细胞凋亡显像剂^99mTc-膜联蛋白V的制备与体内分布

将本室改造的毕赤酵母接入100ml BMGY培养基培养24h，离心收集酵母细胞并重悬于100ml BMMY培养基，每12小时加入终浓度为0．5％甲醇诱导表达具有内在金属螯合位点的突变型人膜联蛋白V。48h后离心沉淀培养基，获得的上清经硫酸氨沉淀、分子筛分离纯化蛋白；SDS—PAGE鉴定其相对分子质量为36000，并测定其纯度为95％。纯化后的蛋白加入终浓度为1mmol／L二硫苏糖醇，37℃保温15min恢复活性，     

甘油对毕赤酵母高密度发酵表达重组水蛭素Ⅱ的影响

目的：考察甘油对毕赤酵母生长和重组水蛭素Ⅱ表达的影响。方法：在摇瓶和IOL发酵罐中用含有不同浓度甘油的培养基培养毕赤酵母，测定毕赤酵母的生长和重组水蛭素Ⅱ的表达。结果：发酵培养基中初始甘油浓度为5g／L时，毕赤酵母生长速度明显加快；补料过程中甘油浓度大于70g／L时，毕赤酵母生长受到抑制。与不加甘油相比较，诱导表达期维持培养基中甘油浓度在5g/L以下，重组水蛭素表达可提前4h，诱导30h其活性达13000 ATU／ml，比仅用甲醇诱导时效价提高了7．7％。结论：降低初始培养基中甘油浓度有利于毕赤酵母生长，补料过程中培养基甘油浓度应维持在押制毕赤酵母生长的浓度之下，诱导阶段培养基中少量的甘油有利于水蛭素的表达.     

离心法尿沉渣计数尿液最佳体积研究

目的:研究用不同尿量离心沉淀,观察其离心有效性和对细胞计数结果准确性的影响。方法:以红细胞尿液为标本,分别用5.0ml、2.5ml、1.0ml三个不同尿量进行离心和不离心方法的细胞计数,检测结果用t检验统计分析。结果:1.0m尿量进行离心和不离心方法的细胞计数结果无显著差异(P>0.05),5.0ml和2.5ml、细胞计数结果具有显著差异P<0.05。结论:采用1.0ml尿量进行离心法细胞计数可以确保细胞成分离心沉淀完全,细胞计数结果准确。     

人膜联蛋白V二聚体的制备研究

目的 制备人膜联蛋白V二聚体,为其药理作用研究创造条件.方法 人膜联蛋白V基因转化毕赤酵母获得的转基因酵母用于本实验.在BMGY培养基中培养转基因酵母,在BMMY培养基中诱导人膜联蛋白V的分泌表达.通过硫酸铵沉淀、分子筛分离、超滤浓缩等纯化步骤序列处理BMMY培养基上清,用SDS-PAGE分析人膜联蛋白V形成二聚体的变化.结果 BMMY培养基诱导转基冈酵母2天后获得人膜联蛋白V,培养基上清经过硫酸铵沉淀、分子筛分离、超滤浓缩等纯化步骤序列处理后制备人膜联蛋白V二聚体.结论 本实验室制备出人膜联蛋白V二聚体,其药理作用有待进一步研究.     

丙酮沉淀法提取杠板归多糖的工艺研究

目的:探讨丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。方法:以杠板归为研究对象,以水为溶剂提取杠板归多糖,提取液用丙酮进行沉淀,选取离心时间、沉淀时间和沉淀剂用量3个因素做单因素进行正交实验,探索最佳提取条件。结果:丙酮加入量75ml、沉淀时间18h和离心时间18min是丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。结论:确定了丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。     

一种感受态细菌的制备方法

目前,尽管分子克隆实验中通常采用的感受态细菌的制备方法可满足一般的实验要求,但对于获得比较困难的DNA分子而言,最大限度地提高质粒转化细菌菌株的效率,对提高实验成功率无疑具有重要意义[1]。我们通过摸索,建立起一种方便、快捷、重复性好,转化效率高的感受态细菌的制备方法,介绍如下。1 材料与方法1.1 缓冲液的配制 配制100ml(pH6.2)缓冲液,各组分终浓度分别为:KCl 100mmol,CaCl2 50mmol,Glucose 10％,KAc 10mmol。0.22μm滤器滤过除菌,4℃保存,3个月有效。1.2 实验步骤 取单克隆细菌DH—5α接种于含有1ml LB培养基的试管中,37℃温育,振摇过夜;将上述菌液1ml加至100ml LB培养基中,37℃摇床(250r/min)振荡培养3h至OD≈0.5;菌液离心,4℃,4000r/min,离心10min,弃去上清液;     

离心沉淀集菌涂片与罗氏培养痰内结核分枝杆菌结果分析

目的 通过离心沉淀集菌方法 来提高痰液结核分枝杆菌的检出率.方法 采用快速离心沉淀集菌涂片法检测痰液抗酸杆菌,同时痰涂阳性者接种酸性罗氏培养基进行培养对照观察.结果 利用离心沉淀集菌方法 可提高痰涂片和培养的阳性率.结论 此方法 操作简便、快速、敏感,其阳性检出率高,便于其他实验室借鉴与改进推广运用.     

从曲霉EF8培养物制取免疫增强剂

一种免疫增强剂含有产生分裂素的曲霉EF8的培养物。方法是将曲霉EF8培养于含牛奶培养基(脱脂牛奶8％,酵母提取物为0.3％和葡萄糖1.0％),培养72h,6000r/min离心20min,收集上清液,除去蛋白质,进行吸附层析或凝胶过滤层析。     

洗涤红细胞的临床应用(附三例报告)

<正> 1 制备方法 取与受血人配合的72h内新鲜全血300～400ml,离心或自然沉淀后,分离出血浆另用,将0.85％生理盐水倍量注入压积红细胞中。轻轻混匀后,离心,弃去上清液,同法洗涤8次后,注入0.85％生理盐水等量。混匀后即可应用。     

一种改进简便的质粒DNA提取方法

参照 T.Maniatis 等大量分离纯化质粒DNA 的方法,我们改进为一种简便小量分离提取法,介绍如下。材料和方法一、材料1.含 pCP_(10)(pBR_(322)—HBV—DNA 重组质粒)质粒大肠杆菌由北京医科大学肝病研究所王宇赠.2.RNase、PronaseE.BamHI 购自华美生物工程公司。3.肉膏汤(LB)培养基:每100毫升含胰蛋白胨1g,酵母膏0.5g、氯化钠0.5g、高压灭菌,加氨苄青霉素2mg.二,方法1.细菌培养:挑取重组菌株,接种于含有20mlLB 培养基的试管或锥形瓶中,37℃摇床培养至光密度 A_(600)为1.7～1.9(约5小时),加氯霉素0.2mg/ml,继续扩增质粒14～24小时。2.提取质粒 DNA:将菌液倒入1.5ml 离心管。4000×g 离心10分钟,弃上清,再加菌液,重复离心一次,存留菌体。加 TE 液100ul(10mMTris—HCI、ImMEDTA)、使菌体充分悬浮,加300ul     

复方洁霉素滴鼻液细菌微生物限度验证

目的建立复方洁霉素滴鼻液的微生物检查法。方法通过对供试品的离心处理后,联合培养基稀释法,建立复方洁霉素滴鼻液微生物限度验证方法。结果采用上述实验方法,5种验证用菌的回收率都在70％以上。结论检查复方洁霉素滴鼻液微生物限度可用离心沉淀集菌法联合培养基稀释法。     

快速融化离心法与虹吸法制备冷沉淀的质量评价

目的: 评价快速融化离心法与虹吸法制备冷沉淀的质量与制备效率,选择优质高效的冷沉淀制备方法。方法: 取新鲜冰冻原料血浆420袋,分为2组,每组有200 ml原料血浆90袋,100 ml原料血浆120袋,4名成分制备人员连续2日分别采用虹吸法与快速融化离心法制备冷沉淀,记录制备时间,计算制备效率。每组随机抽取100 ml原料血浆制备的冷沉淀30袋,使用半自动血凝仪检测冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量,分别计算合格率。结果: 快速融化离心法和虹吸法制备冷沉淀Ⅷ因子含量分别为（70.9±8.3）IU和（45.9±7.6）IU,合格率分别为100%和 90%,差异均有统计学意义（P <0.05）;纤维蛋白原含量分别为（96.0±7.3）mg和（79.0±6.8）mg,合格率分别为100%和90%,差异均有统计学意义（P <0.05）。快速融化离心法和虹吸法制备效率分别为46 U/h和40 U/h。结论: 快速融化离心法制备冷沉淀具有优质高效的特点,值得推广。     

富铬酵母的制备及最佳工艺条件研究

目的:研究设计制备富铬酵母的最佳工艺条件.方法:对5株啤酒酵母和三种培养基进行比较,选出富铬能力相对较强的菌株和培养基,确定其最佳培养条件.结果:富铬酵母的最佳培养条件为:天然南瓜汁作为培养基,铬浓度为300μg/mL,pH为5.0,接种量为10%,培养时间为24 h,培养温度为28℃,转速为200 rpm.在此条件下,富铬酵母的生物量为0.867 3 g/100 mL,有机铬含量为516.25μg/g.结论:该生物制品安全无毒,生产成本低,很具有市场前景.     

胆石利通片微生物限度检查法方法验证

目的：建立胆石利通片的微生物限度检查方法。方法按《中国药典》的规定,采用5种对照菌回收率试验测定其是否含抑菌成分。结果采用常规法,5种对照菌的回收率均小于70％;采用培养基稀释法,胆石利通片对枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的回收率小于70％;采用离心沉淀加薄膜过滤法,回收率均大于80％;控制菌检查采用培养基稀释法能检出控制菌。结论胆石利通片细菌、霉菌及酵母菌的检查采用离心沉淀加薄膜过滤法,控制菌的检查采用培养基稀释法,可行。     

Influence of Rubrus Suarissimus S.Lee Dental Care Buccal Tablets on Glucosyltransferase and Water-insoluble Glucan

目的 研究甜茶护齿含片对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖合成的影响.方法 将甜茶护齿含片磨成粉末,并采用二倍稀释法,用含1%蔗糖的胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物(TTY)液体培养基,配制成5个浓度的实验组;并以含1%蔗糖的TTY液体培养基作为阴性对照组.加入变形链球菌菌液,厌氧培养48 h后离心,一份透析提取葡糖基转移酶,采用Somogyi法和考马斯亮蓝法分别测定还原糖和总蛋白含量,计算酶活性和比活力大小;另一份弃上清液留沉淀,采用蒽酮法测定水不溶性多糖的含量.结果 随着甜茶护齿含片混悬液浓度的升高,葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量逐渐降低(P＜0.05),除0.313 g/50 ml浓度组外,葡糖基转移酶各实验组与对照组酶活性及比活力之间差异有统计学意义(P＜0.05),各实验组与对照组水不溶性多糖含量差异有统计学意义(P＜0.05).结论 甜茶护齿含片对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的合成具有显著抑制作用.     

甜茶护齿含片对葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的影响

目的研究甜茶护齿含片对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖合成的影响。方法将甜茶护齿含片磨成粉末,并采用二倍稀释法,用含1%蔗糖的胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物(TTY)液体培养基,配制成5个浓度的实验组;并以含1%蔗糖的TTY液体培养基作为阴性对照组。加入变形链球菌菌液,厌氧培养48 h后离心,一份透析提取葡糖基转移酶,采用Somogyi法和考马斯亮蓝法分别测定还原糖和总蛋白含量,计算酶活性和比活力大小;另一份弃上清液留沉淀,采用蒽酮法测定水不溶性多糖的含量。结果随着甜茶护齿含片混悬液浓度的升高,葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量逐渐降低(P<0.05),除0.313 g/50 ml浓度组外,葡糖基转移酶各实验组与对照组酶活性及比活力之间差异有统计学意义(P<0.05),各实验组与对照组水不溶性多糖含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论甜茶护齿含片对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的合成具有显著抑制作用。     

空气干燥法制备阴道毛滴虫染色体标本

阴道毛滴虫染色体数目及染色体核型分析,国内尚未见报道。本文采用空气干燥法制备阴道毛滴虫染色体的标本,效果良好,现报告如下。从患者阴道后穹隆拭取分泌物,接种于肝浸汤培养基中(内含10％小牛血清,100u/ml青霉素,链霉素100μg/ml),37℃孵育48—72h。收获前1.5h加入秋水仙素(最终浓度     

用含肉苁蓉提取物的制剂治疗脑神经退行性疾病

将酵母提取物和乳糖溶于蒸馏水中作培养基，在培养基中接种各种菌株或酵母株，并在37℃～42℃下培养24h。黄芪片于蒸馏水中煮沸，过滤得提取液。将大豆粉、蔗糖在蒸馏水中混合，并加到所得的黄芪提取液中，混匀。此混合物经加压灭菌后加到上述酵母培养基中，于36℃～42℃培养42～60h。     

毕赤酵母工程菌在不同培养基中生长的研究

目的确定重组Pichia pastoris GS115Muts菌株更适合的培养基和最佳接种时间。方法采用3种不同的培养基（YPD培养基、BMGY培养基和复合培养基）培养重组Pichia pastoris GS115Muts菌株,分别在4h和24h的时间间隔下,采用比浊法对酵母菌96h内的生长进行OD值测定。结果复合培养基和YPD培养基是3种培养基较为合适的,且在12~24h之间是重组酵母菌的对数生长期,此时是接种的最佳时间。结论合适的培养基和适当的接种时间对巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）的培养关系密切。     

中华麦饭石对真菌生长的抑制作用

<正> 菌株:本实验室保存的白色念珠菌,新型隐球菌。 含不同浓度麦饭石的沙氏液体培养基:称取中华麦饭石(简称CMS)200目粉剂20g,加于100ml蒸馏水中,隔水煮沸2h后室温过夜,次日取上清,做为100％麦饭石水。配制含麦饭石浓度为0％(对照)、10％、20％ 50％、100％的沙氏液体培养基。