盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin，Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系；采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响；采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达；TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218），采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）；Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后，与对照组比较，2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）；Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05），Bax mRNA表达升高（均P<0.05）；Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05），PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）；MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示，ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209，P=0.007；r=0.235，P=0.002），与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326，P＜0.001；r=-0.453，P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长，可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

人乳腺癌组织中miR-34a的表达及其在乳腺癌细胞系中的功能研究

目的 探讨miR-34a在人乳腺癌组织和细胞中的表达情况及对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移侵袭和凋亡等生物学行为的影响,为研究乳腺癌组织中miR-34a的作用及深入了解乳腺癌发生发展的分子机制奠定理论基础。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-34a在20例人乳腺癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异并比较其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达差异;体外利用脂质体转染技术,转染miR-34a的模拟物（miR-34a mimic）和标记FAM（绿色荧光）的阴性对照(negative control ,miR-NC)进入MDA-MB-231细胞,研究miR-34a对细胞增殖活性、迁移和侵袭能力以及凋亡和周期分布的影响。结果 miR-34a在乳腺癌组织中的表达量较正常癌旁组织下调(P＜0.01);在MDA-MB-231、MCF-7和MCF-10A中的表达呈依次增高的趋势(P＜0.01);转染miR-34a mimic与转染miR-NC的MDA-MB-231相比,其增殖活力、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01),凋亡增加(P＜0.01),细胞周期被阻滞在G1/G0期（P＜0.01）。结论 miR-34a在乳腺癌组织和细胞系MDA-MB-231及MCF-7中的表达较正常组织和MCF-10A中都明显下调;miR-34a能够抑制肿瘤细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭迁移,增加细胞凋亡率,使细胞周期阻滞在G0/G1;miR-34a可能起到抑癌作用,其表达水平与乳腺癌的发生发展密切相关。     

顺铂诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞株的建立及鉴定

目的 建立人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231顺铂（DDP）耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法 采用逐步增加顺铂浓度、间歇诱导的方法,建立人三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DDP体外耐药细胞模型;MTT法检测MDA-MB-231/DDP的耐药特性;高效液相色谱法检测耐药细胞内DDP药物浓度的改变; 实时荧光定量PCR法分析两种细胞耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及 GST-π表达差异。结果 MTT显示MDA-MB-231/DDP的顺铂、5-氟尿嘧啶及环磷酰胺的耐药指数分别为9.80、4.43及2.21;高效液相检测显示2种细胞分别与6 μg/ml的DDP接触24 h后,MDA-MB-231细胞内DDP的浓度为（47.10±2.37）ng/（5×10⁴） cells,而MDA-MB-231/DDP细胞则为（6.30±1.64）ng/（5×10⁴）cells（P<0.01）;MDA-MB-231/DDP细胞中MDR1、BCRP、MMP7及GST-π基因 mRNA的表达量分别是亲本细胞的15.39、13.73、22.52及44.90倍（P<0.01）。结论 逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的MDA-MB-231/DDP细胞株,其耐药机制可能与ABC转运蛋白表达增加等多种机制相关。     

miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及其可能的作用机制。方法 采用qRT-PCR检测人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、SK-HEP-1、Huh7及正常肝细胞株QSG7701中miR-106b mRNA的表达。用miR-106b siRNA转染HepG2细胞（miR-106b下调组）,并设空白对照组和阴性对照组。不同剂量（0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy）照射后,采用细胞克隆形成实验检测各组细胞克隆形成率（plating efficiency,PE）及细胞存活分数（survival fraction,SF）;6 Gy照射后,采用CCK-8法、流式细胞仪分别检测各组细胞增殖、凋亡情况,Western blot检测p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、PCNA和Bax蛋白表达情况。结果 与QSG7701细胞相比,HepG2、SMMC-7721、SK-HEP-1、Huh7细胞中miR-106b表达水平均升高（均P＜0.05）,其中HepG2细胞中miR-106b的表达水平最高。克隆形成实验结果显示,不同剂量（0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy）照射后,HepG2细胞的PE、SF水平随照射剂量升高而逐渐降低（均P＜0.05）,其中6 Gy和8 Gy照射的PE、SF水平差异无统计学意义（均P＞0.05）。6 Gy照射后,与空白对照组、阴性对照组相比,miR-106b下调组HepG2细胞的增殖能力及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、PCNA蛋白表达水平均降低（均P＜0.05）,细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平则升高（均P＜0.05）。结论 下调miR-106b表达可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,增强放疗敏感性,其作用机制可能与阻断PI3K/AKT通路活化有关。     

过表达RSK4m1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和侵袭的影响

目的 探讨过表达p90核糖体S6蛋白激酶4变异体1（ribosomal protein S6 kinase 4 variant 1,RSK4m1）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和侵袭的影响。方法 通过负载RSK4m1慢病毒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中稳定过表达RSK4m1。以MDA-MB-231亲本细胞为空白对照组（Con组）、转染空载病毒的MDA-MB-231细胞为阴性对照组（Mock组）、转染过表达RSK4m1的MDA-MB-231细胞为实验组（OE组）。采用qRT-PCR和Westen Blot法检测各组RSK4m1 mRNA及蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果 OE组中RSK4m1 mRNA及蛋白的表达量均明显高于Con组及Mock组（P<0.05）。CCK-8实验显示,24 h、48 h、72 h和96 h时OE组细胞增殖均低于Mock组和Con组（P<0.05）;细胞划痕实验显示,细胞培养24 h后,OE组细胞迁移率显著低于Con组和Mock组［（14.53±0.64）% vs （25.67±2.44）%、（24.47±2.25）%,P<0.05］。Transwell小室侵袭实验显示,OE组细胞侵袭能力显著低于Con组和Mock组［（35.00±5.57）个 vs （66.70±5.86）个、（58.67±4.16）个,P<0.05］。结论 过表达RSK4m1可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭能力,为RSK4m1可能成为乳腺癌的治疗新靶点提供了实验依据。     

电离辐射克服NSCLC细胞株H1975吉非替尼耐药的体外研究

目的 探讨电离辐射联合吉非替尼对NSCLC耐药株H1975耐药突变、细胞凋亡及相关蛋白表达的影响及其可能机制。方法 实时荧光定量PCR对不同处理组H1975细胞的T790M突变进行相对定量分析;流式细胞仪检测不同处理组H1975细胞的凋亡率;免疫印迹检测不同处理组凋亡相关蛋白的表达水平。结果 2.5 Gy电离辐射组相较于0 Gy对照组,H1975细胞株T790M突变量降为原来的0.67倍,随电离辐射剂量的增高,T790M突变量降低（P＜0.05）;电离辐射联合吉非替尼组的细胞凋亡率为（44.35±8.49）%,相较于单独电离辐射组（21.84±5.62）%或吉非替尼组（17.38±6.78）%明显升高（P＜0.05）;电离辐射联合吉非替尼可诱导H1975细胞中磷酸化表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor, p-EGFR）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B, p-AKT）蛋白表达水平明显下调。结论 在吉非替尼耐药的NSCLC细胞株H1975中,电离辐射可以克服吉非替尼耐药,与吉非替尼有良好的协同作用。     

NRP-1过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3生物学行为的影响

目的 通过上调乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3中NRP-1的表达,观察NRP-1对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法 构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,脂质体介导NRP-1 表达质粒转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞,用G418筛选出稳定转染的乳腺癌细胞株。利用RTqPCR、Western blot法分别检测NRP-1基因mRNA及其蛋白表达;CCK-8法、AnnexinⅤ-APC/7-AAD法、Transwell小室分别检测转染细胞增殖率、凋亡率及侵袭、迁移能力。结果 成功构建pcDNA3.1- NRP-1表达载体,转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞并筛选稳定表达系。与对照组相比,过表达组细胞的NRP-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（均P<0.05）;NRP-1过表达组的细胞较对照组增殖率增加、凋亡率降低、侵袭及迁移能力增强（均P<0.05)。结论 NRP-1在乳腺癌发展、浸润、转移中起着一定的作用,它可促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。     

miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P＜0.001）,且与淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）。过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05）;miR-204上调后,细胞凋亡率达到（34.7±1.9）%,细胞凋亡能力明显增强（P＜0.001）。结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡。     

二甲双胍对直肠癌细胞放疗敏感性的影响

目的 探讨二甲双胍（DMBG）对直肠癌细胞放疗敏感性的影响及其可能的作用机制。方法 体外培养直肠癌SW1463细胞，设对照组、DMBG组、照射组及DMBG+照射组，同时建立裸鼠移植瘤模型。MTT实验检测不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用SW1463细胞的细胞活力，克隆集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期，免疫印迹法检测DNA损伤蛋白γ-H2AX及DNA损伤修复蛋白DNA-PK的表达，同时观察各组裸鼠移植瘤重量及体积变化，计算抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。 结果 不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用可抑制SW1463 细胞活力（F=43.283，P=0.021）。DMBG+照射组在不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy）照射下的细胞存活率均低于DMBG组及照射组（P<0.05），细胞凋亡率明显高于DMBG组及照射组［（63.32±6.15）% vs （16.19±4.38）%，P<0.05；（63.32±6.15）% vs （17.24±5.17）%，P<0.05 ］；DMBG+照射组G2 /M期细胞比例增加到（61.50±5.25）%，G0 /G1期细胞比例减少为（17.36±3.17）%，上调了γ-H2AX蛋白表达，并下调了DNA-PK蛋白表达，与DMBG组及照射组比较差异有统计学意义（P<0.05）；裸鼠移植瘤体积和重量明显变小，抑瘤率亦明显高于DMBG胍组和照射组［（68.51±2.58）% vs （20.74±2.61）%，P<0.05；（68.51±2.58）% vs （31.52±3.43）%，P<0.05］。结论 二甲双胍对直肠癌SW1463细胞及其裸鼠移植瘤具有放疗增敏作用，可能与DMBG联合放疗后改变肿瘤细胞周期分布，抑制肿瘤细胞对DNA损伤的自我修复能力有关。     

顺铂耐药乳腺癌细胞株的建立及FANCF 基因在耐药中的作用

[摘要] 目的：探讨三阴性乳腺癌顺铂（cisplatin, DDP)耐药细胞和敏感细胞中FA/BRCA通路关键基因FANCF的表达和功能,以及与DDP耐药的相关性。方法：DDP浓度递增法诱导建立乳腺癌细胞MDA-MB-231的DDP耐药细胞株MDA-MB-231/DDP;通过RNAi技术敲减MDA-MB-231 敏感细胞和DDP耐药细胞中FANCF,并在mRNA和蛋白水平进行敲减效果验证。CCK-8 法检测DDP耐药细胞株增殖活性,Western blotting 法检测该细胞中FANCF蛋白表达,流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期和凋亡情况,实时定量PCR（RT-qPCR）法检测FANCF mRNA的表达。结果：MDA-MB-231细胞DDP诱导3个月建立的MDA-MB-231/DDP细胞株耐药指数为13.5,其G0/G1 期细胞增多、S期和G2/M期细胞减少。MDA-MB-231/DDP细胞中FANCF mRNA和蛋白表达水平显著升高（均P<0.01）。FANCF敲低后MDA-MB-231/DDP细胞凋亡增加,细胞对DDP的药物敏感性显著升高（均P<0.01）。结论：FANCF基因通过抗凋亡作用导致MDA-MB-231细胞对DDP的耐药性,FANCF是乳腺癌治疗的一个潜在靶点。     

电离辐射对胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：研究电离辐射对体外胃腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响。方法：~（60）Coγ射线单次照射胃腺癌BGC-823细胞,照射剂量分别为0、2、4 Gy,利用MTT和克隆形成率实验检测各剂量组BGC-823的增殖能力;同时利用Annexin-V/PI双染法检测各剂量组BGC-823细胞的凋亡;用PI单染测定各剂量组BGC-823的细胞周期。结果：与0 Gy组相比,2、4Gy 60Coγ射线照射可显著抑制胃腺癌BGC-823细胞的增殖（P〈0.05）,诱导BGC-823细胞在照射后依次出现S期和G2/M期阻滞。4Gy 60Coγ射线照射后48h,凋亡细胞比例显著高于对照组（P〈0.05）。结论：60Coγ射线照射可抑制胃腺癌细胞BGC-823增殖、诱导胃癌细胞出现周期阻滞和细胞凋亡。     

Cox-2在乳腺癌多药耐药中的作用及其与P-gp、MRP1的关系

目的通过检测环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,Cox-2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的对化疗药物敏感性及其对P-gp、MRP1表达的影响,探讨Cox-2在乳腺癌细胞肿瘤多药耐药（multidrug resistance,MDR）中的作用及其作用机制。方法 （1）MTT法检测丝裂霉素（MMC）及其与不同浓度Cox-2抑制剂nimesulide联合作用对MDA-MB-231的抑制作用（IC50）;（2）流式细胞术检测不同浓度nimesulide作用后,细胞凋亡率的变化及Cox-2、P-gp、MRP1的表达情况。结果 （1）以25、50μmol/L的nimesulide与MMC联合作用,MDA-MB-231细胞的IC50值（5.89±0.66、3.31±0.30）小于MMC单独作用的IC50值（8.59±1.16）且呈剂量依赖性,差异有统计学意义;（2）nimesulide可诱导细胞凋亡,且随着浓度的增加,凋亡率也随之增加（0.13±0.15至29.2±0.95）,差异有统计学意义;（3）25、50μmol/L nimesulide作用于MDA-MB-231细胞后,Cox-2、P-gp、MRP1的表达值均下降。结论 nimesulide能增加乳腺癌细胞株MDA-MB-231对化疗的敏感性,诱导细胞凋亡;Cox-2参与肿瘤多药耐药（MDR）,且可能通过影响P-gp、MRP1的表达来实现。     

ATM基因在低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中的作用

目的：探讨低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中ATM基因的作用。方法：EL-4细胞应用渥曼青霉素处理后接受低剂量0.075 Gy预先照射,再分别进行较高攻击剂量照射（1.0,1.5和2.0 Gy）,RT-PCR和免疫荧光法检测ATM mRNA及蛋白表达。同时应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期进程变化。结果：渥曼青霉素能够阻断ATM基因在mRNA及蛋白水平的表达。应用渥曼青霉素后直接接受攻击剂量照射和应用渥曼青霉素后先接受低剂量0.075Gy预先照射后再接受攻击剂量照射,均能诱导EL-4细胞发生适应性反应。结论：ATM基因可能不影响低剂量电离辐射诱导EL-4细胞发生适应性反应。     

放射诱导多倍体乳腺癌细胞衰老和自噬

目的探讨衰老和自噬在放射诱导的多倍体乳腺癌细胞中的作用。方法在6 MV X射线模式下用7 Gy剂量照射乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞,分别于第3天(Day 3组)、5天(Day 5组)、7天(Day 7组)、11天(Day 11组)和19天(Day 19组)观察细胞形态变化,采用流式细胞术检测细胞倍性,β⁃半乳糖苷酶检测细胞衰老情况,Western blot检测衰老和自噬相关蛋白的表达。应用GEPIA工具分析PLK1在乳腺组织及乳腺癌组织中的表达差异。结果7 Gy剂量照射后,Day 3组、Day 5组、Day 7组MDA⁃MB⁃231细胞体积变大,多倍体细胞亚群(DNA含量>4 N)比例均明显高于未经放射处理的对照组MDA⁃MB⁃231细胞(均P<0.0001),同时发生细胞衰老现象。与未经放射处理的对照组相比,Day 3组和Day 5组中DNA损伤修复蛋白PARP,DNA合成相关蛋白Rb、E2F⁃1、E2F⁃2表达下调,自噬相关蛋白LC3B/LC3A比值显著升高;核膜完整性相关蛋白Lamin B1、DNA损伤修复蛋白PARP表达下调,DNA损伤应答相关蛋白PLK1表达上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与乳腺组织相比,PLK1在乳腺癌组织中高表达(P<0.05)。结论放射诱导乳腺癌细胞发生衰老现象可能是多倍体细胞形成的有利条件,衰老和自噬现象也可能有助于多倍体细胞自我修复去倍化增殖。     

早熟染色体凝聚最长染色体长宽比和最长与最短染色体长度比作为估算辐射剂量指标的研究

目的：用花萼海绵体诱癌素A（calyculin A,CA）诱导早熟染色体凝聚（prematurc chromosome condensation,PCC）,探索将G_2/M-PCC细胞中最长染色体长宽比（L/B）和最长与最短染色体长度比（L/L）用于分析电离辐射损伤和作为估算辐射剂量指标的可行性。方法：分别用0、4、8、12、16和20Gy（剂量率为1Gy/min）的~（60）Coγ射线照射外周血,培养48h后用50nmol/L CA诱导PCC。分析各射线照射剂量组G_2/M-PCC指数,并进一步分析G_2-PCC、M-PCC中L/B和L/L值的变化,建立L/B和L/L值与射线照射剂量之间的剂量-效应曲线。结果：用CA可成功诱导人外周血淋巴细胞产生PCC,G2/M-PCC指数随着照射剂量水平的增高而降低（P〈0.05）。G2-PCC、M-PCC分裂相中的L/B和L/L值在8～20 Gy范围内显著增大（P〈0.05或P〈0.01）,在同样照射剂量水平上L/L值较L/B值增加更快（P〈0.05或P〈0.01）。结论：CA诱导淋巴细胞G2/M-PCC中的L/B和L/L值可用于电离辐射损伤程度的测定和作为估算辐射剂量的指标。     

Changes in Radiation Sensitivity and Steroid Receptor Content Induced by Hormonal Agents and Ionizing Radiation in Breast Cancer Cells in Vitro

Possible influences of tamoxifen and estradiol on in vitro radiation sensitivity and cellular receptor content after irradiation and/or tamoxifen treatment were studied in breast cancer cell lines; estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PgR) positive cell lines MCF-7 and MCF-7/TAM^R-1 and the ER and PgR negative cell line MDA-MB-231. The tamoxifen resistant MCF-7/TAM^R-1 cells were more resistant to ionizing radiation than the MCF-7 and MDA-MB-231 cells. Exposure to tamoxifen made the MCF-7 cells more radiation resistant, while estradiol made the MDA-MB-231 cells more radiation sensitive. A radiation dose of 6 Gy reduced the ER content in cytosol in both MCF-7 and MCF-7/TAM^R-1 cells, but brought no alterations to the PgR content. In MCF-7/TAM^R-1 cells tamoxifen exposure significantly increased the ER and reduced the PgR content, an effect not observed in the MCF-7 cells. To conclude, the present study indicates that irradiation and tamoxifen may modify the ER and PgR content in cytosol in breast cancer cells. Hormonal treatment may alter the radiation sensitivity, even in ER negative cells, suggesting that hormonal agents may act both via receptor and non-receptor binding mechanisms.     

不同浓度洋地黄对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究不同浓度洋地黄对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,不同浓度洋地黄处理,MTT法观察洋地黄对MDA-MB-231细胞活性、增殖的影响;Hoechst 33342染色观察洋地黄促细胞凋亡作用,细胞色素C含量及caspase 9活性变化检测线粒体损伤程度;生长曲线法观测洋地黄对细胞增殖的影响,Western blot检测细胞周期蛋白表达。结果:高浓度的洋地黄（≥100nmol/L）引起MDA-MB-231细胞凋亡,促进细胞色素C释放,增加caspase 9活性。低浓度洋地黄（30nmol/L）不引起肿瘤细胞凋亡,但是抑制细胞增殖,抑制细胞周期素D1和细胞增殖抗原PCNA的表达,增强p21cip1蛋白的表达。结论:高浓度洋地黄通过线粒体损伤通路促进乳腺癌细胞凋亡,低浓度洋地黄通过干扰细胞周期抑制乳腺癌细胞的生长。     

缬沙坦对阿霉素所致心肌细胞损伤保护作用的初步研究

目的 研究缬沙坦（valsartan,VAT）对阿霉素（doxorubicin,DOX）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法 采用不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX处理H9C2心肌细胞建立DOX心肌细胞损伤模型。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果 与对照组比较,不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX作用H9C2心肌细胞12 h和24 h,细胞存活率均随药物浓度增加而降低（P＜0.01）。其中1 μmol/L DOX作用24 h即可明显引起H9C2心肌细胞损伤,细胞存活率为（75.5±5.6）%,细胞凋亡率为（11.94±2.07）%,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;10 μmol/L的 VAT预处理H9C2心肌细胞24 h后可明显抑制1 μmol/L DOX引起的心肌毒性作用,与单用 DOX组比较,细胞存活率升高［（74.2±3.0）% vs （89.3±4.0）%,P＜0.01］、细胞凋亡率下降［（13.15±6.07）% vs （11.01±3.17）%,P＜0.01］、G₀/G₁期细胞所占比例明显减少［（69.21±2.03）%  vs （50.28±1.21）%,P＜0.05］。结论 VAT能抑制DOX所致的心肌细胞损伤,保护作用可能与其调控细胞凋亡有关。