Rho/Rho激酶信号通路与血管内皮通透性的研究

Rho/Rho激酶信号通路是体内普遍存在的一条信号通路,它通过调节细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态而扮演着"分子开关"的角色,参与细胞形态维持、细胞粘附与迁移、细胞增殖与凋亡、基因转录、平滑肌收缩等多种生物学行为.Rho/Rho激酶信号通路在血管内皮通透性的病理生理过程中发挥了重要作用,抑制Rho/Rho激酶信号通路取得了显著的内皮保护作用.     

Rho/Rho激酶信号通路与肺部疾病

Rho通过GTP结合形式和GDP结合形式的转换起着分子开关的作用, 调控许多细胞内信号通路。Rho通过激活其下游靶分子Rho激酶调节细胞的收缩、黏附、迁移、增殖、凋亡等多种生物学行为和功能。目前已证实Rho/Rho激酶通路参与肺动脉高压、哮喘、特发性肺纤维化和肺癌等多种肺部疾病的病理生理过程，在这些疾病的动物模型中阻断该信号通路能够改善这些疾病的病理改变与预后。     

RhoA/Rho激酶信号通路与肺动脉高压

目前研究已发现RhoA/Rho激酶信号通路参与了人体多种疾病的形成,如高血压、冠心病、脑率中等.肺动脉高压的病理学改变包括内皮细胞的损伤、增殖,肺血管平滑肌细胞的高反应性,炎症细胞迁移和黏附以及肺小血管形成和栓塞;Rho激酶调节细胞的多种生物学行为和功能,如收缩、黏附、迁移、增殖、凋亡、基因表达等.研究表明RhoA/R...     

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的 探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体(IP3R)是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式. 方法 培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇(IP3)刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白(α-actin)、β主要组织相容性复合体(β-MHC)及即早基因(c-fos、c-myc)蛋白表达及肝素的干预作用. 结果 给予IP3(10-7mmol/L)刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达(P＜0.05),且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用(P＜0.05). 结论 激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一.     

RhoA和肌球蛋白轻链在肝纤维化大鼠肝组织中的表达

目的观察Rho/Rho激酶信号转导通路关键信号分子RhoA和磷酸化肌球蛋白轻链[p-MLC(Thr18/Ser19)]在大鼠肝纤维化组织中的表达规律。方法HE及Masson三色染色观察肝病理组织学变化;用Western blot检测RhoA、p-MLC(Thr18/Ser19)蛋白的表达;RT-PCR方法检测RhoAmRNA的表达。结果随着肝纤维化的进展,RhoA、p-MLC(Thr18/Ser19)蛋白表达明显增加,RhoAmRNA基因表达也逐渐加强。RhoA和p-MLC(Thr18/Ser19)分别与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)呈显著正相关。结论Rho/Rho激酶信号转导通路在肝纤维化形成过程中发生变化。     

Rho激酶和PKC在环孢素A改善休克血管反应性中的作用及与MPTP的关系

目的：观察Rho激酶和PKC在环孢素A( CsA)改善创伤失血性休克大鼠血管反应性中的作用及与线粒体通透性转换孔(MPTP)开放的关系。方法采用创伤失血性休克大鼠模型和缺氧培养的血管平滑肌细胞(VMSC),观察了Rho激酶和PKC在CsA调节休克血管反应性中的作用,以及对血管平滑肌细胞线粒体MPTP开放的影响,同时观察CsA对休克动物炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响。结果 CsA明显改善了休克血管反应性,Rho激酶抑制剂Y27632可显著拮抗CsA恢复休克血管反应性的作用,但是PKC抑制剂staurosporine对CsA的作用无明显影响。 CsA和Rho激酶激动剂U46619都可抑制缺氧后线粒体MPTP的开放程度。休克后大鼠血液中TNF-α和IL-1β的浓度均显著增加,但CsA处理仅使其轻微减少。结论 CsA可以通过抑制线粒体MPTP开放改善休克后血管的低反应性,发挥对创伤休克的治疗作用。 Rho激酶参与了这其中的调节过程。     

Rho/Rho激酶与动脉粥样硬化及冠心病的关系

1Rho/Rho激酶的生理特性Rho是一种小分子G蛋白,是Ras超家族成员之一,在细胞的信号转导通路中作为信号转换器或分子开关,作用于细胞骨架或其靶蛋白而产生多种生物效应。不仅在细胞骨架调节、细胞形态维持、细胞迁移、平滑肌细胞收缩等细胞活动中有重要作用,在细胞的各种生物活动     

上皮间质转化(EMT)及其分子机制

上皮细胞受到细胞外因子刺激后向间质细胞转化的现象与肿瘤的浸润转移密切相关。在此过程中上皮细胞的极性丧失，迁移和运动能力增强，同时上皮表型丢失而逐渐获得间质表型。参与这一过程的细胞内信号转导途径有受体酪氨酸激酶Ras-MAPK途径，Src激酶，Rho家族激酶，PI3K/AKT途径，Wnt信号通路，转录因子等。     

前列腺素E1对肾缺血再灌注损伤大鼠内皮的Rho/Rho激酶信号通路的影响

探讨前列腺素E1对肾缺血再灌注损伤大鼠内皮细胞Rho/Rho激酶信号通路的影响.建立大鼠IRI模型,将健康Wistar大鼠75只随机平均分为假手术组、模型组、治疗组,每组各25只;并按术后观察时间分为6、12、24、48、72 h5个不同时段亚组,每组各5只.检测各组血清肌酐(Scr)、血管内皮生长因子(Vascula...     

羟丁酸钠通过Rho / Rho 激酶信号通路减轻脑缺血再灌注大鼠脑损伤

目的:探讨羟丁酸钠通过Rho/Rho激酶信号通路对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的作用。方法:通过右侧血管内大脑中动脉闭塞(MCAO)构建局灶性脑缺血再灌注模型。造模前40 min腹腔给予50、100、200 mg/kg羟丁酸钠,1次/d,连续灌胃1周。尼莫地平组腹腔每天给予0.7 mg/kg尼莫地平,水仙环素组和给药高剂量+水仙环素组以相同方式每天给予10 mg/kg水仙环素。对照组和模型组大鼠注射等体积生理盐水。开场行为检测自发活动情况,T迷宫实验检测学习记忆能力,检测脑组织含水量,HE染色观察脑损伤,TUNEL染色检测脑细胞凋亡情况,qRT-PCR检查RhoA、Rho-kinaseα和Rho-kinaseβmRNA表达水平,Western blot检测cleaved caspase-3、 Bax、Bcl-2、RhoA、Rho-kinaseα和Rho-kinaseβ蛋白表达水平。结果:与模型组相比,给药高剂量组大鼠10 min内爬行经过的格子数目明显减少(P0.01),选择正确次数明显增多(P0.01),脑组织含水量明显减少(P0.01),脑组织细胞凋亡率明显减少(P0.01),脑组织cleaved caspase-3和Bax表达明显下调、Bcl-2表达明显上调(P0.01),脑组织RhoA、Rho-kinaseα和Rho-kinaseβmRNA表达水平明显下调(P0.01),给予Rho/Rho激酶信号通路激活剂水仙环素后,可逆转上述改变。结论:羟丁酸钠通过抑制Rho/Rho激酶信号通路减轻脑缺血再灌注大鼠脑损伤。     

Rho激酶与哮喘气道高反应性

炎症细胞和结构细胞促进哮喘患者支气管的急性收缩和慢性气道重建。当前哮喘的治疗不能有效地抑制气道高反应性和气道重建。近来发现Rho激酶在哮喘的发病中起重要作用，而Rho激酶抑制剂可抑制气道平滑肌收缩、调节气道平滑肌特异性的基因转录、减轻气道壁增厚和气道炎症，从而减轻急性和慢性气道高反应性。     

卡维地洛与压力负荷心衰大鼠心室重塑和Rho激酶表达的关系

目的研究卡维地洛(α1肾上腺素受体阻断剂、β肾上腺素受体非选择性阻断剂)对升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠心室重塑、RhoA、Rho激酶表达的影响,探讨卡维地洛改善心力衰竭的新机制。方法将升主动脉缩窄术后心力衰竭Wistar雌性大鼠随机分为2组,一组为心力衰竭组,给予生理盐水灌胃,每日2次(n=10);一组为卡维地洛组,12.5mg/Kg卡维地洛灌胃,每日2次(n=10),治疗12周。同时制备模型设置假手术组作为对照(n=10),不予处置。观察各组大鼠各项指标变化。结果与假手术组相比,心力衰竭大鼠心肌肥厚指数增加,HE染色心肌排列紊乱,血液动力学指标明显异常,心肌细胞RhoA、Rho激酶表达显著升高(P<0.05);药物治疗12w后,与心力衰竭组对比,卡维地洛治疗组心肌肥厚指数降低,HE染色示心肌重塑不明显,血液动力学参数改善,RhoA、Rho激酶表达显著降低。结论卡维地洛可通过对心肌细胞α-Gq-RhoA/Rho激酶通路表达干预,明显缓解心力衰竭症状、改善心室重塑,卡维地洛这种α1肾上腺素受体阻断剂可能对心力衰竭更有利。     

Rho激酶在血管紧张素Ⅱ刺激大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

目的： 探讨Rho激酶在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激心肌成纤维细胞（CFBs）增殖和胶原合成中的作用。方法： 采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生Sprague-Dawley (SD) 大鼠CFBs，并用AngⅡ诱导CFBs增殖和胶原合成。采用四氮唑盐（MTT）比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸法测定CFBs胶原含量, RT-PCR检测Rho激酶mRNA表达，Western blotting检测肌球蛋白结合亚基磷酸化（MBS-P）表达作为Rho激酶功能活化的标志。结果：（1）AngⅡ（10-７ mol/L）刺激48h可诱导CFBs增殖和胶原合成(均P<0.01)；（2) AngⅡ（10-7 mol/L）可显著上调新生SD大鼠CFBs的Rho激酶mRNA表达并诱导Rho激酶快速活化；（3）在一定浓度范围内，Rho激酶特异性抑制剂hydroxyfasudil (H4413)对AngⅡ（10-7 mol/L）刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论： AngⅡ可诱导新生SD大鼠CFBs的Rho激酶mRNA转录并活化Rho激酶，抑制Rho激酶活化对AngⅡ刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用，提示Rho激酶在调控AngⅡ刺激大鼠CFBs增殖与胶原合成中可能具有重要作用。     

盐酸法舒地尔对大鼠AMI后心室重构的保护作用研究

目的:利用Sprague-Dawley(SD)大鼠AMI模型评价Rho激酶抑制剂法舒地尔对心梗后心室重构的改善作用及其相关机制。方法:通过结扎左前降支冠脉法制备大鼠急性心梗(AMI)模型40只,随机分为AMI组,法舒地尔低、中、高剂量治疗组和卡维地洛治疗组,另设假手术组。连续给药4周后,进行超声心动图检测心功能指标,同时留取大鼠心肌组织标本检测Rho激酶、TGF-β1、Bax、Bcl-2、MMP-9表达和Smad2/Smad3信号通路的激活状态。结果:(1)超声心动图检测显示:与AMI组比较,法舒地尔3个治疗组对AMI后心室重构均有明显抑制作用,以中剂量组最佳。(2)与AMI组比较,治疗组Rho激酶和TGF-β1的m RNA水平、Bax和MMP-9蛋白表达水平明显降低,Bcl-2水平升高,Smad2/Smad3信号通路激活程度明显降低(P0.05)。结论:法舒地尔可抑制大鼠心梗后的心室重构。     

Rho激酶在失血性休克大鼠心肌收缩功能障碍中的作用

目的:观察Rho激酶对失血性休克大鼠心肌收缩力的影响。方法:利用离体乳头肌张力测定技术和心脏灌流技术,测定失血性休克后不同时间大鼠离体左室乳头肌在K-H液中的等长收缩张力的变化,以及大鼠的血流动力学指标(包括LVSP、±dp/dtm ax),并观察Rho激酶在其中的作用。结果:失血性休克后大鼠离体乳头肌收缩力和离体心脏血流动力学指标随着休克时间延长逐渐降低,在休克1 h、2 h以及4 h时乳头肌对异丙肾上腺素的收缩反应性显著低于正常对照组,同时休克后不同时点心肌组织Rho激酶活性发生明显变化,在休克1 h、2h、4 h Rho激酶活性显著低于正常对照组,Rho激酶活性变化与大鼠离体乳头肌收缩力和离体心脏血流动力学参数变化之间呈明显相关性,Rho激酶激动剂U-46619在浓度为10-8m ol/L预孵育休克2 h离体乳头肌或离体心脏后,离体乳头肌对异丙肾上腺素收缩力明显增加,最大收缩张力显著高于休克2 h组,曲线向左移。U-46619也可明显改善休克离体心脏血流动力学指标,Rho激酶特异性抑制剂Y-27632可明显拮抗由U-46619引起的休克大鼠离体乳头肌收缩反应性和离体心脏的改善作用。结论:Rho激酶在休克心肌收缩功能调节中发挥重要作用。     

类胰蛋白酶通过上调PAR-2和Rho激酶抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞凋亡

目的研究类胰蛋白酶(tryptase)对MH7A类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞表面蛋白酶激活受体2(PAR-2)、Rho信号通路及细胞凋亡的影响。方法采用流式细胞术检测MH7A细胞表面受体PAR-2的表达;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用Pull-down及Western blot法检测MH7A细胞Rho激酶的表达变化。结果类胰蛋白酶能够上调MH7A细胞表面PAR-2的表达,并剂量依赖性的抑制Fas介导的MH7A细胞的凋亡;同时,PAR-2抑制剂FSLLRY-NH2能够显著降低类胰蛋白酶对MH7A细胞的抗凋亡作用,其作用与活化Rho激酶的表达增加有关。结论类胰蛋白酶通过上调PAR-2和活化Rho激酶发挥很强的抗MH7A细胞凋亡的作用。     

Rho GDI与肿瘤

RhoGDP解离抑制剂(RhoGDPdissociationinhibitor,RhoGDIs)是Rho鸟苷三磷酸酶(RhoGTPases)活化的中心调节因子。Rho GDI家族主要有Rho GDIα,Rho GDIβ和Rho GDIγ。Rho GDI通过与P21激酶1,原肌球蛋白相关激酶B受体T1,神经介素U,肉瘤病毒原癌基因,细胞分裂周期蛋白42,X连锁凋亡蛋白,磷酸化的视网膜母细胞瘤蛋白等多种蛋白及Rho GTPases的相互作用,在多种肿瘤的发生、发展与转移过程中起着重要作用。     

血管平滑肌收缩蛋白钙增敏的调节机制

收缩蛋白对Ca2+敏感性的高低是调节血管平滑肌缩舒功能的重要环节,肌球蛋白磷酸酶活性的抑制可增加收缩蛋白对C+的敏感性.G蛋白、PKC、Rho/ Rho激酶均可通过对肌球蛋白磷酸酶活性的抑制来调节血管平滑肌收缩蛋白对Ca2+的敏感性.G蛋白对肌球蛋白磷酸酶活性的抑制可能与启动血管平滑肌产生收缩有关,而PKC通路可能参与了VSM收缩力的稳态上升过程.     

Rho激酶在免疫细胞及自身免疫性疾病中的研究进展

Rho激酶(Rho-associated kinases,ROCKs)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是Rho GTP酶下游重要的效应分子.Rho GTPase酶能够在与GTP结合的活性状态和与GDP结合的失活状态之间转换,发挥分子开关的作用.Rho GTPase/ROCK信号通路是体内普遍存在的一条通路,在细胞骨架建成,细胞的增殖、收缩、粘附、迁移等生物学行为中发挥重要的调控作用.近年来大量研究表明,ROCKs通过影响T淋巴细胞、B淋巴细胞、以及单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞的活化、增殖、粘附、迁移等方面,进而参与多种自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE),类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA),系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)等的发病过程.因此,在未来ROCKs有望为多种自身免疫性疾病提供一种新的治疗靶点.     

胆碱能抗炎通路的机制及其在脓毒症的应用

胆碱能抗炎通路是近年来发现的对全身性炎症反应有调节作用的通路,可通过迷走神经抑制促炎细胞因子的合成从而抑制机体炎症反应.核因子-κB和Janus激酶/信号转导与转录激活子是该通路细胞内信号转导中最重要的两条信号通路.脓毒症以全身炎症反应为特点,是危重症患者的常见死因.根据胆碱能抗炎通路作用迅速有效的特点,推测其可应用于...