硝普钠对体外培养的海马神经元NF-κB和caspase-3基因表达的影响

目的探讨NO供体硝普钠（SNP）诱导体外培养的海马神经元凋亡与核因子-kappaB（NF）-κB p65和caspase-3表达变化的关系。方法终浓度分别为0、25、50、100、200、400μmol/L的SNP处理海马神经元24 h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察凋亡的形态学改变;DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征;用RT-PCR检测NF-κB p65、caspase-3 mRNA表达变化;Western印迹检测NF-κB p65、caspase-3蛋白表达的变化。结果SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率;荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体,其细胞核明显固缩、凝聚和断裂;电泳图谱显示清晰的DNA梯度。随着SNP剂量的增加,NF-κB p65 mRNA、NF-κB p65蛋白表达逐渐增加;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化;从50μmol/LSNP起,caspase-3相对酶活性显著增加,为对照组的3.02倍,100μmol/L达最大值。结论SNP可诱导培养的海马神经元凋亡,其凋亡机制可能与增加NF-κB p65表达及激活caspase-3酶原有关。     

糖基化终末产物上调大鼠心脏微血管内皮细胞NF-κB和COX-2表达

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对大鼠心脏微血管内皮细胞因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)表达的影响,探讨AGEs与糖尿病血管病变间的关系. 方法 体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞至亚融和状态时,以不同浓度糖基化白蛋白BSA-AGEs与之作用不同时间后,检测内皮细胞NF-κB及COX-2蛋白的表达. 结果 25、50、100、200mg/L BSA-AGEs作用后,NF-κB和COX-2蛋白表达呈剂量依赖性增多,100mg/L AGEs作用6、12、24、48h,NF-κB和COX-2蛋白表达呈时间依赖性增多. 结论 BSA- AGEs可促进体外培养微血管内皮细胞NF-κB和COX-2的表达,其作用可能与NF-κB的活化有关.     

替米沙坦对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1、核因子κB表达及细胞黏附的影响

目的观察替米沙坦对同型半胱氨酸诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)表达及与单核细胞黏附的影响。方法胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞;RT-PCR检测VCAM-1 mRMA的表达;Western blot检测VCAM-1、NF-κB蛋白的表达;ROSE BENGAL染色法检测单核细胞-血管内皮细胞黏附功能。结果与空白对照组相比,同型半胱氨酸增强了人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白的表达水平及与单核细胞黏附能力。替米沙坦(1000 nmol/L组)明显降低了同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白及与单核细胞的黏附水平(P<0.01)。与同型半胱氨酸组比,PDTC(NF-κB抑制剂)组NF-κB p65蛋白、VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白表达水平均明显降低,内皮细胞与单核细胞的黏附水平也明显降低(P<0.01)。结论替米沙坦抑制了VCAM-1 mRMA和蛋白的表达及内皮与单核细胞的黏附水平,其机制可能是通过抑制NF-κB而抑制炎症反应及内皮损伤。     

乔松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨蜂胶乔松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法用消化灌注法收集人脐静脉内皮细胞进行体外原代培养,于培养液中给予10 mg/L脂多糖处理以建立细胞凋亡模型,乔松素处理组于模型条件培养液中分别加入不同浓度的乔松素(50、100和200 mg/L)干预,共同孵育24 h。光镜下观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率以观察细胞增殖变化,缺口末端标记技术TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测信号转导系统核因子κB亚基p65核易位变化。结果模型组内皮细胞凋亡率明显高于阴性对照组,不同浓度乔松素组细胞凋亡率均低于模型组,同时细胞存活率增高(P0.01)。加入不同浓度乔松素能显著降低脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞核因子κB p65核易位活性(P0.01)。结论乔松素可通过抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡而保护内皮细胞功能,其机制可能与抑制核因子κB p65活化有关。     

依达拉奉对Aβ25-35诱导分化PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉(MCI-186)对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响.方法 实验对象分为3组:MCI-186保护组(MCI-186 20 μmol/L,Aβ25-35 30 μmol/L)、Aβ25-35干预组(Aβ25-35 30 μmol/L)和正常对照组.采用MTT法测定细胞生存率;RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA表达变化,Western印迹法检测NF-κB p65蛋白表达的变化.结果 Aβ25-35能增加NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,促进细胞凋亡;MCI-186能抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞凋亡.结论 MCI-186具有神经细胞保护作用,可能的机制与其抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白表达有关.     

重组人红细胞生成素通过上调核因子-κB p65减少同型半胱氨酸诱导的培养内皮细胞凋亡

目的 探讨红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的血管内皮细胞凋亡的影响以及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65的作用.方法 培养人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)分为正常对照组、Hcy处理组、EPO预处理组和单纯EPO组.四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测NF-κB p65表达.结果 正常对照组、Hcy处理组、EPO预处理组和单纯EPO组(n均=3)细胞凋亡率分别为(2.23±0.4)％、(12.8±1.2)％、(3.2±0.5)％和(2.18±0.6)％(F=1 105.630,P =0.000).Hcy处理组细胞凋亡率较正常对照组显著性增高(P=0.000);单纯EPO组(P=0.616)与正常对照组无显著性差异;EPO预处理组(P =0.000)和单纯EPO组(P =0.000)均较Hcy处理组显著性降低.蛋白质印迹分析显示,正常对照组基本不表达NF-κB p65.Hcy处理组、单纯EPO组和EPO预处理组(n均=3)分别为66.1±7.3、1 046.1 ±71.3和1 362.4±25.3,三组间存在显著性差异(F=1 310.954,P=0.000).EPO预处理组(P=0.000)和单纯EPO组(P=0.000) NF-κB p65表达均显著性高于Hcy组;EPO预处理组显著性高于单纯EPO组(P=0.007).结论 EPO可能通过上调NF-κB p65表达减少Hcy诱导的内皮细胞凋亡.     

右美托咪定联合Tol样受体4抑制剂对缺氧复氧心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制

目的探讨右美托咪定(DEX)联合Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对缺氧复氧(H/R)心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制。方法心肌细胞H9C2分为对照(Con)组、H/R组(H/R损伤)、DEX组(1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤)、TAK-242组(30μmol/L TAK-242,再行H/R损伤)和DEX+TAK-242组(30μmol/L TAK-242及1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤处理)。各组细胞复氧培养6 h后,采用MTT法、流式细胞仪、试剂盒、酶联免疫吸附法检测细胞增殖、凋亡、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)、TLR4和核因子B p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果五组细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平、IL-1β、TNF-α含量比较差异均有统计学意义(F=316.938、330.004、839.933、169.750、378.365、476.535、298.527、99.219、293.498,P<0.05)。与Con组相比,H/R组细胞的凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平、细胞上清液中IL-1β和TNF-α含量均明显升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(均P<0.05)。与H/R组相比,DEX组、TAK-242组和DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax蛋白、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白、IL-1β、TNF-α的表达水平均明显降低,Bcl-2蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。与DEX组、TAK-242组相比,DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达、IL-1β、TNF-α表达水平更低,Bcl-2蛋白的表达更高(均P<0.05)。结论DEX和TAK-242联合可协同抑制H/R引起的心肌细胞凋亡和炎症反应,其作用机制可能与协同抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

二苯乙烯苷通过核因子κB信号通路抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的 研究二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用,探讨二苯乙烯苷是否通过核因子κB信号通路调节凋亡相关基因的表达来抑制细胞凋亡.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、过氧化氢组和二苯乙烯苷组,采用显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测核因子κB p65、IκB、bcl-2蛋白的表达.结果 过氧化氢能显著抑制内皮细胞增殖,增加细胞凋亡率;并增加核因子κB p65蛋白的表达,降低bcl-2和IκB蛋白的表达.二苯乙烯苷预处理后显著增加氧化损伤内皮细胞的增殖率,并降低细胞凋亡率;与过氧化氢组相比,二苯乙烯苷组核因子κB p65蛋白的表达显著降低,bcl-2和IκB蛋白的表达显著升高(P<0.01).结论 二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与其抑制核因子κB/ IκB信号通路并上调bcl-2蛋白的表达有关.     

N-乙酰半胱氨酸对阿霉素致心力衰竭兔心肌细胞凋亡的作用

目的:探讨慢性心力衰竭(HF)兔心肌核因子-κB(NF-κB)活化、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)与心肌细胞凋亡的关系以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对心肌细胞凋亡的作用。方法:设立对照组,剩余动物以阿霉素复制HF模型,随机分为HF组和NAC组,药物干预4周。观测3组心肌细胞凋亡指数、血清和心肌一氧化氮(NO)浓度、iNOS蛋白在心肌细胞中表达的水平,以及NF-κB p65的核表达和结合活性的改变,观察NAC对上述指标的影响。结果:与对照组比较,HF组心肌细胞凋亡指数增高,iNOS蛋白表达增多,NF-κB p65易位和核内表达增多,血清和心肌NO浓度升高(P<0.001),NF-κB p65活化与iNOS表达呈直线相关(r=0.973,P<0.001)。NAC组结果示NAC可显著减少NF-κB p65核内表达及iNOS蛋白的表达,降低血清和心肌NO水平,降低心肌细胞凋亡指数(P<0.01～0.001)。结论:HF时心肌细胞中NF-κB的活化及其促进iNOS的转录合成导致NO大量生成,参与了心肌凋亡的发生。NAC可显著拮抗NF-κB的大量活化核表达,减弱iNOS的表达上调,抑制NO的生成,减少心肌细胞凋亡。NF-κB的活化可能是iNOS表达的重要调控机制之一。     

NF-κB活化与星形细胞肿瘤凋亡的关系

目的 探讨核因子κB(NF-κB)在星形细胞肿瘤组织中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系.方法 应用免疫组化方法检测 85例星形细胞肿瘤组织及10例正常大脑组织中的NF-κB p65,并用Tunel法检测凋亡肿瘤细胞,分析NF-κB p65的表达与患者生存时间的关系.结果 星形细胞肿瘤中NF-κB p65蛋白阳性表达率为60.0%,对照组中NF-κB p65无表达.NF-κB p65在低级别与高级别星形细胞肿瘤的表达相比,P＜0.05.随着肿瘤恶性程度的增加,肿瘤细胞凋亡指数(AI)增高,NF-κB p65与AI呈正相关关系(r=0.437,P＜0.01).随访资料完整的45例中NF κB p65阴性者3 a生存率为72.2%,明显高于阳性者的33.3% (P＜0.05).结论 NF-κB是与星形细胞肿瘤相关的癌蛋白,NF-κB参与星形细胞肿瘤的凋亡.     

苯磺酸左旋氨氯地平对AGEs诱导内皮细胞MCP-1分泌的影响

目的 观察钙通道阻滞剂苯磺酸左旋氨氯地平(SHD)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)分泌的影响,为高血压并糖尿病患者的治疗提供依据.方法 取以胶原酶消化、分离并经内皮细胞表面抗原Ⅷ因子免疫组化鉴定的脐静脉内皮细胞,按2×106/mL种植在6孔培养板中,在无血清培养基中静止24h后随机分为空白对照组、牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGEs组及SHD组,其中空白对照组不加干预因素,BSA对照组予50 mg/L BSA,AGEs组分别予25、50、100 mg/L的AGEs共培养24h；SHD组分别加入2.5、5.0、10.0 mg/L的SHD培养1h,而后加入100 mg/L的AGEs共同孵育24h；用ELISA检测细胞内MCP-1分泌,蛋白免疫印迹法测定NF-κB p65蛋白表达.结果 ①AGEs处理后人脐静脉内皮细胞分泌MCP-1增加,且存在浓度梯度效应,其中AGEs组50、100 mg/L处理者与空白对照组和BSA对照组比较P均＜0.05；SHD处理后AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1分泌减少,且存在浓度梯度效应,其中SHD组SHD质量浓度为5.0、10.0 mg/L者与空白对照组和BSA对照组比较P均＜0.05.②AGEs组质量浓度为25、50、100 mg/L者NF-κB p65蛋白表达量分别是空白对照组的1.24倍、3.10倍和4.05倍,其中50、100 mg/L者与空白对照组比较P均＜0.05；与AGEs组相比,SHD组NF-κB p65蛋白表达降低,且存在浓度梯度效应,SHD组SHD质量浓度为2.5、5.0、10.0 mg/L者分别降低1.08倍、1.74倍和2.94倍,其中5.0、10.0 mg/L者与AGEs组比较P均＜0.05.结论 SHD可通过下调NF-κB表达抑制AGEs诱导的人内皮细胞炎性因子MCP-1分泌,此为其在高血压并糖尿病患者治疗中的应用提供了依据.     

瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1/S1P/NF-κB信号通路的影响

目的探讨经氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激后,人脐静脉内皮细胞鞘氨醇激酶(Sphk)1、1-磷酸鞘氨醇(S1P)、基质金属蛋白酶(MMP)-3、核转录因子(NF)-κB p65表达的变化及瑞舒伐他汀(Rt)对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1-S1P信号通路的影响。方法实验分为空白对照组,ox-LDL(50μg/ml)处理组,Rt(0.1、1、10μg/ml)干预组,RT-PCR检测细胞Sphk1、S1P、MMP-3因子水平;Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白表达;观察药物干预后细胞Sphk1、S1P、MMP-3、NF-κB p65因子的变化。MTT检测细胞增殖活性。结果 ox-LDL处理组细胞Sphk1、S1P、NF-κB p65、MMP-3的表达均显著高于空白对照组(P<0.05),Rt各干预组较ox-LDL处理组降低(P<0.05)。ox-LDL处理组细胞增殖明显受抑制,Rt各干预组细胞增殖率均较ox-LDL处理组显著上升(P<0.001)。结论 Sphk1-S1P信号传导通路的激活,导致下游炎症因子NF-κB p65、MMP-3的高表达,参与ox-LDL诱导的内皮细胞损伤过程,Rt可能通过抑制Sphk1/S1P信号传导通路介导的与炎症有关的血管损伤,延缓动脉粥样硬化的进程。     

阿托伐他汀对HMGB1诱导血管内皮细胞激活的影响

目的探讨阿托伐他汀能否抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导的血管内皮细胞激活,阐明其潜在的分子机制。方法体外培养大鼠胸主动脉内皮细胞,分别用不同浓度的阿托伐他汀、HMGB1、TLR4特异性抑制剂CLI-095预处理内皮细胞,荧光定量分析中性粒细胞与内皮细胞的黏附活力;实时定量RT-PCR与Western blot分别检测TLR4、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和E-选择素mRNA和蛋白的表达水平;电泳迁移率实验(EMSA)测定核因子κB(NF-κB)p65的DNA结合活性。结果阿托伐他汀(0.1～10μmol/L)呈剂量依赖性地抑制HMGB1诱导的血管内皮细胞活化。阿托伐他汀预处理能明显下调HMGB1诱导的TLR4 mRNA和蛋白表达水平(P均0.05);阿托伐他汀、CLI-095均能有效抑制HMGB1诱导的NF-κB p65的DNA结合活性以及ICAM-1和E选择素的表达水平(P均0.05)。结论阿托伐他汀可通过调节黏附分子(ICAM-1和E-选择素)的表达而显著抑制HMGB1诱导的血管内皮细胞活化效应,其机制可能与它抑制TLR4的表达及NF-κB激活有关。     

吡咯烷类对糖基化终产物诱导的老年大鼠内皮细胞纤连蛋白mRNA表达的影响

目的观察抗氧化剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(PDTC)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的老年大鼠内皮细胞核转录因子(NF-κB)活性、活化蛋白(AP-1)组成成分c-jun和纤维连接蛋白(Fn)mRNA表达的影响。方法取24月龄的SD大鼠主动脉内皮细胞进行原代培养,再给予不同剂量AGEs及PDTC继续培养并分为5组,采用荧光免疫化学法检测细胞NF-κB活性和RT-PCR检测细胞c-jun和Fn mRNA的表达。结果不同剂量AGEs组中,NF-κB活性呈浓度依赖性上升, AGEs 25 mg／L组和50 mg／L组分别为(0．25±0．02)％和(0．42±0．03)％,与未给AGEs对照组(0．04±0．01)％比较,差异有统计学意义(P<0．05);AGEs还上调了Fn mRNA和c-jun mRNA的表达(P<0．05)。给予PDTC干预后,抑制了AGEs诱导的NF-κB激活,干预后AGEs 25 mg／L组和50 mg／L组NF-κB分别为(0．21±0．01)％和(0．22±0．01)％,与干预前比较,差异有统计学意义(P< 0．05);PDTC干预后,AGEs诱导的c-jun和Fn mRNA的表达均有所下调。结论抗氧化剂PDTC通过抑制NF-κB和c-jun途径,下调了AGEs诱导的血管基底膜Fn的表达。     

TNF-α诱导脑胶质瘤细胞凋亡过程中NF-κB、IκB活性的研究

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)及其抑制因子(IκB)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脑胶质瘤细胞株U 251细胞凋亡过程中生物活性的变化。方法应用流式细胞仪检测TNF-α对U-251细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。用免疫组化方法检测肿瘤细胞p65的表达,用W estern b lot检测IκB蛋白的变化。结果TNF-α可诱导U 251细胞凋亡,激活细胞中p65并诱导IκB降解;抗氧化剂二硫碳吡咯烷醇(PDTC)可抑制TNF-α诱导的IκB的降解及NF-κB的激活,增强TNF-α诱导U 251细胞的凋亡。结论TNF-α在诱导U 251细胞凋亡的过程中可激活NF-κB。抑制NF-κB活性,可增强TNF-α诱导细胞凋亡的作用。     

基于NF-κB通路探讨鹿角壮骨胶囊对兔膝骨关节炎的保护作用机制

目的观察鹿角壮骨胶囊对兔膝骨关节炎模型核因子(NF)-κB通路的影响,探讨其对膝骨关节炎的保护作用机制。方法采用木瓜蛋白酶右侧膝关节腔内注射诱导建立兔膝骨关节炎模型,将24只长耳大白兔随机分为正常组、模型组、治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予鹿角壮骨胶囊0.3 g/(kg·d)灌胃,治疗4 w后,采用Western印迹法检测各组膝关节滑膜组织中NF-κB抑制蛋白(IκB)α、NF-κB p65、骨桥蛋白(OPN)的表达,采用免疫组化法观察各组膝关节软骨组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子(HIF)-2α、NF-κB p65的阳性表达水平。结果 Western印迹结果显示,与正常组比较,模型组兔膝关节滑膜IκBα、NF-κB p65、OPN的蛋白相对表达量明显升高(P<0.05),而治疗组IκBα、NF-κB p65、OPN的蛋白相对表达量明显低于模型组(P<0.05)。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组兔膝关节软骨VEGF、HIF-2α、NF-κB p65的表达明显升高(P<0.05),而治疗组VEGF、HIF-2α、NF-κB p65的表达明显低于模型组(P<0.05)。结论鹿角壮骨胶囊可能通过抑制NF-κB信号通路的激活发挥缓解膝骨关节炎的作用。     

NF-κB在TNF-α致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究核转录因子-κB（nuc lear factor-κB,NF-κB）在TNF-α诱导培养的人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并用10 ng/m l的TNF-α进行诱导,不同时间段观察NF-κB活性、NF-κB抑制物IκBα表达以及细胞凋亡的情况,EMSA测定NF-κB活性,W estern-b lot检测IκBα的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡;并用NF-κB的抑制剂PDTC预处理细胞后来观察TNF-α诱导细胞凋亡的情况。结果TNF-α以时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,NF-κB的活性在处理后10 m in开始增强,2 h后恢复正常,IκBα的表达在10m in开始下降,2 h恢复正常;PDTC能抑制TNF-α诱导的凋亡。结论TNF-α在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,IκBα降解,NF-κB激活,从而引起细胞的凋亡。     

硫化氢对自发性高血压大鼠血管炎症反应的调节作用

目的 探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对自发性高血压大鼠(SHR)血管炎症反应的调节作用.方法 4周龄Wistar-Kyoto(WKY)雄性大鼠和SHR雄性大鼠分为4组:WKY大鼠对照组、SHR对照组、SHR+硫氢化钠(NaHS,H2S供体)组及SHR+炔丙基甘氨酸(PPG,H2S生成关键酶抑制剂)组,饲养至9周.尾容积法测清醒时大鼠血压,免疫组织化学方法检测主动脉内皮细胞膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和核转录因子抑制因子-α(IκB-α)的蛋白表达,原位杂交分析检测主动脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达.结果 SHR对照组血压显著高于WKY对照组(P<0.05),主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65明显高(P均<0.01),胞浆IκB-α蛋白表达明显低(P<0.01).SHR+NaHS组血压显著低于SHR对照组,主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达明显低(P<0.05),胞浆IκB-α蛋白表达明显增高(P<0.05),SHR+PPG组主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达更高(P<0.05),胞浆IκB-α蛋白表达显著低(P<0.05).结论 H2S可通过抑制SHR血管炎症发挥抗高血压效应.H2S的抗血管炎症效应可能通过上调IκB-α的表达,降低NF-κB p65的表达,抑制ICAM-1 mRNA的转录和蛋白表达实现.     

从NF-κB信号通路研究至真方对HCT-8/VCR细胞多药耐药的影响及机制

[目的]观察至真方含药血清对人大肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/VCR多药耐药的影响,并从NF-κB信号通路探讨其作用机制。[方法]用8%、16%、32%体积分数的至真方含药血清干预人大肠癌敏感细胞株HCT-8与耐长春新碱细胞株HCT-8/VCR,CCK8法检测细胞多药耐药性及存活率;ELISA法检测NF-κB活性;AnnexinV/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测NF-κB/p65、IκB-α和Caspase-3蛋白的表达。[结果]体积分数8%时,高、中、低剂量含药血清组对HCT-8/VCR细胞的抑制率与空白血清组比较差异均有统计学意义(P0.01),且呈浓度递增趋势;8%、16%、32%体积分数的中剂量组至真方含药血清作用于HCT-8/VCR细胞24h后,NF-κB活性较HCT-8/VCR阴性对照组明显降低(P0.01);至真方含药血清可促进HCT-8/VCR细胞凋亡,且在一定范围内细胞凋亡率呈浓度依赖性;经至真方含药血清处理后,HCT-8/VCR细胞NF-κB/p65蛋白表达较用药前明显下降(P0.05),IκB-α蛋白表达明显上调(P0.05),Caspase-3蛋白表达明显上调(P0.05)。[结论]至真方含药血清可降低HCT-8/VCR细胞NF-κB的活性,一定程度上逆转了大肠癌细胞的多药耐药,其机制可能与抑制该通路分子开关IκB-α的磷酸化,下调NF-κB/p65蛋白的表达,从而上调通路下游的Caspase-3蛋白的表达,诱导HCT-8/VCR细胞凋亡有关。     

川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养人冠状动脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度川芎嗪为1μmol/L组、10μmol/L组、100μmol/L组。用RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因和蛋白表达;采用免疫荧光法观察NF-κB p65蛋白的核转位。结果与对照组比较,ox-LDL组MCP-1、ICAM-1基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,10μmol/L组、100μmol/L组MCP-1、ICAM-1基因表达明显降低(P<0.01),1μmol/L组、10μmol/L组MCP-1、ICAM-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。免疫荧光显示,1μmol/L组、10μmol/L组可抑制NF-κB p65亚基的核转位。结论川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。