内毒素诱导肝细胞非经典途径分泌HMGB1

目的 探讨内毒素诱导肝细胞释放高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的胞内途径.方法 采用正常大鼠肝细胞BRL-3A培养,观察不同浓度的内质网-高尔基体途径抑制剂布雷菲德菌素A和核转录因子-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷对100μg/L脂多糖诱导后肝细胞培养上清液中HMGB1含量的影响.HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测.结果 脂多糖诱导后肝细胞培养上清液中HMGB1含量明显升高(P＜0.01),2,10,50μmol/L布雷菲德菌素A处理对HMGB1含量没有影响,而10,50μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷显著抑制HMGB1的胞外释放(P＜0.05).结论 内毒素诱导肝细胞HMGB1释放与核转录因子-κB通路有关,但不通过经典的内质网-高尔基体途径分泌.     

缺氧对巨噬细胞HMGB1释放的影响及其机制

目的观察缺氧对巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用,并初步探讨其可能的机制。方法采用巨噬细胞株RAW264.7,观察缺氧培养不同时间对培养上清液中HMGB1含量、细胞HMGB1mRNA表达和HMGB1胞内分布的影响,及不同浓度N-乙酰半胱氨酸对HMGB1释放的抑制作用。HMGB1含量和HMGB1mRNA表达水平分别采用酶联免疫吸附试验、实时荧光定量PCR法检测。结果缺氧培养6h后HMGB1mRNA表达水平已显示增强(P0.05),缺氧培养12h后培养上清液中HMGB1含量明显升高(P0.01),且显示HMGB1核浆转移;N-乙酰半胱氨酸对缺氧培养HMGB1释放有剂量依赖性抑制作用。结论缺氧能诱导巨噬细胞释放HMGB1,其机制可能与胞内氧自由基产生有关。     

缺氧诱导人肺成纤维细胞释放高迁移率族蛋白B1

目的:观察缺氧对人肺成纤维细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用。方法:采用HFL1人肺成纤维细胞株,观察缺氧培养不同时间对细胞HMGB1mRNA表达和培养上清液中HMGB1含量的影响,及不同浓度N-乙酰半胱氨酸对HMGB1释放的抑制作用。HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测。结果:缺氧培养6h后HMGB1mRNA表达水平和培养上清液中HMGB1含量明显升高(P<0.01),后者随着培养时间延长而进一步升高;10mmol/L和100mmol/LN-乙酰半胱氨酸对缺氧培养HMGB1释放有不完全的抑制作用。结论:缺氧能诱导人肺成纤维细胞释放HMGB1,其机制可能与胞内氧自由基产生有关。     

HMGB1在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组0、.2 mg/kg脂多糖组、1 mg/kg脂多糖组5、mg/kg脂多糖组、AG 490处理组和氟达拉宾处理组,AG 490和氟达拉宾的使用剂量分别为20 mg/kg和10 mg/kg。于腹腔注射后不同时间观察肝组织HMGB1 mRNA表达、血清HMGB1水平和丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力的变化。HMGB1 mRNA表达和HMGB1含量分别采用RT-PCR方法和ELISA检测。结果小鼠注射脂多糖后,肝组织HMGB1 mRNA表达、血清HMGB1水平和丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力均呈剂量相关性升高,而使用JAK/STAT通路抑制剂AG 490和氟达拉宾处理后,以上指标均明显下降（P〈0.05）。结论脂多糖诱导的HMGB1释放与胞内JAK/STAT信号通路有关,HMGB1在内毒素血症小鼠肝损伤中具有作用。     

TNF参与内毒素诱导肥大细胞HMGB1释放

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在内毒素诱导肥大细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放中的作用。方法采用小鼠肥大细胞株P815培养物,观察100μg/L脂多糖(LPS)诱导后培养上清液中HMGB1、TNF-α含量的变化,不同剂量抗TNF-α中和抗体IgG对LPS诱导HMGB1释放的影响,及TNF-α对HMGB1释放的诱导作用。HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测。结果培养上清液中HMGB1含量随LPS诱导时间而升高,而TNF-α含量于诱导6 h时达到峰值;5、25 mg/L抗TNF-α抗体对LPS诱导HMGB1释放有明显的抑制作用(P0.05);TNF-α显示具有诱导肥大细胞释放HMGB1的作用,并呈时间、剂量相关性。结论 TNF-α参与内毒素诱导肥大细胞释放HMGB1的过程。     

电针干预自发性高血压大鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达

背景:近年来大量临床研究表明针刺风池、太冲、曲池等穴位能有效降低血压,可用于高血压,但对其治疗的分子机制尚未阐明.目的:观察针刺大鼠风池、太冲、曲池等穴位对丝裂原活化蛋白激酶信号转导调控系统的影响,从而探讨针刺治疗高血压的分子机制.方法:选取8月龄自发性高血压雄性Wistar大鼠14只,随机分为针刺组和模型组,每组7只;另选取同月龄正常血压雄性Wistar-Kyoto大鼠7只作为对照组.对针刺组大鼠采用电针针刺双侧风池、曲池和三阴交穴,毫针刺太溪和太冲穴.3周后采用RT-PCR方法检测各组大鼠主动脉组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 mRAN的表达,Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达.结果与结论:与对照组比较,模型组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 mRNA及其蛋A表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平降低,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05).提示针刺治疗自发性高血压大鼠可能是通过调控丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径,增强磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达,降低丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1蛋白表达,从而改善血管重塑,降低血压.     

原发性肝癌高迁移率族蛋白B1表达改变及其机制

目的研究原发性肝癌（PHC）组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达改变和诱导机制,及PHC患者血清HMGB1水平变化和意义。方法对38例慢性乙肝、32例乙肝后肝硬化、23例继发性肝癌、39例PHC患者和48例健康对照者的血清HMGB1水平进行测定和分析。采用RT-PCR方法,检测11例PHC组织及其癌旁组织中的HMGB1基因表达水平。观察缺氧培养对肝癌细胞株SMMC-7721HMGB1基因表达和胞外释放的影响。结果PHC患者血清HMGB1水平（13．5±6．3μg／L）明显高于健康对照者（3．9±1．4μg／L）,并与AFP水平、TNM分期有关。PHC组织中HMGB1mRNA表达增强。SMMC-7721细胞经缺氧培养3h后,培养上清液中HMGB1含量即见升高,6h后,HMGB1mRNA表达明显增强（P〈O．01）。结论PHCHMGB1表达增强,缺氧为诱导因素。     

肺癌细胞促进单核吞噬细胞MAPK相关通路活化诱导炎性细胞因子表达上调的研究

目的：通过建立人单核吞噬细胞系（THP‐1）和人肺腺癌细胞系（SPC‐A1）共培养体系,检测共培养体系中THP‐1的炎性细胞因子mRNA表达水平和丝裂原活化蛋白激酶通路（MAPK）的表达情况,初步阐明肺癌微环境对THP‐1中炎性细胞因子表达的影响。方法体外培养SPC‐A1细胞系、THP‐1细胞系,并建立二者共培养体系,设置THP‐1单独培养组为对照组。24h后,收集各组THP‐1细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real‐TimePCR）检测白细胞介素（IL）‐1β、‐6、‐8及肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）的mRNA表达水平;Westernblot检测MAPK通路蛋白c‐Jun氨基末端激酶及其磷酸化形式（JNK／p‐JNK）、丝裂原活化蛋白激酶p38亚单位及其磷酸化形式（p38MAPK／p‐p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶及其磷酸化形式（ERK／p‐ERK）的表达。结果共培养24h后,共培养组THP‐1的IL‐1β、IL‐8mRNA表达水平均明显高于对照组（P＜0．05）,分别为对照组的5．81、4．21倍;Westernblot结果显示共培养组p38MAPK、p‐p38MAPK的表达水平均明显高于对照组（P＜0．05）。结论肺癌细胞可引起肺癌环境中单核吞噬细胞中p38MAPK通路的活化,进而诱导IL‐1β、IL‐8mRNA表达上调,有利于肿瘤炎症微环境的维持和促进肿瘤的进展。     

IL-17A诱导胃癌细胞SGC-7901分泌CXCL13机制研究

目的探讨白细胞介素17A(IL-17A)诱导胃癌细胞SGC-7901分泌CXCL13的分子机制。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901,利用IL-17A刺激或预先加入信号通路抑制剂孵育后再进行IL-17A刺激。刺激后采用酶联免疫吸附法检测培养上清CXCL13水平。结果 SGC-7901细胞经IL-17A刺激后,CXCL13分泌水平显著增加(P0.05),且具有剂量和时间依赖性。信号转导与转录激活因子-3(STAT3)抑制剂预孵育,可显著抑制IL-17诱导SGC-7901细胞分泌CXCL13(P0.05),核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶1/2(MEK1/2)、p38/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂则无显著抑制作用。结论 IL-17A可通过STAT3信号通路诱导胃癌细胞SGC-7901分泌CXCL13,从而发挥免疫调节作用。     

HMGB1及其受体RAGE分子信号通路参与调节肝细胞肝癌增殖和侵袭迁移机制的研究

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及其受体晚期糖基化终产物(RAGE)在人体肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况,了解HMGB1及其受体RAGE对HCC细胞增殖和侵袭转移的影响,研究HMGB1及其受体分子信号通路参与调节HCC细胞增殖和侵袭转移的相关机制。方法选取10例人体HCC组织标本和HCC细胞培养标本,以正常的肝脏组织细胞作为对照。通过免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR检查方法分析HMGB1对HCC细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶B(AKT)、NT-κB等信号通路的调节,检测HCC细胞中HMGB1及其受体分子RAGE蛋白的表达量,对HMGB1及其受体RAGE的表达量与其临床症状作相关性分析。结果 1在HMGB1抑制剂甘草皂甙、重组HMGB1(r HMGB1)、r HMGB1+sRAGE的作用下,能够有效干扰HMGB1在HCC细胞中的表达。干扰HMGB1可以抑制HCC细胞的增殖、促使细胞凋亡、引起细胞周期阻滞,同时降低其体外迀移和侵袭能力。这些结果提示HMGB1在HCC中具有促增殖、促迁移、抗凋亡和侵袭的作用。2HMGB1能增强MAPKs和NF-κB信号通路活性。稳定干扰HMGB1的HCCLM3细胞内MAPKs的磷酸化水平降低,包括p38和JNK,同时它们的上游激酶(MEK1/2、SEK1)和下游底物(c-Jun、-Myc)的磷酸化也被抑制;NF-κB的表达量及Ser536位点的磷酸化水平也下调。结论 1HMGB1与RAGE结合通过激活MAPK信号通路最终导致核转录因子NF-κB激活并促进RAGE基因转录,增加RAGE的mRNA含量,使RAGE表达上调,正反馈的扩大HMGB1引起的反应;2HMGB1通过作用于RAGE激活下游RAC1分子,并最终引起VEGF表达上调,进而促进HCC的增殖和侵袭转移。