AdTK治疗肺癌的实验研究

目的：构建含HSV—TK基因的重组腺病毒AdTK，在两种肺癌细胞和鼠肺癌模型中对AdTK／GCV系统进行抑瘤买验研究。方法：采用同源重组法构建AdTK，用MTT法测定AdTK／GCV系统对H460、PG49人肺癌细胞的生长抑制率，建立T739鼠肺癌模型，观察AdTK／GCV系统对瘤体大小及鼠存活期的影响。结果：成功构建AdTK，AdTK转染H460、PG49细胞后对细胞抑制率随AdTK、GCV及药物作用时间的增加而增高，有显著性差异，小鼠体内实验中观察到AdTK／GCV系统对鼠肺癌有明显生长抑制作用，且明显延长了小鼠的存活期。结论：本文建立的AdTK／GCV系统在体内外对肺癌细胞均有明显抑制作用，为AdTK用于基因治疗奠定了基础。     

叶酸修饰埃洛石纳米管负载姜黄素对乳腺癌细胞及移植瘤的放射增敏作用

目的:探究叶酸修饰埃洛石纳米管负载姜黄素（HNTs-PEG-FA/Cur）对乳腺癌MCF-7细胞及4T1荷瘤鼠的靶向放射增敏作用。方法:用化学改性和物理吸附的方法合成纳米放疗增敏药物HNTs-PEG-FA/Cur，采用透射电子显微镜、傅里叶红外光谱仪和X射线光电子能谱仪进行形貌和化学组分表征，MTT法检测不同浓度纳米药物对人乳腺癌MCF-7细胞活性的影响，流式细胞术、活/死细胞荧光染色和克隆形成实验评估HNTs-PEG-FA/Cur联合放疗对MCF-7细胞的促凋亡作用和放射增敏作用。最后，通过建立乳腺癌4T1细胞小鼠移植瘤模型，评估联合治疗对小鼠肿瘤体积生长的抑制效果。结果:成功将姜黄素负载于叶酸修饰的HNTs管腔内。所制备的HNTs-PEG-FA/Cur在等效姜黄素浓度为5 μmol/L时对MCF-7细胞无明显毒性，并能有效增强X射线诱导的细胞凋亡和杀伤作用（增敏比为1.25）。体内抑瘤实验结果显示HNTs-PEG-FA/Cur联合放疗对小鼠肿瘤生长抑制率（56.75%）>单独射线组（24.16%）>单独药物组（6.67%）。结论:HNTs-PEG-FA作为姜黄素的新型纳米药物载体，能有效提高姜黄素生物利用度并且对乳腺癌具有靶向放射增敏潜力。     

乳腺癌rAdCDES基因治疗的体内外实验研究

恶性肿瘤已成为一类严重威胁人类健康和生命的疾病.目前,将多种目的基因融合后行肿瘤基因治疗已为众多学者所关注.将胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和内皮抑素(ES)基因融合成重组腺病毒rAdCDES,并观察其在体内外对乳腺癌细胞生长抑制作用,以期为乳腺癌的基因治疗提供新的研究方向.     

SHP-2野生型基因可促进乳腺癌转移而其突变型基因可抑制转移

目的:探讨含2个Src同源区2的蛋白酪氨酸磷酸酶(Src homology 2 domain-containing tyrosine phosphatase,SHP-2)在乳腺癌MCF-7细胞体内外移动和转移中的作用.方法:首先构建重组质粒SHP-2-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因及SHP-2C＞S-GFP(SHP-2突变体),并分别转入乳腺癌MCF-7细胞中,建立2种细胞,即SHP-2-GFP-MCF-7和SHP-2C＞S-MCF-7.利用荧光显微镜技术观察细胞移动情况,动物实验观察不同细胞移植组裸小鼠的肿瘤生长情况,从而确定蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动、侵袭和转移中的作用.结果:SHP-2转染的乳腺癌MCF-7细胞的体外移动能力增强,且在注射此组细胞的裸鼠中有肿瘤生长;而转染了SHP-2C＞S-GFP的乳腺癌MCF-7细胞的移动能力明显减弱,且注射此组细胞的裸鼠未发现肿瘤生长.结论:SHP-2可促进乳腺癌MCF-7细胞在体外的移动及体内的侵袭和转移.     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

重组人p53腺病毒联合肿瘤坏死因子对乳腺癌Ca761细胞的抑制作用

目的:探讨重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)联合肿瘤坏死因子(TNF)对荷瘤小鼠体内外的乳腺癌细胞Ca761的抑制效果.方法:MTT法,流式细胞术检测细胞凋亡率,观察rAd/p53和TNF对乳腺癌细胞的体外抑制作用及促凋亡作用.建立乳腺癌Ca761细胞小鼠移植瘤模型,瘤内分别注射rAd/p53和TNF及两药联合,观察对肿瘤生长的影响,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查.结果:rAd/p53和TNF体内外均可显著抑制乳腺癌Ca761细胞的生长,可以促进乳腺癌细胞Ca761株的凋亡.两药联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用.结论:重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)治疗Ca761乳腺癌细胞移植瘤是有效的,TNF也可抑制其生长,rAd/p53和TNF联合应用有协同作用,为临床乳腺癌的综合治疗提供了依据.     

重组人p53腺病毒联合肿瘤坏死因子对乳腺癌Ca761细胞的抑制作用

目的：探讨重组人p53腺病毒注射液（rAd/p53）联合肿瘤坏死因子（TNF）对荷瘤小鼠体内外的乳腺癌细胞Ca761的抑制效果。方法：MTT法,流式细胞术检测细胞凋亡率,观察rAd/p53和TNF对乳腺癌细胞的体外抑制作用及促凋亡作用。建立乳腺癌Ca761细胞小鼠移植瘤模型,瘤内分别注射rAd/p53和TNF及两药联合,观察对肿瘤生长的影响,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查。结果：rAd/p53和TNF体内外均可显著抑制乳腺癌Ca761细胞的生长,可以促进乳腺癌细胞Ca761株的凋亡。两药联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用。结论：重组人p53腺病毒注射液（rAd/p53）治疗Ca761乳腺癌细胞移植瘤是有效的,TNF也可抑制其生长,rAd/p53和TNF联合应用有协同作用,为临床乳腺癌的综合治疗提供了依据。     

重组腺病毒抗小鼠移植瘤生长

目的:研究携带细胞因子基因hIL-2、hTNF-a的重组腺病毒对小鼠移植瘤生长抑制作用。方法:将分别携带有hIL-2基因、hTNF-a基因的重组腺病毒感染人肺腺癌Anip973细胞系,应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL-2、TNF-α的分泌量;通过肿瘤局部注射重组腺病毒的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:转基因的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。24h细胞培养上清IL-2的分泌量为50pg/2×105细胞,TNF-α的分泌量为20pg/2×105细胞。体内实验表明注射重组腺病毒后小鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.05),存活期显著延长。结论:瘤内注射重组腺病毒具有明显抗肿瘤作用。     

重组人IL-2抑制乳腺癌细胞增殖及其机制的研究

目的:观察重组人IL-2对体外培养乳腺癌细胞生长的影响,及对洛铂体外抑瘤效果的影响。方法:选择乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231作为实验对象。利用MTT实验检测重组人IL-2和对照药物洛铂对肿瘤细胞生长的抑制率,利用RT-PCR方法分析MCF-7细胞中Syk基因在不同处理因素作用下表达情况。结果:洛铂能明显抑制两种乳腺癌细胞体外生长,重组人IL-2对两种癌细胞有一定的抑制作用。重组人IL-2和洛铂同时处理时,对肿瘤细胞的抑制率比单独应用洛铂时明显升高,并且同时处理时MCF-7细胞中Syk mRNA表达水平比洛泊单独处理时高。结论:重组人IL-2能增强洛铂对乳腺癌细胞生长抑制效果。重组人IL-2单独作用乳腺癌细胞时也有一定的抑制效果,针对MCF-7细胞,重组人IL-2刺激信号传递可能有Syk参与。提示在体内时IL-2不仅对机体免疫细胞起重要的刺激激活作用,还可能对瘤细胞本身也有抑制作用。     

重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)治疗小鼠乳腺癌的实验研究

目的 探讨重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)不同用药方式对荷瘤小鼠乳腺癌的治疗效果.方法 细胞毒性实验,流式细胞术观察rAd/p53对乳腺癌细胞的体外抑制作用及促凋亡作用.建立乳腺癌小鼠模型,不同方式瘤内注射rAd/p53,观察对肿瘤的生长情况的影响,并对肿瘤组织进行免疫组化检查微血管密度(MVD).结果 rAd/p53体内外均可显著抑制乳腺癌细胞Ca761的生长,且早期连续瘤内给药效果好于隔天给药.结论 实验研究提示重组人p53腺病毒注射液治疗乳腺癌是有效的,早期连续用药疗效可能会更佳.     

多种肿瘤抑制基因在视网膜母细胞瘤中存在状态的研究

目的 深入研究视网膜母细胞瘤（ＲＢ）内多种肿瘤抑制基因的存在状态。方法 综合利用ＳＳＣＰ分析、ＤＮＡ序列测定以及多重ＰＣＲ等技术,检测分析ＲＢ肿瘤内Ｒｂ、ｐ５３,ｐ１６,ｐ１５及ｐ１２等肿瘤抑制基因是存在缺失与点突变。结果 约７４％的ＲＢ肿瘤有Ｒｂ基因点突变,１６％显示,ｐ１６基因缺失,但ｐ５３及ｐ２１基因除多态性外未检测到真正的点突变。结论 ＲＢ的发病和病变的进展主要是由于以Ｒｂ基因为核心的代谢     

亚硒酸钠抗氧化作用与抑瘤效应的实验观察

人ｐ１６基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因。ｐ１６蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。为了进一步探讨ｐ１６基因的抗肿瘤特性，我们通过运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体（ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６），并通过电穿孔方法将ｐ１６基因导入到人肺腺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０细胞中，经Ｃ４１８筛选获得可稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞，观察ｐ１６基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

Mechanisms by which eucaryotic genes evolve

Summary This paper reviews our current efforts to understand the evolutionary origin of the ovomucoid gene. Sequence analyses have suggested that introns were present in the primordial ovomucoid gene before birds and mammals diverged, about three hundred million years ago. Our work suggests that the present ovomucoid gene has evolved from a primordial ovomucoid gene by two separate intragenic duplications followed by the addition of a final segment which codes for a secretory signal sequence. The three domains of the secreted peptide and also the signal sequence, are constructed by an apparent assembly of exons which code for individual peptide segments. The exact position of introns within the ovomucoid gene has been defined and the results support the theory that introns separate gene segments that code for functional domains of proteins and provide insight into the manner by which eucaryotic genes were constructed during the process of evolution.     

含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析

克隆适于构建可调控基因打靶载体的小鼠糖皮质激素受体（ＧＲ）基因片段,为建立糖皮质激素受体基因缺陷型小鼠模型奠定基础。和ＰＣＲ扩增小鼠ＧＲ基因第二外显子上５６２ｂｐ的核酸片段作为探针,筛选小鼠基因组文库,共获得６个阳性克隆。对Ｃ１０克隆进行详细的测序和酶切图谱和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析事一６．５ｋｂ的基因片段。该片段含完整的ＧＲ基因第二外显子,基或分别有３．９ｋｂ和１．４ｋｂ的ＤＮＡ片段可作为下一步构     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达 ,须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明 ,阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题 ,对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

MTX耐药基因在骨髓干细胞中的高效表达

以脂质体为载体，把突变的抗ＭＴＸ的耐药基因转染到小鼠的造血干细胞中，用不同浓度的ＭＴＸ对细胞进行筛选。结果发现同一浓度下已转染基因组的细胞接种率大于未转染基因组的细胞接种率，未转染组对ＭＴＸ耐受性差，克隆形成率低。行卡方检验，同一浓度下的组间差异显著（Ｐ〈０．００１）。ＰＣＲ分析证实抗ＭＴＸ的耐药基因在造血干细胞中有效表达，该实验为进一步研究ＭＴＸ治疗的肿瘤患者减少骨髓毒性，提供了有参考价值的资料     

bcl-2、bax和mdrl基因表达与急性白血病的治疗及预后

目的 :研究探讨 bcl- 2基因、bax基因和 m drl基因表达与急性白血病的治疗及预后的关系。方法 :用链亲和素—胶体金原位杂交检测了 5 6例 AL 患者的 bcl- 2、bax和 mdrl基因表达。结果 :bcl- 2和 mdrl基因低表达及 bax基因高表达患者的完全缓解率 (CR)高 ,bcl- 2 /bax比值 <0 .6患者的 CR率更明显高于 >1.2者 (P<0 .0 0 1)。结论 :bcl- 2、m dr1及 bax基因表达是 AL 相对预后不良因素 ,bcl/bax比值更是决定 AL 预后好坏的关键指标。     

Stathmin 基因在非小细胞肺癌中的表达

目的：检测 Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：用免疫组织化学 SP 法检测135例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中 Stathmin 蛋白的表达,分析其与患者年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果：小细胞肺癌组织中 Stathmin 基因蛋白的表达水平明显高于癌旁肺组织（P ＜0．05）,Stathmin 的表达与淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论：Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达显著上调;Stathmin 基因的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、组织类型无关。