干扰LOX基因对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响

目的 探讨抑制赖氨酰氧化酶（LOX）基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响。方法 转染LOX干扰质粒的 Hep-2细胞株,RT-PCR 检测 LOX mRNA,Western blot检测喉癌Hep-2细胞中LOX蛋白及细胞增殖侵袭相关蛋白Ki-67、PCNA、MMP-2/9的表达情况;MTT法检测不同剂量射线对Hep-2细胞生存率的影响,流式细胞术（FCM）检测 Hep-2 细胞凋亡。结果 转染 LOX干扰质粒后 Hep-2细胞中,LOX蛋白和 mRNA 的表达水平下调;Western blot结果显示转染组细胞LOX、Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达明显低于阴性对照组和空白对照组;同时不同剂量射线对Hep-2细胞生存率影响呈剂量依赖性,转染组细胞转染后联合放疗细胞凋亡率明显高于空白及阴性对照组。结论 LOX干扰可特异下调LOX表达,抑制细胞增殖侵袭,作用机制可能与Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达下调有关,并且可增强放疗敏感性,为临床提供一个新的靶点,提高喉鳞癌治疗效果。     

丙泊酚下调miR-93-5p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚对miR-93-5p以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的影响。方法:培养对数期MDA-MB-231细胞,进行细胞毒性试验,筛选最佳丙泊酚处理浓度与时间,实验分为空白对照组（0.1%DMSO培养基）、阳性对照组(30μmol·L-1环磷酰胺)、丙泊酚1,2,5 mg·L-1浓度组。CCK8法检测细胞增殖,细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移侵袭情况,免疫印迹法（Western Blot）检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）、侵袭迁移相关蛋白金属机制蛋白酶2（MMP-2）、金属机制蛋白酶2（MMP-9）蛋白表达情况,定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测细胞miR-93-5p表达情况。结果:与空白对照组相比,阳性对照组与丙泊酚各浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率、迁移抑制率显著升高,裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达显著降低（P<0.05）。与阳性对照组相比,1 mg·L-1和2 mg·L-1丙泊酚组MDA-MB-231细胞裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达依次升高,增殖抑制率、迁移抑制率依次降低（P<0.05）。结论:丙泊酚可能通过下调miR-93-5p表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力发挥抗肿瘤作用。     

川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭黏附能力的影响

目的观察不同浓度川芎嗪干预后乳腺癌细胞侵袭、黏附能力的改变及MMP-2/MMP-9的表达。方法用细胞黏附实验,检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力的抑制作用;用Transwell小室检测不同浓度川芎嗪干预后MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的改变;用半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞MMP-2/MMP-9 mRNA表达的抑制作用。结果川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力有明显抑制作用,对MDA-MB-231细胞的MMP-2 mRNA的表达有明显抑制作用;但对MMP-9mRNA的表达无明显影响。结论川芎嗪能显著抑制MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭能力,其抑制效应与药物的浓度呈正相关。川芎嗪可能通过下调MDA-MB-231细胞MMP-2mRNA的表达而抑制细胞的黏附、侵袭能力。     

芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响

目的研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响及其作用机制。方法 MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测AE对MDA-MB-231细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA和蛋白表达的影响。明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性。结果 80μmol·L-1 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力、趋化性运动能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(45.88±8.51)%。作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE下调FAK mRNA和蛋白表达,下调MDA-MB-231细胞分泌MMP-9。结论 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、趋化性运动能力,其作用机制与其下调FAK表达和MMP-9的分泌有关。     

阿帕替尼调控上皮间质转化抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭

目的探讨阿帕替尼对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭作用的影响。方法 MTT法检测不同浓度的阿帕替尼(1、 2、 4、 8、 16μmol·L~(-1))作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h的细胞毒性,并采用Bliss法计算半数抑制浓度(IC50); Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测阿帕替尼对MDA-MB-231细胞凋亡的影响;Transwell实验检测阿帕替尼对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;Western blot检测阿帕替尼对上皮间质转化(EMT)标志性蛋白上皮钙黏素、神经钙黏素及波形蛋白表达的影响。结果 1、 2、4、 8、 16μmol·L~(-1)阿帕替尼可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,增殖抑制率分别为(38.38±3.33)%、(53.17±4.31)%、(62.09±6.21)%、(80.97±7.50)%和(98.54±9.75)%。阿帕替尼作用48 h对MDA-MB-231细胞的IC50为1.96μmol·L~(-1)。与空白对照组相比,阿帕替尼可显著诱导MDA-MB-231细胞凋亡,显著抑制MDA-MB-231细胞侵袭基底膜的能力(P<0.05);阿帕替尼还可显著上调MDA-MB-231细胞上皮钙黏素的表达,下调神经钙黏素及波形蛋白的表达(P <0.05)。结论阿帕替尼可能通过调控EMT进而发挥抗三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭作用。     

Gab2通过PI3K/Akt/ARK5/MMP途径影响乳腺癌的侵袭和转移

目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的相关性,分析浸润性导管癌中Gab2、MMP-2及MMP-9蛋白表达的相关性。采用Western blot检测乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中Gab2蛋白的表达情况。采用RNAi技术将小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,应用Western blot检测转染成功后各组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况,应用Transwell体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭性,用EGF刺激细胞后Western blot检测Akt及ARK5的磷酸化情况。结果浸润性导管癌组织中Gab2蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),浸润性导管癌中Gab2蛋白的表达与ER、组织学分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),且其表达与MMP-2及MMP-9蛋白的表达呈正相关;MDA-MB-231细胞系中Gab2蛋白表达量高于MCF-7细胞系中表达量;转染干扰质粒24 h后,与转染空载细胞组相比,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功。同时,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组穿过Transwell小室人工基膜数量明显减少(P<0.05),并伴有MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。用EGF刺激各组细胞,结果显示:在SiG ab2/MDAMB-231细胞组Akt及ARK5的磷酸化明显受到抑制。结论Gab2通过PI3K/Akt/ARK5信号通路影响MMP-2、MMP-9的表达从而促进乳腺癌的侵袭与转移。     

miR-187通过靶向胰岛素生长因子 -1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100和不同乳腺癌细胞中miR-187的表达水平.在MDA-MB-231细胞中分别转染miR-187 mimics(miR-187组)或阴性对照mimics-NC(miR-NC组),以未转染的MDA-MB-231细胞为空白对照(空白对照组).采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测转染后细胞中miR-187和IGF-1R蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况.Western blot检测与增殖和凋亡相关蛋白表达水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-187与IGF-1R靶向调控关系.结果 与人正常乳腺上皮细胞HBL-100(1.00±0.10)相比,乳腺癌细胞中miR-187表达水平明显降低(P<0.05),在MDA-MB-231细胞中表达水平最低(0.11±0.01).与miR-NC组和空白对照组相比,miR-187组的miR-187表达水平明显上调[(0.98±0.09)、(1.00±0.11)比(3.18±0.33),P<0.05],IGF-1R蛋白表达水平明显下调[(0.28±0.03)、(0.27±0.03)比(0.09±0.01),P<0.05],细胞增殖活力OD值[(0.79±0.08)、(0.82±0.08)比(0.43±0.04)]和PCNA表达水平[(0.39±0.04)、(0.40±0.04)比(0.20±0.02)]均显著降低(P<0.05),凋亡率[(5.02±1.13)％、(4.61±1.01)％比(20.38±3.44)％]和Cleaved Caspase-3表达水平[(0.09±0.02)、(0.08±0.02)比(0.58±0.07)]显著升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验显示miR-187与IGF-1R基因3'非编码区(UTR)存在靶向关系.结论 miR-187对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制与靶向抑制IGF-1R基因表达有关.     

lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制研究

目的：探讨lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制。方法：收集30例类风湿关节炎的滑膜组织；培养类风湿关节炎滑膜细胞MH7A，实验分为siNC组、si-HOTAIR组、miR-NC组、miR-206 mimic组、si-HOTAIR+NC inhibitor组、si-HOTAIR+miR-206 inhibitor组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HOTAIR、miR-206表达水平。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测细胞CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测HOTAIR与miR-206靶向结合关系。结果：与健康对照组比较，类风湿关节炎患者HOTAIR表达水平明显上调，miR-206表达水平明显下调（P<0.05）。与si-NC组比较，si-HOTAIR组HOTAIR表达水平明显下调，细胞存活率明显下调，细胞凋亡率明显上调（P<0.05）。与miR-NC组比较，miR-206 mimic组miR-206表达水平明显上调，细胞存活率明显下...     

低分子量肝素联合吉西他滨对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨低分子量肝素(low molecular weight hepa-rin,LMWH)对吉西他滨(gemcitabine,GEM)抗肿瘤作用的影响及其作用机制。方法实验分为对照组、LMWH组、GEM组、LMWH与GEM联合应用组。MTT法测定药物对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞增殖的影响;细胞划痕实验、Tr-answell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达;ELISA法检测乳腺癌细胞培养液中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的表达。结果 LMWH对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞的增殖没有明显影响,亦不能增强GEM的增殖抑制作用。30×104IU·L-1LMWH与2.5 mg·L-1GEM联合作用于MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞24 h的迁移抑制率分别为66.3%、76.5%,较单用GEM的迁移抑制率(MDA-MB-231细胞47.4%,MDA-MB-435细胞52.9%)明显提高。同时LMWH与GEM合用对乳腺癌细胞侵袭的抑制也明显高于GEM单用时的作用。GEM可下调MMP-9和HPA的表达,与LMWH合用时下调更加明显。结论 LM-WH具有增强GEM抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关。     

应用 RNA 干扰技术下调 ANXA3表达的 MDA-MB-231乳腺癌细胞株的建立

目的：建立针对膜联蛋白A3（Annexin A3, ANXA3）的shRNA稳定转染的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,为后续进一步研究奠定基础。方法荧光定量RT-PCR及western blot方法检测两种乳腺癌细胞株（ MDA-MB-231及MCF-7）中ANXA3 mRNA及蛋白表达水平。构建沉默ANXA3基因的shRNA质粒3个（ ANXA3-sh1-3）及阴性对照质粒,脂质体法转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231;选出ANXA3沉默效果最好的干扰质粒做后续实验。嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞;Western blot 方法检测转染后细胞中ANXA3蛋白表达水平。结果 MDA-MB-231细胞中 ANXA3 mRNA及蛋白表达水平显著高于MCF-7中的表达（ P ＜0 k．05）;成功构建3个针对ANXA3基因的shRNA质粒;转染ANXA3-sh1～3及阴性对照质粒后MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平分别为（0．0196±0．0002）、（0．0085±0．0002）、（0．0220±0．0035）、（0．0661±0．0057）,未转染的MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0692±0．0050）,脂质体组MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0652±0．0118）,ANXA3-sh2对MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA沉默效率最高,达87．72％,因此后续实验选择ANXA3-sh2;嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞分别命名为MDA-MB-231-Sh及MDA-MB-231-NC细胞。 Western blot检测结果显示,MDA-MB-231-Sh细胞中ANXA3蛋白显著低于MDA-MB-231及MDA-MB-231-NC细胞中的表达（ P ＜0．01）。结论 MDA-MB-231细胞较MCF-7细胞高表达ANXA3,成功的建立了稳定下调ANXA3表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,为后续进一步研究ANXA3的表达及特性打下基础。     

高强度聚焦超声通过TRIF介导的ERK通路增强乳腺癌的顺铂化疗敏感性

目的　探究高强度聚焦超声（HIFU）通过β干扰素TIR结构域衔接蛋白（TRIF）介导的细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路增强乳腺癌顺铂（DDP）化疗敏感性的作用机制。方法　依次增加DDP浓度间歇作用的方法诱导乳腺癌细胞（MDA-MB-231、MCF-7）/DDP耐药细胞;将MDA-MB-231/DDP、MCF-7/DDP细胞分为control组、HIFU组、HIFU+二甲基亚砜（DMSO）组、HIFU+漆黄素（fisetin）组。CCK-8检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞TRIF蛋白、耐药相关蛋白及ERK通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤生长情况;免疫组化染色法检测肿瘤组织Ki-67的表达。结果　与亲本MDA-MB-231及MCF-7细胞相比,在相同浓度DDP处理下MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞活力更高,且半数抑制浓度（IC50）显著增加（P＜0.05）,成功建立了稳定的DPP耐药细胞系;与control组相比,HIFU组MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、TRIF、p-糖蛋白（p-gp）、多药耐药基因1（MDR1）、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bcl-2关联X蛋白（Bax）表达水平显著增加（P＜0.05）;与HIFU组相比,HIFU+fisetin组细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、Bcl-2、TRIF、p-gp、MDR1、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著增加,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bax表达水平显著降低（P＜0.05）。与control组相比,HIFU组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著降低（P＜0.05）;与HIFU组相比,HIFU+fisetin组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著增加（P＜0.05）。结论　HIFU通过抑制TRIF表达来抑制其介导的ERK通路,从而增强乳腺癌DDP化疗敏感性。     

白花蛇舌草对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡、活性氧水平的影响研究

目的探讨白花蛇舌草注射液( HDI)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞( HRCECs)增殖、凋亡、氧化应激的影响及机制。方法 2019年 10月至 2020年 6月,体外培养 HRCECs。将 HRCECs分为对照组( 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高渗对照组( 19.5 mmol/L甘露醇及 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖对照组( 25 mmol/L葡萄糖处理细胞)、白花蛇舌草组( HDI组)(6.25 mL/L、12.5 mL/L、25 mL/L、50 mL/L HDI和 25 mmol/L的葡萄糖处理细胞)。处理细胞 48 h,通过 CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜检测活性氧水平。蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原( PCNA)、细胞周期蛋白 A1(CyclinA1)和活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组细胞活性明显升高［(1.116±0.105)比( 0.684±0.072)］(P<0.05)。与高糖组比较, 12.5 mL/L、25 mL/L和 50 mL/L的白花蛇舌草组细胞活性明显降低［( 0.847±0.076)、(0.639±0.058)、(0.421±0.042)比( 1.116±0.105)］(P<0.05)。选择 50 mL/L的白花蛇舌草作为研究对象。与对照组比较,高糖组 G0/G期细胞百分比［( 60.02±5.01)%比( 54.72±4.31)%］、细胞凋亡率［( 17.11±1.01)%比( 3.32±0.47)%］、活性氧水平［( 96.18±5.22)比( 42.14±3.56)］及 PCNA、CyclinA1和 cleaved caspase-3表达均明显升高, G2/M期和 S期细胞百分比明显降低( P<0.05)。与高糖组比较, HDI组 G0/G期细胞百分比［( 32.31±3.42)%比( 60.02±5.01)%］、细胞凋亡率［( 9.72±0.73)%比     

去甲斑蝥素对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的抑制作用

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤抑制作用。方法:建立荷瘤裸鼠胆囊癌模型,应用NCTD对该动物模型进行移植瘤增殖、生长的抑制实验,观察并测量荷瘤鼠移植瘤大小、计算抑瘤率,应用流式细胞术和免疫组化等观测移植瘤细胞的细胞周期,凋亡率,PCNA,Ki-67,Cyclin D1,p27基因蛋白表达。结果:NCTD的半数致死量(LD50)为139．96 mg·kg-1,应用1／5LD50。即可使NCTD组裸鼠移植瘤生长减缦[(5．6±s 0．4)cm3与对照组(9．8±0．6)cm3比较,P<0．011,抑瘤率上升(43±8)％;S期细胞减少、细胞凋亡率上升;免疫组化检测显示,NCTD组PCNA,Ki-67,cyclin D1表达下降,p27表达上升,与氟脲嘧啶(FU) 联合应用时作用明显。结论:NCTD可明显抑制荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的增殖和生长,与FU合用呈协同效应以加强其抗癌作用;其机制可能与NCTD干扰荷瘤鼠胆囊癌移植瘤细胞周期,抑制细胞增殖,诱导细胞调亡以及改变细胞增殖、细胞周期调控相关基因蛋白表达有关。     

微小 RNA-525-5p通过靶向 RECQ样蛋白 5调控乳腺癌放射敏感性

目的探讨微小 RNA-525-5p(miR-525-5p)对乳腺癌细胞辐射照射敏感性的影响及机制。方法该研究起止时间为 2019年 6月至 2020年 6月,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A均购自美国菌种保藏中心。运用 qRT-PCR法检测人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A中 miR-525-5p的 mRNA的表达;将 miR-525-5p模拟物( miR-525-5p mimics)阴性对照( miR-NC)组(转染 miR-NC)、 miR-525-5p组(转染 miR-525-5p mim. ics)、 RECQL5小干扰 RNA阴性对照( si-NC)组(转染 si-NC)、 RECQL5小干扰 RNA(si-RECQL5)组(转染 si-RECQL5)、 miR-525-5p+RECQL5过表达空载体( pcDNA)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA)、 miR-525-5p+RECQL5过表达载体( pcDNA-REC. QL5)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA-RECQL5),均用脂质体法转染至 MDA-MB-231细胞; Western blotting检测细胞中 RECQ样蛋白 5(RECQL5)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;克隆形成实验检测细胞的存活分数。结果与非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A相比,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474中 miR-525-5p表达［ 0.28±0.02,0.33±0.02,0.42±0.03比 1.01±0.08］显著降低, RECQL5 mRNA和蛋白表达［ 1.68±0.15,1.58±0.12,     

长链非编码 RNA LINC00662靶向微小 RNA-103a-3p对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响

目的探究长链非编码 RNA LINC00662对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响,以及分子机制。方法本研究于 2018年 10月至 2020年 2月进行。以体外培养的人皮肤黑色素瘤细胞 A375为研究对象,然后将其分为四组,分别为 si-NC、si-LINC00662、si-LINC00662+anti-miR-NC和 si-LINC00662+anti-miR-103a-3p转染 A375细胞。采用 RT-PCR检测皮肤黑色素瘤组织中 LINC00662和 miR-103a-3p的表达水平, CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法( western blot. ting)检测细胞周期蛋白 1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原( PCNA)的蛋白表达。结果与正常组织和正常皮肤细胞相比,在皮肤黑色素瘤组织和细胞株中 LINC00662表达［ 1.24±0.50比 4.17±1.27］上调, miR-103a-3p表达［ 1.17±0.32比 0.64±0.21］显著下调。 LINC00662与 miR-103a-3p靶向结合。与 si-NC组相比, si-LINC00662组 LINC00662表达［ 1.00±0.06比 0.48±0.06］、 OD值和 S期细胞比例［( 34.7±3.5)%比( 20.5±3.0)%］降低, G0/G1期细胞比例［( 57.4±5.2)%比( 74.7±4.8)%］增高, Cyclin D1［1.00±0.01比     

The inhibitory effect of turmeric curcuminoids on matrix metalloproteinase-3 secretion in human invasive breast carcinoma cells

Matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) is a key enzyme with important implications in the invasion and metastasis of breast cancer cells. Curcumin (Cur), demethoxycurcumin (DMC), and bisdemethoxycurcumin (BDMC) are major forms of curcuminoids found in turmeric powder with reported anticancer activity. This study focuses on the comparative effect of Cur, DMC and BDMC on the modulation of MMP-3 activity and its secretion in MDA-MB-231 breast cancer cells. MMP-3 levels were determined by casein zymography, ELISA and western blotting. Analysis of MMP-3 expression by casein zymography revealed high expression in MDA-MB-231 invasive breast carcinoma cells, but not in MCF-7 non-invasive breast cancer cells. ELISA assays showed MMP-3 levels were significantly decreased in all curcuminoid treatments. Using zymography, treatment with non-toxic doses revealed that every curcuminoid compound except Cur reduced MMP-3 levels. Moreover, the result from western blot analysis confirmed that only DMC and BDMC reduced MMP-3 secretion in MDA-MB-231 cells, but Cur did not have any effect. MMP-3 activity revealed that none of the curcuminoids showed significant effects. However, treatment of the cells with Cur, DMC and BDMC exhibited a significant inhibition of cell invasion and motility with DMC and BDMC being more potent. These results suggest that Cur, DMC, and BDMC may be used as MMP-3 inhibitors to modulate MMP-3 expression.