行减压。其中1只兔发生急性脊髓损伤,改良Tarlov运动功能评分降至1分,排除实验。②压迫组6只:不施行减压术。另取6只无神经功能障碍的健康大白兔作为正常对照组。分别在减压后第1,7,15,30,60天,观察减压术后脊髓的细胞凋亡和凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果:脊髓减压术后凋亡细胞逐渐减少。脊髓减压术后第1天,bcl-2和bax阳性细胞均较减压前增多。减压后第7天,bcl-2阳性细胞明显增多,bax阳性细胞减少。减压后第15,30天和第60天,bcl-2和bax阳性细胞均逐渐减少。至减压后第60天,bcl-2和bax阳性细胞表达与正常对照组相似。结论:脊髓减压术能有效抑制神经细胞凋亡。     

慢性压迫性脊髓损伤后神经前体细胞的增殖

背景:关于成年哺乳类动物脊髓损伤后神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用尚无肯定性结论。目的:通过分析成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达的变化,探讨神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用。设计:完全随机对照实验。单位:兰州大学第二医院骨科研究所。材料:实验于2003-03/10在兰州大学第二医院骨科研究所完成,选择成年健康Wistar大鼠50只。随机分为正常对照组、慢性压迫性脊髓损伤中度组(压迫物占椎管矢状径的40%)、重度组(压迫物占椎管矢状径的60%)及重度压迫损伤24h后减压3d、10d组,每组10只。主要观察指标:①各组大鼠压迫临近段(距压迫边缘至5mm)脊髓灰质和白质内nestin的阳性表达并测量其灰度值。②各组大鼠脊髓内胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:50只大鼠均进入实验分析。①中度压迫组(白质235.33±6.48,灰质196.28±6.55)、重度压迫组(白质190.45±4.91,灰质173.15±5.98)及重度压迫损伤减压后3d组(白质198.39±3.24,灰质180.38±4.51)和减压后10d组白质(202.55±3.54)中巢蛋白均有明显表达(P<0.05),以重度压迫组最为显著(P<0.01)。减压10d组的灰质和脊髓中央管室管膜细胞的巢蛋白表达与正常对照组相比,差异无显著性意义(P>0.05)。②与正常对照组相比,各损伤组脊髓内胶质纤维酸性蛋白表达增强,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目增多、胞体肥大,突起增粗、增长。结论:成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后早期存在神经前体细胞的增殖。星形胶质细胞参与神经前体细胞的增殖与迁移,对脊髓具有重要的营养修复作用。     

兔慢性颈脊髓压迫减压术后凋亡基因bcf-2和bax的表达

目的：通过观察兔慢性颈脊髓压迫症动物模型脊髓减压术后bcl-2和bax的表达，以期了解脊髓减压术治疗慢性颈脊髓压迫症的作用机制。方法：21只患有慢性颈脊髓压迫症的中国大白兔，改良Tarlov运动功能评分均为3分，随机分为两组：①减压组15只：退出螺钉进行减压。其中1只兔发生急性脊髓损伤，改良Tarlov运动功能评分降至1分，排除实验。②压迫组6只：不施行减压术。另取6只无神经功能障碍的健康大白兔作为正常对照组。分别在减压后第1，7，15，30，60天，观察减压术后脊髓的细胞凋亡和凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：脊髓减压术后凋亡细胞逐渐减少。脊髓减压术后第1天,bcl-2和bax阳性细胞均较减压前增多。减压后第7天，bcl-2阳性细胞明显增多，bax阳性细胞减少。减压后第15，30天和第60天，bcl-2和bax阳性细胞均逐渐减少。至减压后第60天，bcl-2和bax阳性细胞表达与正常对照组相似。结论：脊髓减压术能有效抑制神经细胞凋亡。     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后凋亡调控相关基因p53的表达变化及意义

目的:探讨慢性压迫性脊髓损伤(chroniccompressivespinalcordinjury,CCSCI)后脊髓组织中凋亡相关基因p53的表达变化规律及意义。方法:通过制作Wistar大鼠慢性压迫脊髓损伤模型,应用免疫组织化学方法和原位杂交方法,研究压迫组、假手术对照组脊髓组织中p53mR-NA和p53蛋白表达的灰度值差异。结果:p53mRNA在脊髓受压后4h脊髓组织即有表达,1d后增高,7d后仍有表达,14d后无表达,而p53蛋白受压1d后呈弱阳性,之后无明显表达。结论:p53的表达规律提示它参与了CCSCI内源性机制的调控过程。     

慢性压迫性脊髓损伤后神经前体细胞的增殖

背景：关于成年哺乳类动物脊髓损伤后神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用尚无肯定性结论。目的：通过分析成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达的变化，探讨神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用。设计：完全随机对照实验。单位：兰州大学第二医院骨科研究所。材料：实验于2003-03／10在兰州大学第二医院骨科研究所完成，选择成年健康Wistar大鼠50只。随机分为正常对照组、慢性压迫性脊髓损伤中度组（压迫物占椎管矢状径的40％）、重度组（压迫物占椎管矢状径的60％）及重度压迫损伤24h后减压3d、10d组，每组10只。主要观察指标：①各组大鼠压迫临近段（距压迫边缘至5mm）脊髓灰质和白质内nestin的阳性表达并测量其灰度值。②各组大鼠脊髓内胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：50只大鼠均进入实验分析。①中度压迫组（白质235.33&;#177;6.48，灰质196．28&;#177;6．55）、重度压迫组（白质190．45&;#177;4．91，灰质173．15&;#177;5．98）及重度压迫损伤减压后3d组（白质198．39&;#177;3．24，灰质180．38&;#177;4．51）和减压后10d组白质（202．55&;#177;3．54）中巢蛋白均有明显表达（P〈0．05），以重度压迫组最为显著（P〈0．01）。减压10d组的灰质和脊髓中央管室管膜细胞的巢蛋白表达与正常对照组相比，差异无显著性意义（P〉0．05）。②与正常对照组相比，各损伤组脊髓内胶质纤维酸性蛋白表达增强，胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目增多、胞体肥大，突起增粗、增长。结论：成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后早期存在神经前体细胞的增殖。星形胶质细胞参与神经前体细胞的增殖与迁移，对脊髓具有重要的营养修复作用。     

高压氧对递增负荷训练大鼠腓肠肌P53、Bcl-2蛋白表达的影响

背景:研究显示高压氧疗法在运动损伤与疲劳恢复方面具有较好的应用效果,但其机制尚不清楚.目的:观察高压氧对递增负荷跑台运动后大鼠腓肠肌P53、Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验.于2008-03/05在苏州大学运动人体科学实验室完成.材料:2个月龄雄性SD大鼠24只,随机分为3组,安静对照组、递增负荷训练组、高压氧恢复组,每组8只.方法:递增负荷训练组:坡度10%,递增负荷训练,第1～4周,每天20 m/m.n运动10 min,25 m/min运动10 min,30 m/mIn运动10 min,35 m/min运动10 min.第5～8周,每天20 m/mIn运动10 min,25 m/min运动10 min,30 m,min运动20 min,35 m/min运动20 min.高雎氧恢复组:运动方案相同,运动后即刻用0.2 MPa压力的商压氧恢复60 min.安静对照组自由喂养,不进行训练.递增负荷训练组末次运动后1 h、高压氧舱恢复组恢复1 h及相应安静对照组分批麻醉处死,快速取腓肠肌立即用体积分数为0.1甲醛固定,制作切片.主要观察指标:①苏木精-伊红染色观察各组大鼠骨骼肌细胞凋亡情况.②免疫组织化学检测各组大鼠骨骼肌细胞P53与Bcl-2蛋白表达情况.结果:24只大鼠进入结果分析.①递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞凋亡数量增多,经高压氧恢复后细胞凋亡数量减少.②递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞P53蛋白表达增多,经高压氧恢复后表达显著减少.③递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞Bcl-2蛋白表达增多,高压氧恢复后未见减少.结论:高压氧能够抑制递增负荷训练大鼠骨骼肌P53蛋白的表达,减少运动导致的大鼠骨骼肌细胞凋亡的发生.     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后凋亡调控相关基因p53的表达变化及意义

目的：探讨慢性压迫性脊髓损伤(chronic compressive spinal cord iniury，CCSCI)后脊髓组织中凋亡相关基因p53的表达变化规律及意义。方法：通过制作Wistar大鼠慢性压迫脊髓损伤模型，应用免疫组织化学方法和原位杂交方法，研究压迫组、假手术对照组脊髓组织中p53mRNA和p53蛋白表达的灰度值差异。结果：p53mRNA在脊髓受压后4h脊髓组织即有表达，1d后增高，7d后仍有表达，14d后无表达，而p53蛋白受压1d后呈弱阳性，之后无明显表达。结论：p53的表达规律提示它参与了CCSCI内源性机制的调控过程。     

构建脊髓慢性压迫损伤模型大鼠巢蛋白的表达规律

背景:既往应用的脊髓损伤动物模型难以达到一种慢性渐进性的压迫效果,与人体慢性脊髓压迫损伤机制有很大的不同。目的:构建一种新的脊髓慢性压迫性损伤模型大鼠,探究慢性压迫损伤后脊髓损伤区域巢蛋白的表达规律及其意义。方法:Wistar大鼠40只随机分为实验组30只和对照组10只。实验组大鼠取下胸7、8椎板,植入压迫材料,形成慢性压迫脊髓损伤模型。植入后第1,3,7,14,28天,取压迫处脊髓组织,行病理学检查及巢蛋白免疫组织化学染色,半定量反转录PCR反应测定巢蛋白mRNA的表达,同时测量压迫段椎管直径及缓膨胀材料侵占厚度。结果与结论:随压迫时间的延长,实验组大鼠椎管侵占率逐渐增加,脊髓组织出现坏死等情况,大鼠BBB评分降低,压迫处脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白表达至伤后7d时达到高峰,而后表达逐渐下降,说明实验成功建立慢性脊髓压迫损伤动物模型,且慢性脊髓压迫损伤大鼠脊髓组织Nestin mRNA及蛋白呈动态变化。     

构建脊髓慢性压迫损伤模型大鼠巢蛋白的表达规律

背景：既往应用的脊髓损伤动物模型难以达到一种慢性渐进性的压迫效果,与人体慢性脊髓压迫损伤机制有很大的不同。目的：构建一种新的脊髓慢性压迫性损伤模型大鼠,探究慢性压迫损伤后脊髓损伤区域巢蛋白的表达规律及其意义。方法：Wistar大鼠40只随机分为实验组30只和对照组10只。实验组大鼠取下胸7、8椎板,植入压迫材料,形成慢性压迫脊髓损伤模型。植入后第1,3,7,14,28天,取压迫处脊髓组织,行病理学检查及巢蛋白免疫组织化学染色,半定量反转录PCR反应测定巢蛋白mRNA的表达,同时测量压迫段椎管直径及缓膨胀材料侵占厚度。结果与结论：随压迫时间的延长,实验组大鼠椎管侵占率逐渐增加,脊髓组织出现坏死等情况,大鼠BBB评分降低,压迫处脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白表达至伤后7d时达到高峰,而后表达逐渐下降,说明实验成功建立慢性脊髓压迫损伤动物模型,且慢性脊髓压迫损伤大鼠脊髓组织Nestin mRNA及蛋白呈动态变化。     

非甾体抗炎药对大鼠神经根慢性压迫性损伤诱导的脊髓神经细胞凋亡的影响

目的检测大鼠神经根慢性损伤后脊髓神经细胞的凋亡率,同时探讨不同类型非甾体抗炎药(NSAIDs)对此的影响,试图解释腰椎管狭窄症的一些不典型症状。方法将48只SD大鼠随机分为对照组、结扎组、吲哚美辛组和美洛昔康组各12只。在结扎组、吲哚美辛组和美洛昔康组,造成神经根慢性压迫性损伤模型,后2组术后分别喂服吲哚美辛、美洛昔康,饲养4周处死,提取标本。结果在结扎组,凋亡指数与神经损伤评分之间存在正相关(r=0.858,P0.01)。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dutp末端标记染色(TUNEL)结果显示结扎组与对照组比较有非常显著差异(P0.01);吲哚美辛组和美洛昔康组与对照组比较均无统计学差异(P0.05),与结扎组比较均有非常显著差异(P0.01),吲哚美辛组和美洛昔康组之间无统计学差异(P0.05)。免疫组化法显示结扎组Bax蛋白表达与各组比较均有非常显著差异(P0.01);各组bcl-2蛋白表达均无统计学差异(P0.05)。结论神经根慢性压迫性损伤可以引起相应脊髓节段前角运动神经元的凋亡,与损伤程度正相关;非选择性环氧化酶(COX)抑制剂吲哚美辛和选择性COX-2抑制剂美洛昔康均可抑制脊髓神经细胞的凋亡;但未明显改善大鼠的神经损伤症状。     

成人型脊髓性肌萎缩─附1例临床及病理报告

成人型脊髓性肌萎缩，是一组较少见、以下级运动神经元变性的疾病。发病年龄较晚，多在３０岁以后，为性连隐性遗传，主要表现为近端肌萎缩伴球麻痹。可见广泛的束震颤，无锥体束征及感觉障碍。病理上病变仅在脊髓前角及脑干运动神经核，故认为是不同于肌萎缩侧索硬化的一组独立的疾病。现将我院经尸检确诊的１例报告如下，并结合文献进行简单地讨论。     

Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响

目的：观察Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响。方法：将48只大鼠制备为压迫性脊髓损伤模型。分为单纯损伤组24只及实验组(应用zVAD-fmk)24只。损伤后8h、3及7d对脊髓损伤区进行HE、细胞凋亡的检测，免疫组化检测Caspase-3的表达变化。同时采用BBB评分和斜板试验观察脊髓神经功能恢复情况。结果：2组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Caspase-3表达。实验组凋亡的细胞数减少。免疫组化检测Caspase-3表达降低，神经功能增强。结论：Caspase阻滞剂zVAD-fmk能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。     

针刺对慢性脊髓损伤大鼠神经递质和营养因子表达的影响

目的 探讨针刺治疗慢性脊髓损伤的机理。方法 建立后路渐进性脊髓压迫大鼠模型,然后手术减压,进行电针治疗,观察联合行为评分(CBS)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的免疫组化检测结果。结果 初次术后90 d,电针组大鼠CBS评分优于减压组( P <0.05),ChAT免疫组化染色阳性细胞数多于减压组 ( P <0.05),神经元和胶质细胞增强的BDNF和TrkB表达得到恢复。结论 电针治疗可能通过影响 BDNF及其受体的表达,促进 ChAT表达和增强其活性而对大鼠慢性脊髓损伤起治疗作用。     

胰岛素样生长因子1对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经功能恢复的影响

目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对慢性压迫性脊髓损伤后神经功能恢复的影响。方法50只Wistar雌性大鼠,随机分为正常组、慢性重度(60%)压迫组、减压组、生理盐水(NS)组及IGF-1组。正常组不做任何处理,其余各组置入平头塑料螺钉对大鼠脊髓进行后路渐进性压迫,于2个月后达到60%左右重度压迫程度,然后减压组、NS组和IGF-1组彻底减压,NS组和IGF-1组分别于减压后1、3、5、7、9d在蛛网膜下腔给予NS和IGF-1(25μl),并于减压后2、4、6、8、10d后肢运动功能评分和检测运动诱发电位(MEP)。结果压迫组大鼠后肢运动功能障碍,MEP波幅(P1～N1峰峰值)降低、潜伏期延长;IGF-1组大鼠后肢运动功能及MEP波幅及潜伏期有明显的恢复(P<0.05),且于4～6d后显著优于单纯减压组和NS组(P<0.05)。结论IGF-1可明显促进慢性压迫性脊髓损伤后大鼠后肢运动功能及MEP波形的恢复。     

兔颈脊髓慢性受压后神经元计数及截面积的变化

背景机械压迫可造成神经细胞死亡,直接的机械性损伤和复杂的病理生理学机制都可导致轴突和神经元胞体的病变.目的观察兔颈脊髓慢性压迫后神经细胞超微结构变化、压迫程度与神经细胞损害的关系.设计以实验动物为研究对象,随机对照观察性研究.材料实验于2002-12/2003-08在广西中医学院附属瑞康医院中心实验室完成.雄性新西兰大白兔共48只,体质量(2.45±0.28)kg.分为空白组,轻、重度压迫组,每组16只.方法建立兔颈脊髓慢性受压轻、重度动物模型,空白组为伪手术.分别进行颈脊髓光镜、电镜观察、神经细胞凋亡检测(TUNEL法),计算神经元个数,神经元截面积. 主要观察指标主要结局各组光镜观察结果.次要结局①各组电镜观察结果.②神经细胞凋亡检测.结果兔颈脊髓慢性受压后出现神经元萎缩、脱失,神经元截面积减少,压迫后有神经元、神经细胞凋亡现象,空白组神经元形态正常,数量多,为(40±2)个,神经元截面积(41.24±15 61)μm2;轻度压迫组神经元(27±2)个,神经元截面积(20.82±6.57)μm2;重度压迫组神经元(22±2)个,神经元截面积(17.96±9.03)μm2.轻、重度压迫组与空白组比较差异有显著性意义(P＜0.01),轻、重度压迫组间比较差异无显著性意义(P＞0.05).慢性压迫后神经细胞超微结构发生胞核体积减少,核仁不清,粗面内质网减少.髓鞘板层结构松散,出现泡解现象,轴浆内细胞器减少或缺失等变化.结论脊髓慢性受压后神经细胞超微结构发生变化,压迫程度越重,神经细胞损害越重,脊髓慢性压迫存在细胞凋亡现象.     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤后bcl-2、bax基因表达的影响

目的:探讨嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后脊髓组织bcl-2、bax基因表达的影响。方法:64只SD大鼠随机分成生理盐水组(A组)和嗅鞘细胞移植组(B组);采用AllenWD法致伤力损伤T8脊髓,B组术后即刻给予嗅鞘细胞局部注射,A组局部注射等量生理盐水。采用RT-PCR和免疫组织化学染色(SABC方法)分别检测SCI后基因bcl-2、bax的mRNA水平和蛋白表达变化。结果:B组bcl-2mRNA和蛋白较A组在各时间点的表达均明显升高,P<0.01;B组baxmRNA较A组在各时间点的表达均明显降低,P<0.01。结论:嗅鞘细胞移植可以促进脊髓损伤后bcl-2基因表达和蛋白产物的增加,抑制bax基因的表达和蛋白产物的增加,这可能是嗅鞘细胞移植对脊髓损伤具有保护作用的机制之一。