miR-499a-5p靶向调控CDKN1A基因在心肌细胞肥大中的作用机制研究

目的:探讨miR-499a-5p靶向细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,并将H9c2细胞随机分为正常对照(Con)组、细胞肥大模型(AngⅡ)组、转染对照(AngⅡ+miR-NC)组和转染(AngⅡ+miR-499a-5p)组。采用Image J软件测量单细胞表面积,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析各组细胞中miR-499a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测CDKN1A、cleaved Caspase-3以及心肌肥大标志蛋白心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-499a-5p和CDKN1A的靶向作用关系。结果:与Con组比较,AngⅡ组H9c2细胞表面积、凋亡率、CDKN1A、Cleaved Caspase-3、ANP、BNP和β-MHC蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而细胞活力和mi...     

三七总皂苷抗细胞凋亡作用与MIF/AMPK的关系研究

目的我们前期的研究表明三七总皂苷(panaxnotoginseng saponin,PNS)能够抗SGOD(serum,glucoseand oxygen deprivation)诱导的H9c2细胞凋亡,本论文我们进一步探讨PNS抗缺血诱导的心肌细胞凋亡的可能作用机制。方法将心肌H9c2细胞株分为正常对照组(control),模型组(model)和PNS组。DCFH-DA和JC-1荧光探针分别检测细胞内活性氧的水平和线粒体膜电位,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot检测MIF,AMPK和磷酸化AMPK(p-AMPK)以及cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果与model组比较PNS能够稳定线粒体膜电位,降低胞内ROS水平;PNS抗细胞凋亡的作用能够被MIF拮抗剂ISO-1显著逆转(P=0.000);Western blot结果显示SGOD处理后能够明显的升高胞内活化的caspase-3蛋白(cleaved caspase-3)的表达水平,同时升高MIF和p-AMPK蛋白的表达水平,而PNS能够显著的降低cleaved caspase-3的蛋白水平,并进一步促进MIF和p-AMPK蛋白的表达。结论 PNS能够抗线粒体途径介导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡的机制与激活MIF/AMPK有关。本研究将为进一步探讨PNS保护心脏的分子机制及将PNS更好地应用于临床治疗提供有意义的实验依据。     

lncRNA NEAT1调控miR-206对缺氧复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控miR-206对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响和机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧复氧诱导后lncRNA NEAT1和miR-206的表达水平。将lncRNA NEAT1小干扰RNA(si-lncRNA NEAT1)、miR-206模拟物(miR-206 mimics)分别转染H9c2细胞,缺氧复氧诱导后,检测细胞中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量以及细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9蛋白表达。利用荧光素酶报告基因实验以及RT-qPCR验证lncRNA NEAT1和miR-206的靶向结合关系。结果 缺氧复氧诱导后H9c2细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,miR-206的表达显著降低(P＜0.05)。转染si-lncRNA NEAT1或miR-206 mimics处理缺氧复氧H9c2细胞,细胞存活率显著升高,MDA、ROS含量以及LDH活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)。lncRNA NEAT1靶向miR-206并负调控miR-206表达。抑制miR-206部分逆转沉默lncRNA NEAT1对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡的影响(P＜0.05)。结论 沉默lncRNA NEAT1通过上调miR-206可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。     

TRAF6基因对缺氧复氧肝细胞凋亡、Caspase-3、Caspase-9表达及线粒体膜电位的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因对缺氧复氧(H/R)肝细胞凋亡、Caspase-3和Caspase-9表达及线粒体膜电位的影响。方法人正常肝L02细胞分为对照组(不进行转染和H/R处理)、H/R组(细胞缺氧12 h,复氧12 h)、H/R+NC组(转染NC后进行H/R处理)和H/R+si-TRAF6组(转染si-TRAF6后进行H/R处理)。Western blotting检测TRAF6、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达。流式细胞仪检测细胞凋亡率及膜电位变化。结果 si-TRAF6转染L02细胞后,细胞中TRAF6蛋白表达明显降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。H/R处理可明显上调L02细胞TRAF6、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达,促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位,而抑制TRAF6蛋白表达可降低TRAF6、Caspase-3和Caspase-9表达,抑制细胞凋亡,提高线粒体膜电位。结论抑制TRAF6基因表达可降低H/R诱导的L02细胞凋亡,提高线粒体膜电位,下调Caspase-3和Caspase-9表达。     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

沙库巴曲缬沙坦调节线粒体动力系统改善缺氧心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦（Sacubitril Valsartan,S/V）通过调节线粒体动力系统对缺氧H9c2心肌细胞凋亡保护作用。方法 实验分为3组: 对照组、造模组、造模 S/V组。流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（Reactive oxygen species,ROS）,JC-1检测线粒体膜电位,蛋白质免疫印迹法（Western blot,WB）检测线粒体融合蛋白1（Mfn1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）、动力相关蛋白 1 (Drp1)、线粒体分裂蛋白1（Fis1）、细胞色素C（CytC）、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白（Bax）及含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)表达情况。采用 GraphPad Prism 8统计软件进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析。结果 H9c2心肌细胞建立糖氧剥夺模型,经S/V处理光镜下心肌细胞形态学明显改善;流式细胞技术分析S/V明显降低细胞内ROS水平,抑制心肌细胞凋亡（P＜0.05）;荧光显微镜分析提示S/V明显改善线粒体膜电位水平（P＜0.05）;WB显示S/V可明显提升Mfn2、Mfn1、Bcl2蛋白表达水平,降低Drp1、Fis1、CytC、Bax及Caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 S/V可能通过促进线粒体融合、抑制线粒体分裂调节线粒体稳态,减少ROS生成,减轻心肌细胞凋亡。     

OPA1在缺氧心肌细胞凋亡中的保护作用

目的：探讨线粒体融合蛋白OPA1在缺氧环境下心肌细胞凋亡中的保护作用。方法：利用小干扰RNA(siRNA)在体外下调OPA1表达后,用流式检测对缺氧环境下心肌细胞凋亡的影响;用Western blot检测对缺氧环境下心肌细胞线粒体细胞色素c释放及Caspase-3与Caspase-9活性的影响;用流式分析对缺氧环境下心肌细胞活性氧ROS产生的影响。结果：下调OPA1可明显加重缺氧诱导的心肌细胞凋亡;下调OPA1可诱导线粒体细胞色素c释放并同时激活Caspase-3与Caspase-9的活性;下调OPA1可诱导心肌细胞中ROS产生。     

当归补血汤超滤物对大鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的探讨当归补血汤超滤膜提取物对大鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响。方法原代培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,阿霉素诱导心肌细胞凋亡。实验分正常组、阿霉素组(2.5 mg/L)、当归补血汤超滤膜提取物低、中、高剂量干预组(阿霉素造模前,预先给予含30,60,120 mg/L当归补血汤超滤膜提取物完全培养基培养2 h)。MTT法检测各组细胞存活率,荧光显微镜下各组细胞凋亡形态学观察,激光共聚焦技术测定各组心肌细胞线粒体膜电位水平,蛋白印迹法测定各组Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达水平。结果与正常组相比,阿霉素组心肌细胞存活数明显降低,可见细胞凋亡及线粒体膜电位降低;Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、Caspase-3表达水平升高(P0.05);与阿霉素组比较,当归补血汤超滤膜提取物干预组的心肌细胞存活数明显升高,凋亡细胞数目减少,线粒体膜电位升高,Bax、Caspase-3表达水平下调,Bcl-2蛋白表达水平上调(P0.05)。结论线粒体凋亡通路的激活是阿霉素诱导心肌细胞凋亡的机制之一,当归补血汤超滤膜提取物可调控该通路发挥心肌细胞保护作用。     

上调Yes相关蛋白对缺氧复氧心肌细胞损伤保护作用的实验研究

目的研究Yes相关蛋白(YAP)在缺氧复氧(H/R)心肌细胞损伤中的作用。方法用过表达YAP重组慢病毒感染心肌细胞,给予H/R处理,用real-time PCR和Western blot检测细胞中YAP表达情况。CCK8法测定增殖变化,二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞术检测凋亡变化,Western blot检测活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白水平,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blot法检测胞浆和线粒体中细胞色素C(Cytochrome C)蛋白水平。结果过表达YAP重组慢病毒感染可以提高H/R条件下心肌细胞中YAP表达水平。H/R处理后的心肌细胞增殖活性降低,LDH漏出率升高,细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白水平升高,ROS水平也升高,SOD活性降低,线粒体膜电位下降,胞浆中Cytochrome C蛋白水平升高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低。上调YAP可以提高H/R条件下心肌细胞增殖活性,降低LDH漏出率,减少细胞凋亡,降低细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白水平表达,提高SOD活性,减少细胞中ROS水平,提高线粒体膜电位,降低胞浆中Cytochrome C蛋白水平,提高线粒体中Cytochrome C蛋白水平。结论上调YAP减轻缺氧复氧心肌细胞损伤,减少细胞凋亡,作用机制可能与提高抗氧化酶活性,减少细胞内ROS水平,抑制线粒体凋亡途径有关。     

神经调节蛋白1通过ERK1-2通路减轻心肌细胞缺氧复氧损伤

目的探究神经调节蛋白1(NRG-1)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路减轻心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的作用。方法培养心肌H9c2细胞株,随机分为常规条件下用不含药物DMEM处理的对照组、H/R条件下用不含药物DMEM处理的H/R组、H/R条件下用含NRG-1 DMEM处理的NRG-1组、H/R条件下用含NRG-1及ERK1/2抑制剂PD98059处理的NRG-1+PD组。检测细胞增殖活力、凋亡率及细胞中的凋亡基因、炎症指标、ERK1/2。结果 H/R组细胞的OD_(490)水平明显低于对照组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、核因子κB(NF-κB)、ERK1/2的表达水平及培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、γ干扰素(IFN-γ)的含量明显高于对照组;NRG-1组细胞的OD_(490)水平及细胞中ERK1/2的表达水平明显高于H/R组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、NF-κB的表达水平及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量明显低于H/R组;NRG-1+PD组细胞的OD_(490)水平及细胞中ERK1/2的表达水平明显低于NRG-1组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、NF-κB的表达水平及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量明显高于NRG-1组。结论 NRG-1通过激活ERK1/2通路减轻心肌细胞H/R损伤。     

miR-200c-3p靶向XIAP调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨miR-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p组(转染anti-miR-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAP组(转染pcDNA-XIAP)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-NC组(共转染anti-miR-200c-3p和si-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-XIAP组(共转染anti-miR-200c-3p和si-XIAP),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-200c-3p与XIAP的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中miR-200c-3p表达明显上调,XIAP表达明显下调;抑制miR-200c-3p、过表达XIAP均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved Caspase-3、Bax,上调Bcl-2;miR-200c-3p可显著抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAP的表达;敲减XIAP可逆转抑制miR-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论 miR-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAP有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。     

沙库巴曲缬沙坦对缺氧心肌细胞线粒体动力系统和细胞凋亡的影响

目的 验证沙库巴曲缬沙坦(S/V)能否通过调节线粒体动力系统改善缺氧大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)凋亡水平,发挥心脏保护作用。方法 培养H9c2心肌细胞,建立糖氧剥夺模型(OGD),将细胞分为对照组、造模组、药物组。对照组正常培养心肌细胞,造模组采用OGD建模,药物组采用OGD建模后加用S/V 20μmol/L干预处理,每组重复5遍。采用流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS),JC-1检测线粒体膜电位,蛋白质免疫印迹法(WB)检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、细胞色素C(CytC)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)及含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达情况。采用GraphPad Prism 8统计软件进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 H9c2心肌细胞建立OGD模型,经S/V处理后,光镜下心肌细胞形态学明显改善;流式细胞技术分析结果显示S/V明显降低细胞内ROS水平,抑制心肌细胞凋亡(P＜0.05);荧光显微镜分析结果显示S/V明显改善线粒体膜电位水平(P＜0.05);WB结果显示S/V可明显提升Mfn2、Mfn1、Bcl2蛋白表达水平,降低Drp1、Fis1、CytC、Bax及Caspase-3蛋白表达水平(P＜0.05)。结论 S/V可能通过促进线粒体融合、抑制线粒体分裂调节线粒体稳态,减少ROS生成,减轻心肌细胞凋亡。     

线粒体融合素2突变体对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究大鼠线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)基因蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点的2种突变体对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡及其相关的信号通路的影响。方法构建4种重组腺病毒,分别携带磷酸化位点突变为丙氨酸(重组1组)、Mfn2基因(重组2组)、突变为天冬酰胺(重组3组)和半乳糖苷酶基因(对照组),感染培养的VSMCs,另设未感染腺病毒的空白组。流式细胞术比较各组细胞的凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot分析各组Mfn2蛋白的表达以及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和活性半胱天冬酶9(caspase-9)表达。结果与空白组和对照组比较,重组1组、重组2组和重组3组Mfn蛋白显著增加(P0.01);重组1组和重组2组细胞凋亡率显著增强(P0.01);线粒体膜电位显著降低(P0.01);p-Akt表达水平显著降低(P0.01),活性caspase-9表达水平显著增高(P0.01);且重组1组作用较重组2组更明显(P0.01);而重组3组上述指标无显著差异(P0.05)。结论 Mfn2突变为丙氨酸的位点PKA通过Akt信号及线粒体途径诱导VSMCs凋亡的作用较Mfn2更明显,表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2诱导VSMCs凋亡的重要功能位点。     

TRAIL-induced apoptosis in human vascular endothelium is regulated by phosphatidylinositol 3-kinase/Akt through the short form of cellular FLIP and Bcl-2

BACKGROUND: Apoptosis of vascular endothelial cells plays a central role in angiogenesis and atherosclerosis. This study investigates the molecular mechanisms of endothelial apoptosis induced by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) following inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K). It examines downstream regulation and activation of the extrinsic and intrinsic pathways. METHODS AND RESULTS: By flow cytometry, TRAIL receptors 2 and 3 were present to a greater extent than receptors 1 and 4. TRAIL reduced cell numbers in combination with the PI3K inhibitor LY 294002. TRAIL (100 ng/ml) with LY 294002 (20 micromol/l) activated the extrinsic pathway, causing progressive cleavage of caspase-8 and caspase-3. Activation of the intrinsic pathway proceeded by release of mitochondrial factors Smac/DIABLO and cytochrome c, and caspase-9 cleavage. LY 294002 reduced phosphorylated Akt (p-Akt), with early loss of the short form of cellular FLIP (c-FLIP(S)) and concurrent reduction of Bcl-2. Treatment with small interfering RNA against PI3K also reduced c-FLIP(S) and Bcl-2, and cotreatment with TRAIL triggered caspase-3 cleavage. CONCLUSIONS: This study details the molecular regulation of TRAIL-induced apoptosis in vascular endothelium. Inhibition of PI3K reduces p-Akt, with concurrent reductions in c-FLIP(S) and Bcl-2, and so renders endothelium sensitive to TRAIL-induced apoptosis through the extrinsic and intrinsic pathways.     

Isoproterenol Cytotoxicity is Dependent on the Differentiation State of the Cardiomyoblast H9c2 Cell Line

H9c2 cells are used as a surrogate for cardiac cells in several toxicological studies, which are usually performed with cells in their undifferentiated state, raising questions on the applicability of the results to adult cardiomyocytes. Since H9c2 myoblasts have the capacity to differentiate into skeletal and cardiac muscle cells under different conditions, the hypothesis of the present work was that cells in different differentiation states differ in their susceptibility to toxicants. In order to test the hypothesis, the effects of the cardiotoxicant isoproterenol (ISO) were investigated. The present work demonstrates that differentiated H9c2 cells are more susceptible to ISO toxicity. Cellular content of beta₁-adrenergic receptors (AR), beta₃-AR, and calcineurin is decreased as cells differentiate, as opposed to the content on the mitochondrial voltage-dependent anion channel (VDAC) and phosphorylated p38-MAPK, which increase. After ISO treatment, the pro-apoptotic protein Bax increases in all experimental groups, although only undifferentiated myoblasts up-regulate the anti-apoptotic Bcl-2. Calcineurin is decreased in differentiated H9c2 cells, which suggests an important role against ISO-induced cell death. The results indicate that the differentiation state of H9c2 myoblasts influence ISO toxicity, which may involve calcineurin, p38-MAPK, and Bax/Bcl-2 alterations. The data also provide new insights into cardiovascular toxicology during early development.     

Ghrelin通过抑制ERS减轻ISO所致的心肌损伤和心肌细胞凋亡

目的探讨ghrelin（G）减轻异丙基肾上腺素（isoproterenol,ISO）所致心肌损伤和凋亡是否与其抑制心肌内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）有关。方法：将29只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为对照（Con）组、ISO组和ISO＋G组。Con组皮下注射生理盐水,ISO组皮下注射ISO,ISO＋G组皮下注射ISO前2 d皮下注射ghrelin。采用生理记录仪测定各组大鼠心功能。以HE染色及血浆乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶MB（CK-MB）活性的测定评估心肌损伤的程度。用TUNEL法测定心肌细胞的凋亡。用Western blot检测各组心肌组织中ERS标志性分子C／EBP同源蛋白（C／EBP-homologous protein,CHOP）和easpase．12的表达。结果：外源性ghrelin可显著缓解ISO所致大鼠的心功能不全,减轻ISO造成的心肌损伤,减少心肌细胞凋亡,并降低CHOP和剪切的caspase-12的表达。结论：ghrelin通过抑制ERS可减轻ISO所致心肌损伤和心肌细胞凋亡。     

藤梨根提取物通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞的增殖和凋亡

背景藤梨根提取物(rattan root extract,RRE)可抑制胃癌、肺癌等肿瘤细胞增殖,具有一定抗肿瘤作用,但其是否影响结直肠癌细胞的恶性表型还未知.miR-192-5p在结直肠癌组织中表达降低,且其低表达与肿瘤大小等临床病理特征相关,可作为结直肠癌诊治的潜在生物学标志物.StarBase生物信息学软件预测显示,环腺苷酸调节的磷酸化蛋白19(cAMP-regulated phosphoprotein 19,ARPP19)可能是miR-192-5p的靶基因.本研究假设RRE可通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞增殖和凋亡.目的探讨RRE对结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法RRE干预SW480细胞后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、C-caspase-3和ARPP19蛋白水平,RT-qPCR检测细胞中miR-192-5p和ARPP19 mRNA水平.转染miR-192-5p模拟物或ARPP19小干扰RNA至SW480细胞,上述相同方法观察过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p和ARPP19调控关系.结果RRE可降低SW480细胞存活率及ARPP19 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),增加SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白和miR-192-5p的表达(P<0.05).过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达均可降低SW480细胞存活率及CyclinD1蛋白表达(P<0.05),而提高SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白表达(P<0.05).miR-192-5p在SW480细胞中靶向负调控ARPP19表达.抑制miR-192-5p表达可逆转RRE对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.抑制ARPP19表达可逆转抑制miR-192-5p表达对RRE处理的SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.结论RRE可有效抑制结直肠癌SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与调miR-192-5p/ARPP19轴有关.