NS398对Aβ肽损伤原代培养海马神经元的影响

目的:探讨Cox-2抑制剂NS398对损伤神经元的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠海马神经元随机分为空白对照组、Aβ肽细胞模型组和NS398实验组。以10μmol/L Aβ25-35制作原代培养海马神经元损伤模型,以四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞存活率,免疫细胞化学法检测Cox-2、Caspase-3的表达。结果:Aβ25-35细胞模型组神经元形态变化明显,细胞存活率明显下降,Cox-2和Caspase-3表达增强,与空白组比较有显著差异(P<0.01)。NS398使神经元细胞存活率明显提高并使Cox-2和Caspase-3表达减弱,与Aβ肽模型组比较具有显著性差异(P<0.01)。结论:Aβ25-35导致Cox-2和Caspase-3的表达增强,并使SD大鼠原代培养海马神经元变性、死亡。NS398可能通过抑制Cox-2和Caspase-3的表达保护原代培养海马神经元。     

β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞Sorcin、RyR2mRNA基因表达的影响

目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ)对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的影响.方法 新生1-3天的Wistar大鼠,取其海马组织,原代培养8d后,用已老化过的Aβ25-35对海马神经细胞进行1μmol/L,10μmol/L和20 μmol/L剂量的染毒,培养24和48 h后分别观察海马神经细胞形态、和海马神经细胞内钙调节相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的基因表达水平.结果 随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,可发现随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,海马细胞出现细胞凋亡的比例增加,其中Aβ25-35 20 μmol/L染毒48 h培养海马细胞中出现了大量早期凋亡细胞和少量中期凋亡细胞.实时定量PCR结果显示,10 μmol/L Aβ5-35在对原代细胞染毒24和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量为(1.42±0.03)和(1.63±0.02),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20μmol/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24h和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量(2.11±0.05)和(2.23±0.05),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20 μmo]/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24和48h后RyR2mRNA的相对表达量为(1.64±0.03)和(1.95±0.03),表达显著高于对照组相(P＜0.05).结论 Aβ具有神经毒性,可抑制海马神经细胞的生长,可通过作用于钙调节相关蛋白的表达,诱发阿尔茨海默氏病(AD)的发生.     

APP17肽对SAM鼠脑内Bcl-2和Caspase-3凋亡相关因子的影响

APP17肽是产生老年斑的主要成分β-淀粉样前体蛋白中具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段。本课题组曾将APP17肽作用于D-半乳糖脑老化模型，结果发现其具有防止或逆转处于凋亡过程中的神经元恢复或接近正常状态的功能，对Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡也有保护作用；将APP17肽直接作用于糖尿病大鼠，发现其可以改善末梢神经的脱髓鞘，抑制神经元胞质内钙离子浓度的升高，从而保护神经细胞免受钙离子中介谷氨酸的毒性。为进一步探讨APP17肽对神经细胞的保护作用，本实验利用尼氏染色和免疫组化方法，观察APP17肽治疗后，快速老化小鼠SAMP10脑内神经元数目的变化以及细胞凋亡执行因子Caspase-3和凋亡抑制基因Bcl-2表达的变化。     

与IGFBP-3相关的RXRα、STAT-1信号通路在β-淀粉样肽1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、视网膜X受体α(RXRα)及信号转导子和转录激动子(STAT-1)在β-淀粉样肽1～42(Aβ1～42)诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用.方法 以原代培养的大鼠海马神经元为模型,分为对照组和Aβ1～42组,加入不同浓度的凝聚态Aβ1～42,原位缺口末端标记法(TUNEL)观察凋亡细胞的形态;免疫细胞荧光方法 检测凋亡细胞及IGFBP3、RXRα阳性细胞;免疫印迹法检测RXRα蛋白和STAT-1蛋白的表达水平.结果 20μmol/L Aβ1～42作用大鼠海马神经元24h能明显诱导神经元凋亡,表现为TUNEL/DAPI染色出现阳性细胞;20μmol/LAβ1～42作用大鼠海马神经元3～6h后IGFBP3阳性细胞、RXRα阳性细胞、RXRα蛋白的表达水平均较对照组有明显增高(P<0.01),在较高水平保持一段时间后逐渐下降;而STAT-1蛋白的表达水平则显著降低(P<0.01).结论 IGFBP3/RXRα或STAT-1信号转导通路可能在Aβ1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中起一定作用.     

转铁蛋白受体1对小鼠海马神经元生长与分化的影响

目的探讨转铁蛋白受体1(TfR1)对小鼠海马神经元生长与分化的影响。方法取胚胎18.5 d小鼠原代海马神经元培养,培养7 d后使用TfR1 shRNA p GFP-V-RS干扰质粒转染小鼠海马原代神经元使TfR1基因沉默,采用绿色荧光蛋白(GFP)分析及Western blotting技术检测TfR1 shRNA的转染效率;4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)及TUNEL法检测干扰后海马神经细胞凋亡情况,免疫荧光技术检测凋亡后神经细胞骨架的变化及神经元突起生长的形态特征。结果 TfR1 shRNA质粒能有效使神经细胞内TfR1基因沉默;TfR1基因沉默后,原代海马神经细胞凋亡率增加,细胞骨架部分崩解,且神经元树突突起长度明显增长(P0.05)。结论转铁蛋白受体1可通过调控小鼠海马神经元树突的生长来影响海马神经元的分化。     

miRNA-132上调p75ECD和Trk A抑制A β对大鼠海马CAI区神经元毒性作用

目的 探讨miRNA-132调控p75ECD和TrkA抑制Aβ对大鼠海马CAI区神经元损伤的机制.方法 将60只健康大鼠分为对照组、Aβ组和miR-132组,每组20只.用免疫组化检测大鼠海马区Trk A的阳性细胞数量;CCK8检测神经细胞活力;TUNEL检测神经细胞凋亡程度;Western blot检测p75ECD、Trk蛋白表达,比较各组差异性.结果 Aβ组海马CAI区Trk A细胞数与对照组相比明显减少,而miR-132组与A β组相比明显增多;A β组较对照组神经元活性减弱,神经元损伤严重,修复能力缓慢,miR-132组较Aβ组神经元活性增强,神经元损伤程度下降;Aβ组与对照组相比神经元凋亡程度严重,miR-132组较Aβ组神经元凋亡程度减轻;Aβ组与对照组相比神经元中p75ECD、TrkA蛋白表明下降,miR-132组较Aβ组神经元中p75ECD、TrkA蛋白水平上升.结论 miRNA-132过表达可激活p75ECD和TrkA,降低Aβ对神经元的损伤.     

海马背侧注射β-淀粉样蛋白_(25～35)激活胶质细胞和p38丝裂原活化蛋白激酶诱导神经元凋亡

目的探讨海马背侧注射β-淀粉样蛋白25~35(Aβ25~35)后胶质细胞与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)激活的关系,及Aβ25~35诱导神经元凋亡的可能机制。方法采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察海马背侧注射Aβ25~35后不同时段小胶质细胞(MG)、星形胶质细胞(AS)的激活和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)在海马组织中的表达;酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)在海马组织中的含量;Nissl染色法观察海马神经元存活;TUNEL染色观察海马神经元凋亡。结果注射Aβ25~35后海马内抗特异性标记小胶质细胞(ox-42)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、和p-p38MAPK的表达与TNF-α、IL-1β的含量同步增加,于7d达到高峰,而Nissl阳性神经元数量逐渐减少,TUNEL阳性神经元数量则逐渐增多,亦于7d达到高峰。结论海马背侧注射Aβ25~35可能通过激活胶质细胞和p38MAPK,使TNF-α,IL-1β含量增加导致海马神经元凋亡。     

线粒体缺陷对原代培养新生大鼠海马神经元微管相关蛋白表达的影响

目的：观察线粒体呼吸链复合体IV（即细胞色素C氧化酶）抑制剂叠氮钠（NaN₃）对神经元细胞骨架系统的影响,探讨线粒体缺陷在阿尔茨海默病发病中的作用。方法：将叠氮钠与原代培养的新生大鼠海马神经元共同孵育,MTT法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜系统观察细胞微管结构及微管相关蛋白表达的变化。结果：叠氮钠8-128 mmol/L与培养的神经元共孵育6-24 h,细胞存活率下降,呈时间及剂量依赖性;NaN₃ 16、64 mmol/L作用6 h,使细胞微管结构损伤,微管相关蛋白表达下降,尤以突起内最为显著。结论：叠氮钠与培养的神经元共孵育导致神经元损伤,其机制与线粒体缺陷致细胞骨架系统异常有关。     

脑神经肽类似物Rattin对β-淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元损伤的影响

目的:探究Humanin衍生物Rattin拮抗Aβ_(31-35)所致在体海马theta节律紊乱及离体细胞损伤的保护作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为4组(vehicle+saline、vehicle+Aβ_(31-35)、Rattin+saline以及Rattin+Aβ_(31-35)),大鼠海马区注射Aβ_(31-35)/Rattin后,利用微电极记录在体海马局部场电位;分离培养SD大鼠乳鼠原代海马神经元,利用CCK-8法检测Aβ_(31-35)/Rattin处理后细胞活性,利用激光共聚焦显微镜荧光成像技术观察细胞内[Ca~(2+)]、利用real-time RT-PCR检测MAPK、PI3K以及STAT3的表达。结果:(1) Aβ_(31-35)抑制了大鼠海马CA1区的theta节律,Rattin处理可拮抗Aβ_(31-35)所致的theta节律压抑;(2)单独给予Rattin不影响原代海马神经元的存活率,但中等浓度(10μmol/L)或高浓度(100μmol/L)的Rattin明显保护了海马神经元免受Aβ_(31-35)引起的细胞伤害,该效应可被酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein完全逆转;(3)单独注射Aβ_(31-35)使海马神经元STAT3 mRNA表达下调、p38MAPK和PI3K mRNA表达增加,联合给予Rattin则阻止了STAT3 mRNA的下调,但对p38MAPK和PI3K mRNA表达没有影响;(4) Rattin预处理抑制了Aβ_(31-35)诱发的细胞内[Ca~(2+)]升高,此效应可被JAK抑制剂AG490所阻断。结论:Rattin能够有效减轻Aβ_(31-35)引起的海马theta节律压抑和剂量依赖性拮抗Aβ_(31-35)所致的细胞毒性。这些神经保护作用与Rattin对JAK/STAT3信号转导途径的激活以及细胞内Ca2+稳态的维持有关。     

与IGFBP-3相关的RXRα、STAT-1信号通路在β-淀粉样肽1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3）、视网膜X受体α（RXRα）及信号转导子和转录激动子（STAT-1）在β-淀粉样肽_1～42(Aβ_1～42)诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用。方法 以原代培养的大鼠海马神经元为模型，分为对照组和Aβ_1～42组，加入不同浓度的凝聚态Aβ_1～42，原位缺口末端标记法（TUNEL）观察凋亡细胞的形态；免疫细胞荧光方法检测凋亡细胞及IGFBP3、RXRα阳性细胞；免疫印迹法检测RXRα蛋白和STAT-1蛋白的表达水平。结果 20μmol/L Aβ_1～42作用大鼠海马神经元24h能明显诱导神经元凋亡，表现为TUNEL/DAPI染色出现阳性细胞；20μmol/L Aβ_1～42作用大鼠海马神经元3～6h后IGFBP3阳性细胞、RXRα阳性细胞、RXRα蛋白的表达水平均较对照组有明显增高（P<0.01），在较高水平保持一段时间后逐渐下降；而STAT-1蛋白的表达水平则显著降低（P<0.01）。 结论 IGFBP3/RXRα或STAT-1信号转导通路可能在Aβ_1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中起一定作用。     

寡聚态β-淀粉样肽1～42可通过胶质-炎症反应损伤神经元

目的 观察寡聚态β-淀粉样肽1～42(Oligo-Aβ1～42)诱导的小胶质细胞条件培养液对Neuro-2A神经元细胞的影响,探讨炎症介质在胶质介导的神经元损伤中的作用.方法 以Oligo-Aβ1～42诱导BV-2细胞,制备小胶质细胞条件培养液,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定Neuro-2A神经细胞的活力,AO-EB染色荧光显微镜观察计数细胞凋亡和坏死率;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小胶质细胞培养上清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及前列腺素E2(PGE2)水平;Griess法检测上清NO水平;免疫印迹法测定小胶质细胞胞质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平.结果 Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液(Aβ-CM)明显引起Neuro-2A神经细胞损伤,MTF法显示神经元活力随Aβ诱导剂量的增加而逐渐下降(P<0.01),并且浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的Aβ-CM组比同浓度Aβ单纯组神经细胞的存活率更低,分别为(53.75±3.95)%和(34.61±2.72)%(Aβ-CM组与Aβ单纯组相比P<0.05,P<0.01);联合作用组(Aβ-CM+Aβ)神经细胞存活率下降更明显,两因素方差分析显示,Aβ诱导的小胶质细胞条件培养液与单纯Aβ(1.0μmol/L)有协同作用[F(3.39)=53.16,P<0.001].AO-EB荧光观察计数显示,低浓度(0.2μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液可引起神经细胞发生凋亡性损伤,较高浓度(1.0～5.0μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导不仅引起神经细胞凋亡,还引起细胞发生坏死性改变.进一步研究显示,低浓度(0.2～5.0μmol/L)的Oligo-Aβ1～42明显增加小胶质细胞培养上清中TNF-α、PGE2、NO的产量及胞质COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),呈现一定的量效关系.结论 低浓度Oligo-Aβ1～42可通过胶质-炎症反应加剧神经元损伤,其作用可能与Oligo-Aβ1～42诱导小胶质细胞产生炎症介质及胞质内COX-2、iNOS蛋白表达水平增高有关.     

β淀粉样蛋白_(25～35)对PC12细胞骨架的毒性作用

目的建立阿尔茨海默病(AD)的细胞模型,并探讨β淀粉样蛋白_(25～35)(Aβ_(25～35))对细胞骨架的神经毒性机制。方法采用MTT法检测不同浓度的Aβ_(25～35)对PC12细胞存活率的影响,应用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法和TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法和鬼笔环肽(phalloidin)染色观察细胞骨架的形态变化。结果 Aβ_(25～35)经过"老化"处理后,可以明显引发PC12细胞死亡,导致PC12细胞发生凋亡,并具有剂量依赖性(P0.05)。Aβ_(25～35)也可以引起细胞骨架解体,同样具有剂量依赖性(P0.05)。结论 PC12细胞的细胞骨架对Aβ_(25～35)的神经毒性非常敏感,细胞骨架的解体很可能是AD重要的病理学改变,同时Aβ是AD发病机制的关键分子。     

circ_0000285 靶向miR-127-5p 调控阿尔茨海默病细胞模型的损伤

目的：探讨环状RNA 0000285(circ＿0000285)是否靶向miR-127-5p调控阿尔茨海默病（AD）细胞模型损伤。方法：采用β淀粉样蛋白25-35多肽片段（Aβ25-35）诱导神经细胞瘤细胞SK-N-SH建立AD体外细胞模型。采用实时定量PCR(RT-qPCR)测定circ＿0000285和miR-127-5p表达水平。试剂盒测定丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤（Bcl-2）和Bcl相关x蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用上述方法测定干扰circ＿0000285表达或过表达miR-127-5p对AD模型细胞凋亡、损伤的影响。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR用于验证circ＿0000285对miR-127-5p的靶向调控作用。结果：Aβ25-35处理显著上调circ＿0000285表达及Bax蛋白水平,下调miR-127-5p及Bcl-2蛋白表达水平,增加MDA含量,降低SOD和GSH-Px活性,并提高细胞凋亡率。干扰circ＿0000285表达或过表...     

神经钙调蛋白介导IL-1β诱导的NF-κB p65的表达及神经毒性

目的：探讨神经钙调蛋白在白细胞介素-1β(IL-1β)和兴奋性氨基酸（NMDA）诱导皮层神经元NF-κΒ表达及神经损伤机制的作用。 方法： 应用IL-1β或NMDA诱导原代培养的胎鼠皮层神经元损伤；通过MTT法、LDH释放率测定观察细胞生存力和损伤程度；通过Western blotting分析NF-κB p65的表达；通过膜联蛋白（Annexin V）和碘化丙啶（PI）免疫荧光法观察细胞凋亡或坏死程度。 结果： MTT和LDH释放率测定结果表明， IL-1β和NMDA都可分别引起神经细胞的生存力明显下降，并呈量效依赖关系。IL-1β和NMDA在引起细胞损伤的同时都可促进NF-κΒ p65的表达。应用神经钙调蛋白抑制剂CsA明显抑制IL-1β引起的细胞损伤，也明显抑制IL-1β诱导的NF-κB p65表达增加。但是，环孢菌素A(CsA)不能明显抑制NMDA诱导的细胞损伤（P>0.05），对NMDA诱导的NF-κΒ p65的表达的抑制作用也不明显。Annexin V 和 PI免疫荧光检测表明，IL-1β诱导的神经损伤以神经元凋亡为主，而NMDA则主要引起坏死。 结论： 神经钙调蛋白参与介导IL-1β诱导的NF-κΒ p65的表达及神经细胞凋亡，但对NMDA诱导的神经元坏死则不起主要作用。说明神经钙调蛋白是细胞凋亡信号通路中重要分子。     

细胞自噬在Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞中的作用

目的:探究β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的神经细胞损伤作用是否与调节细胞自噬相关,并基于Akt/mTOR通路对其作用机制进行初步探究。方法:5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L和25μmol/L的Aβ_(25-35)与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞共同孵育24 h,MTT法检测细胞活力,Western blot检测细胞内微管相关蛋白1轻链3-I(LC3-I)、微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。选用合适浓度的Aβ_(25-35),观察自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别与Aβ_(25-35)联用后上述指标的变化。结果:各浓度Aβ_(25-35)均能引起SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力下降。Aβ_(25-35)能够增加自噬标志蛋白LC3-II蛋白表达,提高LC3-II/LC3-I水平,下调Akt和mTOR蛋白磷酸化水平(P0.05)。与自噬诱导剂Rapa联用,细胞活力未见明显变化,而细胞内LC3-II蛋白表达升高,LC3-II/LC3-I明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低(P0.05);与自噬抑制剂3-MA联用,LC3-II蛋白表达和LC3-II/LC3-I水平有下降趋势,p-Akt/Akt水平明显下降(P0.05)。结论:Aβ_(25-35)可能通过下调Akt和mTOR蛋白磷酸化水平而诱导SH-SY5Y细胞自噬状态及损伤。     

5-LO过表达神经细胞对铝盐损伤的易感性观察

目的：初步观察5-LO过表达神经细胞对铝盐损伤的易感性。方法：以铝盐和原代海马-皮层神经元混合培养。通过检测LDH漏出率、MTT吸光度以及病理形态学变化来评价铝负荷对原代皮层-海马混合培养神经元的毒性作用。建立铝盐致神经细胞损伤模型。把原代皮层-海马混合培养神经元与携带5-LO重组体的腺病毒共同培养。观察5-LO过表达的神经元对铝负荷损伤的易感性。结果：皮层-海马混合神经元在与铝盐混合培养24小时后．     

β淀粉样蛋白25～35急性给药和慢性孵育对神经元Ca2+非依赖性的K+电流作用的比较

目的 探讨β-淀粉样蛋白25～35(Aβ25-35)急性给药和慢性孵育对神经元Ca2+非依赖性的K+电流作用的区别. 方法 急性分离大鼠海马及培养皮层神经元; Aβ25-35急性给药(3min)或慢性孵育(24h);利用全细胞膜片钳技术记录Ca2+非依赖性的K+电流以及Calcein-AM法检测神经元活力. 结果 Aβ25-35急性给药使急性分离的海马神经元Ca2+非依赖性的K+电流幅度明显降低(n=11),而慢性孵育则使培养的皮层神经元该电流幅度明显升高(n=11).前者是Aβ25-35通过对K+通道直接的效应发挥其抑制作用,而后者可能主要是通过Aβ25-35上调通道蛋白,改变通道数量而发挥作用. 结论 不同的给药方式通过不同的机制对海马和皮层神经元的Ca2+非依赖性的K+电流产生不同的作用.     

星形胶质细胞对β-淀粉样蛋白诱导神经元凋亡的影响

目的:于大鼠海马原代培养的细胞模型中明确星形胶质细胞(Astrocytes,AS)在β-淀粉样蛋白(Am-yloid-β,Aβ)诱导的神经元凋亡中是否发挥作用,以及其发挥作用的主要方式。方法:建立4天龄Wistar大鼠海马原代混合培养体系(MIX-S)、纯化原代AS培养体系(AS-S)及纯化原代神经元培养体系(NE-S),用Aβ处理三种不同体系细胞,24 h后收集三种培养液(MNE-Aβ24 h、MAS-Aβ24 h、MMIX-Aβ24 h)及control组三种培养液(MNE-control、MAS-control、MMix-control)。在下一批NE-S和MIX-S培养细胞中,分别用不同培养液或Aβ处理24 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡数量的变化。结果:Aβ处理后NE-S凋亡比例显著高于MIX-S,其中MIX-S凋亡与control组相近,MIX-S表现出较弱的Aβ毒性易感性。比较Aβ处理24 h后收集的培养液(MAβ24 h,Aβ前处理)与对照组培养液(Mcontrol)再加Aβ处理(Aβ后处理)培养细胞,发现Aβ前处理(MNE-Aβ24 h、MAS-Aβ24 h)比Aβ后处理(MNE-control、MAS-control再加Aβ)诱导NE-S凋亡的效果更加显著。而Aβ前、后处理对MIX-S组神经元诱导凋亡的效果类似,接近Control组凋亡比例。结论:AS参与保护Aβ诱导的海马神经元凋亡,其保护作用依赖于AS与神经元构建的MIX-S完整性而并不是由AS分泌入培养液的成分介导。单纯AS-S在Aβ刺激下不仅失去保护功能,且释放促凋亡物质。     

β-细辛醚对缺糖缺氧再灌注损伤原代大鼠海马神经元的保护作用*

 目的：探讨β-细辛醚对缺糖缺氧再灌注损伤原代海马神经元的保护作用及其机制。方法：利用MTT法检测缺糖缺氧再灌注诱导的原代大鼠海马神经元的细胞活力,用分光光度法检测caspase-3的活性,用Western blotting法检测p-JNK和Bcl-2的蛋白表达,RT-PCR检测Bcl-2和caspase-3 mRNA表达。结果：与正常对照组比较,缺糖缺氧再灌注损伤组细胞活力明显下降,caspase-3活性明显升高,p-JNK蛋白表达和caspases-3 mRNA表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.05）。与缺糖缺氧再灌注损伤组比较,不同剂量β-细辛醚预处理组抑制了这些指标的改变（均P＜0.05）。结论：β-细辛醚通过抑制JNK介导的线粒体通路抑制缺糖缺氧再灌注诱导的原代海马神经元凋亡。     

原花青素抑制Aβ25-35诱导的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y分泌Aβ1-42

目的研究原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ_(25-35))诱导的人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)淀粉样肽产生的影响及可能的作用机制。方法以Aβ_(25-35)体外处理SH-SY5Y细胞诱导细胞损伤模型,应用PC和(或)Wnt/β-catenin信号通路的内源性抑制剂分泌型蛋白Dickkopf-1(Dkk1)干预。设立对照组、Aβ_(25-35)组、不同浓度PC+Aβ_(25-35)组、Dkk1组和Dkk1+PC+Aβ_(25-35)组。MTT法检测细胞活力;Western blot检测β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达水平;ELISA检测Aβ_(1-42)分泌水平。结果与对照组相比,Aβ_(25-35)可使细胞活力降低(P0.05),可降低细胞中β-catenin蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平(P0.05),增加细胞中Aβ_(1-42)分泌(P0.05)。PC干预可改善Aβ_(25-35)导致的细胞活力降低(P0.05),增加细胞中β-catenin蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平(P0.05),减少Aβ_(1-42)分泌(P0.05)。应用Dkk1后,PC提高细胞中β-catenin蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平及降低Aβ_(1-42)分泌水平的能力下降(P0.05)。结论 PC可抑制Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞Aβ_(1-42)生成,该作用可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。