Amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

背景与目的 Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion, IC50）]为（2.19±0.92）μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。     

氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53基因对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氧化铁磁性纳米颗粒介导野生型p53基因（wild type p53,wt-p53）对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染肺腺癌细胞A549/DDP作为实验组,以纳米颗粒介导空载体pcDNA3转染作为阴性对照组,脂质体介导wt-p53转染作阳性对照组。MTT法和绘制生长曲线观察基因转染对A549/DDP细胞增殖抑制作用,荧光显微镜、流式细胞术观察其对A549/DDP细胞诱导凋亡作用,RT-PCR检测其对A549/DDP细胞Bax mRNA表达的影响。结果：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP增殖有持续的抑制作用,而以脂质体介导wt-p53对增殖抑制作用持续时间短暂;纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP诱导凋亡作用明显强于以脂质体载体;同时介导wt-p53上调Bax mRNA表达水平的作用也明显强于以脂质体载体。结论：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染对人肺腺癌细胞A549/DDP有持续的增殖抑制和诱导凋亡的作用。     

siRNA干扰MT1H基因对A549/DDP细胞耐药性的逆转

目的：探讨siRNA干扰金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因逆转A549/DDP细胞耐药的可行性。方法：采用RT-PCR方法检测MT1H基因在A549和其顺铂耐药株A549/DDP细胞中的表达;将针对MT1H的siRNA导入A549/DDP细胞;用RT-PCR和斑点印迹方法分析MT1H基因表达情况;MTT法观察细胞顺铂耐药性;TUNEL、流式细胞术检测顺铂诱导细胞凋亡率;免疫细胞化学分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：MT1H在A549/DDP细胞中高表达但不在A549细胞中表达;A549/DDP细胞转染48 h后,与对照组比较,MT1HsiRNA转染组MT1H mRNA和蛋白表达均明显下调,细胞对DDP的药物敏感性明显提高,DDP诱导凋亡率明显增加,Bcl-2表达明显下降,Bax表达无变化。结论：MT1H基因沉默能降低Bcl-2表达,增强顺铂对A549/DDP细胞凋亡诱导作用,有效逆转A549/DDP细胞耐药。     

MicroRNA-181a提高A549/DDP细胞顺铂敏感性的研究

目的 观察miR-181a对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响,并探讨其机制.方法 采用miR-181amimic转染A549/DDP细胞,MTT法检测细胞增长率;荧光定量PCR检测A549/DDPmiR-181 a表达;免疫印迹法检测Bcl-2蛋白表达;AnnexinV/PI双标法检测细胞凋亡.结果 miR-181a提高A549/DDP细胞的顺铂敏感性,促进顺铂诱导的细胞凋亡,并且降低Bcl-2蛋白的表达.结论 miR-181a通过降低Bcl-2蛋白表达,促进顺铂诱导的细胞凋亡,从而提高A549/DDP细胞顺铂敏感性.     

miRNA-451逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制研究

目的:探讨microRNA-451(miR-451)逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其可能的作用机制.方法:应用实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测耐DDP细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-451的表达差异,同时检测A549/DDP细胞转染miR-451 mimic后miR-451表达的变化;分别应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP药物敏感度,细胞增殖能力,联合DDP处理后细胞凋亡变化;Western印迹法检测转染后A549/DDP细胞Akt、p-Akt( Ser473)、bcl-2和bax的表达变化.结果:miR-451在耐DDP细胞株A549/DDP中的表达量显著低于敏感细胞株A549 (P ＜0.05),A549/DDP细胞转染miR-451 mimic24h后,细胞中miR-451的表达水平较对照组明显提高(P＜0.05).在A549/DDP细胞中过表达miR-451可产生以下效应:相较于对照组,DDP对A549/DDP/miR-451细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P＜0.05),A549/DDP/miR-451细胞的增殖能力减弱,A549/DDP/miR-451经过DDP处理后细胞凋亡增多(P＜0.05).Western印迹法结果显示,与对照组比较,转染miR-451 mimic的A549/DDP细胞p-Akt ( Ser473)、bcl-2表达水平降低;bax表达水平升高.结论:miR-451可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调bax蛋白及下调p-Akt( Ser473)、bcl-2蛋白表达而逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性.     

康莱特注射液调控胆固醇代谢以抑制肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的：明确康莱特注射液（KLTi）通过调控胆固醇代谢对肺腺癌A549 细胞恶性生物学行为的抑制作用。方法：构建A549 细胞体外培养模型，设置空白对照组（CON组）、KLTi组、顺铂（DDP）组及KLTi+DDP 组，分别给予对应药物干预，采用CCK-8法检测不同分组的药物干预对A549 细胞增殖的影响，并确定IC50 值用于后续实验；使用细胞划痕实验、平板克隆形成实验、 Transwell 侵袭实验观察不同分组药物对A549 细胞恶性生物学行为的影响；流式细胞术检测不同分组药物对A549 细胞晚期凋亡水平的影响；WB法检测各组细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达，ELISA 法检测促炎因子释放水平。采用比色法检测细胞胆固醇含量水平的组间差异，借助WB法检测胆固醇代谢相关膜通道蛋白ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）及功能蛋白ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）、肽基脯氨酰异构酶B（PPIB）表达水平差异。结果：KLTi 及DDP对A549 细胞抑制作用具有时间及剂量依赖性（均P<0.05），最终选择2 mg/mL KLTi、3 μg/mL DDP作为干预剂量，按分组加药干预48 h后显示，KLTi 单用或联合DDP均可抑制A549 细胞克隆形成、迁移、侵袭能力且促进其晚期凋亡，KLTi+DDP 组的效果更加明显（P<0.05 或P<0.01）； KLTi 单用或联合DDP 可通过调控E-cadherin、vimentin、snail 蛋白表达从而影响A549 细胞EMT 进程（P<0.05 或P<0.01），同时下调IL-6 及IL-8的释放水平（P<0.05 或P<0.01）。KLTi 单用及联合DDP 均可以明显降低A549 细胞胆固醇含量（P<0.05 或P<0.01），并且对ABCA1、ACLY、PPIB 表达具有调控作用，联合组的效果更加明显（P<0.05 或P<0.01）。结论：KLTi 可能通过调控胆固醇代谢水平及相关通道蛋白抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为及EMT进程。     

苦瓜蛋白诱导A549肺癌细胞凋亡及对相关蛋白的影响

[目的]观察苦瓜蛋白对A549非小细胞肺癌细胞凋亡的影响,探讨苦瓜蛋白对PI3K/AKT细胞信号传导通路中相关蛋白分子的作用影响。[方法]以梯度浓度苦瓜蛋白处理A549细胞48h,流式细胞术(TUNEL方法)检测A549细胞凋亡;10μg/ml苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间(0h、6h、12h、24h、48h、72h)后,提取细胞总蛋白,Westernblot检测AKT信号通路中AKT及p-AKT等信号分子表达的变化。[结果]苦瓜蛋白可以明显诱导A549细胞凋亡,以10μg/ml苦瓜蛋白处理组A549细胞凋亡率最高(50.15%)。苦瓜蛋白处理A549细胞12h后,p-AKT及AKT表达明显下调,呈现时间—效应依赖关系。[结论]苦瓜蛋白可以诱导A549细胞发生显著凋亡,其机制可能是部分通过抑制AKT蛋白的表达及其磷酸化,抑制AKT信号传导通路,导致肿瘤细胞凋亡。     

咖啡酸联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究咖啡酸(caffeic acid)与化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子作用机制。方法:体外培养A549细胞,采用MTT法检测咖啡酸与DDP单药或联合用药对A549细胞增殖抑制率的影响;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学的变化,FCM检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及caspase-3表达水平的改变。结果:咖啡酸或DDP单药或联合用药均对A549细胞有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,且两药联合应用具有协同作用。蛋白质印迹法检测结果表明,咖啡酸与DDP联合用药可协同抑制Bcl-2蛋白的表达,增强Bax的表达,活化caspase-3蛋白的表达。结论:咖啡酸联合DDP作用于肺腺癌A549细胞可以抑制其增殖并诱导细胞凋亡,两者联合应用有一定的协同效应。     

三氧化二砷对A549细胞增殖抑制作用及其机制

[目的]探讨三氧化二砷对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其作用机制.[方法]以不同浓度三氧化二砷作用于体外培养的A549细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.[结果]三氧化二砷可显著降低A549细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;在Hoechst染色图片上可见细胞染色质浓缩及细胞核碎裂等典型的凋亡改变.[结论]三氧化二砷能抑制A549细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

环氧化酶-2抑制剂联合顺铂治疗肺癌的实验研究

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼米舒利(NIM)与化疗药顺铂(DDP)联合应用治疗肺癌的效应及可能机制。方法 应用MTT试验及流式细胞术分别检测NIM与DDP联用对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响，裸鼠移植瘤实验检测NIM与DDP联用对A549细胞成瘤性的影响。结果 在一定浓度范围内NIM、DDP均可抑制A549细胞的生长，其抑制作用呈量一效关系。NIM(25umol／L)与DDP合用可增强对A549细胞生长的抑制作用，DDP浓度≥1mg／L时二者有协同或相加作用。NIM及DDP可有效诱导A549细胞凋亡，联用后凋亡率显著增加。裸鼠移植瘤体内实验显示NIM与DDP均可抑制移植瘤生长，联用后抑瘤率显著增高。结论 NIM与DDP联用对A549细胞、肺癌移植瘤有显著的协同抗肿瘤效应，该作用可能是通讨增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡来实现的。     

miRNA-192对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨抑制microRNA-192（miR-192）在非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂（DDP）耐药性方面的影响及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人肺腺癌耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549细胞中miR-192的表达水平,A549／DDP细胞转染miR-192抑制剂（inhibitor）和miR-阴性对照（NC）48h后采用qRT-PCR检测转染效率,分别采用MTT法、克隆形成实验及流式细胞术检测转染48h后A549／DDP细胞对DDP的药物敏感性、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,Western blotting检测转染48h后细胞中Bax和Bcl-2的表达变化。结果 miR-192在A549／DDP细胞中的表达水平高于A549细胞（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor 48h后的A549／DDP细胞miR-192水平低于转染miR-NC者（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor后,A549／DDP细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多、DDP对其半数抑制浓度降低、Bax蛋白水平升高和Bcl-2蛋白水平下降,与转染miR-NC者比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 抑制miR-192能够降低A549／DDP细胞对DDP的耐药性,其作用机制可能是通过增加细胞凋亡以及下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达来实现的。     

miRNA-451逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制研究’

目的：探讨microRNA-451（miR-451）逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其可能的作用机制。方法：应用实时荧光定量PCR法（real～timefluorescentquantitativePCR,qRT—PCR）检测耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549中miR-451的表达差异,同时检测A549／DDP细胞转染miR-451mimic后miR-451表达的变化;分别应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549／DDP细胞对DDP药物敏感度,细胞增殖能力,联合DDP处理后细胞凋亡变化;Western印迹法检测转染后A549／DDP细胞Akt、P—Akt（Ser473）、bcl-2和bax的表达变化。结果：miR-451在耐DDP细胞株A549／DDP中的表达量显著低于敏感细胞株A549（P〈0．05）,A549／DDP细胞转染miR-451mimic24h后,细胞中miR-451的表达水平较对照组明显提高（P〈0．05）。在A549／DDP细胞中过表达miR-451可产生以下效应：相较于对照组,DDP对A549／DDP／miR-451细胞的半数抑制浓度（half inhibitioncon centration,IC50）减低（P〈0．05）,A549／DDP／miR-451细胞的增殖能力减弱,A549／DDP／miR-451经过DDP处理后细胞凋亡增多（P〈0．05）。Western印迹法结果显示,与对照组比较,转染miR-451mimic的A549／DDP细胞P—Akt（Ser473）、bcl-2表达水平降低;bax表达水平升高。结论：miR-451可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调bax蛋白及下调P—Akt（Ser473）、bcl-2蛋白表达而逆转A549／DDP细胞对DDP的耐药性。     

华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路调控肺癌细胞的增殖、凋亡及血管生成

目的:探讨华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路对肺癌细胞增殖、凋亡及血管生成的影响。方法:选取肺癌细胞株A549、H460为研究对象,以不同浓度华蟾素（0、25、50、75、100、125、150 μg/mL）作用细胞株,采用MTT检测细胞活力。随后,设置组别为空白组、华蟾素组（100 μg/mL华蟾素）、华蟾素+inhibitor NC组、华蟾素+miR-497-5p inhibitor组,通过MTT检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中VEGF、VEGFA蛋白表达;RT-qPCR检测细胞中miR-497-5p表达;并采用荧光素酶报告实验确定miR-497-5p靶向VEGFA。结果:随着华蟾素浓度的升高,A549、H460细胞增殖活力明显下降（P＜0.01）;与空白组相比,华蟾素组A549、H460细胞克隆形成能力明显降低、细胞凋亡明显增加、VEGF和VEGFA蛋白表达明显降低、miR-497-5p mRNA表达明显升高（P＜0.01）;荧光素酶报告实验显示miR-497-5p靶向VEGFA;与华蟾素+inhibitor NC组相比,华蟾素+miR-497-5p inhibitor组A549、H460细胞中miR-497-5p mRNA表达明显降低、VEGF和VEGFA蛋白表达明显升高、细胞克隆形成能力明显增加、细胞凋亡明显被抑制、细胞增殖活力明显增加（P＜0.05）。结论:华蟾素可能通过调控miR-497-5p/VEGFA通路从而抑制肺癌细胞增殖和血管生成,并诱导细胞凋亡。     

丙戊酸对耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡作用的实验研究

目的:探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)抑制肺癌耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的作用.方法:0-4mmol/L丙戊酸作用于A549/DDP细胞48h,观察细胞数量和形态的变化,MTT法分析细胞生长抑制,流式细胞仪测定细胞周期动力学变化,细胞免疫组化测定Caspase-3.结果:VPA干预后细胞数量明显减少,形态不规则,细胞核固缩,胞质减少;与对照组比较,VPA可造成A549/DDP细胞生长抑制,且随着VPA浓度的增加,抑制率增加;G1期比例明显升高,S期明显降低;与对照组比较,各实验组细胞胞质中Caspase-3表达明显增加,Caspase-3表达与VPA的浓度成正相关.结论:VPA可明显抑制A549/DDP的生长,诱导凋亡和G1期阻滞作用,在肺癌耐药方面具有重要理论价值和实践意义.     

赤星衣酸乙酯对A549及HepG2细胞抗癌作用及机制差异研究

目的:探讨赤星衣酸乙酯对A549细胞和HepG2细胞体外抗癌效果和作用机制的差异。方法:采用体外细胞培养实验,以MTT法检测赤星衣酸乙酯对A549细胞和HepG2细胞增殖的作用;应用流式细胞术,通过Annexin V/PI双染法检测赤星衣酸乙酯对细胞凋亡的影响,PI染色法检测赤星衣酸乙酯对细胞周期分布的影响;通过平板克隆形成实验观察赤星衣酸乙酯对克隆形成的影响;采用划痕实验观察赤星衣酸乙酯对细胞迁移的影响;应用mRNA转录组测序初步探讨赤星衣酸乙酯抗癌机制,采用RT-qPCR实验对测序结果进行验证。结果:赤星衣酸乙酯对A549细胞和HepG2细胞的增殖有抑制作用,并存在剂量、时间-效应关系;赤星衣酸乙酯可以抑制癌细胞克隆形成,促进癌细胞凋亡,抑制癌细胞迁移,并将大部分癌细胞阻滞于G0/G1期;通过调节BRCA2、IL-7R、F2发挥抗肺癌作用,通过调节STAT1、PAX8、PTGS2、LAMA1发挥抗肝癌作用。结论:赤星衣酸乙酯在A549细胞和HepG2细胞中可能通过调节不同基因导致两株细胞敏感性差异的存在。     

丙戊酸对耐药细胞株A549／DDP增殖和凋亡作用的实验研究

目的：探讨丙戊酸（valproicacid,VPA）抑制肺癌耐药细胞株A549／DDP增殖和凋亡的作用。方法：0—4mmol／L丙戊酸作用于A549／DDP细胞48h,观察细胞数量和形态的变化,MTT法分析细胞生长抑制,流式细胞仪测定细胞周期动力学变化,细胞免疫组化测定Caspase-3。结果：VPA干预后细胞数量明显减少,形态不规则,细胞核固缩,胞质减少;与对照组比较,VPA可造成A549／DDP细胞生长抑制,且随着VPA浓度的增加,抑制率增加;G1期比例明显升高,S期明显降低;与对照组比较,各实验组细胞胞质中Caspase-3表达明显增加,Caspase-3表达与VPA的浓度成正相关。结论：VPA可明显抑制A549／DDP的生长,诱导凋亡和G1期阻滞作用,在肺癌耐药方面具有重要理论价值和实践意义。     

siRNA沉默K-Cl协同转运子1基因的表达对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响

目的:探讨降低K-Cl协同转运子1(KCC1)基因在肺腺癌A549细胞中的表达及对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响.方法:设计并合成KCC1特异性siRNA,转染A549细胞;RT-PCR检测RNA干扰后KCC1基因的表达改变;应用DDP处理后,MTT法测定细胞毒性指数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:siRNA-KCC1能够抑制KCC1基因在A549细胞中的表达;而KCC1表达降低后,A549细胞的凋亡明显升高(P＜0.05),增殖能力明显下.降(P＜0.05).结论:KCC1基因表达降低能够抑制A549细胞的增殖并促进细胞凋亡,并能够在一定程度上增强A549细胞对化疗药物DDP的敏感性.     

siRNA沉默K-C1协同转运子1基因的表达对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响

%0 Journal Article %A 徐然;赵俊刚;石文君; 目的：探讨降低K-Cl协同转运子1（KCC1）基因在肺腺癌A549细胞中的表达及对化疗药物顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：设计并合成KCC1特异性siRNA,转染A549细胞;RT-PCR检测RNA干扰后KCC1基因的表达改变;应用DDP处理后,MTT法测定细胞毒性指数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：siRNA-KCC1能够抑制KCC1基因在A549细胞中的表达;而KCC1表达降低后,A549细胞的凋亡明显升高（P〈0.05）,增殖能力明显下降（P〈0.05）。结论：KCC1基因表达降低能够抑制A549细胞的增殖并促进细胞凋亡,并能够在一定程度上增强A549细胞对化疗药物DDP的敏感性。