风疹IgG抗体ELISA检测方法的建立和应用

目的:建立血清风疹IgG抗体(RV-IgG)酶联免疫测定(ELISA)方法,初步探讨其应用价值。方法:采用RV-GOS株感染Vero细胞制备风疹病毒(RV)抗原,并经浓缩和纯化后,建立定量间接ELISA方法。应用该方法对深圳市宝安区加～40岁270例育龄妇女血清进行RV-IgG检测,与FDA认证的意大利Dia Sorin公司生产的RV-IgGELISA方法检测试剂盒进行比较。结果:两种方法相关系数为0.92,P相似文献   

巨细胞病毒特异性IgG抗体检测方法的建立及应用

目的 为了建立一种快速、简便、实用的可用于育龄妇女血清中巨细胞病毒(CMV)-IgG抗体的筛查方法,并初步探索其应用价值. 方法 建立重组CMV(pp150+52)抗原;以国家人口和计划生育委员会科学技术研究所(简称本所)建立的重组CMV(pp150+52)抗原作为包被抗原,700 IU/L作为临界值,用间接ELISA方法,对深圳宝安区1 024例血清标本进行CMV-IgG抗体的检测. 结果 该方法 灵敏度为13 IU/L,批内变异系数4.7%～7.0%,批间变异系数7.6%～14.4%,并与SORIN公司生产的试剂盒进行了比较,2种方法 呈最度相关,Kappa值为0.82;深圳宝安区1 024例血清标本CMV-IgG抗体阳性率为93.3%(955/1 024),阴性率为6.7%(69/1 024). 结论 本所建立的ELISA方法 快速、简便和实用,可用于育龄妇女CMV-IgG抗体的筛查.     

深化孕产妇管理 预防巨细胞病毒宫内感染

目的探讨深化孕产妇管理在预防巨细胞病毒(CMV)宫内感染方面的意义.方法前瞻性随机对照研究.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测有异常孕产史的育龄妇女2 907例、孕妇3 193例外周血中CMV特异性抗体IgG和IgM,筛查出CMV IgM阳性育龄妇女210例、孕妇245例,观察中药对IgM转阴率以及孕妇的宫内传播率和妊娠结局的影响,观察育龄妇女治疗转阴后再次妊娠情况.结果中药治疗可使育龄妇女CMV IgM转阴率从自然状态下的41.28%(45/109)提高到77.23%(78/101)(X2=27.91,P=0.01)、孕妇从41.94%(52/124)提高到75.21%(91/121)(X2=27.90,P=0.01),孕妇宫内传播率从41.46%(17/41)降低到20.83%(10/48)(X2=4.45,P=0.03),流产等胎儿异常明显减少(X2=5.43,P=0.02).结论应用ELISA法,从孕前开始筛查CMV IgM阳性者并给予相应的治疗,应纳入孕产妇管理.     

巨细胞病毒IgG阳性育龄妇女体液阳性情况研究

目的:比较巨细胞病毒(CMV)IgG阳性育龄妇女外周血、尿液、阴道分泌物及乳汁中CMV排出情况,并探讨妊娠与体液排毒之间的关系。方法:应用酶联免疫吸附测定法对1 063例血清进行CMV IgG检测,阳性756例。对其中422例CMV IgG阳性的育龄妇女,应用实时荧光定量聚合酶链反应技术同时检测外周血白细胞、尿液、阴道分泌物中CMV DNA含量。22例孕妇随访至分娩,检测其乳汁中CMV排出情况。结果:422例CMV IgG阳性的育龄妇女中外周血白细胞、尿液、阴道分泌物CMV DNA检测的阳性率(1.4%、6.4%、13.7%)差异有统计学意义(χ2=48.615,P<0.01)。未妊娠妇女组、早期妊娠妇女组、中晚期妊娠妇女组分泌物CMV DNA阳性率(11.0%、14.4%、26.7%)差异有统计学意义(χ2=7.919,P=0.019)。随访的22例CMV IgG阳性孕妇有10例产后乳汁中检测出CMV DNA,阳性率为45.5%;孕期体液有CMV排出的孕妇分娩后乳汁中CMV的检出率高于孕期无体液排毒者。结论:对于CMVIgG阳性的育龄妇女,应重视无症状排毒情况,尤其重视对尿液、阴道分泌物以及产后母乳CMV排出的检测。     

风疹病毒IgG抗体检测方法的研究及应用

目的:建立一个以最低保护力的抗体水平(15IU/ml)为临界值的风疹病毒特异性IgG抗体的检测方法。方法:用优选的抗原和具有变色功能的标本稀释液,用世界卫生组织提供的标准品标定标准曲线,以常规间接ELISA方法进行检测。结果:对检测方法的各个环节进行了比较研究,确定了检测方法的最佳工艺流程。对1005例育龄妇女血清标本进行检测,并与意大利Sorin公司的试剂检测结果进行比较,两种方法呈高度相关(Kappa值为0.85)。结论:本文建立的方法具有敏感、特异、简便、快速、可重复性好等特点,适用于育龄妇女风疹病毒抗体水平的筛查。     

巨细胞病毒IgG抗体亲和力检测试剂盒的临床应用评估

目的对巨细胞病毒(CMV)IgG抗体亲和力检测试剂进行临床应用评估,为临床资料提供参考依据。方法收集医院364例CMV IgG阳性标本,同时用被考核试剂(罗氏公司生产)和参考试剂[意大利索灵诊断医疗设备(上海)有限公司生产]进行CMV IgM和IgG抗体亲和力检测,计算被考核试剂IgG抗体亲和力检测的相对灵敏度、相对特异度、相对总符合率。结果参考试剂检测为高亲和力抗体的350例、低亲和力抗体11例、灰区3例,即被考核试剂的相对灵敏度为90.90%、相对特异度为98.25%、相对总符合率为98.02%。结论罗氏公司的巨细胞病毒(CMV)IgG抗体亲和力检测试剂盒的灵敏度、特异性均高(>90.00%),具有临床应用的可行性及检测结果的可靠性。     

重庆市渝北区育龄妇女孕前病毒感染状况调查

目的:了解重庆市渝北区育龄妇女孕前弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)及巨细胞病毒(CMV)3项病毒感染状况,为优生优育工作提供依据。方法:收集2010年的1 998份育龄妇女血清标本,用ELISA法进行TOX、RV和CMV抗体检测,用SPSS11.5统计软件对资料进行分析。结果:TOX累计及新发感染率分别为2.0%和1.0%,各年龄组间TOX累计及新发感染率差异均有统计学意义(P<0.05);RV-IgG抗体阳性率为13.3%,不同年龄组育龄妇女RV抗体阳性率差异有统计学意义(P<0.05),20～30岁人群相对易感;CMV累计及新发感染率分别为14.0%和0.6%,不同年龄组育龄妇女CMV累计感染率差异有统计学意义(P<0.05),但CMV新发感染率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重庆市渝北区育龄妇女TORCH3项病毒感染率偏低,人群普遍易感,应积极加强对育龄妇女人群孕前TORCH检查,以达到优生目的。     

包头地区6000例新生儿TORCH检测结果分析

目的分析包头地区新生儿TORCH检测结果,了解该地区新生儿TORCH感染情况,为包头地区的预防保健和优生优育工作奠定坚实基础。方法选取于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院出生的6 000例新生儿利用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)检测血清中特异的TOX-IgM/IgG、RV-IgM/IgG、CMV-IgM/IgG抗体,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中的HSV I/II IgM/IgG抗体。结果 6 000例新生儿中TORCH感染阳性率为91. 17%,感染率最高的为CMV,CMV-IgM、CMV-IgG阳性检出率分别为3. 67%、90. 66%,RV-IgG的阳性检出率也高达60. 83%,TOX-IgG的阳性检出率为5. 17%,阳性检出率最高的CMV与其他各病原体阳性检出率比较差异均有统计学意义(P<0. 05)。结论包头地区新生儿TORCH感染情况不容乐观,应积极开展育龄妇女及新生儿的TORCH筛查工作。     

4644名育龄妇女TORCH-IgM抗体检测结果分析

目的:了解本地区育龄妇女弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV-1、HSV-Ⅱ)5种病原体(TORCH)感染情况,为预防TORCH感染提供参考。方法:应用酶联免疫法(ELISA)对4 644例育龄妇女TORCH-Ig M抗体水平进行检测。结果:育龄妇女TOX-Ig M、CMV-Ig M、HSVⅡ-Ig M、RV-Ig M的阳性率分别为0.02%、0.58%、0.06%和0.00%;育龄妇女CMV-Ig M阳性率在不同年龄组间有明显差异(P<0.05)。结论:本地区育龄妇女CMV感染率较高,应进行TORCH筛查以提高出生人口素质。     

肾综合征出血热IMMS-ELISA检测方法建立

目的建立一种用于检测肾综合征出血热(HFRS)特异性抗体IgG的ELISA方法—免疫磁性微球(IMMS)ELISA。方法利用重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET32a-L99S诱导表达SEO型汉坦病毒(HV)重组核蛋白(rNP),并进行镍亲和层析纯化,以纯化rNP为抗原,分别建立检测HFRS特异性抗体IgG的3种ELISA法:间接ELISA、捕获ELISA和IMMS-ELISA,并进行方法学比较。结果新建立的3种ELISA的检测灵敏度和特异度为≥90%,总符合率≥95%。其中间接ELISA的灵敏度达100%,而假阳性率为10%;捕获ELISA特异度达100%,灵敏度较低(92.5%),且假阴性率为7.5%;IMMS-ELISA的灵敏度和特异度均达到100%。结论 IMMS-ELISA较其他2种ELISA检测方法更为简单、安全和准确,易于在基层公共卫生和临床医疗机构推广使用。     

Evaluation of a new serological technique for detecting rabies virus antibodies following vaccination

Two major techniques are currently used to estimate rabies virus antibody values: neutralization assays, such as the rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT), and enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). The RFFIT is considered the gold standard assay and has been used to assess the titer of rabies virus neutralizing antibodies for more than three decades. In the late 1970s, ELISA began to be used to estimate the level of rabies virus antibody and has recently been used by some laboratories as an alternate screening test for animal sera. Although the ELISA appears simpler, safer and more efficient, the assay is less sensitive in detecting low values of rabies virus neutralizing antibodies than neutralization tests. This study was designed to evaluate a new ELISA-based method for detecting rabies virus binding antibody. This new technique uses electro-chemi-luminescence labels and carbon electrode plates to detect binding events. In this comparative study, the RFFIT and the new ELISA-based technique were used to evaluate the level of rabies virus antibodies in human and animal serum samples. By using a conservative approximation of 0.15 IU/ml as a cutoff point, the new ELISA-based technique demonstrated a sensitivity of 100% and a specificity of 95% for human samples and for experimental animal samples. The sensitivity and specificity for field animal samples was 96% and 95%, respectively. The preliminary results from this study appear promising and demonstrate a higher sensitivity than traditional ELISA methods.     

间接酶联免疫定量检测风疹IgG的方法学研究

目的 建立检测血清风疹IgG(RV-IgG)抗体的间接酶联免疫测定(在和,ELISA)方法。方法 利用RV－GOS株感染单层Vero细胞方法制备RV抗原，并采用血凝素方法提纯抗原，建立定量间接ELISA方法，进行了实验条件的选择。然后用优化的ELISA法对检测RV－IgG的敏感性，特异性和重复性进行鉴定，并与美国食品与药品监督局认证的ELISA方法进行比较。结果 间接定量ELISA方法的敏感度为3IU／ml,以Diasorin公司生产的RV－IgG试剂盒检测结果为标准，其敏感性，特异性和准确性分别为97．79％（221／226），95．45％（42／44），97．41％（263／270）；2种方法相关系数为0．92，P＜0．05，呈显著相关。结论 该ELISA方法敏感性高，特异性强，且简便，快速，重复性好，具有实际应用价值。     

ELISA法检测血清IgM抗体诊断急性期手足口病患儿CV-A16感染效能的Meta分析

目的 定量评价酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清CV-A16 免疫球蛋白M(IgM)抗体的诊断效能。方法 制定相应的研究目标和检索策略,系统地检索中、外文数据库,以HFMD患儿急性期呼吸道/或肠道标本CV-A16核酸检测为“参考标准”,采用Meta分析及Meta回归的方法,定量地评价ELISA法检测血清CV-A16 IgM抗体诊断HFMD患儿CV-A16感染的效能。结果 基于随机效应评估9篇原始研究,ELISA法诊断HFMD患儿CV-A16感染效能的合并灵敏度为65%(95%CI:47%～81%),合并特异度为92%(95%CI:88%～95%),合并阳性预测值为61%(95%CI:33%～85%),合并阴性预测值为93%(95%CI: 90%～96%),合并曲线下面积为0.92±0.04; Meta回归发现研究样本量大小、CV-A16病例占比是导致不同研究结果灵敏度及阳性预测值异质性的主要因素。结论 目前的ELISA试剂盒检测血清CV-A16 IgM的诊断效能相对较差,临床应用需谨慎,仍需要进一步加强ELISA法试剂盒的研发。     

戊型肝炎病毒IgG抗体酶联免疫诊断试剂盒研制

目的 研制戊型肝炎病毒IgG抗体（抗－HEV IgG）酶联免疫试剂盒（ELISA）。方法 应用2个人工合成的HEV多肽抗原包被微量反应板,用兔抗人IgG(γ链）辣根过氧化酶结合物作为第二抗体,检测血清中抗－HEV IgG,建立抗－HEV IgG ELISA;对该试剂盒的灵敏度、特异度、精密度、稳定性进行测定和临床考核。结果 经中国药品生物制品检定所检定,本试剂盒的灵敏度为90％（1／10）,特异度为100％（0／30）, 精密度＜15％,符合国家对抗HEV IgG ELISA的要求;在4℃下的稳定性至少为1年;与美国Genelabs公司和新加坡DBL抗－HEV IgG,ELISA总符合率分别为100％（43／43）和96．6％（86/89)。该试剂盒于1998年通过国家药品监督管理局的新药评审,获国家新药证书。结论 抗HEV IgG ELISA可用于戊型肝炎病毒感染的流行病学调查和临床诊断。     

酶联免疫吸附试验间接抗体夹心检测SARS-CoV抗原方法的建立和应用

目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(rnAb)和多克隆抗体建立SARS—CoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法用于SARS-CoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARS-CoV N蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备mAb和多克隆抗体，采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定，用单克隆抗体与兔多克隆抗体进行配对试验，建立抗原捕获抗体夹心ELISA法测定SARS-CoV N抗原。结果获得9株特异性针对SARS-CoV N蛋白的mAb和高效价的兔多克隆抗体，通过高亲和力的mAb与兔多抗的配对试验，筛选出3株单抗N1E8、N8E1和N10E4混合作为捕获抗体，与兔多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG组合作为测定抗体，建立了抗体夹心ELISA法，测定重组SARS-CoV N蛋白最高灵敏度为50pg／ml，特异性达99．86％，测定420份血清学确诊的SARS患者血清，其中发病1—10天阳性检出率为90.1％，11—20天检出率为23％，21天以上均为阴性，与其他呼吸道病毒和冠状病毒无交叉反应。结论获得特异性好、亲和力高的单克隆抗体和高效价的兔多克隆抗体，经过抗体的配对和优化，建立了一种灵敏度高、特异性强的SARS-CoV抗原的ELISA捕捉法．可应用于SARS早期诊断、溯源及流行病学研究。     

夹心ELISA检测血清结缔组织生长因子及其初步临床应用

目的应用抗结缔组织生长因子（CTGF）单克隆抗体和抗CTGF多克隆抗体,建立CTGF免疫分析方法,用其方法检测血清中CTGF含量初步验证其临床应用价值。方法使用抗CTGF的单克隆抗体包被反应板,辣根过氧化物酶标记兔抗人CTGF多克隆抗体（二抗）建立双抗体央心方法,通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA办法。使用该检测系统和进口试剂盒对照,检测其准确性和可比性。利用该系统检测临床有肝纤维化症状的患者血清标本,初步评价其临床应用价值。结果该方法有较高的灵敏度、特异性及稳定性,最低检测限批间和批内变异系数分别为0．98ng／ml、9．8％、4．9％。与进口试剂盒有很强的可比性,两者的相关系数r=0．988。初步临床标本检测证实,肝硬化、慢性肝炎急性肝炎患者的血清CTGF含量明显高于建康对照者（P〈0．01）,肝硬化患者的血清CTGF水平明显高于慢性肝炎和急性肝炎患者（P〈0．01）。结论成功地建立了一种测定血清CTGF的双抗体夹心方法,该反应系统有较高的灵敏度和特异性,和进口试剂盒有很强的可比性,为临床广泛使用打下了基础。     

尿液HIV 1抗体检测及其临床意义 FREE

目的探讨尿液标本中人免疫缺陷病毒（HIV） 1抗体检测的临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对59例经疾病预防控制中心（CDC）确诊的HIV感染者及30例健康体检者血液和尿液标本同时进行HIV 1抗体检测;以确认结果为准,计算尿液HIV 1抗体检测的敏感度、特异度。结果59例经CDC确诊的HIV感染者血清HIV 1抗体全部阳性,相应尿液中HIV 1抗体阳性53例,阴性6例;对照组30例的血清HIV 1抗体全部阴性,相应尿液1例HIV 1抗体阳性,经血清ELISA法及胶体硒法对该样本进行HIV 1抗体检测均阴性。以确认结果为准,尿液HIV 1抗体检测阳性敏感度为89.83%,特异度为96.67%。结论在采集血液标本不便的情况下,可通过检测尿液HIV 1抗体对高危人群进行HIV感染筛查。     

育龄妇女麻疹抗体水平及免疫效果分析

目的:了解南昌市育龄妇女麻疹抗体水平,探讨育龄妇女接种麻疹疫苗的可行性,为完善麻疹免疫策略及控制麻疹疫情提供依据。方法:在南昌市的12个县(区)随机抽取健康育龄妇女,观察育龄妇女强化接种麻疹疫苗(MV)前后的麻疹IgG抗体,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测麻疹IgG抗体。结果:南昌市育龄期妇女麻疹抗体血清几何平均滴度(GMT)为1∶482.64,抗体阳性率为80.79%,有随年龄增长呈下降的趋势;流动育龄期妇女麻疹抗体GMT和抗体阳性率均高于常住育龄期妇女,差异有统计学意义(P<0.05);有免疫史与无免疫史两组麻疹抗体GMT和抗体阳性率差异均有统计学意义(P=0.000),有免疫史者高于无免疫史者;育龄期妇女强化接种MV后麻疹抗体GMT为1∶1 616.47,抗体阳性率为98.52%,均显著高于接种前,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:建议对育龄妇女婚前接种含麻疹成分的疫苗,提高育龄期妇女麻疹抗体水平,降低育龄妇女和MV初始免疫月龄前婴儿麻疹发病率。