慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞及其相关因子表达的检测

目的研究Th17细胞及其相关细胞因子在慢性乙型肝炎（CHB）发病中的作用。方法流式细胞术检测CHB患者外周血Th17细胞的比例;实时定量RT-PCR检测CHB患者外周血中诱导Th17细胞分化的核转录因子RORγt以及细胞因子白细胞介素17（IL-17）、IL-21、IL-23、IL-6的mRNA表达水平;用酶联免疫吸附试验法检测IL-23、IL-6和IL-17因子分泌水平;全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平,并分析Th17细胞阳性率与ALT水平的相关性。结果 CHB患者外周血中Th17细胞阳性率、RORγt基因表达、相关细胞因子mRNA及蛋白水平均高于正常对照组（P〈0.01）,Th17细胞比例与血清ALT水平呈正相关。结论 CHB患者外周血中Th17细胞比例增高,其相关因子过表达,并与肝细胞炎性损伤程度及疾病进程相关。     

外周血Th17/Treg细胞平衡与儿童口腔溃疡严重程度的相关性分析

目的 探讨外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡与儿童口腔溃疡(OU)严重程度的关系。方法 选择浙江中医药大学附属广兴医院2018年5月—2020年7月收治的72例OU患儿进行研究(OU组),并选取同期75例体检健康儿童进行对照分析(健康组)。利用流式胞仪测定外周血Treg细胞、Th17细胞百分比，计算Th17/Treg细胞比值；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测定叉头/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)mRNA表达水平，计算RORγt/Foxp3比值；比较不同严重程度OU患儿外周血Th17、Treg、Th17/Treg及血清RORγt、Foxp3 mRNA水平、RORγt/Foxp3比值；Pearson法分析OU患儿外周血Th17、Treg、Th17/Treg水平与血清RORγt、Foxp3 mRNA水平、RORγt/Foxp3比值，外周血Th17细胞百分比与Treg细胞百分比，及血清RORγt mRNA水平与Foxp3 mRNA水平的相关性。结果 OU组患儿外周血Th17细胞百分比、Th17/Treg细胞比值...     

Th17/Treg细胞及其细胞因子在Graves眼病中的作用及意义

目的探讨Graves眼病患者外周血中Th17/Treg细胞及其相关细胞因子的表达和意义。方法选取2011年1月-2016年3月本院门诊收治的Graves眼病患者28例和20例正常健康体检者,采用流式细胞术(FCM)检测外周血中Th17细胞和Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞频数;同时检测血清中IL-17A、IL-6、TGF-β和IL-35细胞因子表达水平,实时荧光定量RT-PCR检测外周血Th17/Treg细胞的转录因子(ROR-γt/Foxp3)和功能因子(IL-17A/EBi3)的相对mRNA表达。结果 Grave眼病组外周血Th17细胞的表达百分率、IL-6和IL-17A表达水平明显高于对照组,Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞的百分率、TGF-β和IL-35表达水平明显低于对照组,Th17/Treg、IL-17A/IL-35平衡明显失调,差异均有统计学意义(P0.01)。Grave眼病组的外周血和中的Foxp3和EBi3 mRNA表达明显低于对照组,IL-17A和ROR-γt的mRNA表达明显高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 Th17/Treg细胞平衡失调,可能是导致Graves眼病发生的重要原因。     

尖锐湿疣患者外周血Treg/Th17细胞平衡及相关转录因子的表达

目的探讨Treg/Th17细胞失衡在尖锐湿疣(CA)发病及复发机制中的作用及意义。方法选取52例CA患者(初发27例,复发25例)作为研究组,30例健康者为正常对照组,采用流式细胞术(FCM)检测其外周血Treg、Th17细胞的比例,实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA和RORγt mRNA的表达水平。结果 CA患者外周血Treg细胞比例、Foxp3 mRNA表达水平高于正常对照组,复发组高于初发组,差异均有统计学意义(均P0.05);Th17细胞比例、RORγt mRNA表达水平低于正常对照组,复发组Th17细胞比例低于初发组,差异有统计学意义(均P0.05);Treg/Th17比值高于正常对照组[4.60(3.20,8.68)vs 1.39(1.05,2.05)],复发组高于初发组[8.19(4.21,10.81)vs 3.52(2.47,4.85)],差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 CA患者存在Treg/Th17细胞失衡,复发患者Treg/Th17细胞失衡更显著,并可能在CA发病及复发机制中起重要作用。     

EV71型手足口病患儿外周血RORγt mRNA与IL-17A和IL-23水平变化及其意义

目的探讨手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)患儿血液中转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA、白介素-17A(IL-17A)、白介素-23(IL-23)表达差异及其意义。方法将某医院2016年7月-2018年7月50例确诊为EV71感染的HFMD患儿分为重症组(15例)、轻症组(35例),20名同龄健康儿童作为对照组,采用液相芯片技术检测血液IL-17A、IL-23细胞因子水平,通过实时荧光定量PCR检测RORγt mRNA的表达水平。并进行组间比较。结果重症组患儿血清IL-17A、IL-23细胞因子水平和外周血RORγt mRNA表达水平均高于轻症组及对照组(P<0.05),轻症组与健康对照组比较差异无统计学意义。结论手足口病发生发展可能与外周血IL-17A、IL-23浓度升高及Th17细胞特异性转录因子RORγt mRNA表达升高引起免疫系统异常有关,值得进一步研究。     

Th17/Th22/Treg细胞及其细胞因子在先兆流产发病中的作用

目的探讨Th17/Th22/Treg细胞及其细胞因子在先兆流产发病中的作用。方法采用流式细胞术检测20例先兆流产组患者和20例正常对照组女性外周静脉血Th17/Th22/Treg细胞频数,采用ELISA双抗体夹心法检测血清中IL-17A、IL-22、IL-23和IL-35细胞因子,RT-PCR检测Th17/Th22/Treg细胞的转录因子(ROR-γt/AHR/Foxp3)的mRNA表达水平。结果先兆流产组的Th17和Th22细胞百分比高于正常对照组;Treg细胞百分比低于正常对照组;Th17/Treg比例失衡,上述差异均有统计学意义(P0.01)。先兆流产组的IL-17A、IL-22和IL-23表达水平高于正常对照组;IL-35表达水平低于正常对照组;IL-17A/IL-35比例失衡,上述差异均有统计学意义(P0.01)。先兆流产组外周血中Foxp3的mRNA表达明显低于对照组;AHR和ROR-γt的mRNA表达明显高于正常对照组,上述差异均有统计学意义(P0.01)。结论 Th17/Th22/Treg细胞失衡可能导致先兆流产发生。     

Th17/Treg细胞及其细胞因子在原因不明性复发性流产发病中的作用

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)女性患者外周血中Th17/Treg细胞及其相关细胞因子的表达和意义。方法选取2011年1月-2015年12月本院妇产科门诊收治的URSA患者32例和20例正常早孕女性,采用流式细胞术(FCM)检测外周血中Th17细胞和CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3~+CD4~+CD25~+Treg细胞频数;同时检测血清中IL-17、IL-22、IL-10和IL-35细胞因子表达水平,荧光定量PCR检测外周血和蜕膜中Treg细胞的转录因子(Foxp3)和Th17细胞的转录因子ROR-γt的相对mRNA表达水平。结果 URSA组外周血Th17细胞的百分率高于正常对照组,CD4~+CD25~+Treg细胞和Foxp3~+CD4~+CD25~+Treg细胞的百分率低于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。URSA组外周血的IL-22和IL-17A表达水平高于正常对照组,IL-10和IL-35表达水平低于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。URSA组的外周血和蜕膜组织中的Treg细胞的转录因子Foxp3的mRNA表达低于正常对照组,Th17细胞的转录因子ROR-γt的mRNA表达高于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Th17/Treg细胞平衡失调,可能是URSA发生的重要原因。     

脓毒症患儿外周血Th17细胞水平的变化 及其临床意义

摘要:目的　探讨外周血辅助性T 细胞17（Th17）细胞水平在儿童脓毒症发病中的作用及临床价值。方法　选取脓毒症患儿36例;健康儿童20例为正常对照组。分离外周淋巴细胞后,分别采用流式细胞仪检测Th17细胞比例;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测Th17细胞特异性转录因子即维甲酸受体相关孤儿受体γt（RORγt）mRNA 表达水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清IL-6,IL-17及IL-23的含量。结果　与健康对照组比较,脓毒症患儿组外周血Th17细胞比例增高（t＝3.68,P＜0.05）;脓毒症患儿组RORγt mRNA 表达水平也显著高于健康对照组（t＝8.32,P＜0.05）;同时脓毒症患儿组细胞因子含量（IL-6,IL-17,IL-23）明显高于健康对照组（P＜0.05）。此外,脓毒症死亡组患儿外周血Th17细胞水平（2.2±0.5）%显著高于存活组（0.8±0.3）%（t＝4.67,P＜0.05）,外周血Th17细胞比例与患儿死亡率呈正相关（r＝0.24,P＜0.001）。结论　Th17细胞参与了脓毒症的炎症反应,检测Th17细胞水平有助于儿童脓毒症的早期诊断、治疗及预后的判断。     

慢性乙型肝炎及后期肝病患者外周血T淋巴细胞亚群标志的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎及其后期肝病患者免疫状态,了解其变化及临床意义。 方法 纳入临床确诊的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者37例、乙型肝炎后肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者35例、乙肝肝癌(hepatocellular cancer,HCC)患者32例及健康对照(healthy controls,HC)38例。流式细胞术检测其外周血T淋巴细胞亚群(CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD4⁺ /CD8⁺和Th1、Th2)的构成比,用ELISA法分析各组血清中Th1类(IFN-γ)、Th2类(IL-4)、Th17(IL-17)细胞因子的表达量。 结果 CHB、 LC、HCC与正常对照相比外周血CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺百分数比例均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);CHB、 LC、HCC患者TH1(CD4⁺IFN-γ⁺)细胞频率明显低于健康对照(P＜0.05),CHB、 LC、HCC三组患者TH2(CD4⁺IL4⁺)均高于健康对照(P＜0.05); 对应CHB、LC、HCC患者血清IL-4、IL17明显高于健康对照组(P＜0.05),而CHB、LC、HCC患者血清中IFN-γ低于健康对照组(P＜0.05)。慢性乙型肝炎患者病程与淋巴细胞亚群、细胞因子均有明显相关性(均P<0.05)。 结论 慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化及肝癌患者外周血存在T细胞亚群标志改变,提示患者免疫功能紊乱,监测免疫功能并纠正免疫紊乱对指导临床有重要意义。     

IL-33/ST2在肺炎支原体肺炎患儿外周血中的表达研究

目的 研究白细胞介素-33/肿瘤发生抑制蛋白2(IL-33/ST2)在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血中的表达及临床意义。方法 选取2017年6月-2018年10月开封市儿童医院收治MPP患儿100例为研究对象(MPP组),另取同期健康体检者儿童100例为对照组,采集两组儿童外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC)及血浆,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-33、IL-4、IFN-γ表达水平,免疫印迹法(WB)检测ST2蛋白表达水平,COSMED PFT4型仪器检测两组儿童肺功能指标,采用Pearson法分析MPP患儿外周血IL-33、ST2蛋白水平与肺功能相关性。结果 与对照组比较,MPP儿童外周血IL-33、ST2蛋白水平、IL-4水平显著增加(t=9.749、 33.783、 43.890, P＜0.05),INF-γ水平、PEF%、FEV1%、FEV1/FVC水平均显著降低(t=12.014、 19.860、 20.258、 21.006, P＜0.05)。Pearson法分析结果显示,MPP儿童外周血中IL-33、ST2水平与IL-4水平呈正相关(r=0.537、 0.511),与INF-γ水平、PEF%、FEV1%、FEV1/FVC水平均呈负相关(r=-0.660~-0.431,P＜0.05)。结论 IL-33、ST2在MPP患儿外周血中高表达,可能通过介导Th2优势免疫应答参与MPP气道炎症反应。     

复发性流产患者外周血FOXP3 mRNA、RORγt mRNA表达及临床诊断价值

目的:探讨外周血中FOXP3mRNA、RORγt mRNA在复发性流产(RSA)患者的表达及临床诊断效能。方法:选择2018年1月-2019年12月本院就诊的RSA患者106例为RSA组,早孕健康女性39例为健康早孕组,健康体检女性42例为健康体检组,实时荧光PCR技术测定各组妇女外周血中FOXP3mRNA、RORγtmRNA表达,酶联免疫吸附试验测定白细胞介素-6、7(IL-6、7)、人胸腺活化调节趋化因子17(CCL17)、CC趋化因子受体4(CCR4)水平;绘制ROC曲线,分析FOXP3mRNA、RORγtmRNA诊断RSA效能。结果:RSA组FOXP3mRNA水平高于健康体检组但低于健康早孕组,RORγtmRNA、IL-6、IL-7水平均高于健康早孕组及健康体检组,CCL17和CCR4水平低于健康早孕组但高于健康体检组(均P<0.05)。ROC曲线分析,FOXP3mRNA联合RORγtmRNA检测诊断RSA的曲线下面积为0.962,敏感性(94.3%)、特异性(92.2%)均高于单一项目检测(P<0.05),准确率达100%。结论:外周血中FOXP3mRNA、RORγtmRNA在RSA患者中表达异常,可能与机体免疫紊乱有关,二者联合检测能获得较高的诊断RSA效能。     

过敏性哮喘患儿外周血单个核细胞mir-29c与Thl/Th2细胞平衡的相关性分析

目的 分析过敏性哮喘(AA)患儿外周血单核细胞微小RNA 29c(mir-29c)表达及与CD4+辅助性T细胞1/CD4+辅助性T细胞2(Th1/Th2)平衡的相关性。方法 将2015年10月-2018年12月本院收治的94例AA患儿分为稳定组32例,轻度急性发作组27例,中度急性发作组35例;另取健康体检儿童40例为对照组。采集所有受试者儿童外周血,分离血清和单个核细胞(PBMC),检测mir-29c、Th1/Th2、IFN-γ、IL-4、T盒子转录因子21(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA3)蛋白水平。结果 与对照组比较,稳定组、轻、中度急性发作组AA患儿PBMC中mir-29c水平、Th2亚群比例、GATA3蛋白水平及血清IL-4水平依次升高,PBMC中Th1亚群比例、Th1/Th2、T-bet蛋白水平、T-bet/GATA3及血清IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4依次降低,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。AA患儿外周血mir-29c水平与Th1/Th2、IFN-γ/IL-4、T-bet/GATA3均呈负相关(r=-0.823、-0.789、-0.804,P＜0.05)。结论 mir-29c在AA患儿外周血单个核细胞中上调表达,可能通过Th1/Th2平衡影响AA发生。     

NOD样受体介导炎症反应在不同胎龄及出生体重早产儿抗感染免疫中的作用和意义

目的 比较不同胎龄及出生体重早产儿NOD样受体(NOD1和NOD2)和炎症因子IL-6、TNF-α表达的差异,分析早产儿胎龄及出生体重与免疫功能的关系。方法 收集2016年4月-2017年11月苏州大学附属儿童医院新生儿科收治的早产儿外周血标本,分离早产儿外周血单个核细胞,分别加入NOD1激动剂Tri-DAP、NOD2激动剂MDP刺激细胞24 h,测定细胞中NOD1、NOD2的基因水平以及上清液中IL-6、TNF-α的表达水平。结果 胎龄<32周的早产儿NOD1 mRNA及IL-6的表达量明显低于34~36周早产儿(P<0.05);出生体重<1.5 kg的早产儿NOD1 mRNA的表达量明显低于1.5 kg以上的早产儿、NOD2 mRNA以及IL-6的表达明显低于2.0~2.5 kg的早产儿(P<0.05);NOD1 mRNA、NOD2 mRNA的表达量与出生体重呈正相关(r=0.352、0.306,P<0.05),但与胎龄无明显相关性;TNF-α的表达与胎龄和出生体重均呈正相关(r=0.380、0.289,P<0.05)。结论 出生体重越低,早产儿NOD样受体水平越低,介导抗感染免疫也越弱。相比于胎龄,出生体重对早产儿免疫功能影响较大。     

反复喘息儿童血清微小RNA-155表达水平及临床意义

目的 分析miRNA-155在哮喘预测指数(API)阳性和阴性反复喘息儿童中的表达水平,探讨微小RNA-155(miRNA-155)与喘息及嗜酸性粒细胞计数的关系。方法 选取2019年1月—2020年10月在玉环市人民医院住院治疗的反复喘息儿童40例为喘息组,其中API阳性儿童27例,API阴性儿童13例;同时选择健康体检儿童40例为对照组。检测喘息组和对照组儿童外周血miRNA-155、嗜酸性粒细胞、IFN-γ和IL-4水平。结果 喘息组miRNA-155水平、IFN-γ/IL-4值显著低于对照组 (t＝2.307,3.839,P＜0.05),喘息组嗜酸性粒细胞数明显高于对照组(t =5.278,P＜0.05);喘息组中API阳性儿童miRNA-155水平、IFN-γ/IL-4值显著低于API阴性及对照组儿童(H =13.580,F=9.731,P＜0.05),喘息组中API阳性儿童嗜酸性粒细胞明显高于API阴性及对照组儿童(F=22.303,P＜0.05);喘息组中API阳性儿童miRNA-155水平与喘息次数呈负相关(r＝-0.566,P＜0.05),喘息组miRNA-155水平与嗜酸性粒细胞计数呈负相关(r＝-0.630,P＜0.05)。结论 miRNA-155水平下降可能是喘息发生的危险因素,且miRNA-155在喘息发生发展中的作用可能与嗜酸性粒细胞有关。     

重组人干扰素α1b通过调控Foxp3对儿童传染性单核细胞增多症免疫功能的影响

目的 探讨重组人干扰素α1b(rhIFN-α1b)通过调控叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)表达对传染性单核细胞增多症(IM)患儿机体免疫功能的调节作用.方法 选取2019年3月—2020年3月某院儿科收治的98例IM患儿,使用简单随机数字表法将其随机分成干扰素组(n=49)和更昔洛韦组(n=49).干扰素组采...     

Fyn在母胎界面的表达及免疫调控作用

目的研究Fyn在母胎界面的表达及作用。方法构建妊娠和自然流产小鼠模型,免疫组化、实时荧光定量PCR、western-blot检测子宫胎盘组织中Fyn表达;建立LPS诱导的小鼠流产模型,以Fyn活性抑制剂,计算胚胎吸收率,实时荧光定量PCR和流式细胞学技术检测炎症因子(IL-17、RORγt、IFN-γ和TNF-α)水平、Th17和Treg细胞含量。结果Fyn水平在小鼠妊娠第4.5天最高,着床后明显降低;Fyn主要表达于子宫系膜淋巴聚集区的淋巴细胞中,自然流产组Fyn表达高于正常妊娠组;SU6656抑制LPS诱导的小鼠流产和IL-17、RORγt、TNF-α的异常高表达,以及Th17细胞含量的升高。结论Fyn通过Th17细胞等免疫因素参与母胎免疫调控及妊娠维持。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中凋亡分子表达水平及临床意义

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMC）中凋亡分子表达水平及临床意义。方法 以2018年1月至2020年7月郑州市某医院消化内科诊治的CHB患者为研究对象,比较不同病情程度患者PBMC中凋亡分子（Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8）mRNA表达量、辅助T细胞（Th）1细胞因子[白细胞介素（IL）-2、干扰素γ（IFN-γ）]、Th2细胞因子（IL-4、IL-10）水平,采用Pearson相关性分析凋亡分子与IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4的相关性。根据凋亡分子表达均数分为低表达者、高表达者,比较不同表达CHB患者HBV-DNA载量,并分析凋亡分子与乙型肝炎病毒（HBV）-DNA的关系。结果 本研究共纳入CHB患者116例,男83例,占71.6%。患者年龄27~78岁,以45~59岁所占比例最大,占50.9%。轻、中、重度患者分别为36、45、35例,分别占31.0%、38.8%、30.1%。不同病情程度的CHB患者PBMC中Caspase-3 mRNA、Caspase-6 mRNA、Caspase-8 mRNA表达量差异均有统计学意义（均P<0.01）。重度患者IL-2、IFN-γ、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4低于中度、轻度患者,IL-4、IL-10高于中度、轻度患者（均P<0.01）。以HBV-DNA载量1× 10⁵ copy/mL为界分为高载量与低载量,HBV-DNA高载量患者PBMC中Caspase-3 mRNA、Caspase-6 mRNA、Caspase-8 mRNA表达量高于HBV-DNA低载量患者（P<0.01）;且3者mRNA与IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4呈负相关（P<0.05）,与HBV-DNA载量呈正相关（P<0.05）。结论 PBMC中凋亡分子（Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8）mRNA表达随CHB患者病情加重而升高,并与Th1/Th2失衡及HBV-DNA载量具有相关性,抑制凋亡分子表达可为Th1/Th2失衡的纠正及控制HBV的复制提供新思路。