蛇孢菌素A对人直肠癌细胞生长的抑制作用及其机制研究

背景:蛇孢菌素A(OphA)是一种由双极霉属真菌产生的二倍半萜化合物,已被证实在多种实体瘤中具有抗癌效应,但其在直肠癌中的作用尚不明确。目的:研究OphA对人直肠癌细胞生长的抑制作用及其可能作用机制。方法:体外人直肠癌细胞株SW480经OphA和(或)活性氧簇(ROS)清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)作用后,以光学显微镜观察细胞形态,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和ROS表达,蛋白质印迹法检测线粒体凋亡途径相关蛋白表达和NF-κB活化情况。结果:OphA可剂量依赖性地抑制体外SW480细胞增殖,诱导细胞凋亡,促进细胞内ROS表达,细胞色素C、cleaved caspase-3、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达上调,Bcl-2、p-NF-κBp65表达下调。以NAC清除ROS可明显阻断OphA对SW480细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,同时逆转上述相关蛋白表达。结论:OphA可能通过ROS介导线粒体途径细胞凋亡,抑制人直肠癌细胞生长。NF-κB信号通路可能参与了ROS介导的细胞凋亡的调控。     

紫外线灭活仙台病毒诱导人胶质瘤细胞系LN229凋亡作用(英文)北大核心CSCD

目的探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制。方法用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果 MTT检测显示灭活仙台病毒能够剂量依赖性抑制LN229细胞增殖;流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;caspase活性测定显示灭活病毒组细胞中caspase-3,-8和-9蛋白活性呈剂量依赖性增加;Western blotting结果显示,随着灭活病毒滴度增加,细胞中Bax、细胞色素c、Fas、FasL表达水平升高、而Bcl-2、caspase-8前体、caspase-9前体和caspase-3前体蛋白表达下降。结论灭活仙台病毒能够诱导LN229细胞剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体途径和死亡受体途径相关。     

西达苯胺联合传统化疗药物促进急性T淋巴细胞系的凋亡

目的:探讨西达苯胺联合伊达比星或左旋门冬酰胺酶对急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat、MOLT4、CCRF-CEM增殖及凋亡的影响。方法:CCK8法检测西达苯胺、伊达比星、左旋门冬酰胺酶单药或两药联合对Jurkat、MOLT4、CCRF-CEM细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,Westernblot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:西达苯胺、伊达比星、左旋门冬酰胺酶单药作用于细胞,细胞的增殖抑制呈现药物浓度及作用时间依赖性。流式细胞术检测发现,西达苯胺联合伊达比星或左旋门冬酰胺酶作用于细胞相较于任何一种单药诱导细胞凋亡更加明显(均P 0. 05),具有明显的协同效应(CI 0. 7),且联合用药组细胞凋亡蛋白表达水平较单药组显著升高。结论:西达苯胺联合伊达比星或左旋门冬酰胺酶具有协同抑制急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat、MOLT4、CCRF-CEM增殖,促进细胞凋亡的作用。     

青蒿素衍生物SM1044对急性髓系白血病细胞株HL60作用的研究

目的:探讨青蒿素衍生物SM1044对人急性髓系白血病细胞株HL60细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用及其相关机制。方法:细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测SM1044对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测SM1044对细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化。结果:SM1044能有效抑制HL60细胞的增殖,且抑制作用明显强于其他几种青蒿素衍生物,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.053μmol/L;SM1044能有效地呈剂量依赖性地诱导HL60细胞凋亡及促进线粒体跨膜电位丢失,不同浓度SM1044(0、0.05、0.1和1μmol/L)作用24 h,细胞凋亡率分别为3.15%、16.75%、32.53%和49.33%(r=0.947,P<0.05)。SM1044能活化凋亡外在途径和内在途径关键蛋白胱天蛋白酶-8(caspase-8)和胱天蛋白酶-9,进而激活凋亡执行蛋白胱天蛋白酶-3及剪切凋亡底物蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)。结论:SM1044能显著抑制HL60细胞增殖,诱导HL60细胞凋亡,其机制可能与凋亡内在途径和外在途径有关。     

黄芩素通过线粒体凋亡途径诱导体外培养喉癌细胞凋亡的机制

目的探索中药黄芩有效成分——黄芩素(BAI)通过线粒体凋亡途径诱导体外培养喉癌细胞凋亡的分子机制。方法体外培养的人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,暴露于浓度递增的BAI培养液中,分别培养24、48 h,流式细胞术(FCM)检测诱导细胞凋亡作用;分光光度法检测对半胱天冬酶(caspase)-3及caspase-9的激活作用;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测对Bcl-2、Bax mRNA表达的影响;Western印迹检测对酶原蛋白(procaspase)-9、caspase-9,procaspase-3、caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果 BAI可诱导细胞凋亡,凋亡率增加;分光光度法表明BAI可以激活caspase-3、caspase-9活性;BAI可下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达;印迹BAI可上调Bax、caspase-9、caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论 BAI通过上调Bax在mRNA和蛋白水平的表达,下调Bcl-2在mRNA和蛋白水平的表达及Bcl-2/Bax比,促进Bax在线粒体外膜处聚集成簇,降低线粒体跨膜电位,促进细胞色素(Cyt)C释放到胞质,进而与激活的caspase-9及Apaf-1形成凋亡小体,从而激活caspase-3及后续线粒体凋亡途径,诱导喉癌Hep-2细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的作用及机制

目的研究三氧化二砷(ATO)对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)凋亡的作用及机制。方法将HFLS-RA分为单纯培养基空白对照组和0．5、2、8μ,mol/L ATO实验组．分别观察ATO作用72 h电镜下细胞的病理改变以及TUNEL法检测细胞的凋亡；四唑盐(MTT)法检测ATO对HFLS-RA生长的影响；反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ATO作用24 h对核转录因子(NF)-κB的mRNA表达影响。结果电镜下,ATO可以诱导HFLS-RA的凋亡,TUNEL法检测ATO组凋亡指数呈剂量依赖性增加,与对照组相比,2、8μ,mol/L ATO组凋亡指数明显增加(P＜0．05)；ATO呈现时间和剂量依赖性抑制HFLS-RA生长的作用；RT-PCR法表明ATO组NF-κB的mRNA表达剂量依赖性减少,2μmol/L以上ATO可以明显下调NF-KB的mRNA表达(P＜0．05),结论ATO可以抑制HFLS-RA的生长,并且可能通过抑制NF-KB的mRNA表达促进HFLS-RA的凋亡。     

苦参碱对体外诱导人结肠HT29细胞凋亡作用的实验研究

[目的]研究苦参碱（matrine,MA）对体外诱导人结肠癌HT29细胞的凋亡作用及其机制。[方法]不同浓度MA（0-32mg／m1）作用HT29细胞24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,线粒体跨膜电位检测试剂盒（3C-1）检测线粒体膜电位（Apm）变化,分光光度法检测caspase-3,9酶活性,Westernblot法检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl-2表达。[结果]MA显著诱导HT29细胞凋亡;16mg／mlMA作用HT29细胞24h后,caspase-9,-3酶活性明显升高;Westernblot结果显示：MA处理组促凋亡蛋白Pax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达明显降低。[结论]MA具有促进结肠癌细胞凋亡的作用,且具有剂量依赖性,其机制与线粒体凋亡途径有关。     

siRNA对脂多糖诱导下HepG2细胞caspase-8基因的干扰及对凋亡的影响

目的:研究针对人caspase-8基因mRNA的siRNA(small interfering RNA)表达载体,观察其转染人肝癌细胞HepG2后,细胞caspase-8基因表达的变化,及其对细胞凋亡的影响。方法:采用针对人caspase-8基因mRNA的siRNA表达质粒,由脂质体介导瞬时转染HepG2细胞株,并采用脂多糖(LPS)诱导HepG2细胞凋亡,RT-PCR、Westernblot测定caspase-8表达。结果:针对人caspase-8基因mRNA的siRNA表达质粒能抑制caspase-8mRNA和蛋白表达;转染后HepG2细胞体外生长明显受到抑制。结论:siRNA表达质粒能有效地抑制HepG2细胞中caspase-8的表达,抑制细胞凋亡并促进生长。为进一步探究肝衰竭基因治疗提供了实验依据。     

曲古霉素A对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的作用及机制

目的探讨曲古霉素A（TSA）对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及机制。方法用AnnexinV-FITC和PI进行双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TSA对食管癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果 1.0μmol/L的TSA诱导EC9706细胞凋亡率增加（P〈0.05）,且呈浓度依赖性;0.5μmol/L的TSA作用48 h后细胞凋亡率增加（P〈0.05）,呈时间依赖性。TSA处理的EC9706细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;TSA诱导EC9706细胞caspase-8及caspase-9裂解活化,且随作用时间延长逐步升高。结论一定量的TSA可以诱导EC9706细胞凋亡,凋亡原因与Bax表达增强、Bcl-2减少以及凋亡细胞中caspase-8及caspase-9介导的caspase-3活化有关。     

秦皮乙素对人肝癌HepG2细胞体外增殖的影响及机制探讨

目的探讨秦皮乙素对人肝癌HepG2细胞体外增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法采用不同浓度的秦皮乙素干预人肝癌HepG2细胞。采用MTT比色法观察细胞增殖率;流式细胞仪分析细胞凋亡及线粒体膜电位;分光光度法检测细胞Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9活性;免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Caspase 9蛋白表达。结果秦皮乙素干预后人肝癌细胞HepG2增殖抑制,凋亡增加;线粒体膜电位降低,Caspase 3、Caspase 9活性增强,均呈剂量依赖性;Caspase 8活性无明显变化。Bax蛋白表达上调的同时Bcl-2蛋白表达下调,亦呈剂量依赖性。结论秦皮乙素可抑制人肝癌HepG2细胞体外增殖;作用机制可能为通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

紫外线灭活仙台病毒诱导人胶质瘤细胞系LN229凋亡作用(英文)

目的探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制。方法用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果 MTT检测显示灭活仙台病毒能够剂量依赖性抑制LN229细胞增殖;流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;caspase活性测定显示灭活病毒组细胞中caspase-3,-8和-9蛋白活性呈剂量依赖性增加;Western blotting结果显示,随着灭活病毒滴度增加,细胞中Bax、细胞色素c、Fas、FasL表达水平升高、而Bcl-2、caspase-8前体、caspase-9前体和caspase-3前体蛋白表达下降。结论灭活仙台病毒能够诱导LN229细胞剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体途径和死亡受体途径相关。     

鹅脱氧胆酸衍生物HS-1200诱导人肝癌细胞株凋亡的作用及机制

鹅脱氧胆酸衍生物HS-1200可有效地抑制肝肿瘤细胞株BEL7402的生长,其作用随药物浓度提高和作用时间延长而增强,呈一定的剂量、时间依赖性;鹅脱氧胆酸衍生物HS-1200对人肝肿瘤细胞株BEL7402有显著的生长抑制作用,该生长抑制作用与HS-1200诱导肝肿瘤细胞凋亡有关;HS-1200对正常肝细胞株无生长抑制及诱导凋亡的作用.HS-1200诱导凋亡的机制可能是HS-1200提升Bax而降低Bcl-2的表达,从而使线粒体膜通透性增高,使细胞色素C由线粒体释放入胞质,活化easpase-9,活化的caspase-9切割pro-caspase-3生成caspase-3,从而诱导凋亡;但上述凋亡过程caspase-8特异性抑制剂未改变HS-1200诱导的凋亡,因而HS-1200诱导肝肿瘤细胞凋亡途径为内源性凋亡途径.     

荜茇酰胺对人胃癌细胞株MKN45增殖、凋亡的影响及其机制研究

背景:近年研究显示,荜茇酰胺(PL)在诸多恶性肿瘤中可通过升高活性氧(ROS)水平选择性杀伤肿瘤细胞,然而其对胃癌细胞的作用仍有待进一步研究。目的:探讨PL对人胃癌细胞株MKN45增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法:以不同浓度PL以及caspase抑制剂、抗氧化剂单独或联合处理MKN45细胞,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和细胞内ROS水平,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白XIAP、cleaved-caspase3、7、9、cleaved-PARP、p53及其下游靶基因p21、GADD45α、PUMA表达。结果:PL可剂量和时间依赖性地抑制MKN45细胞增殖,经PL处理的MKN45细胞G1期细胞比率、细胞凋亡率和细胞内ROS水平显著升高,抗凋亡蛋白XIAP表达下调,caspase依赖性凋亡途径、p53及其下游靶基因激活。抗氧化剂NAC或广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理可逆转PL的促ROS生成以及增殖抑制和促凋亡作用。结论:PL能抑制MKN45细胞增殖,使细胞发生G1期阻滞,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应的作用机制可能为升高肿瘤细胞内ROS水平,进而激活p53和caspase依赖性凋亡途径。     

线粒体损伤在幽门螺杆菌诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用。方法采用Westernblotting检测细胞内线粒体DNA细胞色素氧化酶(COX)Ⅰ蛋白表达的含量;流式细胞术测定细胞凋亡和线粒体膜电位变化。结果Hp培养滤液呈剂量和时间依赖性地直接诱导SGC-7901细胞凋亡,随着其浓度的增加,细胞的凋亡率呈上升的趋势。Hp培养滤液处理SGC-7901细胞4h后,线粒体膜电位开始降低,8h后下降更明显,12h已基本降至最低,24h后无明显变化。Hp培养滤液作用胃癌细胞后,线粒体DNACOXⅠ蛋白表达明显低于对照组(632·8±40·6vs895·1±44·2,P<0·05)。结论线粒体途径可能在Hp诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡过程中起重要作用。     

氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的机制

目的探讨氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用及机制。方法以不同剂量的氧化苦参碱作用于人结肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖能力,Hoechst 33258染色法观测细胞凋亡。免疫印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,荧光法测定半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的活性。结果氧化苦参碱可剂量依赖性地抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡。Western印迹方法显示氧化苦参碱可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,提高促凋亡蛋白Bax的表达,同时激活凋亡效应分子caspase-3。结论氧化苦参碱能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖,通过提高Bax的表达、抑制Bcl-2的表达、激活caspase-3发挥其诱导细胞凋亡的作用。     

多克隆抗胸腺细胞球蛋白对白血病细胞增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨多克隆兔抗人胸腺细胞球蛋白(ATG)对白血病细胞的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法:体外培养Jurkat、Raji、HL-60、NB4、K562、U937细胞株以及15例患者原代白血病细胞。用50、100、150、200、250μg/mL终浓度的ATG在不同时间分别作用于以上细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)比色法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:ATG对Jurkat、Raji、HL-60细胞有明显的增殖抑制以及诱导凋亡作用,且高浓度ATG抑制作用更强。ATG对NB4、K562、U937细胞增殖抑制与诱导凋亡作用均不明显。15例初发白血病患者中7例的原代细胞经ATG作用后明显凋亡,凋亡率均>30%。结论:ATG具有广谱抗白血病作用,尤其是对淋巴细胞白血病作用较强,为其在异基因造血干细胞移植中的应用提供了实验依据。     

青蒿琥酯对人白血病细胞Cyt C依赖性信号途径的影响

目的 探讨青蒿琥酯作用后人白血病细胞K562的细胞色素(Cyt C)和caspase-3表达的变化及其诱导白血病细胞凋亡的分子机制.方法 体外培养K562细胞,用细胞计数法绘制生长曲线;荧光显微镜检测药物作用前后细胞凋亡情况;RT-PCR检测caspase-3的表达;Western印迹法测定药物作用前后线粒体、细胞浆Cyt C的表达.结果 青蒿琥酯的浓度为1×10-4、1×10-5、1×10-6mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现;RT-PCR检测到caspase-3的表达;Western印迹法检测药物处理细胞后线粒体Cyt C表达水平下调,细胞浆出现明显Cyt C蛋白条带.结论 青蒿琥酯可诱导白血病K562细胞凋亡,其机制涉及Cyt C依赖性凋亡调节信号通路.     

去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因通过线粒体凋亡路径促进大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的 研究去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素2(tMfn2)基因对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响及其相关的信号通路.方法 用携带tMfn2基因和线粒体融合素2(Mfn2)基因的重组腺病毒(Adv-tMfn2和Adv-Mfn2)感染VSMC.采用流式细胞术、细胞凋亡ELISA、TUNEL染色等方法检测tMfn2对VSMC凋亡的影响.Western blot分析磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)以及线粒体凋亡路径中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、有活性的天冬氨酸特异-半胱氨酸蛋白酶9(cleaved caspase-9)的表达变化.结果 流式细胞仪检测和ELISA结果表明.tMfn2促VSMC凋亡的作用显著强于Mfn2,且呈时间依赖性[72 h凋亡率分别为(79.2±0.12)%和(65.0±1.2)%,P<0.01].TUNEL染色发现tMfn2组的凋亡细胞明显多于Mfn2组(P<0.01).Western blot结果显示,tMfn2和Mfn2组中p-Akt水平均明显降低,但前者作用更显著(P<0.01).进一步检测线粒体凋亡路径中的相关蛋白,tMfn2组的Bax蛋白表达显著升高、Bcl-2蛋白表达显著降低,且cleaved caspase-9的活性明显增强,较Mfn2诱导凋亡的作用更强(P<0.01).结论 与Mfn2相比,tMfn2促进VSMC凋亡的作用更强,其机制与抑制Akt磷酸化并激活线粒体凋亡途径有关.     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制

目的研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)在体外诱导人胃癌SGC7901细胞的凋亡作用,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTT比色法观察SFN对其增殖的影响。流式细胞术检测早期凋亡率、线粒体跨膜电位;免疫细胞化学法检测细胞Bax、Bcl-2、Bcl-X/L及Fas蛋白的表达;RT-PCR检测细胞Survivin基因mRNA表达。结果 SFN对SGC7901细胞的增殖具有明显抑制作用,SFN浓度在6.25～50μmmol/L之间时诱导SGC7901细胞凋亡的作用呈剂量依赖性(P0.01)。经SFN作用的SGC7901细胞线粒体跨膜电位降低,Bax及Fas蛋白表达水平上调,Bcl-X/L及Bcl-2/Bax表达水平降低;Survivin基因的mRNA表达降低(P0.01)。结论SFN可能通过下调Bcl-2/Bax及抑制Bcl-X/L蛋白的表达,活化Bax蛋白,诱导SGC7901进入内源性途径凋亡,外源性途径也可能起一定作用。SFN对SGC7901细胞的诱导凋亡作用还可能与抑制Survivin基因表达有关。     

夏枯草诱导人淋巴瘤Raji细胞凋亡及其机制

目的 探讨夏枯草诱导人淋巴瘤Raji细胞凋亡的机制.方法 人淋巴瘤Raji细胞在不同浓度夏枯草干预后分别采用CCK-8法、流式细胞术及免疫组织化学法等检测细胞增殖率和凋亡率的变化及Bcl-2、p53蛋白表达.结果 夏枯草作用于人淋巴瘤Raji细胞后引起细胞凋亡增加,并出现Bcl-2蛋白表达抑制,p53蛋白表达增强.结论 夏枯草可能通过激活p53、抑制BcI-2来诱导Raji细胞凋亡.