地塞米松对骨髓间充质干细胞凋亡影响的体外实验研究

目的 探讨地塞米松对猪骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响.方法 体外分离猪MSCs,培养扩增后,培养基中分别加入浓度为0,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L地塞米松,培养24 h后, Hoechst 33258染色,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术分析不同浓度地塞米松对 MSCs凋亡的影响.结果 Hoechst 33258染色可见:1×10-6 mol/L地塞米松诱导后MSCs部分细胞核与细胞质中可见浓染致密的颗粒荧光.流式细胞术检测显示各实验组细胞凋亡率较对照组高,尤其以浓度为 1×10-6 mol/L最显著.结论 地塞米松可引起MSCs凋亡,有浓度依赖性, 1×10-6 mol/L引起MSCs凋亡最为显著.     

芸香诱导K562细胞凋亡机制探讨

目的:研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中Caspase-3基因的表达.方法:体外培养白血病K562细胞,生长曲线观察芸香对K562细胞的细胞抑制作用,MTT法观察芸香的细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR观察Caspase-3的表达,CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性.结果:芸香浓度为2×10-5mol/L、4×10-5mol/L、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制;不同浓度quercetin处理K562细胞48 h 后,IC50为4×10-5mol/L;Hoechst 33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香处理后细胞发现G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;以Caspase-3 基因和内参照β-actin序列设计引物,PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到约300 bp 条带;CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性明显升高(P＜0.05).结论:芸香诱导白血病细胞Caspase-3基因表达,细胞发生凋亡,caspase-3途径诱导凋亡是芸香作用机制之一.     

环磷酰胺对小鼠精子胞内钙离子浓度的影响

目的 观察腹腔注射环磷酰胺对小鼠精子胞内钙离子浓度的影响.方法 将20只雄性昆明小鼠随机分为对照组和模型组,按60mg/kg体重给对照组小鼠腹腔注射生理盐水(NS),另按60mg/kg体重给模型组小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5d,常规饲养观察34d,然后对小鼠精子进行精液常规分析,对精子行FITC-AV/PI染色后用流式细胞仪检测精子凋亡率,用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM处理精子后用流式细胞仪检测精子胞内Ca2+浓度.结果 对照组与模型组精子密度分别为(5.20±1.34)×106/ml和(1.73±0.03)×106/ml,精子活力分别为(14.49±0.30)%和(6.64±1.88)%,精子活率分别为(68.39±15.13)%和(39.96±4.89)%,精子凋亡率(AV/PI)分别为(8.38±0.45)和(14.84±1.22),胞内Ca2+浓度分别为(133.14+11.86)和(80.84±6.92),以上项目两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子密度、活力、活率降低,精子凋亡增加,精子胞内Ca2+浓度降低.造成精子胞内Ca2+浓度降低的可能机理是环磷酰胺降低了精子特异性Ca2+通道蛋白功能.     

双环铂对激素抵抗型前列腺癌细胞PC3的凋亡诱导作用

目的采用体外实验观察双环铂对激素抵抗型前列腺癌细胞PC3的凋亡诱导作用,并初步探讨其凋亡机制。方法 CCK-8法观察双环铂对PC3细胞增殖的抑制,Hoechst染色荧光显微镜下观察凋亡细胞,Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率,PI单染流式细胞仪检测细胞周期变化。结果双环铂可抑制PC3细胞的增殖,48hIC50为（195±19.0）×10-6 mol/L.;PC3细胞在经双环铂处理后,漂浮细胞呈明显的凋亡细胞形态,经Hoechst染色荧光显微镜下可见凋亡小体等典型的细胞核染色质形态学改变;双环铂诱导的PC3细胞凋亡呈剂量依赖性及时间依赖性。低浓度的双环铂可引起PC3细胞G2期阻滞,随药物浓度的升高sub-G1期细胞比例明显增加。结论体外实验显示双环铂可诱导PC3细胞的凋亡,双环铂对细胞周期的影响可视为其抗肿瘤活性的机制之一。     

精子凋亡率与精子密度、活率、活力及活性氧关系探讨

目的 探讨精子凋亡率与精子密度、活率、活力与精浆活性氧关系.方法 分析85例男性不育患者精液样本,采用计算机辅助精液分析进行精液参数检测,采用Annexin V/PI染色法检测精子凋亡率,采用TBA法测定精浆活性氧.结果 精子凋亡率与精子密度之间有显著负相关性(P＜0.01);与精子活率之间无显著相关性(P＞0.05):与精子活力之间有显著负相关性(P＜0.05);与精浆活性氧之间有显著正相关性(P＜0.05).结论 精子捌亡率与精子密度和活力有相关性,精子凋亡率增加可能是少、弱精子症患者不育的原因之一,精浆活性氧升高可能是精子凋亡率增加的原因之一.     

AnnexinⅤ法检测HepG2细胞凋亡

目的 应用Annexin V-PITC/PI技术检测化疗药物顺铂(CDDP)诱导肝癌细胞(HepG2)凋亡作用的特性.方法 将不同浓度的CDDP与肝癌细胞株HepG2共孵育4 h、15 h、24 h、36 h后,应用流式细胞术和Annexin V-PITC/PI双染免疫荧光法观察细胞凋亡情况.结果 CDDP可以诱导HepG2细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,发生凋亡和坏死细胞的比例增加.结论 化疗药物CDDP诱导肝肿瘤细胞凋亡呈时间和剂量依赖性.AnnexinⅤ-FITC /PI双标记流式细胞术可用于早期细胞凋亡的检测.     

染料木黄酮对去势小鼠脾细胞凋亡及雌激素受体表达的影响

目的探讨染料木黄酮(GEN)对去势(OVX)小鼠脾细胞凋亡、凋亡基因Fas、FasL及雌激素受体(ER)亚型表达的影响。方法流式细胞仪检测不同浓度GEN对OVX小鼠脾细胞的凋亡率,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内Fas、FasL及ERα、ERβ mRNA的表达。结果OVX+GEN组与青年组相比,脾细胞凋亡率在GEN两个高浓度(37.0、92.5μmol/L)时都显著增高(P均<0.05);而Fas基因表达在GEN 92.5μmol/L时显著增高(P<0.05),FasL基因表达在GEN两个高浓度均显著高于青年组(P均<0.05);与OVX空白组相比,GEN最高浓度(92.5μmol/L)时凋亡率显著增高(P<0.01),Fas、FasL基因的表达均显著增高(P均<0.05)。ERα、ERβ基因的表达随GEN浓度增加而呈增加趋势,在GEN最高浓度(92.5μmol/L)时显著高于OVX空白组(ERα:P<0.05;ERβ:P<0.01)。结论高浓度GEN致脾细胞凋亡,与上调凋亡促进基因Fas、FasL基因表达有关。低浓度GEN可能逆转OVX小鼠脾细胞凋亡。高浓度GEN增加ERα、ERβ基因表达。GEN对脾细胞凋亡、ERs表达的调节可能不完全通过ER途径。     

吸烟对重庆主城区成年男性精子凋亡及精液质量的影响

目的:探讨吸烟对重庆市主城区健康成年男性精子凋亡和精液质量的影响。方法:235例健康成年男性根据吸烟习惯分为吸烟组和不吸烟组。不吸烟组89例,吸烟组146例。采用计算机辅助精液分析系统检测精液常规参数;流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI荧光染色检测精子凋亡(AN-/PI-、AN+/PI-、AN+/PI+、AN-/PI+精子比率),并对吸烟组和不吸烟组的各项参数进行比较研究。结果:与不吸烟组比较,吸烟组的早期凋亡精子(AN+/PI-)率高于不吸烟组[(8.1±5.1)%vs(6.8±3.8)%,P=0.039],而晚期凋亡精子(AN+/PI+)率两组间差异无显著性[(5.6±5.2)%vs(5.5±5.1)%,P=0.87];两组间精液量、精子密度、精子活动率、活力和正常形态精子率等精液常规指标的差异均无显著性(P=0.30;0.82;0.37;0.81;0.84)。结论:吸烟者早期精子凋亡率较不吸烟者高,提示吸烟可能诱导精子出现早期的细胞损害。精子凋亡可作为较精液常规指标更为敏感的生物标志物反映吸烟对男性精子造成的损伤。     

益精方对环磷酰胺小鼠精子胞内钙离子浓度的干预作用

目的 从精子胞内钙离子的角度阐述益精方治疗弱精子症的机制.方法 将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、小剂量中药治疗组(SG)和大剂量中药治疗组(LG),按60mg/kg体质量给CG小鼠腹腔注射生理盐水,60mg/kg体质量给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺,qd,连续5d,第6d开始按体重分别给SG和LG小鼠灌服益精方,剂量分别为人类常规用量(以60kg为标准)的1倍和5倍,MG小鼠给予等体积的生理盐水灌胃,qd,连续34d,CG常规饲养,第40天对小鼠进行精液常规分析,对精子行FITC-AV/PI染色后用流式细胞仪检测精子凋亡率,用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM处理精子后用流式细胞仪检测精子胞内Ca2+浓度.结果 CG、MG、SG和LG精子胞内Ca2+浓度分别为133.14±11.86、80.84±6.92、88.05±3.31、99.08±7.17,MG胞内Ca2+浓度显著低于CG(P＜0.05),治疗后LG胞内Ca2+浓度显著升高,与MG比较差异有统计学意义(P＜0.05);精子活力分别为(14.49±0.30)％、(6.64±1.88)％、(11.99±1.01)％和(19.40±3.13)％;精子活率分别为(68.39±15.13)％、(39.96±4.89)％、(62.28±4.43)％和(73.61±5.05)％;精子密度分别为(5.20±1.34)×106/ml、(1.73±0.03)×106/ml、(2.08±0.01)×106/m和(3.31±0.56)×106/ml,MG活力、活率、密度显著低于CG (P＜0.05),经治疗后LG活力、活率、密度明显增加,与MG比较差异有统计学意义(P＜0.05),而与CG在活力和活率上没有明显区别;精子凋亡率分别为8.38±0.45、14.84±1.22、13.25±1.83、8.35±2.1,MG凋亡率显著高于CG (P＜0.05),治疗后LG凋亡率显著降低,与MG比较差异有统计学意义(P＜0.05)而与CG没有明显区别.结论大剂量益精方可提高因腹腔注射环磷酰胺造成的小鼠精子活力、活率低下状态,其改善精子活力的作用可能与益精方增加精子胞内Ca2+浓度有关.     

PI3K/AKT/FOXO1信号通路参与复方中药CFF-1诱导的前列腺癌细胞凋亡和周期阻滞

目的:研究复方中药CFF-1诱导前列腺癌细胞的凋亡作用及其相关分子机制的探讨。方法:通过形态学观察、噻唑蓝(MTT)比色实验、CCK-8实验测定前列腺癌细胞的存活能力;采用DAPI染色法测定细胞核凝缩破裂;运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定前列腺癌细胞的凋亡率。再通过PI单染流式细胞术测定前列腺癌细胞的周期变化;以及采用蛋白质免疫印迹实验检测PI3K/AKT/FOXO1信号通路以及其下游凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达。结果:复方中药CFF-1使前列腺癌细胞周期阻滞在G1期,并呈浓度依赖性降低细胞的存活能力、增加细胞核凝缩破裂以及核小体的形成,显著提高前列腺癌细胞的凋亡率。在分子机制上,CFF-1呈现浓度依赖性下调PI3K/AKT活性,降低FOXO1磷酸化水平,进而上调FOXO1的转录活性,最终影响凋亡相关基因和周期相关基因的表达。结论:CFF-1对前列腺癌细胞的生长有显著的抑制作用,并且通过PI3K/AKT/FOXO1信号通路诱导前列腺癌细胞周期阻滞并发生凋亡,对治疗前列腺癌具有潜在的临床应用价值。     

光动力治疗骨与软组织肉瘤的疗效及其机制

目的 探讨血卟啉单甲醚介导光动力疗法(hematoporphyrin monomethyl ether induced photodynamic therapy,HMME-PDT)的抗肉瘤效应及其机制.方法 流式细胞仪检测骨肉瘤细胞和成肌细胞的胞内HMME摄取,MTT法检测骨与软组织肉瘤细胞存活率,流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡率,Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡,不可逆caspase通路抑制剂及坏死抑制剂检测PDT介导的细胞死亡形式,蛋白免疫印迹和免疫组化检测肿瘤细胞中caspase-1、-3、-6、-9、PARP蛋白相对表达量,测定瘤体体积及瘤重评估PDT的抗肿瘤效应,HE染色检测肿瘤组织形态学改变.结果 光敏剂HMME选择性的聚集于骨肉瘤细胞中,而正常细胞摄取较少,且骨肉瘤细胞的摄取呈孵育时间及浓度依赖性.HMME-PDT能显著杀伤骨与软组织肉瘤细胞.HMME-PDT可明显诱导贴壁及悬浮培养骨肉瘤细胞发生凋亡.Hoechst 33342染色可见典型的凋亡改变.凋亡是HMME-PDT介导的细胞死亡的主要形式,且与caspase依赖的凋亡通路密切相关.HMME-PDT可明显上调caspase-1、-3、-6、-9、PARP蛋白表达量.HMME-PDT组肿瘤体积及瘤重均较空白组明显减小,且肿瘤区域出现广泛坏死.结论 HMME-PDT能有效地抑制肉瘤生长,其抗肉瘤效应与caspase依赖的凋亡通路密切相关.     

白蛋白超载通过线粒体经典途径诱导肾小管上皮细胞凋亡

目的研究线粒体经典途径在白蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法大鼠肾近曲小管细胞分别用0～40mg／ml低内毒素胎牛血清白蛋白处理24h,或用20rag／ml白蛋白处理0～24h,或在白蛋白处理同时加入蛋白水解酶抑制剂。处理后的细胞分别进行以下处理：固定后用Floechst 33342染色供计数凋亡细胞比例;以碘化丙啶染色观察坏死细胞;冰上裂解后供caspase-3活性测定;分离胞浆和线粒体组分供免疫印迹法分析Bax和细胞色素C的变化;固定后供免疫荧光染色。结果白蛋白呈剂量和时间依赖性诱导肾小管上皮细胞凋亡,并伴随有线粒体Bax活化、细胞色素C释放和蛋白水解酶激活,蛋白水解酶抑制剂可以抑制细胞凋亡。结论线粒体经典凋亡途径参与白蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡。     

甘草素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及自噬的影响

目的：观察甘草素对人乳腺癌MCF-7细胞生长、凋亡及自噬的作用。方法：不同浓度（0.05,0.10,0.20,0.40 mmol/L）的甘草素处理MCF-7细胞24,48,72 h后,采用MTT比色法测定细胞存活率。以上浓度的甘草素处理MCF-7细胞48 h后,用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡情况,用吖啶橙（AO）染色,观察细胞自噬。结果： 随着甘草素浓度的增加及作用时间的延长,MCF-7细胞的存活率不断降低,部分结果与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;随着草素浓度的增加,MCF-7细胞的凋亡率不断增高,从0.20 mmol/L开始,与对照组比较,差异有统计学意义（均P<0.01）。各浓度的甘草素作用下,MCF-7细胞均产生自噬现象,但随着甘草素浓度的增加,自噬活性呈现先升后降的趋势。结论：甘草素可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的生长,该作用与其促进凋亡及诱导自噬有关。

     

Role of downstream metabolic processing of proinflammatory fatty acids by 5-lipoxygenase in HL-60 cell apoptosis

BACKGROUND: Proinflammatory eicosanoids formed from arachidonic acid (AA) by lipoxygenase (LO) and cyclooxygenase (COX) pathways have been shown to inhibit apoptosis in certain cell types. This study determined whether inhibition of LO and COX increased apoptosis in AA-treated HL-60 cells in vitro. METHODS: HL-60 cells were incubated with 50 micromol/L AA and an enzyme inhibitor (1-10 micromol/L) for COX, LO, 12-LO, and 5-LO for 12 hours. Flow cytometry was used to assess viability, apoptosis, and necrosis. Apoptosis was further assessed using terminal dUTP nick end-labeling and DNA fragmentation. RESULTS: The highest concentration of LO inhibitors, but not COX inhibitors, decreased viability and increased apoptosis and necrosis in the presence of exogenous AA. CONCLUSION: These results suggest that disruption of the metabolism of AA by LO, in particular 5-LO, decreases cell survival and increases apoptosis. Thus, downstream metabolic processing of AA by LO but not COX plays a critical role in the regulation of HL-60 cell apoptosis.     

Single UV excitation of Hoechst 33342 and propidium iodide for viability assessment of rhesus monkey spermatozoa using flow cytometry

Many fluorescent probes excited by visible light have been used to assess sperm quality by flow cytometry. Developing a viability evaluation method using UV excited stains would be useful for multiparameter analysis of sperm function. This investigation was conducted to determine the efficacy of Hoechst 33342 (H342) and propidium iodide (PI) dual staining for evaluating rhesus monkey sperm viability through use of flow cytometry and excited by a single UV laser. The results showed that the live cells stained only with H342 strongly correlated with expected sperm viability, and flow cytometric analyses were highly correlated with fluorescence microscopic observation. Using H342/PI/SYBR-14 triple staining method, it was found that the live/dead sperm distributions were completely concordant in both H342/PI and SYBR-14/PI assays. In addition, this dual staining was extended with fluorescein isothiocyanate-conjugated peanut agglutinin (FITC-PNA) to simultaneously analyze viability and acrosome integrity of sperm cryopreserved using two different extenders, TTE and TEST, and indicated that TTE offered better preservation of plasma and acrosome integrity than TEST. Therefore, the H342/PI dual staining provides an accurate technique for evaluating viability of rhesus monkey sperm and should be valuable for multiparameter flow cytometric analysis of sperm function.     

丝裂霉素C诱导成纤维细胞凋亡的作用及其机制

目的 观察丝裂霉素C(MMC)对成纤维细胞诱导凋亡的作用及机制.方法 体外培养成纤维细胞并传至5～8代,分别用含有0～0.3g/L MMC的MEM培养液处理成纤维细胞12h后CCK-8试剂盒检测不同浓度MMC对成纤维细胞的生长抑制效果;以0～0.2g/L MMC处理细胞爬片后用Hoechest33342细胞核染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态并用image pro-plus软件计数凋亡细胞;按不加药培养细胞12 h作对照组、0.2g/L.MMC培养细胞12h、P13K/Akt抑制剂LY294002 100 nmol/L与MEK/ERK抑制剂PD98059 100nmol/L分别处理细胞1h后换新鲜培养基培养11h分为4组,提取胞质蛋白,Western blot法检测Caspase-3、p-ERK1/2、p-Akt表达量.结果 MMC对成纤维细胞的抑制率与药物浓度呈正相关性,0.2g/L MMC对细胞活性抑制率达50.21%;Hoeeheat33342细胞核染色随MMC浓度升高出现凋亡细胞核特征的染色质凝聚,边集,呈亮蓝色核的比率逐渐增高,凋亡细胞计数显示0.05、0.1、0.2g/L MMC处理组凋亡率显著高于其他低浓度组,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot检测0.2 g/L MMC组、PD98059组、LY294002组C8spase-3表达均显著高于对照组,p-ERK1/2、p-Akt表达均较对照组降低.结论 一定浓度的MMC可诱导成纤维细胞发生凋亡,其效应途径部分是通过降低ERK1/2、Akt的磷酸化水平使胞质内凋亡执行蛋白Caspase-3的表达水平增加,诱导成纤维细胞由正常增生状态转而发生凋亡减少胶原纤维生成,从而抑制瘢痕形成.     

Smac/Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 研究线粒体蛋白Smac/Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制。 方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成,再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复,诱导肾小管上皮细胞凋亡。应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生。用间接免疫荧光检测Smac/Diablo在细胞内的分布。分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白,以Western印迹检测胞质中Smac/Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平。 结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成;间接免疫荧光可见Smac/Diablo由线粒体释放至胞质;Western印迹可见胞质内Smac/Diablo的含量增多( P < 0.01);XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P < 0.05)。 结论 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Smac/Diablo释放至胞质,XIAP蛋白水平降低,进而激活caspase 3,介导肾小管上皮细胞凋亡。     

1-Methylhydantoin cytotoxicity on renal proximal tubular cells in vitro

1-Methylhydantoin is produced by bacterial creatinine deaminase in the intestinal tract of uremic patients and retaken up into the body. The present study was designed to explore the toxic effect of 1-methylhydantoin on renal proximal tubular cells in vitro. HK-2 (Human renal proximal tubular cell line) was used as the subject. The cell viability was assessed by MTT assay. The cytotoxicity of 1-methylhydantoin to HK-2 was determined by NAG release test. Apoptosis of cultured HK-2 was determined by flow cytometry (light scatter and propidium iodide/annexin V-FITC fluorescence) and by nuclear staining with Hoechst 33258. Cells were exposed to 1-methylhydantoin (0.25mMol/L, 0.5mMol/L, or 1mMol/L), or creatinine (1mMol/L) for 24 h. 1-methylhydantoin induced a significant (p < 0.01) dose-dependent loss of cell viability. 1-methylhydantoin-treated HK-2 displayed characteristic microscopic features of apoptosis: reduced cell size, nuclear disintegration, and membrane bleb formation. FACS analysis demonstrated that 1-methylhydantoin induced apoptosis as well as cell changes consistent with necrosis. The proportion of cells with nuclear changes of apoptosis, identified by flow cytometry, increased significantly (p < 0.01) after 1-methylhydantoin (0.5mMol/L ) for 24 h. The results of the present study clearly demonstrate that both 1-methylhydantoin and creatinine are toxic for proximal tubular cells but that the damage resulting from the 1-methylhydantoin is more severe.     

NF-κB、Caspase-3在腺苷诱导人HepG2细胞凋亡中的作用

目的 研究NF-κB、Caspase-3在腺苷(ADO)体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用.方法 将不同浓度的ADO(0.1～5 mmol/L)作用于HepG2细胞,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖的时间效应和剂量效应.2.0 mmol/L ADO单用或联合NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,100 μmol/L)作用HepG2细胞12 h、24 h,采用Hoechst 33342荧光染色法及流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡及细胞周期,Western blot技术检测NF-κB蛋白表达;荧光比色法测定Caspase-3酶活性.结果 ADO对HepG2细胞生长具有显著抑制作用,并呈一定的量效和时效关系.药物作用24 h、48 h的IC50分别为2.52 mmol/L和1.89 mmol/L.ADO单独处理HepG2细胞12 h和24 h或联合PDTC处理后,细胞凋亡率分别为8.30%、22.32%;20.18%、30.89%,均显著高于对照组(0.81%,P<0.001);ADO作用HepG2细胞后荧光显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变,FCM分析药物处理组显示典型特征性的亚二倍体凋亡峰(sub-G1),细胞生长周期阻滞于G0/G1期;同时伴有Caspase-3活性显著升高(P<0.05).ADO处理后显著增加了NF-κB蛋白表达(P<0.05);PDTC有效抑制了NF-κB表达,同时增加了 Caspase-3活性及ADO的细胞毒作用(P<0.05).结论 ADO诱导了HepG2细胞凋亡并活化Caspase-3.抑制NF-κB活性可通过Caspase-3途径增强ADO的细胞毒作用.