G-CSF对创伤性脑损伤大鼠神经再生作用的研究

目的探讨应用粒细胞集落刺激因子（G—CSF）治疗对44伤性脑损伤（TBI）大鼠模型神经功能恢复及神经细胞再生的作用。方法将60只健康雄性Wistar大鼠随机分成假手术对照组、脑创伤对照组、G—CSF治疗组。采用Feeney法制备中度脑创伤模型,O—CSF治疗组在大鼠脑创伤后立即给予G—CSF50μg／（kg·d）,两对照组给予等量的生理盐水,连续3d。通过BrdU标记新生增殖细胞,于术后1d、4d、7d、14d对各组大鼠进行神经功能缺失评分（mNSS）,并取大鼠脑组织行HE染色观察脑组织病理改变,免疫组织化学荧光法进行BrdU染色、BrdU／NeuN双染色检测新生增殖细胞及其分化方向。结果G—CSF治疗组4d、7d、14d时mNSS评分明显低于脑创伤对照组（P〈0．05）,高于假手术对照组（P〈0．05）。BrdU阳性细胞数在用药后4d、7d、14d时G—CSF治疗组明显高于40伤对照组、假手术对照组（P〈0．05）,并且于7d时达高峰;对比7d时创伤周围脑组织BrdU／NeuN双阳性细胞数,O—CSF治疗组明显高于脑创伤对照纽、假手术对照组（P〈0．05）,脑创伤对照纽、假手术对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论应用G～CSF治疗TBI大鼠能明显促进大鼠神经功能恢复,增加创伤周围脑组织细胞增殖,并向神经元细胞方向分化。     

丹参注射液对脑梗死大鼠双侧脑室室管膜下区神经干细胞分化作用的影响

目的观察丹参注射液对脑梗死大鼠双侧脑室室管膜下区(SVZ)内神经干细胞(NSCs)分化作用的影响。方法成功制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,随机分为丹参注射液组、生理盐水组,每组12只,每组再分为治疗7 d、14 d两个亚组。治疗前和治疗后7 d、14 d采用改良神经功能损害评分(mNSS)评定各组大鼠神经功能,另随机选取12只SD大鼠为假手术组。以免疫荧光染色法检测SVZ内溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/神经特异核蛋白(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)/NeuN双标阳性细胞。结果治疗7 d和14 d后,丹参注射液组mNSS评分较生理盐水组下降,差异有统计学意义(P0.05);各时间点丹参注射液组双侧SVZ内BrdU/NeuN双标阳性细胞较其他两组增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论丹参注射液能够促进NSCs向神经元分化及改善神经功能,对脑梗死后神经重塑发挥了积极作用。     

骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制

目的 观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果,探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制.方法 建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组.模型制作24 h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU) 标记处于增殖状态的神经前体细胞,应用免疫组织化学染色检测缺血后7 d脑组织BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数.结果 脑梗死后7 d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数开始增多,上清液高浓度组的上述阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)和低浓度组(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性神经前体细胞的增殖、分化.     

补阳还五汤对老龄大鼠脑缺血再灌注海马齿状回细胞增殖分化的影响

目的 从海马齿状回(DG)细胞增殖和分化的变化揭示补阳还五汤(BHD)抗老年脑缺血再灌注损伤的保护机制.方法 采用大脑中动脉闭塞(MCAO)方法 复制脑缺血动物模型,免疫组化方法 检测观察DG的5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)、神经元核抗原(NeuN)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数,观察脑缺血I/R 1、3、7、14、21 d大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、海马齿状回细胞增殖、分化的变化.结果 模型组脑组织含水量(I/R 1、3、7 d)、神经症状积分(各时间点)、BrdU阳性细胞(各时间点)、BrdU/NeuN双标阳性细胞(各时间点)、BrdU/GFAP双标阳性细胞(I/R 7、14、21 d)数目均高于假手术组;BHD组神经症状积分、脑组织含水量(I/R 3、7、14 d)低于模型组,BrdU阳性细胞(各时间点)、BrdU/NeuN双标阳性细胞数目(I/R 3、7、14、21 d)高于模型组,BrdU/GFAP双标阳性细胞(I/R 3、7、14 d)变化相反;BHD组神经症状积分(I/R 7、14 d)低于尼莫地平组,BrdU阳性细胞(I/R 7 d、I/R 14 d)、BrdU/NeuN双标阳性细胞(I/R 7 d、I/R 14、21 d)数目高于尼莫地平组.结论 脑缺血可激活大鼠DG神经干细胞增殖;BHD抗脑缺血再灌注损伤的机制与其促进DG区神经干细胞增殖和分化有关.     

EPO联合G-CSF对急性心肌梗死患者血流动力学的影响

目的探究粒细胞集落联合促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)和干预重组人粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)对急性心肌梗死患者血流动力学的影响。方法诊断为急性心肌梗死的患者共60例,随机分为三组,EPO组、G-CSF组及EPO+G-CSF组,比较各组患者超声心动图检测结果和血流动力学指标。结果与治疗前比较,各组左心室收缩末内径(LVESD)、左心室舒张末容量(LVEDV)、左心室收缩末容量(LVESV)、左心室舒张未期内径(LVED)、呼气终末正压(LVEDP)显著降低,左心室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+d P/dtmax)显著升高,EPO+G-CSF组效果优于EPO组及G-CSF组,各组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论 EPO联合G-CSF治疗急性心肌梗死可明显改善心功能及血流动力学,其效果优于单纯EPO或G-CSF治疗。     

重组人促红细胞生成素对脑创伤大鼠神经功能和空间记忆的影响

目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对颅脑创伤大鼠行为学和神经功能恢复的影响.方法 30只成年雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、生理盐水对照组和rhEPO治疗组.治疗组大鼠于打击后半小时内腹腔注射rhEPO 5 000 U,连续注射5d,对照组打击后半小时内腹腔内注射等量生理盐水.于术后1、4、7、14、21、25 d对3组大鼠神经功能进行mNSS评分.术后21 ～25 d进行水迷宫实验,记录大鼠每日逃避潜伏期和目标象限百分率.结果 mNSS评分结果 显示,与生理盐水治疗组比较,rhEPO治疗组大鼠于伤后第14、21、25天其行为学功能得到明显改善(P＜0.05).rhEPO治疗组大鼠伤后24和25 d的象限百分率明显比生理盐水治疗组大鼠升高(P＜0.05),逃避潜伏期短于生理盐水治疗组(P＜0.05).结论 rhEPO对脑创伤大鼠行为学功能和学习及记忆功能的恢复有明显的促进作用.     

肿瘤坏死因子α刺激基因6因子对脑梗死大鼠血脑屏障的保护作用

目的探讨肿瘤坏死因子α刺激基因6因子(TSG-6)对脑梗死大鼠血脑屏障(BBB)通透性及紧密连接蛋白ZO-1和Claudin5表达的影响。方法将42只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组6只、溶剂治疗组18只和TSG-6治疗组18只,后2组按再灌注时间分为再灌注1d组、3d组、5d组,每个亚组6只。线栓法制备大鼠大脑中动脉脑栓塞模型。TTC染色评价脑梗死体积;荧光分光光度法测定缺血侧脑组织伊文蓝(EB)含量评价BBB的通透性;神经功能损害评分(mNSS)评价神经功能改善情况;Western blot法检测脑组织ZO-1和Claudin5蛋白的表达。结果与溶剂治疗组比较,TSG-6治疗组大鼠缺血再灌注3d组和5d组mNSS评分、脑梗死体积和伊文蓝含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),TSG-6治疗组3d组和5d组脑梗死侧的ZO-1和Claudin5蛋白含量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TSG-6能够有效的抑制脑梗死大鼠BBB紧密连接蛋白ZO-1和Claudin5表达的丢失,促进BBB修复,减轻脑水肿,加快神经功能恢复。     

成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞增殖分化的比较

目的 比较成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞(NSCs)的增殖与分化,探讨脑出血后NSCs的变化规律.方法 制作大鼠脑出血模型,5-溴脱氧尿核苷(BrdU)腹腔注射标记增殖细胞,用免疫组化法检测大鼠海马齿状回BrdU、神经元核抗原(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数的变化.结果 正常组和假手术组大鼠海马齿状回均可见BrdU阳性细胞,成年大鼠明显多于老年大鼠.脑出血后成年和老年大鼠各时间点的BrdU阳性细胞均较正常组和假手术组明显增加,7d组达到峰值,成年大鼠各时间点均明显高于老年大鼠.正常大鼠海马齿状回可见少量BrdU/NeuN和BrdU/GFAP双标阳性细胞,脑出血后成年和老年大鼠海马齿状回双标阳性细胞数均较正常组明显增加,且老年大鼠BrdU/NeuN双标细胞明显少于成年大鼠.结论 脑出血后大鼠海马齿状回NSCs增殖明显,成年大鼠明显强于老年大鼠,且新生细胞分化为神经元的比例也明显高于老年大鼠.     

脑脉通对骨髓干细胞动员保护大鼠脑缺血损伤的影响

目的 研究脑脉通对脑缺血大鼠骨髓干细胞动员 (BMSCs) 在血液和脑组织的变化及脑保护作用的影响.方法 大鼠随机分为假手术组、模型组、脑脉通组、动员组、脑脉通+动员组,线栓法制备MCAO动物模型.皮下注射人重组粒细胞集落刺激因子(rG-CSF);脑脉通灌胃用药.检测大鼠外周血WBC及CD34+、脑组织CD34+变化;观察神经功能和脑组织病理改变;测定脑组织含水量和脑梗死面积.结果 模型组大鼠外周血WBC(8.07±1.27)×109/L和CD34+细胞(3.17±0.75)个/μl增加,3 d达到峰值,各治疗组增加更为明显;联合组2和3 d外周血WBC、各时间点CD34+细胞均较动员组增加.各模型组大鼠脑组织CD34+表达增强,7 d达到峰值(33.04±2.62)个/μl;各联合组较动员组增强明显.各模型组大鼠神经评分降低、脑含水量增加、脑梗死面积增大、脑组织病理损伤明显,以7 d显著;动员组大鼠7和14 d的上述指标改善;各联合组较动员组的改善明显.结论 血液WBC数CD34+计数,脑组织、CD34+表达均显著显示,脑缺血可引起BMSCs进入外周血并向脑组织归巢,峰值时间存在差异;G-CSF可使BMSCs分布增加;脑脉通使动员后血液和脑组织BMSCs增多、脑组织峰值时间延长,且使其脑保护作用增强.     

针刺预处理对脑梗死大鼠胆碱能抗炎通路的影响研究

目的探讨针刺预处理对脑梗死大鼠胆碱能抗炎通路(CAP)的影响。方法选择40只健康成年SD雄性大鼠,采用随机数字表法将大鼠分为正常组(A组)、假手术组(B组)、脑梗死组(C组)、针刺预处理组(D组)和针刺预处理+甲基牛扁亭(MLA)组(E组),各8只。A组大鼠不做任何处理;B组大鼠只切开皮肤,暴露颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉,不插入线栓,术后缝合皮肤;C组大鼠采用改良Zea Longa方法制备脑梗死模型;D组于造模前7 d开始针刺治疗;E组大鼠于针刺同时腹腔注射MLA,5 mg/kg,1次/d,连续治疗7 d。各组大鼠于造模成功后同步饲养,自由饮食,3 d后处死。于处死前采用Longar 5分制评分法进行神经功能评分;取处死大鼠新鲜脑组织顶叶皮质采用甲醛固定,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况;剩余脑组织采用液氮保存,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-1β水平,采用实时定量荧光PCR检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7n AChR)mRNA表达情况。结果 C组、D组、E组大鼠TUNEL阳性细胞多于A组和B组,脑组织中TNF-α、IL-1β水平高于A组和B组(P0.05);C组和E组大鼠α7n AChR mRNA相对表达量低于A组和B组(P0.05);D组大鼠TUNEL阳性细胞少于C组和E组,神经功能评分低于C组和E组,脑组织中TNF-α、IL-1β水平低于C组和E组,α7n AChR mRNA相对表达量高于C组和E组(P0.05)。结论针刺预处理可以改善脑梗死大鼠神经功能,抑制神经元凋亡,降低炎性细胞因子水平,上调α7n AChR mRNA的表达。     

骨髓间充质干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质神经元核抗原和神经元素1表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cell,BMSC）移植对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质神经元核抗原（neuronal nuclei,NeuN）和神经元素l（neurogeninl,Ngnl）的影响。方法64只健康雄性成年Sprague—Dawley大鼠随机分为正常对照（normal,N）±磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution,PBS）组、大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）±PBS组、正常对照＋BMSC组和MCAO＋BMSC组,每组16只。线栓法制作大鼠MCAO模型。体外培养BMSC,在模型制作后24h进行脑内移植。采用MRI活体检测脑梗死体积,NeuN／DAPI和Ngn1／DAPI免疫荧光双标法以及蛋白印迹法检测缺血周围脑组织NeuN和Ngnl表达。结果移植后14d,MCAO组大鼠T1和T2加权成像均可见大脑皮质和纹状体存在异常信号区,MCAO＋BMSC组脑梗死体积显著性小于MCAO＋PBS组（32．5％±4．2％对47．9％±7．9％;P〈0．001）。免疫荧光双标染色显示,MCAO±PBS组NeuN^＋／DAPI^＋[（976．2±87．5）个／mm^2对（1908．3±127．8）个／mm^2;P〈0．01]和Ngn1^＋／DAPI^＋[（251．6±23．1）个／mm^2对（285．1±25．2）个／mm^3;P〈0．01]细胞数量均显著性少于N±PBS组,但MCAO±BMSC组NeuN’／DAPI^＋[（1439．9±101．7）个／mm^2;P〈0．01]和Ngn1^＋／DAPI^＋[（356．3±35．6）个／mm^2;P〈0．01]显著性多于MCAO±PBS组。蛋白质印迹分析显示,MCAO±PBS组NeuN（0．69±0．06对0．91±0．09;P〈0．01）和Ngn1（0．53±0．05对0．62±0．07;P〈0．01）蛋白表达水平显著性低于N＋PBS组,但MCAO±BMSC组NeuN（0．82±0．07;P〈0．01）和Ngn1（0．77±0．09;P〈0．01）蛋白表达水平显著性高于MCAO＋PBS组。结论BMSC移植可促进NeuN和Ngnl表达,减轻MCAO脑损伤。     

静脉输注人免疫球蛋白G对慢性不可预料应激抑郁模型大鼠海马功能的影响

目的：探讨静脉输注人免疫球蛋白G（IgG）对慢性不可预料应激抑郁模型大鼠海马功能的影响。方法对慢性不可预料应激抑郁模型大鼠分别给予静脉输注人IgG＋应激（ IgG组）和单纯应激（ CUS组）处理,对照组不行任何处理。分别采用悬尾实验、糖水偏好实验、强迫游泳实验、自主活动实验和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记海马齿状回神经元,检测神经元再生情况。结果 IgG组及对照组糖水偏好消耗显著大于 CUS 组（ P均＜0．01）;悬尾实验、强迫游泳实验和自主活动实验不动时间IgG组及对照组显著小于CUS组（P均＜0．01）;IgG组海马区域BrdU阳性细胞数与CUS组比较有统计学差异（ P＜0．01）。结论静脉输注人IgG对慢性不可预料应激造成的大鼠抑郁样行为具有改善作用;可保护海马的神经元再生功能。     

体外增殖培养的骨髓间充质干细胞移植后在脑梗死大鼠脑内的存活

目的观察应用维生素C（Vc）和碱性成纤维因子（bFGF）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外增殖培养,移植到脑梗死大鼠体内后,在脑内的存活情况。方法①采用密度梯度离心及贴壁法分离大鼠BMSCs。按培养液中加入的不同因子分为4组：对照组、Vc组（50μg/m1）、bFGF组（1μg/L）以及Vc＋bFGF组（50μg/ml Vc和1μg/L bFGF）,在体外对BMSCs进行培养并观察各组细胞的增殖情况。采用MT丁比色法分别于培养第1、2、3、5和7天,测定细胞在450nm波长处的吸光度（A）值;采用流式细胞仪检测培养96h后的细胞周期。②采用线栓法制备20只大鼠右侧大脑中动脉闭塞2h模型,并随机分为2组：联合Vc＋bFGF培养的BMSCs移植组（10只）和对照BMSCs移植组（10只）。将相应组别的BMSCs细胞移植人脑梗死24h后的大鼠体内。分别于移植后第1、2和3周,制备大鼠脑组织切片并行BrdU免疫组化染色。结果①形态学观察显示,Vc＋bFGF组的BMSCs增殖最快,对照组则相对缓慢。②各组细胞的A值于培养第2天开始增加,Vc组和bFGF组在第3天达到高峰（F=728．52和F=197．18,P〈0．05）,Vc＋bFGF组在第5天达到高峰（F=1771．32,P〈0．05）,第7天均有所下降。第2天起,bFGF组、Vc组与bFGF＋Vc组的A值均高于对照组;第3天起,Vc＋bFGF组高于Vc组与bFGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。③Vc组、bFGF组与Vc＋bFGF组细胞处于增殖期（s＋G2＋M期）的百分比均较对照组高,差异有统计学意义（P〈0．05）。④BMSCs移植后第2周,联合Vc＋bFGF培养的BMSCs移植组大鼠脑组织切片中BrdU阳性细胞计数较对照组高;第3周两组阳性细胞计数均有下降,但前者仍较后者高。差异均有统计学意义（P〈0．01）;Brdu阳性细胞主要分布在梗死灶周围。结论Vc与bFGF均可促进大鼠BMSCs的增殖,二者联用较单用其一的效果更好;脑梗死大鼠移植增殖培养后的BMSCs,其在脑组织中的成活能力明显增强。     

牛磺酸对重度颅脑创伤大鼠脑组织AQP4/牛磺酸转运体基因的影响

目的研究牛磺酸（Tau）对重度颅脑创伤（TBI）大鼠脑组织的脑组织含水量、水通道蛋白-4（AQP-4）/Tau转运体（TAUT）基因表达的影响。方法按随机数字表法将84只雄性SD大鼠分为7组：假手术组（Sham组）、脑外伤组（TBI组）、Tau治疗组（Tau组）,Tau预防组（Pre-Tau组）、β-丙氨酸组（β-Ala组）、维生素C组（Vc组）、叶酸组（Fa组）,每组12只。后6组均采用液压打击制作重度TBI模型。造模成功后即刻尾静脉给药200 mg/kg。Sham组和TBI组给予相同量等渗盐水,24 h后取脑。采用HE染色法观察TBI后各组脑组织形态学变化、测定脑组织含水量,用荧光定量RT-PCR方法检测AQP-4/TAUT基因表达。结果形态学检查：TBI 24 h后,神经细胞肿胀,细胞丢失,细胞核固缩,突起短小消失,坏死灶边缘可见炎性细胞浸润,β-Ala组同TBI组。但与TBI组比较,Tau组、Vc组、Fa组、Pre-Tau组形态上无显著改善;脑组织含水量：与Sham组相比,TBI组、β-Ala组伤后24 h显著升高（P〈0.05）。而Tau组、Vc组、Fa组明显降低,与Sham组无统计学差异;Pre-Tau组显著低于Sham组（P〈0.05）。基因表达：与Sham组相比,TBI组脑组织AQP-4 mRNA表达量显著升高（P〈0.05）,Fa组TAUT mRNA表达量显著升高（P〈0.05）。结论 Tau、Vc、Fa及Tau预防性治疗均可以显著降低脑水肿和AQP-4基因表达,对TBI后脑水肿有较好的治疗作用,但Tau、Vc对TBI早期的TAUT无调节作用,其对脑组织含水量的有效性并不是通过调节TAUT实现的。     

加味丹参饮对心肌IRI大鼠骨髓干细胞动员作用的影响

目的研究加味丹参饮对心肌缺血再灌注损伤（IRI）鼠心肌细胞CD34＋蛋白表达及心功能的影响,以探讨其对骨髓干细胞动员作用及心肌IRI保护作用机制。方法大鼠120只,分IRI造模后7d、14d和28d三个时间段观察,每个时间段40只大鼠,随机分为假手术组（A组）、IRI组（B组）、重组人红细胞生成素（rhEPO）动员组（C组）、加味丹参饮组（D组）和加味丹参饮联合动员组（E组）,每组8只。采用免疫组化法检测CD34＋蛋白表达,B超检测心功能。结果与rhEPO动员组和加味丹参饮组比较,加味丹参饮联合动员组CD34＋蛋白表达和心功能明显升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论加味丹参饮联合动员骨髓干细胞可以提高心肌IRI鼠干细胞动员作用,提高心功能,从而对IRI心肌具有保护作用。     

柚皮苷联合运动对去势大鼠骨量和骨强度的影响

目的观察柚皮苷（NG）联合中强度跑台运动对去势大鼠骨质疏松模型的治疗效果。方法2月龄雌性SD大鼠80只,用随机数字法分为假手术组（SHAM）、去势组（OVX）、去势＋不同浓度（40、100、200 mg/kg）柚皮苷组（OVX＋NG）、去势＋跑台＋柚皮苷组（OVX＋EX＋NG）、去势＋跑台组（OVX＋EX）、雌激素组（OVX＋E2）,每组10只。大鼠切除卵巢2个月后开始给药,给药60 d后观察各组大鼠股骨骨密度（BMD）,Micro-CT参数,血清生化指标及及股骨力学性能与组织学改变。结果柚皮苷与跑台运动干预60 d后,OVX＋EX＋NG组大鼠股骨颈力学强度、股骨BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th等均高于单纯去势组（P〈0.05）,OVX＋EX＋NG组治疗效果与柚皮苷浓度呈正相关,以200 mg/kg柚皮苷效果最佳;200 mg/kg柚皮苷联合中强度跑台运动可进一步提高治疗效果。OVX＋NG组大鼠血清骨钙素升高,Ⅰ型胶原C端肽（CTX-1）降低;OVX＋EX组大鼠骨钙素与CTX-1均降低;OVX＋EX＋NG组大鼠骨钙素水平与柚皮苷组（200 mg/kg）无差异,但高于OVX＋EX。OVX＋EX＋NG组CTX-1水平低于单纯柚皮苷组和单纯跑台组（P〈0.05）。结论柚皮苷联合中强度跑台运动可提高去势大鼠股骨BMD,增加骨小梁数目,改善骨代谢指标,提高股骨力学性能。     

重度创伤性脑损伤致应激性肝损伤大鼠肝组织细胞色素P4502El水平变化

目的研究重度创伤性脑损伤（TBI）诱导的应激性肝损害（HSI）大鼠肝组织细胞色素P4502El（CYP2E1）的变化。方法取40只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术（A组）和TBI组,采用改良的Feeney自由落体撞击法建立TBI大鼠模型;于颅脑致伤后6、12和24 h,检测各组血清ATL、AST水平和丙二醛（MDA）水平变化,在光镜下观察肝脏组织学改变,采用RT-PCR和Western blot法分别检测各组肝组织CYP2E1 mRNA和蛋白表达。结果在TBI后6和24 h,各组大鼠血清ALT较基线水平[（42.2±8.1）U/L]明显升高[分别为（83.0±10.3）U/L和（1204.5±146.6）U/L,P〈0.01）];伤后12 h血清AST较基线[（44.0±7.2）U/L]升高[（280.4±53.3）U/L,P〈0.01）],于24 h达峰值[（790.3±114.5）U/L];伤后6 h MDA较基线[（5.2±0.2）nmol/mg]明显升高[（14.2±0.2）nmol/mg,P〈0.05],24 h达峰值[（56.3±0.5）nmol/mg];伤后24 h肝组织损伤最严重,可见肝小叶结构不清,肝窦明显扩张,散在肝细胞点状坏死,大量炎细胞浸润;伤后6 h肝组织CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平较基线水平[分别为（0.28±0.02）和（61.68±0.60）]明显增加[（0.89±0.05）和（120.24±1.22）,P〈0.05],在24 h达峰值[分别为（1.50±0.02）和（200.40±2.61）,P〈0.01]。结论 CYP2E1可能参与了TBI诱导的氧化应激反应,从而引起HSI。     

肺表面活性物质对哮喘T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响

目的观察肺表面活性物质（PS）对发作期哮喘患者T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响,揭示PS对CD4＋、CD8＋T细胞增殖周期的具体作用机制及其在哮喘治疗中的意义。方法利用细胞培养技术,通过体外PS干预,流式细胞仪测定经PS干预和未经PS干预的CD4＋、CD8＋T细胞的细胞周期分布和CD4＋、CD8＋T细胞内细胞周期调节蛋白p27kip1、cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达水平。结果哮喘患者CD4＋、CD8＋T细胞分别与PS体外共同培养后,加PS组的S期、G2/M期的CD4＋T比例显著低于对照组（P〈0.01）;G0/G1期的CD4＋T细胞比例显著高于对照组（P〈0.01）。加PS组的S期CD8＋T比例显著低于对照组（P〈0.01）;G2期的CD8＋T细胞比例略低于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）;G0/G1期的CD8＋T细胞比例高于对照组（P〈0.05）。CD4＋T细胞内p27kip1的表达水平高于对照组（P〈0.05）;CD4＋T细胞内cyclinE表达水平显著低于对照组（P〈0.01）;CD4＋T细胞内cyclinA、cyclinB的表达水平低于对照组（P〈0.05）。CD8＋T细胞内p27kip1的表达水平高于对照组（P〈0.05）;CD8＋T细胞内cyclinE、cyclinA表达水平低于对照组（P〈0.01）;CD8＋T细胞内cyclinB的表达水平与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PS通过抑制CD4＋T细胞的正性细胞周期调节蛋白cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达和上调其负性细胞周期调节蛋白p27kip1的表达,抑制CD4＋T细胞的DNA合成和细胞分裂,进而抑制CD4＋T细胞增殖;通过下调CD8＋T细胞内cyclinE、cyclinA的表达,上调p27kip1的表达,抑制CD8＋T细胞DNA合成。     

维生素E对大剂量维生素D3所致心肌损伤保护作用的实验性研究

目的：观察大剂量VD3对心肌的损伤作用及维生素E（VE）对其保护机制。方法：Wistar大鼠36只随机分为3组,VE＋VD3组经口灌胃VE油剂8．3mg／（kg·d）,共7次,后3次给药加VD3油剂15万IU／只。VD3组同法给予生理盐水和VD3,对照组给予生理盐水。测定血清、心肌中的钙含量,血清中VE含量,测量血清、心肌和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和脂质过氧化物酶（丙二醛,MDA）含量。测量心肌损伤面积。结果：VD3组血清中VE含量,血清、心肌和肝脏中GSH—Px活性明显低于VE＋VD,组和对照组（P〈0．01）,VE＋VD3组略高于对照组,但无显著性差异（P〉0．05）。VD3组血清、心肌、肝脏组织中MDA,血清、心肌钙水平明显高于VE＋VD3组和对照组（P〈0．01）,VE＋VD3组与对照组相比差异不显著（P〉0．05）。VE＋VD3组心肌坏死面积明显小于VD3组（P〈0．05）。结论：预先给予天然VE能保护大剂量VD3所致大鼠心肌损伤。     

实验性重症急性胰腺炎大鼠脑内脑红蛋白水平变化的初步研究

目的观察重症急性胰腺炎（SAP）大鼠脑内脑红蛋白（Ngb）的表达水平变化。方法应用4％和0．5％的牛磺胆酸钠（sodium taurocholate，STC）溶液诱导大鼠重症急性胰腺炎（SAP）和轻症急性胰腺炎（MAP）模型。同时设立假手术对照组。分别于模型成功诱发后4、8、16和24h取脑组织标本，免疫组化方法检测Ngb阳性细胞在各组大鼠脑组织表达分布情况，用图像分析软件进行定量分析并作统计学比较。结果SAP和MAP模型均复制成功。模型诱发后8h，SAP组脑内Ngb阳性细胞增多，其表达水平明显高于MAP组和假手术组（P〈0．05）；以后随时间延长而继续升高，24h时Ngb表达显著升高（P〈0．01）。结论SAP早期大鼠脑组织中Ngb表达明显增加，可能发挥对脑组织缺氧的适应性保护作用，同时提示缺血缺氧状态的持续存在是维持和促进胰性脑病病情发展的重要因素。