pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响

背景与目的:精卵融合是发生在受精过程中的重要生物学事件,Izumo是位于顶体内膜上的I型免疫球蛋白,是一种具有精子特异性的膜蛋白,在精卵融合中起关键作用.我们研究pCXN2-mIZUMO在小鼠C57BL/6肌肉中的表达及对其生育能力的影响,为进一步研究免疫避孕手段提供实验依据.材料与方法:用重组质粒pCXN2-mIZUMO分别免疫雌和雄性C57BL/6小鼠.ELISA测定小鼠体内的抗Izumo抗体水平,检测小鼠抗血清在体外受精中对受精率的影响,被免疫的雌性、雄鼠分别与正常的雄、雌鼠交配,雌雄合笼比例为2:1,分娩完成后统计其产仔数.结果:pCXN2-mIZUMO可以在小鼠体内诱发抗Izumo特异性免疫应答.被pCXN2-mIZUMO免疫后的小鼠抗血清在体外能够降低其受精率;各组产仔数分别为:实验雌鼠组2.9±0.66;对照雌鼠组5.4±0.82;实验雄鼠组5.1±0.99;对照雄鼠组6.0±1.34.实验雌鼠组的生育能力比对照雌鼠组明显降低(P＜0.05).结论:重组质粒pCXN2-mIZUMO免疫雌性小鼠具有降低生育能力的作用.     

抗肿瘤化合物MC004对雄性大鼠生殖毒性的研究

背景与目的:研究新型抗肿瘤化合物MC004对雄性大鼠的生殖毒性. 材料与方法:健康成熟雄性Wistar大鼠48只,随机分为3个实验组和1个对照组,实验组分别隔日尾静脉注射给予0.25、0.50、0.75 mg/kg的MC004.共28 d.对照组给予相同体积的生理盐水.给药结束后24 h剖杀动物,用计算机辅助精子分析系统分析精于数量和活力,显微镜下观察精子形态.结果:与对照组相比,MC004 0.75 mg/kg组大鼠体重增长缓慢;各给药组大鼠睾丸、附睾的绝对重量及脏器系数均显著降低(P<0.01);各给药组大鼠的精子数量显著降低(P<0.01),0.50 mg/kg和0.75 mg/kg剂量组的精子运动速度降低明显(P<0.01);各实验组大鼠均出现大量畸形精于(P<0.01). 结论:MC004隔日按0.25 mg/kg剂量尾静脉注射,28 d后即对雄性大鼠生殖系统产生明显毒性.     

高分子聚合物水凝胶HFMC对人精子染色体的遗传毒性研究

高分子聚合物水凝胶HFMC用作输精管节育材料因其具有可通透和自然复孕两大特性而有着广阔的应用前景。为了检测HFMC是否具有潜在的遗传毒性,本研究应用人精子染色体离体测试系统,在体外用经HFMC处理后的人精子与去透明带金黄地鼠卵受精,然后分析这些精子的染色体核型。结果表明:HFMC各剂量组与阴性对照组相比,染色体结构畸变精子率和断裂均数均无显著差异(P>0.05),而阳性对照平阳霉素组的这两个指标均极显著高于阴性对照组(P<0.01)。给果提示:HFMC作为一种安全的高分子男性节育材料值得深入研究。     

HIV感染对患者精液质量的影响

目的：探讨HIV感染对患者精液质量的影响。方法：收集5例正常男性和23例HIV感染者的精液样本,采用计算机辅助精液分析系统检测精液参数,并分析HIV病毒感染对精液质量的影响。结果：HIV感染者和正常男性的精液质量比较,精子密度、总数、活力、活率均较对照组显著降低（P均〈0.01）,而畸形率显著升高（P〈0.01）,HIV感染者精液中CD4~＋T淋巴细胞数低于健康男性,CD4~＋T淋巴细胞数与精子活率和活力相关（r=0.787和0.770,P〈0.01）。结论：HIV感染对男性的精液质量造成严重损伤,有可能降低患者的生育能力。     

乙肝病毒表面蛋白对人精子活力及线粒体膜电位的影响

目的：乙肝患者的精子活力降低且有较高比例的凋亡和坏死,但其机制未明。本研究主要考察乙肝病毒表面蛋白（HBs）对人精子线粒体膜电位的影响。方法：对经不同浓度的HBs（0、25、50、100μg/ml）孵育4h后的人精子活力进行分析,并进一步采用JC_1染料结合流式细胞术监测人精子线粒体膜电位的变化。结果：与对照组比较,人精子在体外加入100μg/mlHBs孵育后,a＋b级精子数比例显著下降（P〈0.01）,精子线粒体膜电位显著下降,25、50、100μg/mlHBs处理组丧失线粒体膜电位的精子百分率分别为24.83%、44.43%和92.22%。结论：乙肝病毒可能通过表面蛋白HBs对人精子活力和线粒体膜电位产生负面影响。     

重组小鼠Izumo的表达及其特异性抗体对小鼠体外精卵融合的影响

背景与目的:精子膜蛋白Izumo在精卵融合中起关键作用.本研究旨在表达和纯化重组小鼠Izumo蛋白(mIzumo),探讨重组mIzumo在小鼠体内的免疫原性及其特异性抗体对小鼠体外精卵融合的影响.材料与方法:将编码mIzumo蛋白的cDNA序列亚克隆到pET28a(+)原核表达载体上,构建pET28a(+)-mIzumo重组质粒.在BL21(DE3)大肠杆菌中表达重组6His-mIzumo融合蛋白,并通过Ni2+亲和层析纯化.使用福氏佐剂乳化纯化的6His-mIzumo,分别免疫雌性和雄性C57BL/6小鼠,并采集免疫前和免疫后血清.用Western Blot和ELISA检测血清中抗6His-mIzumoIgG抗体的特异性和滴度.采用IVF和精卵融合试验检测血清中抗6His-mIzumo抗体对小鼠精卵融合的影响.结果:纯化的6His-mIzumo在SDS-PAGE凝胶上显示为约60 kD的单一条带.免疫了重组蛋白的雌性和雄性小鼠都产生了抗6His-mIzumoIgG抗体.抗6His-mIzumoIgG抗体与重组蛋白,小鼠睾丸、附睾及精子膜蛋白存在交叉反应,免疫印迹显示为约60kD的特异性条带.ELISA结果表明,免疫6His-mIzumo后至少6周之内,血清中的抗6His-mIzumoIgG抗体维持在最高水平.免疫后血清处理组的小鼠精子与去透明带卵母细胞发生胞膜融合的能力明显低于免疫前血清处理组(P＜0.01).结论:纯化的6His-mIzumo融合蛋白能够诱发雌性和雄性小鼠产生可阻断精卵融合发生的特异性血清抗体.因此,6His-mIzumo可作为同种异体抗原用于免疫避孕候选疫苗的研究.     

抗辐灵对微波辐射致大鼠精子损伤的防治作用

目的探讨抗辐灵对微波辐射致大鼠精子损伤的防治作用。方法 100只Wistar雄性大鼠,随机分为:正常对照组、辐射对照组、1 g/(kg.d)抗辐灵组、2 g/(kg.d)抗辐灵组和4 g/(kg.d)抗辐灵组,30 mW/cm2微波全身辐射10 min,于辐射前7 d灌胃给予1、2和4 g/(kg.d)抗辐灵水溶液,每天1次,连续14 d。分别于停药后6 h(辐射后7 d)、7 d(辐射后14 d)、14 d(辐射后21 d)处死大鼠,SCA精子动态分析系统检测大鼠精子活力参数,HE染色观测精子畸形率。结果 30mW/cm2微波辐射后7 d,大鼠精子畸形率升高(P<0.05);停药后6 h各剂量药物组精子畸形率较辐射组明显降低(P<0.05或P<0.01)。30 mW/cm2微波辐射后14 d大鼠精子活动率(AR)和A+B级精子比例明显减少(P<0.05),D级精子比例明显增加(P<0.05),精子畸形率增加(P<0.05)。停药后7 d;2和4 g/(kg.d)抗辐灵组精子活动率(AR)和A+B级精子比例较辐射组明显增加(P<0.05或P<0.01),D级精子比例降低(P<0.05),精子畸形率降低(P<0.05)。结论 30 mW/cm2微波辐射可引起大鼠精子损伤,表现为精子活动率减少和精子畸形率增加,抗辐灵具有明显防治微波辐射损伤的作用。     

生育力与早期胚胎发育毒性试验中雄性大鼠阳性模型的建立

目的： 探讨生育力与早期胚胎发育毒性试验中,SD雄鼠交配前的环磷酰胺给药方法,以建立阳性对照模型。方法：SD大鼠按体质量随机分为3组,分别为溶剂对照组、环磷酰胺I组 (100 mg/kg)、环磷酰胺II组 (20 mg/kg);环磷酰胺I组和II组分别腹腔注射给予环磷酰胺1次和5次,溶剂对照组给予等量的生理盐水;雄鼠于首次给药后63 d开始交配,交配成功后当天检测阴茎勃起功能,随后处死,进行精子活动度和数量检测,腹主动脉采血后检测双氢睾酮、雌二醇和睾酮激素水平,称量睾丸、附睾、包皮腺、前列腺、精囊腺、提肛肌等的质量并计算脏器系数。结果：2个环磷酰胺组雄鼠主要表现为可逆性脱毛。与溶剂对照组比较,体质量和摄食量均明显降低 (P<0.05或0.01);雄鼠附属生殖器官质量降低 (P<0.01),阴茎勃起潜伏期明显延长 (P<0.01),附睾尾精子计数、Ⅰ和Ⅱ级活动精子数及精子活率降低,精子畸形率明显增高 (P<0.05或0.01),但激素水平未见明显异常。结论：给予环磷酰胺对于雄性大鼠的生育力产生明显影响,两种给药方式均可建立生育力与早期胚胎发育毒性试验阳性模型。     

枸杞多糖对慢性心理应激雄性大鼠生殖功能的影响

背景与目的:研究枸杞多糖对应激大鼠生殖功能的保护作用,并探讨其保护机制.材料与方法:实验大鼠依体重和旷场实验评分随机分为6组:对照组,应激组,枸杞多糖高(20 mg/kg)、低剂量组(10 mg/kg)及枸杞多糖高剂量 应激组和低剂量 应激组.采用束缚制动 噪音的方法建立应激动物模型,用枸杞多糖进行干预,观察生殖功能相关指标的变化和睾丸组织形态的改变.结果:应激组大鼠体重的增重较对照组降低,精子数量减少,精子活率降低,畸形率升高,血清睾酮含量降低(P均＜0.01).与应激组相比,枸杞多糖可使应激大鼠体重升高,精子数量增多,精子活率升高,畸形率降低,血清睾酮含量上升(P＜0.05或P＜0.01),能降低慢性心理应激引起的生精细胞损伤,促进睾丸生殖细胞正常发育.结论:枸杞多糖对慢性心理应激大鼠的生殖系统具有一定的保护作用.     

pIRES2-EGFP-DAZ3质粒构建及金黄地鼠2-细胞胚中人DAZ基因的复制与表达

背景与目的：人Yq11.2上AZF区 (内含DAZ基因家族) 的缺失是多数男性不育的病因。本研究旨在探讨DAZ3基因导入精子的可能性以及导入基因在2-细胞胚中的功能。材料与方法：构建pIRES2-EGFP-DAZ3质粒,经鉴定无误后将其导入金黄地鼠精子。将携带DAZ3基因的精子与金黄地鼠卵母细胞进行体外受精。用FISH、PCR、RT-PCR技术分别检测DAZ3基因在精子头部、雄原核上的整合以及在2-细胞胚中的复制与表达。结果：构建的pIRES2-EGFP-DAZ3质粒经酶切、PCR和绿色荧光蛋白表达鉴定构建成功。采用FISH在精子头部、单细胞胚雄原核和2-细胞胚两个间期核上观察到阳性杂交信号。采用RT-PCR在2-细胞胚样本中观察到DAZ3 cDNA的特异条带。结论：外源性DAZ3基因能被导入精子基因组。携带DAZ3基因的精子可与卵母细胞完成正常的受精过程。导入的DAZ3基因在早期胚胎细胞中能够随细胞分裂自我复制并表达其功能。本研究结果为DAZ基因缺失所致男性不育的治疗提供了新的线索。     

Sperm banking and assisted reproductive outcome in men with cancer: a 10 years’ experience

Background

As cancer therapy can be harmful to spermatogenesis, men are generally advised to cryopreserve sperm before gonadotoxic treatment. Here, we compared fresh and frozen-thawed sperm quality in patients according to cancer type, and reported use rate in subsequent assisted reproductive technology (ART) cycles.

Methods

This retrospective analysis of a sperm cryopreservation program in all men suffering from cancer was conducted at the University Hospital of Nantes between 1997 and 2007.

Results

A total of 1042 men were referred for sperm cryopreservation during this period (438 testicular cancer, 184 other solid cancers, 278 lymphoma and 142 other haematological malignancies). A total of 2577 ejaculates from 1009 men were studied. Sperm characteristics and sperm sensitivity to the freezing process varied according to the cancer type. Frozen sperm was used in 82 patients, with 112 in vitro fertilization and 66 intrauterine insemination cycles performed, leading to a clinical pregnancy rate per cycle of 23.2 and 12%, respectively.

Conclusion

Sperm quality and motility alteration during the freezing process can differ according to the type of cancer, but sperm frozen before gonadotoxic treatment in cancer patients can be successfully used in ART.     

乙型肝炎病毒对精子染色体的影响

乙型肝炎病毒感染者的精子与去透明带金黄地鼠卵受精制备染色体。并以ＨＢＶ全长ＤＮＡ作探针对精子染色体进行荧光原位杂交。结果发现慢性迁延型肝炎患者,慢性活动型肝炎患者ＨＢＶ携带者的精子染色体畸变率分别为１２．３３％（０／７３）、１６．１８％（１１／６８）和１５．４８％（１３／４８）,均显著高于健康对照者精子畸变率（４．３５％,５／１１５）,进一步ＦＩＳＨ显示,在１例慢性迁延型肝炎患者的精子染色体上有待     

人精子诱变检测中新体外代谢活化系统的研究

人精子与去透明带金黄地鼠卵受精,在受粗后异合卵培养阶段,用终浓度分别为２０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ的间接诱变剂环磷酰胺进行处理,继而制备精子染色体进行核型分析。得到环磷酰胺诱发的染色体畸变精子率在上述剂量组依次为３３％、５０％、３３％;断裂均数依次为０．５４、１．９４和０．７２。与空白对照组比较,差异具有显著性。本研究结果表明,用人精子／金黄地鼠异合卵为靶细胞,能     

9例正常男性536个精子染色体核型分析

为获得我国正常男性单倍体遗传学基线资料，用人精子与去透明带金黄地鼠卵异种体外受精技术，对正常男性５３６个精子核型进行了分析。结果显示，染色体自发畸变精了为８．０２％，其中非鳖倍体率为１．８６％，结构畸变精子庆为６．１６％，Ｘ－精子与Ｙ－精子比例为５０．５６％；４９．４４％。在丹佛体制水平上，精子核型中随体联合呈随机分布，其频率为０．１１２。     

Monoclonal antibody FsC-47 against carp sperm creatine kinase

The enzyme creatine kinase (CK) plays a key role in energy homeostasis of cells with high and fluctuating energy requirements. As for spermatozoa, the activity of phosphocreatine shuttle, which directs energy from the mitochondria to sites of ATP consumption, is dependent on individual species. High activities of CK are observed in spermatozoa of nonvertebrate, fish, and birds, contrary to the low-level CK activity in mammalian spermatozoa. A new monoclonal antibody (MAb) to carp sperm creatine kinase was prepared. This antibody is applicable to large-scale immunochemical techniques. In this study, it was applied to the study of carp sperm motility, and the evaluation of the influence of CK on the quality and fertilization ability of carp spermatozoa.     

正常人240个人精子染色体核型分析

应用人精子与去透明带金黄地鼠卵受精技术制备人精子染色体标本，对正常男性２４０个精子核型进行了分析。结果显示，数目畸变精子率为３．３４％，结构畸变精子率为６．６７％。所观察到的结构畸变类型为无着丝粒断片，染色体断裂、双着丝粒体、易位和染色单体断裂。在正常男性精子染色体组中，Ｘ一精子与Ｙ一精子的比例为４９．１７％：５０．８３％；近端着丝粒染色体随体联合显随机分布，随体联合频率为０．０９６。对上述实验结果的意义进行了讨论。     

Effectiveness of sperm banking in adolescents and young adults with cancer: a regional experience

BACKGROUND: Improving success in the treatment of cancer has resulted in an increasing number of survivors. An important quality of life issue among younger survivors is the ability to have a family. Current gonadotoxic treatments for cancer pose a challenge to future fertility. Preservation of fertility after gonadotoxic therapy is an important consideration for these patients. In a regional center, the authors evaluated efficacy and utilization of sperm banking for preservation of male fertility in adolescents and young adults (AYA) with cancer. METHODS: A retrospective chart review was conducted to obtain data on clinical features, andrology, and fertility from patients (ages < 30 years) who cryopreserved samples of semen from 1995-2005. RESULTS: Of 821 newly diagnosed male AYA cancer patients, aged 14-30 years, only 146 (17.8%) used sperm cryopreservation technology. Patients who used their cryopreserved semen for attempted conception had a 36.4% success rate with intrauterine insemination (IUI) and a 50.0% clinical pregnancy rate with in vitro fertilization (IVF) and intracytoplasmic sperm injection (ICSI). CONCLUSIONS: Sperm cryopreservation by AYA males with cancer is an efficacious method for preserving future fertility. Awareness and employment of assisted reproductive technologies needs to be implemented by an interdisciplinary team of experts caring for these patients and can result in successful paternity in males after treatment for cancer.     

地鼠血清培养异合卵制备人精子染色体的研究

本文首次应用地鼠血清培养异合卵制备人精子染色体标本，获得显著的效果，同时应用胎牛血清进行了比较，在两咱血清中精子染色体形成率分别为１０２．４５％和５８．２８％，可供分析核型获得率分别为７６．１５％和３１．５１％，两组间存在非常显著的差异（Ｐ〈０．００１）。观察分析了６例供精者的４９８个精子核型，数目异常和结构异常发生率分别为０．８％和２．８％。本研究提示地鼠表培养同种属可促进卵细胞在体外在进一步成     

Toll样受体-4表达对树突状细胞表型及功能的影响

目的:探讨Toll样受体-4(TLR-4)表达对树突状细胞(DC)表型及功能的影响及其机制.方法:以构建的含有TLR-4全基因序列的pcDNA3.1质粒载体为模板,通过mMESSAGE mMACHINE T7 Kit体外转录获得TLR-4 mRNA,并采用脂质体法将其转染健康人外周血PBMC来源的DC,用流式细胞术检测鉴定转染后DC表面功能性分子的表达及DC体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌细胞因子的能力.结果:成功构建人TLR-4-pcDNA3.1质粒载体;体外扩增成功人TLR-4和EGFP mRNA片段.TLR-4 mRNA转染后的DC表面趋化因子CCR7及功能性分子HLA-DR的表达显著高于control mRNA转染DC、转染前成熟DC[CCR-7:(42.4±4.93)％ vs (20.1±3.09)％、(17.1±4.33)％,P＜0.05;HLA-DR:(62.1±7.23)％ vs(17.7±6.01)％、(25.8±4.16)％,P＜0.05],同时转染后的DC体外诱导CTL分泌IFN-γ细胞因子的能力强于control mRNA-DC、空载转染DC诱导的CTL及加入DC前CTL[(66.5±3.58)％ vs (41.1±4.27)％、(37.9±2.96)％、(3.2±2.03)％,P＜0.05].结论:TLR-4 mRNA转染DC可显著增强DC的功能,提高了DC抗原提呈及诱导CTL的能力,为增强DC疫苗抗肿瘤效应提供实验依据.