急性白血病患儿血浆基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4表达的临床意义

目的探讨儿童急性白血病(AL)血浆基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的水平和骨髓细胞表面CXCR4的表达及其临床意义。方法收集50例AL患儿、20例健康儿童和10例非恶性血液病患儿(对照组)。采用ELISA法分别检测AL患儿初诊时、缓解6个月、复发时和对照组儿童外周血浆SDF-1水平。用流式细胞仪检测50例AL患儿初诊时和10例非恶性血液病患儿骨髓细胞表面CXCR4的表达。结果1.AL初诊组和缓解组血浆SDF-1水平明显高于对照组(Pa<0.01),且初诊组高于缓解组(P<0.01);急性淋巴细胞白血病(ALL)组血浆SDF-1水平高于急性髓细胞白血病(AML)组(P<0.01);SDF-1水平在ALL和AML各亚型之间差异无统计学意义;复发的4例患儿,其血浆SDF-1水平在初诊时和复发时均高于缓解时(Pa<0.05);髓外浸润组SDF-1水平与非髓外浸润组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.AL患儿骨髓细胞表面CXCR4的相对荧光强度明显高于对照组(P<0.01);ALL组高于AML组(P<0.01);CXCR4在ALL的L1组与L2组的表达,无统计学差异,但T-ALL组高于B-ALL组(P<0.05...     

同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的：研究同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病（AL）患儿骨髓单个核细胞中的表达,并探讨其临床意义。方法：采用RT-PCR方法检测46例不同时期AL患儿HOXA9 mRNA的表达水平,以15例特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿作为对照。结果：46例AL患儿（52份骨髓标本）HOXA9基因阳性表达率为63%,其中急性髓细胞白血病(AML)组阳性表达率（86%）明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）组（35%）及对照组（13%）（P<0.05）; AML组HOXA9 mRNA表达水平明显高于ALL组及对照组（P<0.05）。HOXA9在各型儿童AML中表达不同,mRNA相对表达水平依次为：M5型＞M4型＞M1和（或）M2型,而在M3型中未检测到表达。HOXA9在AML患儿高危组中的阳性表达水平较高。AML患儿初治组HOXA9基因阳性表达率及mRNA水平明显高于缓解组和对照组（P<0.05）,而缓解组与对照组比较差异无统计学意义;未缓解组HOXA9基因表达显著高于缓解组和对照组（P<0.05）。结论：HOXA9基因高表达与AL的发生相关;AML患儿HOXA9基因表达水平明显高于ALL患儿。HOXA9基因高表达者与白血病危险程度有关,且提示预后不良。因此,HOXA9基因有望成为儿童AL诊断、治疗及判断预后的一个靶点。     

急性白血病患儿Notch1蛋白表达及其临床意义研究

目的探讨儿童急性白血病(AL)骨髓细胞中Notch1蛋白表达及其与免疫分型、治疗效果的关系。方法收集2007年1月至2009年1月华中科技大学同济医学院附属同济医院初诊49例AL患儿和20例非恶性血液病患儿骨髓涂片,采用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测骨髓细胞中Notch1蛋白表达情况;流式细胞仪确定白血病细胞免疫分型;标准化疗方案用于AL患儿的治疗。结果 Notch1在T淋巴细胞性白血病(T-ALL)患儿阳性表达率为77.8%,显著高于B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿(31.0%,P0.05)及对照组骨髓组织(15.0%,P0.05)。急性非淋巴细胞白血病(ANLL)Notch1蛋白阳性表达率为63.6%,显著高于对照组(15.0%,P0.05)。在T-ALL和ANLL中,Notch1与治疗效果无明显相关性;但在随访半年以上的B-ALL中,治疗效果好组(完全缓解无复发)Notch1阳性表达率为21.4%,效果差组(死亡或复发)Notch1阳性表达率为80.0%,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 Notch1在儿童AL中的异常表达与免疫分型关系密切。Notch1蛋白在B-ALL中虽然表达率不高,但可能是预后不良的因素。     

急性白血病患儿骨髓细胞血管内皮生长因子及其受体表达

目的探讨儿童急性白血病（AL）骨髓细胞血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（Flt,KDR）表达差异,分析其与儿童AL临床特征关系及化疗前后变化。方法采用S-P免疫组织化学方法检测53例AL患儿治疗前后及对照组骨髓VEGF/Flt-1,KDR表达情况,其中急性淋巴细胞白血病（ALL）33例,急性髓系白血病（AML）20例;对照组21例为骨髓像正常非恶性血液病患儿,抽取骨髓肝素抗凝,应用梯度离心法分离单个核细胞。结果VEGF、Flt-1、KDR在AL患儿骨髓中表达水平高于对照组,AML组表达高于ALL组。化疗后完全缓解（CR）40例患儿,其VEGF、Flt-1、KDR的表达在化疗后较化疗前显著性降低;化疗后未获得CR患儿的表达在化疗前后无显著性。AL患儿VEGF的表达与骨髓中幼稚细胞百分比、外周血幼稚细胞百分比呈正相关。骨髓VEGF、Flt-1、KDR表达水平在不同年龄、性别、有无髓外浸润无差异。高表达VEGF组缓解率低于低表达组。结论VEGF、Flt-1、KDR在儿童AL中高表达,提示可能与儿童AL的发生过程、发展、疾病预后有关。     

儿童急性白血病survivin、cyclin D1基因的表达

目的探讨基因survivin、cyclin D1的表达与儿童急性白血病（AL）的关系。方法采用RT-PCR方法对42例初发或复发AL患儿和13例完全缓解AL（AL-CR）患儿及15例非恶性疾病患儿骨髓单个核细胞进行基因survivin、cyclinD1表达的检测。结果①AL组survivin、cyclinD1mRNA的阳性率分别为78.6%和42.9%,高于AL-CR组和对照组（P〈0.01）;完全缓解组和对照组差异无统计学意义（P〈0.05）;急性淋巴细胞白血病（ALL）组和急性非淋巴细胞白血病（ANLL）组之间表达差异无统计学意义。AL复发组cyclin D1 mRNA阳性率明显高于初发组。②儿童AL初发者survivin与cyclin D1的阳性表达差异无统计学意义。③cyclin D1 mRNA阳性者缓解率低。结论儿童AL中存在survivin、cyclin D1异常表达,两者阳性表达差异无统计学意义;cyclin D1高表达者可降低AL的化疗敏感性,cyclin D1对AL有判断疗效和预后的价值。     

儿童急性淋巴细胞白血病nm23-H1基因表达及其与免疫分型的关系

目的：探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL) nm23-H1基因的表达水平及其与免疫分型的关系。方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测儿童ALL初治、缓解、难治、复发患儿及正常对照儿童nm23-H1基因的表达水平,观察nm23-H1基因与免疫表型的关系。结果：①初治患儿nm23-H1表达水平明显高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）;完全缓解组nm23-H1表达水平与对照组差异无显著性（P>0.05）,复发组nm23-H1表达水平高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）,与初治差异无显著性(P>0.05);难治组均为高表达。 ②T-ALL的nm23-H1阳性率高于B-ALL(P<0.05),且T-ALL的nm23 H1表达水平高于B-ALL（P<0.05）。结论： nm23-H1的表达水平随儿童ALL的病情发展而变化,在初治、复发及难治ALL具有高表达,nm23-H1高表达者预后差,易复发;nm23-H1在T-ALL具有高表达,可能是T-ALL的缓解率低、预后差的原因之一。［中国当代儿科杂志,2009,11-11）：881-884］     

nm-23H1基因在儿童白血病细胞表达的研究

目的探讨nm23H1基因在儿童急性白血病(AcuteLeakemia,AL)细胞中的表达及临床意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应,RTPCR检测67例次AL儿童患者,ALL31例,AML14例,AL(CR)18例,复发4例及10例ITP患儿骨髓细胞nm23H1表达,将nm23H1/GAPDH≥0.5定为(+)。结果儿童ALL、AML中nm23H1基因表达显著高于正常对照组(P<0.001),AML中M4+M5组的nm23H1表达程度较M2+M3组高(P<0.05)。经化疗在CR后儿童AL患者表达显著低于初诊患儿,复发病人再度升高且阳性表达程度高的易复发。nm23H1基因表达程度与外周血白细胞计数及乳酸脱氢酶值呈正相关(r=0.472P<0.01;r=0.403P<0.05)。CD7+患者nm23H1表达高CD7患者(P<0.05)而与HLADR,CD34阳性或阴性表达无显著性。结论nm23H1可能在儿童AL中发挥一定作用,尤其在粒单或单核细胞性白血病中更具重要作用,还与儿童AL的病情活动有关,与白血病细胞处的分化阶段无明显关系。nm23H1基因的表达是儿童AL重要的预后因素。     

CXCR4在急性白血病细胞中的表达及其意义

目的分析急性白血病(AL)小儿骨髓细胞趋化因子受体CXCR4表达及其与髓外浸润的关系。方法采用流式细胞仪对55例AL进行免疫分型;应用流式细胞仪检测55例小儿急性白血病骨髓细胞CXCR4表达;采用统计学方法分析AL患儿骨髓细胞CXCR4表达与髓外浸润的相关性。结果AL患儿骨髓细胞CXCR4在ALL组表达阳性率明显高于NALL组(P<0.01),my B-ALL组CXCR4表达阳性率较B-ALL组阳性率明显降低(P<0.05);ALL、NALL、B-ALL、my B-ALL组血白细胞计数均数比较无显著差异性(F=0.301 P=0.776),骨髓白血病细胞CXCR4表达的阳性率与外周血白血病细胞数呈正相关(r=0.713 P=0.001)。髓外浸润组白血病细胞CXCR4表达的阳性率为(76.34±11.14)%,非髓外浸润组CXCR4表达的阳性率为(42.65±8.62)%,两组比较有显著差异性(t=2.703 P=0.001)。结论AL小儿骨髓细胞CXCR4的表达与白血病细胞的迁移、浸润密切相关。     

锌指蛋白ZFX在儿童B系急性淋巴细胞性白血病中的表达及意义

目的：研究儿童B系急性淋巴细胞性白血病（B-ALL）患者骨髓单个核细胞中X染色体耦联锌指蛋白（ZFX）的表达及其与白血病预后的关系。方法：通过Western blot方法检测白血病细胞株（REH、HL-60、NB4、K562）中ZFX蛋白的表达;利用PCR方法扩增获得全长ZFX,并测序验证;通过实时定量PCR检测82例初发B-ALL儿童骨髓样本,24例B-ALL缓解期样本,以及64例骨折或先天性心脏病手术患儿样本(对照组)ZFX的表达;并根据治疗3年内有无骨髓或中枢神经系统复发分为预后好组和预后差组,比较两组患儿初发时骨髓中ZFX mRNA的表达水平。结果：ZFX蛋白在白血病细胞株REH、HL-60、NB4和K562中均有表达。初发ALL组骨髓中ZFX mRNA表达高于对照组（P＜0.01）;ALL缓解组ZFX mRNA表达明显低于ALL初发组（P<0.01）;预后差的ALL患儿初发骨髓中ZFX mRNA的表达高于预后好的患儿（P＜0.05）。结论ZFX在儿童B-ALL中高表达,且预后差组表达相对较高,提示它可能在B-ALL预后判断中有重要意义。     

儿童急性淋巴细胞白血病nm23-H_1基因表达及其与免疫分型的关系

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)nm23-H1基因的表达水平及其与免疫分型的关系。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测儿童ALL初治、缓解、难治、复发患儿及正常对照儿童nm23-H1基因的表达水平,观察nm23-H1基因与免疫表型的关系。结果①初治患儿nm23-H1表达水平明显高于正常对照组(P<0.01)和完全缓解组(P<0.01);完全缓解组nm23-H1表达水平与对照组差异无显著性(P>0.05),复发组nm23-H1表达水平高于正常对照组(P<0.01)和完全缓解组(P<0.01),与初治差异无显著性(P>0.05);难治组均为高表达。②T-ALL的nm23-H1阳性率高于B-ALL(P<0.05),且T-ALL的nm23-H1表达水平高于B-ALL(P<0.05)。结论nm23-H1的表达水平随儿童ALL的病情发展而变化,在初治、复发及难治ALL具有高表达,nm23-H1高表达者预后差,易复发;nm23-H1在T-ALL具有高表达,可能是T-ALL的缓解率低、预后差的原因之一。     

���԰�Ѫ������Notch1���ױ�Ｐ���ٴ������о�

??Abstract??Objective??To investigate the expression of Notch1 protein in the children with acute leukemia ??AL?? and to explore the relationship of Notch1 expression with immunophenotype and therapeutic effect. Methods??The Notch1 protein of bone marrow smears was examined by immunohistochemical assay in 49 newly diagnosed children with acute leukemia and 20 control cases without malignant hematologic disease. Immunophenotype of leukemic cells was performed by flow cytometry. The standard chemotherapy regimens were taken to treat the patients. Results??The expression rate of Notch1 protein in T-cell acute lymphoblastic leukemia ??T-ALL?? ??77.8%?? was much higher than that of B-cell acute lymphoblastic leukemia ??B-ALL?? ??31.0%?? P < 0.05?? as well as the control group ????15.0%?? P < 0.05??. Notch1 protein expression in acute non-lymphoblastic leukemia ??ANLL?? ??63.6%?? was significantly higher than that in the control group ??15.0%?? P < 0.05??. Additionally?? in T-ALL and ANLL groups?? there was no correlation between the expression of Notch1 protein and treatment effect. However?? in B-ALL patients with more than 6 months of follow-up?? Notch1 expression rates in the favorable group??complete remission without relapse?? and the unfavorable group ??death or relapse?? were 21.4%and 80.0% respectively ??P < 0.05??. Conclusion??Notch1 expression in childhood leukemia is immunophenotype-specific. Though the expression of Notch1 protein in B-ALL is not high?? it may be a poor prognosis factor.     

T系和B系急性淋巴细胞白血病ID4甲基化状态分析

目的探讨DNA结合抑制因子4（ID4）基因甲基化与T系、B系及T/B双表达儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MS-PCR）对18例初发ALL患儿进行ID4基因启动子区甲基化状况分析。18例ALL患儿中T系（T-ALL）2例,B系（B-ALL）13例,T/B双表达（T/B-ALL）3例。以34 例同期住院的非肿瘤性疾病患儿为对照组。结果ID4基因启动子区在初发ALL患儿中的完全甲基化率（15/18,83%）显著高于部分甲基化率（3/18,17％）,P＜0.05。T-ALL、B-ALL和T/B-ALL患儿的完全甲基化率分别为50%,85%,100%,显著高于对照组（18%;P0.05）。结论 ID4基因的甲基化可能与儿童ALL发病有关,T-ALL、B-ALL及T/B-ALL之间的ID4甲基化状态一致。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：940-942］     

白细胞介素-8及其受体在小儿急性白血病骨髓单个核细胞中的表达和临床意义

目的：探讨白细胞介素8(IL8)及受体(IL8R)在小儿急性白血病骨髓单个核细胞中的表达和临床意义。方法：RTPCR法检测32例急性白血病骨髓单个核细胞IL8,IL8RmRNA表达。结果：急性髓系白血病(AML)组中有5例表达IL8(5/10),4例表达IL8R(4/10);急性淋巴细胞白血病(ALL)组中有13例表达IL8(13/22),9例表达IL8R(9/22)。IL8在急性髓系白血病组中的表达水平高于急性淋巴细胞白血病组,差异有显著性(P<0.05)。AML组中M4M5亚型中的表达水平高于M2M3,差异有显著性(P<0.05)。ALL组中B系列ALL表达水平高于TALL,差异有显著性(P<0.05)。化疗后患儿骨髓单个核细胞IL8,IL8R水平显著低于化疗前(P<0.05)。结论：小儿急性白血病有IL8,IL8R的表达,IL8尤其在AML组M4M5亚型及B系列ALL更明显,化疗后两者水平显著下降。     

Immunologic profile and outcome of childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL) in Morocco

Immunophenotyping in leukemia offers a precise delineation of the hematopoietic lineage and differentiation stage of the malignant cell. In this study, we used flow cytometry to determine the frequency of the immunologic types of acute lymphoblastic leukemia (ALL) in Moroccan children. We analyzed 100 samples from ALL patients within an age ranging from 6 months to 16 years presented over a 4-year period (1996 to 2000). Immunophenotyping allowed classification into 2 major categories: T-ALL (37%) and B-ALL (63%), with a higher percentage of males (69%). Comparison of the clinical characteristics showed that the frequency of splenomegaly was similar in B-ALL and T-ALL patients (53% and 47%, respectively). Hepatomegaly and mediastinal masses were more often associated with T-ALL (62% and 71%, respectively). Splenomegaly, hepatomegaly, and mediastinal masses were more frequent in immature than mature B-ALL, whereas the reverse was observed for T-ALL. Complete remission was obtained in 88% and 84% of B-ALL and T-ALL, respectively and relapse after 1 year occurred in 30% and 37% of cases, respectively. CD10 expressing B-ALL showed a slightly higher complete remission rate, whereas the reverse was observed for CD10 expressing T-ALL. The overall 5-year survival rate of ALL was 38%, whereas patients with B-ALL showed better survival than children with T-ALL.     

160例儿童急性白血病免疫表型分析

目的　免疫表型可以确定细胞的来源和分化阶段 ,是急性白血病的重要生物学特征。该文了解儿童急性白血病 (AL)抗原表达规律、分布情况并探讨其临床意义。方法　采用流式细胞术直接或间接免疫荧光法检测 1 6 0例儿童AL的免疫表型。结果　 1 6 0例AL中 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 1 1 2例 ,急性髓细胞白血病(AML) 4 8例。 1 1 2例ALL中 ,T系ALL 1 2例 (1 0 .7% ) ;B系ALL(不包括成熟B ALL) 93例 (83.0 % )。ALL中 ,1 3.8%有髓系抗原表达 ,以CD33阳性最常见 ;AML中 ,4 0 %有淋系抗原表达 ,以CD7阳性率最高。儿童AML淋系抗原表达阳性率高于儿童ALL髓系抗原表达 (P <0 .0 1 )。CD1 4在儿童M 4和M 5的表达频率为 77.8%。B系ALL中CD34阳性率 5 8.5 %。AML中 ,CD34的表达频率为 5 5 .3% ,其中M1和M 2的CD34阳性率为 76 .5 % ,高于其它AML病人的CD34阳性率 (4 3.3% ) ,P <0 .0 5。HLA DR抗原在M 3的表达频率为 1 1 .1 % ,低于其它类型AML病人的HLA DR阳性率 (76 .3% ) ,P <0 .0 1。B系ALL中 ,CD34表达与FAB分型、起病时白细胞数、髓外侵润情况均无关 (P >0 .0 5 ) ;CD34-组婴幼白血病发生率 (1 7.6 % )高于CD34+ 组 (4 .2 % ) ,P <0 .0 5。结论　HLA DR阴性对于M3的诊断具有一定参考价值。     

伴髓系抗原表达的高危儿童急淋白血病临床生物学特征及长期预后分析

目的分析髓系抗原阳性(My+)的儿童高危急性淋巴细胞白血病(ALL)的临床生物学特征及长期预后关系。方法采用流式细胞仪直接免疫荧光法及RT-PCR法分别检测2001年8月至2003年3月在我院收治的初诊高危112例ALL患儿的髓系抗原及融合基因的表达,对其预后进行了中位时间达76个月的长期观察。结果髓系抗原的表达率为30.4%,B系ALL表达髓系抗原多于T系ALL,差异有显著性意义(P=0.019)。My+ALL患儿携带TEL-AML1融合基因者多于My-ALL患儿(P=0.049),My+ALL与My-ALL患儿在临床特点以及疗效等方面两组之间差异无显著性意义。结论高危ALL无论有无髓系抗原的表达其疗效无显著性差异,髓系抗原阳性表达在高危儿童ALL时不能作为预后不良的因素。     

急性白血病免疫分型与临床研究

目的了解儿童急性白血病(AL)免疫表型的分布情况和抗原表达规律,并与临床特征及预后相结合,为临床个体化用药提供指导。方法对85例新近诊断为AL患儿,采用CD45/SSC双参数散点设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析。其中胞膜抗原采用单克隆抗体三色直接免疫荧光标记法,胞浆内抗原采用双色直标法。结果1.AL 85例免疫分型:未分化型(AUL)1例,占1.2%;杂合型7例,占8.2%;急性髓性白血病(AML)18例,占21.2%;急性淋巴细胞白血病(ALL)59例,占69.4%。其中B-ALL 50例,占84.7%;T-ALL 6例,占10.2%;T/B-ALL 3例,占5.1%。2.ALL 59例中髓系抗原表达31例,占52.5%。髓系抗原表达阳性组和阴性组临床特征、治疗反应及预后方面无明显差异。3.AML患儿中有淋系抗原表达5例,占27.8%,低于ALL有髓系表达。其中以CD7阳性率最高,为60%;CD14在M4、M5表达率为75%;CD13、CD33在AM中表达率分别为83.3%、94.4%。4.混合型白血病7例。其中B/M 6例,TB/M 1例;2例在FAB分型中疑为混合型,余5例为ALL。结论应用多色流式细胞术可较好地分析每例白血病患儿,尤其是对于混合型白血病及抗原交叉表达者更有意义。