脱氧野尻霉素衍生物抗乙型肝炎病毒的体外试验研究

目的:观察脱氧野尻霉素(DNJ)衍生物N—苄基—1—脱氧野尻霉素(P-DNJ)与N—壬基—1—脱氧野尻霉素(NN-DNJ)的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法:以HBVDNA转染的人肝癌细胞株HepG22,2,15细胞为靶细胞,以不同浓度的试验药物培养细胞,在第6天、第10天时应用时间分辨免疫荧光分析法和荧光实时定量聚合酶链反应法检测培养基上清液中HBsAg、HBeAg和HBVDNA,同时应用MTT法检测药物对细胞的毒性。结果:P-DNJ、NN-DNJ在试验浓度(5~125μg.mL-1)内未见细胞毒性作用,在浓度为125μg.mL-1时能显著减少细胞培养基上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA的分泌。结论:P-DNJ、NN-DNJ在体外细胞培养试验中发现有抗HBV作用。     

叶下珠制剂抑制乙型肝炎病毒作用的实验研究

目的：观察四川叶下珠的抗乙型肝炎病毒（HBV）作用。方法：HepG2.2.15细胞培养36小时后,再用含不同浓度叶下珠的培养液培养48小时,测定培养上清液中的HBeAg含量。结果：四川叶下析可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBeAg的表达,其中100、150μg/ml两个浓度组的作用最强。结论：四川叶下珠具有一定的抗HBV作用。     

重组人干扰素α-1b联合拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效分析

目的 分析重组人干扰素α-1b和加用拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的疗效和安全性,分析不同因素对疗效的影响,探索慢性乙型肝炎患者联合抗病毒治疗方法的优点.方法 选择HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者111例,随机分为治疗组和对照组.治疗组62例给予重组人干扰素α-1b (50μg/次,隔日1次,肌肉注射)加拉米夫定(100mg/d,口服),疗程为6～12个月或12个月以上.对照组49例给予重组人干扰素α-1b单药治疗(方法同前).结果 ①治疗组12和18个月HBeAg血清学转换率分别为29.03％和38.71％;对照组12和18个月HBeAg血清学转换率分别为28.57％和36.73％,两组比较差异无统计学意义.②治疗组6、12、18个月的HBV DNA低于检测下限率分别为66.13％、83.87％和88.71％,对照组为8.16％、53.06％和57.14％;两组比较差异具有统计学意义.③性别、年龄对HBeAg血清学转换率无影响,治疗前HBV DNA＜6log10拷贝/ml者HBeAg血清转换率较高.④重组人干扰素α-1b组发热及血象异常发生率分别为32.26％和27.42％,对照组分别为36.73％和34.69％,两组差异无统计学意义.结论 重组人干扰素α-1b联合拉米夫定治疗HBeAg血清学转换率与单用重组人干扰素α-1b无明显差异,但HBV DNA低于检测下限率明显高于单用重组人干扰素α-1b组.拉米夫定的耐药率明显降低.     

中草药提取物体外抗乙型肝炎病毒活性的筛选

目的从31种中草药醇提物中筛选出具有抗HBV活性的药物。方法 60%乙醇回流提取药物醇提物;用四甲基偶氮唑盐比色法检测药物对细胞的毒性;采用酶联免疫法检测细胞培养上清液的HBsAg和HBeAg;用治疗指数判断药物的抗HBV作用。结果实验发现,槟榔、佛甲草、石榴皮、骆驼刺、溪黄草等5种中草药具有一定的抗HBV活性,半数有毒浓度分别为83.2、926.5、509.9、477.7和577.7μg/mL;最大无毒浓度时,5种药物对HBeAg的抑制率分别为52.9%、63.7%、78.1%、56.8%和66.3%,对HBeAg的半数抑制浓度为29.7、34.4、42.1、91.4和27.8μg/mL,治疗指数分别为2.8、26.9、12.1、5.2、20.8。结论槟榔、佛甲草、石榴皮、骆驼刺和溪黄草抗HBV效果较好,有进一步研究的价值。     

晶珠肝泰舒在2.2.15细胞内对HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的探讨晶珠肝泰舒胶囊的抗HBV作用.方法在乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2.2.15细胞中,研究晶珠肝泰舒对细胞的毒性和对HBsAg和HBeAg分泌的抑制效果.结果晶珠肝泰舒胶囊加入细胞培养8天,两批实验对细胞的半数中毒浓度平均为(3433.11±288)μg/ml,最大无毒浓度(TC0)平均为(1250±0)μg/ml.最大无毒浓度时抑制细胞分泌HBeAg率为(34.5±2.87)%,50%有效浓度为(2294.33±136.3)μg/ml,选择指数1.50±0.09.最大无毒浓度时抑制细胞分泌HBsAg率(31.1±3.1)%(P＜0.001),50%有效浓度为(2221.29±151.58)μg/ml,选择指数1.55±0.11.结论晶珠肝泰舒胶囊在2.2.15细胞培养中8天最大无毒浓度对HBeAg和HBsAg的分泌有抑制作用.     

核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的评价核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用。方法以HepG2．2．15细胞作为细胞模型,拉米夫定作为阳性对照药物。HepG2．2．15细胞于药物处理14d后,收集上清液及细胞。采用ELISA检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,HBV荧光定量检测上清液和细胞内HBV DNA水平,CCK-8试剂盒检测药物对细胞的毒性作用。结果核酸类似物PNA与拉米夫定在浓度1．6-1000μmol·L^-1内对HepG2．2．15细胞的毒性均较小。与药物未处理组比较,PNA和拉米夫定均可有效抑制细胞上清HBV DNA,半数抑制浓度（IC50）分别为0．05-0．10μmol·L^-1和0．09-0．18μmol·L^-1,两者之间差异无统计学意义。结论在体外细胞实验中,PNA对细胞的毒性小,与拉米夫定的安全指数相当;PNA对乙型肝炎病毒复制有较强的抑制作用,且具有一定时效量效关系,与拉米夫定的抑制强度相当。     

苦参素联合干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的观察苦参素与α-2b干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效;方法对53例慢性乙型肝炎患者随机分为联合用药组和单用干扰素组,用ELISA法检测HBeAg,用PCR法检测HBV-DNA,观察两组中HBeAg、HBV—DNA阴转情况;结果联合用药组比单用干扰素组在HBeAg、HBV—DNA阴转率高;结论苦参素联合α-2b干扰素对慢性乙型肝炎确有良好的治疗作用。     

鞘氨醇激酶1抑制剂和5-FU联合应用对体外胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察鞘氨醇激酶1(SphK1)抑制剂二甲基鞘氨醇(DMS)与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对体外胃癌细胞SGC7901增殖与凋亡的影响。方法体外培养人胃癌细胞株SGC7901,分别单用不同浓度5-FU(1、5、25μg/ml)或5-FU与DMS(1μmol/L)联合应用。MTT比色法检测各组细胞生长抑制率,光镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。通过SAS软件进行反应曲面分析,分析两药之间的关系。结果不同浓度的5-FU单用组及联用DMS组的抑制率差异有统计学意义(P<0.05),联用组抑制率均高于单用组,两者具有协同作用。单用DMS组及5-FU组的胃癌细胞凋亡率较空白对照组明显增高,联用组凋亡率较单用组明显增加(P<0.05)。结论 DMS可抑制SGC7901细胞的增殖;DMS和5-FU联用显示了较好的协同作用,提示抑制SphK1活性能够提高胃癌细胞对于化疗药物的敏感性。     

免疫调节药联合应用对慢性乙型肝炎病毒标志物阴转率的影响

目的 :观察干扰素α 1b(IFNα 1b)、胸腺因子D(TMD)。乙肝免疫球蛋白 (HBIG)等 3种免疫调节药联合应用与单用干扰素及常规护肝治疗对慢性乙型肝炎病毒 (HBV)标志物HBeAg及HBV DNA的阴转率。方法 :选择 10 8例HBV标志物HBeAg(+) ,HBV DNA(+)患者 ,随机分为 3组 :联合治疗组、单用干扰素组及护肝组 ,各 36例 ,疗程 6mo ,随访 6mo。结果 :6mo疗程结束时 ,联合治疗组和单用干扰素组对HBeAg及HBV DNA阴转率均无显著差异 (P >0 0 5 ) ,与护肝组比较差异均极显著 (P <0 0 1) ;疗程结束后 ,随访 6mo ,联合治疗组HBeAg及HBV DNA阴转率又有提高 ,而单用干扰素组则阴转率下降 ,2组比较 ,差异显著 (P <0 0 1) ,而护肝组无变化。结论 :经 6mo治疗结束时 ,联合治疗组对乙肝病毒标志物HBeAg及HBV DNA阴转率与单用干扰素组相似 ;但治疗结束后 6mo,优于单用干扰素组。     

亚硒酸钠对乙型肝炎病毒的体外抑制作用

目的探讨亚硒酸钠在体外对乙型肝炎病毒(HBV)蛋白合成、DNA复制的影响及机制。方法将不同浓度的亚硒酸钠作用于HepG2.2.15细胞系,通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和HBV DNA水平来评价HBV复制情况;免疫组织化学检测HepG2.2.15细胞p53蛋白的表达情况。结果亚硒酸钠对HBV复制具有抑制作用,随着亚硒酸钠浓度的升高,对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,但对HBsAg的抑制作用要小于HBeAg。细胞内HBV DNA复制水平也逐渐下降(P<0.01)。p53蛋白的分布也发生了改变。结论亚硒酸钠对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg和HBcAg表达、HBV DNA复制均有抑制作用,作用机制与其干扰p53蛋白的表达有关。     

A flavonoid from medicinal plants blocks hepatitis B virus-e antigen secretion in HBV-infected hepatocytes

A flavonoid molecule that showed a unique anti-HBV function was isolated from Phyllanthus urinaria. The molecular formula was determined as C14H6O8 based on FAM-MS analysis and the structure was determined by NMR. The identified flavonoid molecule, ellagic acid, showed unique anti-HBV functions. Ellagic acid did not inhibit either HBV polymerase activity, HBV replication or block HBsAg secretion. Rather, ellagic acid blocks effectively HBeAg secretion in HepG2 2.2.15 cells (IC50=0.07 microg/ml). Since HBeAg is involved in immune tolerance during HBV infection, ellagic acid, a newly identified functional anti-HBV compound, may be a new candidate therapeutic against immune tolerance in HBV-infected individuals.     

硫酸化魔芋葡甘低聚糖的抗乙肝病毒作用

目的体外观察硫酸化魔芋葡甘低聚糖(HOGS)抗乙肝病毒(HBV)的作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和ELISA法,研究HOGS对HepG2-2.2.15细胞细胞毒性作用及其分泌HBsAg、HBeAg的影响。采用荧光探针定量PCR检测HOGS对HepG2-2.2.15细胞HBV-DNA复制的影响。结果HOGS在0.125~1mg/mL浓度范围对HepG2-2.2.15细胞没有明显的细胞毒性作用,细胞的半数中毒浓度(TC50)为1.4753mg/mL;并且可明显抑制HepG2-2.2.15细胞HBsAg的分泌,其半数有效浓度(IC50)为0.0268mg/mL,治疗指数达5.52;对HBV-DNA也有一定的抑制作用。结论HOGS具有一定的体外抗HBV作用。     

Inhibition of hepatitis B virus polymerase-activity by various agents. Transient expression of hepatitis B virus DNA in hepatoma cells as novel system for evaluation of antiviral drugs

The effect of three putative antiviral drugs--aciclovir (acyclovir, CAS 59277-89-3), zidovudine (azidothymidine, CAS 30516-87-1) and sorangicin B (a macrocyclic lactone, CAS 100415-25-6)--on replication and gene expression of hepatitis B virus (HBV) was studied in HepG2 cells. Transfection of these cells with cloned circular HBV DNA resulted in the production and secretion of virions into the medium. When antiviral drugs were added in increasing concentrations (aciclovir at 0.5 microgram/ml to 150 micrograms/ml, zidovudine 0.1 microgram/ml to 30 micrograms/ml, sorangicin B 1 micrograms/ml to 30 micrograms/ml), the activity of the viral polymerase decreased in a dose-dependent manner. Production of viral proteins as measured by the secretion of HBsAg and HBeAg into the medium was unaffected, suggesting interference of these drugs with viral DNA/RNA synthesis. It is concluded that aciclovir, zidovudine and sorangicin B inhibit the replication of HBV. Furthermore, the cell system used in our study appears to be suitable for the rapid testing of antiviral drugs and their evaluation for possible studies in vivo.     

血根碱、白屈菜红碱衍生物的合成与体外抗HBV活性研究

目的合成季铵类苯并菲啶生物碱血根碱(1)和白屈菜红碱(2)的衍生物,评价其体外抗HBV活性,初步探讨抗HBV活性。方法以血根碱和白屈菜红碱为原料,通过结构修饰获得衍生物,采用Hep G2.2.15细胞模型评价衍生物对HBsAg和HBeAg分泌抑制活性和HBV DNA复制的抑制活性。结果血根碱和白屈菜红碱对HBsAg、HBeAg和HBV DNA复制具有较高的抑制活性,但细胞毒性较高。氧化白屈菜红碱(6)对HBV DNA的复制具有一定的抑制作用(IC50=0.75 mmol·L-1),细胞毒性较白屈菜红碱明显降低(CC50>3.0 mmol·L-1)。6-乙氧基二氢血根碱(7)和6-乙氧基二氢白屈菜红碱(8)对HBsAg和HBeAg和HBV DNA复制具有一定的抑制活性。结论季铵类苯并菲啶生物碱具有显著的体外抗HBV活性,烯胺正离子结构单元对化合物的抗HBV活性产生重要的影响。     

HBV-M量化指标HBV DNA及PreS_1抗原相关性分析及临床意义

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物定量与HBV DNA定量及乙型肝炎病毒表面抗原蛋白前S1(PreS1)的关系。结果用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)对乙型肝炎五项定量分析。用荧光定量(FQ)-聚合酶链反应(PCR)技术对HBV DNA定量分析。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定PreS1。结果HBVDNA拷贝数与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)值呈正相关(相关系数分别是r=0.272、P<0.05;r=0.0054,P<0.01),与乙型肝炎核心抗体(HBcAb)值呈负相关(r=-0.273,P<0.01);HBeAb(+)组的HBV DNA平均拷贝数明显高于HBeAb(+)组;PreS1在HBeAg(+)组阳性率高于抗HBe(+)组。结论HBeAg与HBV DNA有相关性,是病毒复制的指标,两者与PreS1具有伴随关系;HBsAg是HBV外膜的组成部分,它的高表达与HBV复制呈正相关。     

HBsAg和HBeAg动态COI值对HBV疗效监测的意义

目的探讨电化学发光免疫分析法检测HBsAg和HBeAg的COI值在疗效监测中的意义。方法分析139例患者HBsAg和HBeAg、HBeAg和HBV DNA、HBsAg和HBV DNA在疗程中的规律和相关性,并通过5例标本观察HD-HOOK效应对检测HBsAg和HBeAg的影响。结果①HBsAg和HBeAg的COI值呈负相关（相关系数为-0.26,P〈0.01）,两者的变化规律60.0%（45/75）为HBsAg COI值随着HBeAg COI值下降而上升;②HBeAg COI值与HBV DNA含量呈正相关（相关系数为0.33,P〈0.01）,两者的变化规律63.3%（62/98）为HBeAg COI值与HBV DNA含量变化一致;③HBsAg COI值与HBV DNA含量呈负相关（相关系数为-0.34,P〈0.01）,两者的变化规律52.4%（54/103）为HBsAg的COI值随着HBV DNA的含量的下降（包括HBV DNA阴性）而上升;④HD-HOOK效应对HBsAg检测有影响,对HBeAg检测没有影响。结论在反映血清中病毒被抑制的治疗效果时HBsAg COI值意义不大,HBeAg COI值较有价值。