上海地区儿童百日咳鲍特杆菌毒素IgG抗体的血清流行病学调查

目的通过对上海地区儿童血清百日咳鲍特杆菌毒素IgG抗体(anti-pertussis toxin IgG,抗-PT IgG)水平检测,初步评估百白破三联疫苗(DTP)的作用强度和持续时间,为评估疫苗接种质量和强化接种提供依据。方法收集上海地区372名0～18岁儿童的血清。通过酶联免疫吸附法测定受试者的血清抗-PT IgG水平。在近1年内未接种百白破无细胞疫苗(DTaP)或含DTaP疫苗的情况下,以受试者的抗-PT IgG水平≥30IU/mL为抗体阳性,提示近期接触过百日咳鲍特杆菌;抗-PT IgG水平≥100IU/mL提示急性感染。结果在372名受试者中,血清抗-PT IgG平均水平为16.21IU/mL,其中42例(11.29%)呈抗体阳性表现。3岁组血清阳性率最高(18.60%),平均水平21.82IU/mL;其次为10～12岁组(11.43%),平均水平21.16IU/mL;阳性率最低的年龄组为3～5岁组(7.46%),而平均水平在6～9岁组(9.74IU/mL)最低。结论不典型百日咳鲍特杆菌感染在中国儿童中普遍存在,以10～12岁儿童发生率最高。作为百日咳感染的高发人群和引起婴幼儿感染的重要传染源,对其进行强化疫苗接种可能有助于显著降低各年龄段儿童百日咳的发病率。     

重组HBsAg用于ELISA检测抗HBs的研究

用高纯度酵母菌基因工程重组HBsAg替代国产抗HBs ELISA试剂盒中的血源HBsAg作为包被抗原,比双抗原夹心法和BA-双抗原夹心法的敏感性均显著提高。用重组HBsAg包被的双抗原夹心法的敏感度为5IU/L。用于检测乙肝疫苗接种7个月和8个月后的婴儿血清,抗HBs转阳率分别为80.7%和92.6%。上海地区义务献血者检测结果,抗HBs阳性率为33.66%。重组HBsAg的应用有利于提高抗HBs ELISA试剂的质量。     

人血清IgG类抗LDH-C4抗体的ELISA检测及其意义

目的建立检测人血清IgG类抗精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)抗体的ELISA法,探讨人血清抗LDH-C4抗体与免疫性不育的关系。方法以重组人LDH-C4(rhLDH-C4)作为包被抗原,建立人血清IgG类抗LDH-C4抗体检测的间接ELISA方法。应用该方法检测74例健康人群(正常生育组)和177例不育人群(不育组)血清IgG类抗LDH-C4抗体。结果初步建立了检测人血清IgG类抗LDH-C4抗体的间接ELISA方法。不育组血清IgG类抗LDH-C4抗体阳性率(30.51%)显著高于正常生育组(9.46%)(P0.01),女性不育组阳性率(31.46%)与男性不育组(29.55%)差异不显著(P0.05)。结论人血清中存在着IgG类抗LDH-C4抗体,此类抗体可能与免疫性不育有密切关系。     

抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及其夹心ELISA方法的建立

[目的]制备抗百咳丝状血凝素（FHA）的单克隆抗体（McAbs），并建立FHA定量检测方法。[方法]采用杂交瘤技术制备McAbs，以间接ELISA法筛选，对获得的稳定杂交瘤细胞株及其分泌抗FHA-McAbs进行了系统的鉴定和纯化，建立定量检测FHA的ELISA方法，并运用建立的ELISA方法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量。[结果]获得6株分泌抗FHA-McAbs的杂交瘤细胞株，抗体类别均为IgG1（K），效价达1：10^5和1：10^6，并能特异识别百日咳丝状血凝素，与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应，建立了检测FHA的ELISA，灵敏度为1．04μg/L，批内变异系数5．49％，批间变异系数9．31％，平均回收率为94．18％，实验结果显示同一单位送检的每批原液之间FHA含量不是很一致。[结论]成功地制备了抗FHA-McAbs，建立了一种特异、准确的定量检测FHA的ELISA方法，并用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测，为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段，同时也为以后FHA的研究奠定了基础。     

血清半乳甘露聚糖抗原及烟曲霉特异性抗体检测在侵袭性肺曲霉病诊断中的价值

目的探讨血清半乳甘露聚糖(GM)抗原及烟曲霉特异性抗体检测在侵袭性肺曲霉病(IPA)临床诊断中的应用价值。方法将124例疑似IPA的住院患者分为IPA组(46例)和非IPA组(78例),检测其血清GM抗原及烟曲霉特异性IgG、IgM抗体,并对其临床资料进行回顾性分析。结果 IPA组病理确诊18例,临床诊断28例。分别以0.5、1.0 ng/mL为阈值,GM抗原诊断IPA的敏感性和特异性分别为58.7%、74.4%和50.0%、83.3%。烟曲霉特异性IgG抗体诊断IPA的敏感性和特异性分别为80.4%、91.0%,烟曲霉特异性IgM抗体诊断IPA的敏感性和特异性分别为71.7%、87.2%。IPA组烟曲霉特异性IgG、IgM抗体水平均高于非IPA组(P0.05)。结论血清GM抗原(以1.0 ng/mL为阈值)及烟曲霉特异性IgG、IgM抗体检测对于IPA的诊断均具有较高的特异性(80%),烟曲霉特异性IgG抗体检测的敏感性、特异性均优于IgM抗体。     

人巨细胞病毒pp65抗体检测方法的建立

目的 建立检测人巨细胞病毒pp65IgG抗体(HCMV pp65 IgG)的间接酶联免疫吸附试验(ELISA).方法 通过棋盘滴定法选择包被抗原和酶标二抗的最适浓度;以商品抗HCMV pp65单抗为阳性模拟标本,建立检测抗HCMV pp65 IgG抗体,并对临床收集的各类血清标本进行检测和分析.结果 检测间接ELISAHCMV pp65 IgG的最佳包被抗原浓度为10 ng/孔,酶标二抗的工作浓度为1∶3000.当阳性吸光度(A)值为0.298时,87份不同组的血清标本(HCMV感染活动组、HCMV感染不活动组、HCMV未感染组)阳性检出率分别为51.6%(16/31)、12.1%(4/33)和0.0%(0/23).3组两两间差异均存在显著性(P＜0.01).结论 本研究建立了检测HCMV pp65抗体的方法,应用该方法能从相应人群中检出该抗体,检测不存在假阳性,并发现该抗体与抗HCMVIgM的检出有关.     

血清抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA定量方法的建立

摘要：目的：建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体（TPOAb）。 方法：用生物素化牛血清清蛋白（BSA）和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价。 结果：本法抗原包被量为0.083 μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL;高、低浓度混合血清批间变异系数（CV）为9.2%、9.0%,批内CV为4.6%、5.6%;回收率为96.0%~104.0%;包被板37 ℃放置5 d保持稳定;与抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人,将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数（r）为0.985（P<0.01）。 结论：间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强;操作简单,成本较低,适合基层医院。     

静注免疫球蛋白制品中水痘-带状疱疹病毒抗体效价的检测结果分析

目的检测静注免疫球蛋白(IVIG)制品中水痘-带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus,VZV)抗体的效价,为临床应用提供参考依据。方法以水痘-带状疱疹病毒人免疫球蛋白国际标准品为参考,采用以纯化的糖蛋白为抗原包被的ELISA定量检测试剂盒对20批IVIG制品进行VZV抗体效价的检测。结果 20批IVIG制品的VZV抗体效价为(3.4～4.1)IU/mL,比活为(68～82)IU/g IgG。结论 IVIG制品中VZV抗体效价可达200 IU/瓶(蛋白浓度5%,50 mL/瓶)。在我国还没有特异性水痘-带状疱疹人免疫球蛋白制品的情况下,可以考虑用作水痘或带状疱疹患者的替代治疗产品。     

低抗原含量百日咳疫苗效力评价研究

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所获得低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验效力结果数据均较低(<1.1IU/mL),中检院计算出的效价均在国外实验室分析得出效价的95%可信区间内。结论 MICA方法可应用于低抗原含量百日咳疫苗效力检测分析,该研究为进一步确定中国低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验检定标准奠定了基础。     

电化学发光免疫分析法检测低值HBsAg与乙肝五项检测结果比较

目的比较电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测低值乙肝表面抗原(HBsAg)与酶联免疫吸附试验(ELISA)法乙肝五项[HBsAg、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)]的检测结果,为临床和科研提供一定的科学依据。方法根据ECLIA检测HBsAg的结果,将207例患者分为3组:A组,HBsAg为0.05~5.00IU/mL;B组,HBsAg为0.20~0.50IU/mL;C组,HBsAg为0.05~0.20IU/mL。采用ELISA法对3组进行HBsAg检测,对C组进行乙肝五项检测及6个月追踪HBsAg检测,对测定结果进行比较分析。结果A、B、C组ECLIA法和ELISA法测定HBsAg的阳性符合率分别为100.00%、98.08%、30.43%,C组显著低于A、B组,差异有统计学意义(P0.05)。对C组中ELISA法检测HBsAg为阴性,HBeAb、HBcAb同时阳性或HBcAb单项阳性的患者,进行6个月追踪检测,HBsAg阳性符合率提高至45.65%。结论 ECLIA法检测低值HBsAg的灵敏度明显高于ELISA法,能有效提高检测的准确性。     

量子点标记技术同步检测抗弓形虫IgG和IgM抗体的实验研究

目的建立抗弓形虫(TOX)IgG和IgM抗体同步检测体系。方法分别用不同发射波长的量子点标记羊抗人IgG、羊抗人IgM作为检测抗体,以免疫磁珠作为固相载体,建立抗弓形虫IgG和IgM抗体同步检测体系,并对该检测体系进行了优化;同时检测280份临床血清标本,并与进口酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行方法学比较。结果 TOX抗原的最适固化浓度为50μg/mL,固化效率在35%～55%之间。抗TOX IgG、IgM抗体检测结果与进口ELISA试剂盒相比符合率分别为96.4%,97.1%,本体系同时检测两种抗体的阳性检测率达8.2%。结论成功建立了抗TOX IgG和IgM抗体同步检测体系,该体系操作简便快速,灵敏度高,具有有良好的临床应用价值。     

化学发光免疫分析法检测乙型肝炎标志物的应用分析

目的探讨化学发光免疫分析法(CLIA)检测乙型肝炎标志物在临床上的应用效果。方法收集该院2015年3月至2016年3月接收的疑似乙型肝炎患者260例,采用CLIA和酶联免疫吸附试验法(ELISA)分别检测患者的乙型肝炎病毒血清标志物。结果乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)的检出率CLIA高于ELISA法,差异有统计学意义(P0.05)。当HBsAg低水平检测值大于1.0IU/mL时,ELISA与CLIA法检测结果相同。小于1.0IU/mL时ELISA检测结果低于CLIA法,差异有统计学意义(P0.05)。ELISA法与CLIA法检测低水平HBsAg相关性良好(r=0.986)。结论采用CLIA法检测乙型肝炎病毒感染性标志物相比ELISA法更准确,可有效应用于乙型肝炎临床诊断和病情动态监测。     

2012年陕西省铜川市百白破疫苗免疫成功率监测分析

目的 评价陕西省铜川市百日咳-白喉-破伤风联合疫苗的免疫效果,为制定有效的免疫策略提供参考依据。 方法 用酶联免疫吸附试验方法检测适龄儿童全程免疫接种百白破疫苗前后百日咳、白喉、破伤风IgG抗体水平。 结果 全程免疫接种后,百日咳抗体阳转率为88.59%,抗体几何平均浓度(geometry mean concentration,GMC)增加了16倍;白喉抗体阳转率为100%,平均GMC增加了130倍;破伤风抗体阳转率为100%,平均GMC增加了57倍。 结论 百白破疫苗免疫效果良好,但百日咳菌苗免疫持久性较差。     

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细胞病毒(HCMV)抗体检测的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV 7个抗原性肽段,并对其抗原性进行了初步评价,选择高抗体反应的肽段为抗原,建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中,抗体反应性较高肽段有4个;以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90.9%和100.0%,对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90.0%和100.0%;与国外试剂盒测定结果有良好的符合性;该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测,以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。     

血小板的促炎症免疫功能与疾病

摘要：目的?研究抗磷脂酰丝氨酸-凝血酶原复合物抗体(aPS/PT)在狼疮抗凝物(LA)阳性患者中的临床事件危险预测价值。方法?连续入选2018年1月至2019年9月在北京大学第三医院2次及2次以上LA检测阳性的患者,且每次检测间隔12周及以上,共167例。将研究对象分为发生临床事件组(n=115)和未发生临床事件组(即LA携带者组,n=52),发生临床事件组中又分为发生血栓栓塞事件(TE)组(n=18)、不良妊娠结局(APO)组(n=91)及TE+APO组(n=6)。通过化学免疫分析方法检测研究对象的抗心磷脂抗体(aCL)、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(aβ2GPⅠ)和aPS/PT并进行统计学分析。结果?与LA携带者组相比,临床事件组aPS/PT IgG阳性率(37.4% vs 9.6%,P<0.001)以及aPS/PT IgG和IgM同时阳性率(31.3% vs 5.8%,P<0.001)升高;且临床事件组aPS/PT IgG浓度也升高[(49.2±5.2)units vs(20.1±3.4)units,P<0.01)]。aPS/PT IgG阳性率在TE+APO组(100.0%)、TE组(55.6%)以及APO组(29.7%)高于LA携带者组(9.6%),P<0.05;aPS/PT IgG浓度在TE+APO组[(125.7±40.3)units]、TE组[(76.3±61.4)units]和APO组[(40.9±50.2)units]也高于LA携带者组[(38.6±22.1)units],P<0.05。aPS/PT IgM阳性率只在TE+APO组(100.0%)高于LA携带者组(38.5%),P<0.05,浓度也升高[(116.3±40.0)units vs (46.5±52.1)units,P<0.05)]。而aPS/PT IgG和IgM同时阳性率在TE+APO组(100.0%)、TE组(44.4%)以及APO组(24.2%)高于LA携带者组(5.8%),P<0.05。aPS/PT阳性与抗磷脂抗体谱(aCL、aβ2GPⅠ和LA)3种抗体全阳组具有一致性(Kappa=0.114,P=0.012),且aPS/PT IgG与IgM浓度在3种抗体全阳组[(64.6±62.8)units,(84.3±51.8)units)]都高于LA单阳组[(19.7±16.7)units,(29.3±40.8)units,P<0.05]。结论?LA阳性患者在aPS/PT阳性情况下发生临床事件的危险增高,且IgG与发生临床事件相关度优于IgM;抗磷脂抗体谱中3种抗体全阳组与aPS/PT阳性具有一致性且发生临床事件危险度最高。     

血清白喉和破伤风抗体检测方法的建立及应用

目的建立定量检测抗白喉抗体、抗破伤风抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法分别用纯化的白喉类毒素、破伤风类毒素作为包被抗原,白喉、破伤风人源血清抗体标准品作为标准品,对供试品和标准品的剂量反应曲线进行拟合,以平行线法建立定量检测抗白喉抗体(Anti-DT)、抗破伤风抗体(Anti-TT)的ELISA方法。并进行方法学验证和应用研究。结果两种定量检测ELISA方法的验证结果均符合规定。定量检测Anti-DT的ELISA方法的定量限为0.084 mU/mL,回收率为97.6%,批内变异系数(CV)≤3.40%,批间CV≤5.05%;检测Anti-TT方法的定量限为0.175mU/mL,回收率为97.5%,批内CV≤2.42%,批间CV≤5.58%。应用上述两种ELISA方法,对白喉破伤风疫苗用于婴儿基础免疫后的免疫原性进行了检测分析和评价。结论所建立的白喉、破伤风血清抗体ELISA检测方法,准确度高,重复性好,适合于一般实验室开展工作,可用于白喉破伤风疫苗免疫接种后的血清学效果评价和白喉破伤风疾病的流行病学研究。     

抗IMP1自身抗体IgG在肝癌患者血清中的表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨肝癌患者血清中抗胰岛素样生长因子Ⅱ在mRNA结合蛋白1(IMP1)自身抗体IgG的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用ELISA法检测120例肝癌患者(肝癌组)血清抗IMP1自身抗体IgG抗体,并与115例健康者(对照组)检测数据进行比较,分析血清抗IMP1自身抗体IgG抗体水平与肝癌患者临床病理参数的关系。结果肝癌组和对照组的血清抗IMP1自身抗体IgG水平分别为(1.512±0.685)、(1.080±0.301)μg/mL,肝癌组明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.001)。肝癌患者血清抗IMP1自身抗体IgG的表达水平与肿瘤大小、肿瘤分化程度、TNM分级、肝内转移有关(P0.001);与年龄、性别、饮酒、是否感染HBV等无明显关系(P0.05)。结论肝癌患者血清抗IMP1自身抗体IgG表达升高,检测肝癌血清抗IMP1自身抗体IgG有利于判断肝癌的恶性程度。     

我院孕妇麻疹和风疹IgG抗体水平调查

目的了解孕妇麻疹IgG抗体和风疹IgG抗体水平现状。方法用酶联免疫吸附试验定量检测法检测孕妇麻疹IgG和风疹IgG抗体。结果 180例孕妇麻疹IgG抗体几何平均浓度为760.84mIU/mL,麻疹抗体阳性率为88.89%;风疹IgG抗体几何平均浓度46.40IU/mL,风疹抗体阳性率为81.67%。≥30岁的孕妇麻疹IgG抗体阳性率更高,而外省孕妇风疹IgG抗体阳性率更高。结论育龄妇女在怀孕前接种麻疹和风疹疫苗是控制先天性风疹及小月龄儿麻疹发病的重要措施。     

甲状腺球蛋白抗体竞争TRFIA技术的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)竞争检测法。方法用甲状腺球蛋白抗原包被96孔板,用铕(Eu3+)标记羊抗鼠IgG做标记物,TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;批内变异系数(CV)为3.3%～4.1%,批间CV为3.7%～4.7%;平均回收率为97.9%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.881 3;男女TgAb测定值差异无统计学意义;TgAb的正常值范围为≤110 IU/mL。结论建立的TgAb-TRFIA是一个高敏感和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。