汉防已甲素对人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９增殖抑制和诱导凋亡的机制研究

目的　探讨汉防已甲素（Ｔｅｔ）对人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９增殖和凋亡的影响。方法　将人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９设不同浓度Ｔｅｔ处理组,并设立空白对照组。采用ＭＴＴ法观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞体外生长的抑制作用;采用透射电镜、流式细胞术观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ １０９细胞凋亡的影响;采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、ＲＴ-ＰＣＲ观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞凋亡相关蛋白和ｍＲＮＡ表达的影响。结果　Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞的抑制作用呈时间 剂量依赖性（Ｐ＜０.０５）,Ｔｅｔ干预４８、７２ｈＥｃａ-１０９细胞的ＩＣ５０分别为（２０.８８６±０.２１５）μｍｏｌ／Ｌ和（１４.３５２±０.１０２）μｍｏｌ／Ｌ。３０μｍｏｌ／ＬＴｅｔ处理细胞４８ｈ后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成。分别以２０、３０、４０μｍｏｌ／Ｌ的Ｔｅｔ干预Ｅｃａ-１０９细胞４８ｈ后,流式细胞术显示早期凋亡率依次为０.１２％、０.３４％和０.３１％,中晚期凋亡率依次为４.０２％、７.４３％和７７.４２％;ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ显示,Ｂｃｌ-２蛋白和ｍＲＮＡ表达均随Ｔｅｔ浓度的增加而逐渐下调（Ｐ＜０.０５）,Ｂａｘ蛋白和ｍＲＮＡ表达均随Ｔｅｔ浓度增加而逐渐上调（Ｐ＜０.０５）,而ｐ５３蛋白水平在处理前后无明显变化。结论　Ｔｅｔ可以抑制食管癌Ｅｃａ-１０９细胞生长,促进其凋亡,其作用机制可能与下调Ｂｃｌ-２表达,上调Ｂａｘ表达有关。     

60^Coγ射线照射对鼻咽癌上皮样细胞株细胞周期进程的影响

应用细胞增殖动力学和流式细胞光度术检测６０Ｃｏγ射线照射对鼻咽癌上皮样细胞株的增殖状况和细胞周期进程的影响。结果显示不同剂量（２，４或６Ｇｙ）γ射线单次照射导致细胞生长抑制，且总数随着照射剂量的增高而减少；６Ｇｙ单次照射后致使ＣＮＥ细胞株各时相细胞的运动均受阻，以照射后４天内的变化较为突出（各时相时间及周期时间均是对照组的３倍多），其中Ｇ２阻滞最为显著。     

转染周期蛋白E基因对乳腺癌MCF-7细胞电离辐射敏感性的影响

周期蛋白Ｅｃｙｃｌｉｎ Ｅ与周期蛋白依赖激酶２ＣＤＫ２相结合,参与细胞由Ｇ１期进入Ｓ期,ｃｙｃｌｉｎ Ｅ的过表达可加速其进程。已有大量研究表明ｃｙｃｌｉｎ Ｅ在乳腺癌细胞中有过表达且与预后有密切的关系。细胞周期受电离辐射的调控,并且影响电离辐射的效应。为了探讨ｃｙｃｌｉｎ Ｅ的高表达是否影响肿瘤细胞对辐射的敏感性,我们用基因转染技术将外源性ｃｙｃｌｉｎ Ｅ基因导入人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７,观察转染前后细胞对电离辐射的敏感性改变,为改进乳腺癌的放疗提供一些实验性参考资料。１ 材料与方法１．１ ＭＣ…     

非霍奇金淋巴瘤中Cyclin D1和p34~(cdc2)蛋白的检测

为了研究非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬｓ）中细胞周期调节因子ＣｙｃｌｉｎＤ１ 和ｐ３４ｃｄｃ２ 蛋白表达与肿瘤分化程度和免疫分型的关系,对４０ 例ＮＨＬｓ 进行ＣｙｃｌｉｎＤ１ 和ｐ３４ｃｄｃ２ 蛋白免疫组化（ＳＰ法）染色。在４０ 例ＮＨＬｓ 中,有１９ 例（４７．５ ％）ＣｙｃｌｉｎＤ１ 阳性表达,２３ 例（５７．５ ％）ｐ３４ｃｄｃ２ 阳性表达。１０ 例淋巴结良性病变中６ 例生发中心细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１ 和ｐ３４ｃｄｃ２ 弱阳性表达。低分化ＮＨＬｓ 的ＣｙｃｌｉｎＤ１ 和ｐ３４ｃｄｃ２ 阳性率明显高于高分化ＮＨＬｓ（Ｐ＜ ０．０５）,而同免疫分型无关（ Ｐ＞０ ．０５） 。２ 个细胞周期调节因子的表达具有高度一致性（Ｐ＜０ ．０５）。提示２ 个细胞周期调节因子参与ＮＨＬｓ 的发生发展过程,其阳性表达率及表达强度同ＮＨＬｓ 恶性程度有密切关系,而同免疫分型无明显联系。ＣｙｃｌｉｎＤ１ 和ｐ３４ｃｄｃ２ 蛋白在部分ＮＨＬｓ 中共同起作用,使Ｇ１ →Ｓ期和Ｇ２ →Ｍ 期２ 个细胞检查点控制减弱。     

Cyclin E蛋白异常表达在胃癌的意义

Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ蛋白在细胞周期的Ｇ１晚期起作用,加速Ｇ１－Ｓ期转化,与人类肿瘤有关。本研究探讨Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ蛋白在胃癌的意义。方法：免疫组化Ｓ－Ｐ法测定胃癌石蜡切片中Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ蛋白的异常表达。结果：Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ在胃癌中表达６１．６７％（３７／６０）,与癌旁组织２５．８１％（８／３１）相比有显著差异（Ｐ〈０．０５）。Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ表达与组织病理分化程度呈负相关,分化差的胃癌组织Ｃｙｃｌ     

非霍奇金淋巴瘤CyclinD1和p34^cdc2蛋白的检测

为了研究非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬｓ）中细胞周期调节因子ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐ３４＾ｃｄｃ２蛋白表达与肿瘤分化程度和免疫分型的关系,对４０例ＮＨＬｓ进行ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐ３４＾ｃｄｃ２蛋白免疫组化（ＳＰ法）染色。在４０例ＮＨＬｓ中,有１９例（４７．５％）ＣｙｃｌｉｎＤ１阳性表达２３例（５７．５％（ｐ３４＾ｃｄｃ２阳性表达。１０例淋巴结良性病变中６例生发中心细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐ３４＾ｃｄｃ２弱 是必     

逐步递量加速超分割照射加化疗非小细胞肺癌

目的 观察逐步递量加速超分割放射治疗（ＥＨＡＲＴ）Ⅲｂ期非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的近期疗效和急性放射反应。方法 ７３例Ⅲｂ期ＮＳＣＬＣ进入ＥＨＡＲＴ组。放射治疗的第１,２周,１．２Ｇｙ２次／ｄ间隔６ｈ以上,第３,４,５周分别为１．３,１．４,１．５Ｇｙ２次／ｄ,均５天／周,照射野仅包括胸部ＣＴ或ＭＲＩ可见的原发灶和淋巴结转移以及周围１．０～１．５ｃｍ的正常组织。肿瘤灶总剂量６６Ｇｙ,５０次,５周     

CyclinD1在食管癌中的表达及与预后的关系

在细胞周期中 ,Ｇ1/Ｓ的转变关系到整个细胞周期的启动。目前发现Ｇ1期的调节因子与癌变关系最为密切 ,而Ｇ1期相关的细胞周期素 (ｃｙｃｌｉｎｓ)主要是Ｄ型 ,其中ｃｙｃｌｉｎＤ1在细胞增殖过程中意义最大 ,是ＧＩ期细胞增殖信号的关键蛋白。本文就ｃｙｃｌｉｎＤ1的结构、功能及其与食管癌的关系作一综述。1　ｃｙｃｌｉｎＤ1的结构ｃｙｃｌｉｎＤ1基因又称ＣＣＮＤ1、ＰＲＡＤ1、ＢＣＬ - 1,位于染色体11ｑ13上 ,全长约 15ｋｂ含 5个外显子 ,4个内含子。ＣＣＮＤ1的启动子没有ＴＡＴＡ盒 ,但富含ＧＣ序列 ,含有几个ＳＰＩ契合部位 ,编码…     

平阳霉素（A5）与抗人食管癌非组蛋白抗体交联物对人食管癌Eca－109细胞株的体外抑制效应

我们以非组生白质（ＮＨＰ）抗体作为抗癌药物平阳霉素（Ａ５）的载体，制备ＮＨＰＩｇＧＡ５交联物。应用（１）细胞培养隔日计数示生长曲线；（２）以Ｆｅｕｌｇｅｎ法示细胞ＤＮＡ相对含量；（３）３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验、比较了ＮＨＰＩＧ－Ａ５、ＮＨＰＩｇＧ及Ａ５对人食管癌细胞株ＥＣａ１０９的体外抑制效应，四者比较，ＮＨＰＩｇＧ－Ａ５人食管癌Ｅｃａ－ｌ０９细胞株有较强的抑制效应。     

CEA启动子驱动cd—tk表达对CEA阳性肿瘤细胞的杀伤作用

目的：大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ，ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）和Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＴＫ，ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ）融合基因ｃｄｔｋ，在癌胚抗原（ＣＥＡ，ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ）阳性肿瘤细胞表达，联合使用前体药５氟胞嘧啶（５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ，５ＦＣ）和丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）可明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：ＰＣＲ法分别扩增出ＣＥＡ启动子、ｃｄ和ｔｋ；构建真核表达载体ｐＣＥＡｃｄｔｋ；用脂质体将它导入ＣＥＡ阳性肿瘤细胞株ＨＴ２９、ＬｏＶｏ、ＳＧＣ７９０１、ＧＬＣ８２及ＣＥＡ阴性细胞株ＢＥＬ７４０２中；ＭＴＴ法检测５ＦＣ、ＧＣＶ对这类细胞的毒性作用及对放疗射线的增敏效果。结果：融合基因ｃｄｔｋ只在ＣＥＡ阳性细胞中表达，且表达该基因的肿瘤细胞对５ＦＣ和ＧＣＶ都很敏感。联合使用ＧＣＶ和５ＦＣ时，对这些肿瘤细胞的毒性明显增加，该体系也可明显增强放疗射线对细胞的杀伤作用。结论：与单独使用ＣＤ／５ＦＣ，ＴＫ／ＧＣＶ相比，ＣＤＴＫ／５ＦＣ＋ＧＣＶ体系对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强，该体系对放疗射线有较强的增敏作用。     

辐射对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其放射增敏意义

目的：探讨不同辐射剂量对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其与放射敏感性的关系,为合理应用COX-2抑制剂提供实验依据。方法：X线照射食管癌Eca-109细胞,2Gy/f,以照射累积剂量（0Gy、20Gy、40Gy）将其分为Eca 109、Eca 109-20、Eca-109-40组;COX-2抑制剂尼美舒利培育Eca-109-40组细胞为Eca-109-40R;RT-PCR及Western-blot检测细胞COX-2的表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果：Eca-109-40细胞COX-2表达增高（P〈0.05）,放射敏感性降低（P〈0.05）,细胞周期S期比例增多（P〈0.05）,Eca 109与Eca 109-20之间差异无统计学意义（P〉0.05）,Eca-109-40R较Eca-109-40 COX-2表达下降（P〈0.05）,放射敏感性增高（P〈0.05）,细胞周期S期比例减少（P〈0.05）。结论：辐射累积剂量在40Gy时Eca-109细胞COX-2的表达较高,癌细胞放射敏感性降低;照射40Gy时加用尼美舒利可提高细胞放射敏感性。     

辐射对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其放射增敏意义

目的:探讨不同辐射剂量对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其与放射敏感性的关系,为合理应用COX-2抑制剂提供实验依据.方法:X线照射食管癌Eca-109细胞,2Gy/f,以照射累积剂量(0Gy、20Gy、40Gy)将其分为Eca 109、Eca 109-20、Eca-109-40组;COX-2抑制剂尼美舒利培育Eca-109-40组细胞为Eca-109-40R;RT-PCR及Western-blot检测细胞COX-2的表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性;流式细胞仪检测细胞周期分布.结果:Eca-109-40细胞COX-2表达增高(P<0.05),放射敏感性降低(P<0.05),细胞周期S期比例增多(P<0.05),Eca 109 与Eca 109-20之间差异无统计学意义(P>0.05),Eca-109-40R较Eca-109-40 COX-2表达下降(P<0.05),放射敏感性增高(P<0.05),细胞周期S期比例减少(P<0.05).结论:辐射累积剂量在40Gy时Eca-109细胞COX-2的表达较高,癌细胞放射敏感性降低;照射40Gy时加用尼美舒利可提高细胞放射敏感性.     

食管癌细胞株高侵袭力亚系的建立及其生物学特性研究

目的:建立具有不同转移潜能的高侵袭能力食管癌细胞株亚系并研究其生物特性.方法:利用Transwell侵袭小室从人食管鳞癌Eca-109细胞株筛选高侵袭能力食管癌亚系,HE染色比较细胞形态;四甲基偶氯唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力的变化;流式细胞术( FCM)检测细胞周期;蛋白质印迹法检测与侵袭能力相关基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白醇组织抑制因子-2(TIMP-2)蛋白表达.结果:利用Transwell侵袭小室从食管癌Eca-109细胞株中筛选出高侵袭能力食管癌细胞株亚系,命名为Eca-109 T4.2个细胞系细胞形态没有明显差异.MTT法检测显示,亚系Eca-109 T4增殖能力强.细胞周期显示,增殖指数(PI)高,PI=41.0％,且MMP-2蛋白表达相比增高,P=0.023;TIMP-2蛋白表达相比增高,但差异无统计学意义,P=0.392.结论:建立了不同转移潜能的高侵袭能力食管癌细胞株亚系,将可以用于探讨食管癌转移机制的研究.     

博安霉素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及其对细胞周期的影响

背景与目的：有研究报道博安霉素（boanmycin,BAM)是通过抑制肿瘤细胞的蛋白质合成来发挥抗人食管癌作用,但目前尚不清楚博安霉素是否还通过其他机制来实现其抗人食管癌作用。本文研究博安霉素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及其对Eca-109细胞周期的影响。方法：运用形态学观察,流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳多种方法检测Eca-109细胞凋亡以及细胞周期分布的改变。结果：在经博安霉素处理的裸鼠移植瘤组织中,用电镜观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变;在体外实验中,博安霉素（50-125μg/ml）作用Eca-109细胞30-36h,用电镜观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变;在体外实验中,博安霉素（50-125μg/ml）作用Eca-109细胞30-36h,可以诱导Eca-109细胞凋亡并出现DNA梯形条带。作用42h后将其细胞周期阻断于G2/M期。结论：博安霉素能诱导Eca-109细胞凋亡将其细胞周期阻断于G2/M期。     

苦参碱通过诱导miR-433-3p表达抑制食管鳞癌放射抵抗

 目的 探讨苦参碱在食管鳞癌中对放射抵抗及miR-433-3p表达的影响。方法 构建miR-433-3p及RAD21过表达和敲减放射抵抗Eca-109R细胞,经不同照射剂量（0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy及8 Gy）及不同浓度（0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mL、4.0 mg/mL和5.0 mg/mL）苦参碱分别处理转染前后的Eca-109和Eca-109R细胞后,采用qRT-PCR及Western blot检测miR-433-3p及RAD21的表达情况,CCK-8实验检测细胞活性;在Eca-109细胞系中,应用双荧光素酶报告基因实验检测miR-433-3p与RAD21的相互作用。结果 不同浓度苦参碱作用可抑制放疗抵抗细胞Eca-109R的细胞活性,重建其对放射的敏感性（P＜0.05）。miR-433-3p在Eca-109R细胞中低表达（P＜0.05）;敲减miR-433-3p可增强Eca-109R细胞活性,而苦参碱能够解除miR-433-3p敲减对Eca-109R细胞活性的促进作用（F=5.213,P＜0.05）。RAD21在Eca-109R细胞中高表达（P＜0.05）;过表达RAD21可增强Eca-109R细胞活性,并逆转miR-433-3p对Eca-109R细胞活性的抑制作用（F=4.554,P＜0.05）。双荧光素酶报告基因提示miR-433-3p可作用于RAD21的3′UTR区域。结论 苦参碱通过诱导miR-433-3p高表达而抑制RAD21表达,重建食管鳞癌的放射敏感性。     

SP600125对D-氨基葡萄糖衍生物诱导Eca-109细胞凋亡的影响

目的:观察特异性JNK抑制剂[specificc-junNH2terminalproteinkinase(JNK)inhibitor]SP600125对D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖{[2-(3-carboxy-1-oxopropyl)a-mino-2-deoxy-D-Glucose],COPADG}诱导Eca-109细胞凋亡的影响并探讨COPADG诱导Eca-109细胞凋亡的潜在分子机制。方法:体外培养Eca-109细胞,用COPADG及SP600125对细胞进行处理。细胞间接免疫荧光染色观察P-JNK蛋白表达的改变,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;MTT检测不同时间点的细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:经SP600125处理后,COPADG诱导的Eca-109细胞P-JNK蛋白表达明显减弱,同时,COPADG诱导的Eca-109细胞凋亡率明显减低,细胞增殖抑制率下降明显,与COPADG单独作用组之间比较差异有统计学意义。结论:SP600125对D-氨基葡萄糖衍生物CO-PADG诱导Eca-109细胞凋亡具有抑制作用,并间接证明JNK信号转导通路在COPADG诱导Eca-109细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌细胞放射敏感性影响

目的 探讨siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌放射敏感性的影响。方法 以食管鳞癌、腺癌细胞系ECa-109、OE-19作为研究对象。脂质体转染化学合成的不同EGFR-siRNA和阴性-siRNA,通过RT-PCR及蛋白印迹法检测转染前后EGFR表达情况,CCK8法分析转染对细胞增殖活性影响。设ECa-109、OE-19细胞空白对照组(O1、O2组)、单纯照射组(R1、R2组)及EGFR-siRNA照射组(E-R1、E-R2组),单次照射0、2、4、6、8 Gy。克隆形成实验计算细胞存活分数及放射增敏比(SER_D0值比),流式细胞仪检测EGFR-siRNA联合放射对细胞周期分布和细胞凋亡率影响,单次照射6 Gy。结果 EGFR-siRNA可明显下调两种细胞EGFR表达,且转染对细胞增殖抑制率<5%(4.9%、4.5%)。克隆形成实验结果显示E-R1、E-R2组细胞SF值低于O1、O2组,SER_D0值比分别为1.40、1.01。流式细胞术结果显示E-R1组比E-R2组照后G₂+M期比例增加、S期比例下降(P=0.016、0.028),细胞凋亡率也增高(P=0.007)。结论 与食管腺癌细胞相比,干扰EGFR表达显著提高了食管鳞癌细胞的放射敏感性。     

JNK抑制剂对D-氨基葡萄糖衍生物诱导Eca-109细胞Caspase-3活化的影响

目的:观察特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对D-氨基葡萄糖衍生物(COPADG)诱导的Eca-109细胞Caspase-3激活及细胞凋亡的影响,并探讨COPADG诱导Eca-109细胞凋亡的潜在分子机制。方法:体外培养Eca-109细胞,以COPADG及SP600125与细胞作用,细胞间接免疫荧光染色观察P-JNK蛋白表达的改变,流式细胞术检测细胞凋亡率及Caspase-3活性的变化。结果:经SP600125处理后,COPADG诱导的Eca-109细胞P-JNK蛋白表达明显减弱,凋亡率明显减低,Caspase-3活性显著下调,与COPADG单作用组之间有显著性差异。结论:SP600125能够显著抑制COPADG诱导Eca-109细胞Caspase-3激活以及COPADG诱导Eca-109细胞凋亡,并间接证明JNK信号转导通路在COPADG诱导Eca-109细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

Ezrin增强子敲除可抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖和迁移

[摘要] 目的：探讨ezrin 增强子敲除对食管癌Eca-109 细胞ezrin 基因表达、细胞增殖和迁移的影响。方法：将靶向ezrin 增强子上、下游的CRISPR/Cas9 重组质粒共转染食管癌Eca-109 细胞,经嘌呤霉素筛选,获得敲除ezrin 增强子的细胞株Eca-C2。用qPCR和Western blotting 分别检测敲除ezrin 增强子的Eca-C2 细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达,用蛋白芯片技术检测MAPK通路相关蛋白的表达,用WST-1 法和细胞划痕愈合实验分别检测ezrin 增强子敲除对Eca-C2 细胞增殖和迁移能力的影响。结果：成功构建稳定敲除ezrin 增强子的食管癌细胞株Eca-C2;与对照细胞相比,ezrin 增强子敲除细胞ezrin mRNA和蛋白的表达水平均明显降低（均P＜0.05）。Eca-C2 细胞中17 种被检测的MAPK通路相关蛋白中有9 种（AKT、CREB、GSK3b、MKK6、mTOR、P38、P53、P70S6K和RSK1）表达下调,ezrin 增强子敲除后细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制（均P＜0.05）。结论：在人食管癌Eca-109 细胞中,敲除ezrin增强子可明显抑制细胞的增殖和迁移。