姜黄素对胰腺癌细胞株生长的抑制作用及可能机制

目的研究姜黄素对胰腺癌细胞增殖的体外抑制作用,探讨其抗癌作用的分子生物学机制.方法MTT法、AnnexinV-FITC/PI双染法、细胞周期分析法、透射电镜等方法检测姜黄素对Pan02细胞生长和凋亡的影响,RT-PCR检测姜黄素对Pan02细胞Bax,Bcl-2,COX-2,Bak,Survivin mRNA的表达.结果(1)姜黄素抑制Pan02细胞生长呈量效关系;(2)姜黄素处理组细胞周期发生改变,G2/M期细胞比例增多、S期细胞比例减少;(3)姜黄素处理组细胞发生凋亡,表现为凋亡细胞比例增多,形态上出现明显细胞凋亡;(4)姜黄素处理组Pan02细胞Bcl-2和Bak mRNA表达水平显著下降,COX-2,BaxmRNA表达水平显著升高,Survivin mRNA的表达水平没有变化.结论姜黄素能够抑制Pan02细胞增殖,它可改变细胞周期、诱导细胞凋亡,Bcl-2家族而不是IAP家族(至少不是Survivin)参与了Pan02细胞的凋亡过程.     

青蒿琥酯和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对前列腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的探讨青蒿琥酯和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导前列腺癌细胞(PC-3、LNCaP)凋亡的机制。方法培养前列腺癌PC-3、LNCaP细胞,分别加入青蒿琥酯和TRAIL,随机分为4组,对照组、TRAIL组、青蒿琥酯组、TRAIL+青蒿琥酯组,分别采用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞内相关信号分子(caspase-3/caspase-8、Bcl-2、Bax、Bak)在mRNA及蛋白水平的表达。结果促凋亡基因(caspase-3/caspase-8、Bax、Bak)mRNA及蛋白的表达与TRAIL及青蒿琥酯的浓度呈正相关,凋亡抑制基因(Bcl-2)蛋白及mRNA的表达与TRAIL及青蒿琥酯的浓度呈负相关。结论青蒿琥酯和TRAIL诱导前列腺癌细胞(PC-3、LNCaP)凋亡的机制可能是通过上调caspase-3/caspase-8、Bax、Bak等促凋亡基因和下调Bcl-2等凋亡抑制基因来实现的。     

三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞周期及Survivin表达的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对慢性髓系白血病细胞(K562)的作用特点及其机制。方法不同浓度As2O3作用于K562细胞后，四唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡及Survivin抗原表达；RT-PCR检测Survivin mRNA的表达。结果2—10μmoL／L的As2O3能有效抑制K562细胞增殖，但未能诱导明显的细胞凋亡。周期分析显示，G2／M期细胞比例显著增多；同时G2／M细胞周期依赖性表达的Survivin mRNA和蛋白表达增加。结论As2O3明显抑制K562细胞的生长，其机制是诱导G2／M期细胞周期停滞。Survivin表达上调可能是K562细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的机制之一。     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制

目的研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)在体外诱导人胃癌SGC7901细胞的凋亡作用,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTT比色法观察SFN对其增殖的影响。流式细胞术检测早期凋亡率、线粒体跨膜电位;免疫细胞化学法检测细胞Bax、Bcl-2、Bcl-X/L及Fas蛋白的表达;RT-PCR检测细胞Survivin基因mRNA表达。结果 SFN对SGC7901细胞的增殖具有明显抑制作用,SFN浓度在6.25～50μmmol/L之间时诱导SGC7901细胞凋亡的作用呈剂量依赖性(P0.01)。经SFN作用的SGC7901细胞线粒体跨膜电位降低,Bax及Fas蛋白表达水平上调,Bcl-X/L及Bcl-2/Bax表达水平降低;Survivin基因的mRNA表达降低(P0.01)。结论SFN可能通过下调Bcl-2/Bax及抑制Bcl-X/L蛋白的表达,活化Bax蛋白,诱导SGC7901进入内源性途径凋亡,外源性途径也可能起一定作用。SFN对SGC7901细胞的诱导凋亡作用还可能与抑制Survivin基因表达有关。     

吲哚美辛对前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响及机制探讨

目的观察吲哚美辛对人激素非依赖性前腺癌细胞系DU145增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛处理DU145细胞。应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测并计算细胞增殖抑制率；流式细胞术检测细胞周期分布，并计算细胞凋亡率；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定细胞培养上清PGE2；应用RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA。结果吲哚美辛可明显抑制DU145细胞增殖（P〈0．05），并具有时间一剂量依赖性；经吲哚美辛作用后，S期细胞明显增多，G2/M期细胞减少，细胞出现凋亡峰；细胞上清中PGB量明显减少（P〈0．001）；Bcl-2 mRNA表达降低，BaxmRNA表达下降，Bcl-2／Bax下降（P〈0．05）。结论吲哚美辛对前列腺癌细胞DU145生长具有抑制作用，阻滞细胞向c2／M期转化，并促进其凋亡。其作用可能与抑制细胞PGE2释放、下调Bel-2／Bax有关。     

EGCG对人胃癌细胞株MKN 45中Bcl-2家族相关基因表达的影响

目的:探讨EGCG干预人胃癌细胞株MKN45后Bcl-2家族相关基因表达的变化情况．方法:运用半定量RT-PCR法和蛋白免疫印迹法分别检测EGCG干预人胃癌细胞株MKN 45后不同时间点上(0,12,24,36 h)抗凋亡相关基因Bcl-xl和Bcl-2及促凋亡相关基因Bax、Bid和Bad的mRNA和蛋白表达水平,并比较不同时间点的Bcl-2与Bax的比值．结果:促凋亡相关基因Bax、Bid和Bad的mRNA与蛋白表达水平随着EGCG作用于人胃癌细胞株MKN45的时间延长(0,12, 24,36 h)逐渐升高(Bax蛋白:0．6292±0．08, 0．6454±0．04,0．8069±0．09,0．8992±0．07, P<0．05;Bid蛋白:1．1214±0．08,1．3697±0．07, 1．610±0．09,2．0623±0．12,P<0．05;Bad蛋白: 0．4327±0．02,0．7531±0．01,1．2827±0．02, 1．6388±0．09,P<0．05),而抗凋亡相关基因Bcl- xl及Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平却逐渐降低(Bcl-xl蛋白:0．6444±0．01,0．6060±0．02, 0．5647±0．04,0．5487±0．11,P<0．05;Bcl-2蛋白:0．8112±0．04,0．6716±0．08,0．4664±0．03, 0．3146±0．01,P<0．05)．Bcl-2／Bax比值也随着EGCG作用时间的延长逐渐变小(P<0．05)．结论:EGCG可改变Bcl-2家族不同成员的mRNA与蛋白表达水平,尤其是Bcl-2／Bax比值,这可能与EGCG来调控胃癌细胞凋亡有关．     

Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡

目的研究Fe-NTA诱导的氧应激对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)和人肝细胞凋亡的影响,并明确其机制与Bcl-2家族蛋白及细胞线粒体膜电位变化的关系.方法采用人肝星状细胞株及人肝细胞株张氏肝,取不同浓度的次氮基三乙酸铁(FeNTA)处理产生氧应激,测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA);用Annexin V-FITC+PI双染色法测定Fe-NTA作用后两种细胞的凋亡率;用比色法检测细胞内Caspase 3活性的改变;用阳离子荧光染料JC-1染色,检测细胞内线粒体膜电位的改变;用RT-PCR检测抗凋亡基因Bcl-2和凋亡基因Bax的mRNA表达情况;用免疫印迹技术检测Bcl-2和Bax的蛋白表达情况.结果铁负载产生氧应激后,两种细胞中SOD水平均下降,MDA含量均升高,与对照组比较有显著差异;Fe-NTa诱导的氧应激不能使HSC发生凋亡,亦未能使HSC线粒体膜电位下降,反而使细胞内Caspase 3活性逐渐降低,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平升高,Bax的mRNA与蛋白表达水平降低;Fe-NTa诱导的氧应激使肝细胞发生凋亡增多,肝细胞内Caspase 3活性逐渐升高,同时线粒体膜电位下降,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平降低;Bax的mRNA与蛋白表达水平升高.结论 Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡,通过上调Bcl-2表达及下调Bax表达、维持线粒体膜电位不致崩溃、降低Caspase 3活性而抑制肝星状细胞的凋亡,而对人肝细胞起到相反的作用,诱导肝细胞凋亡.     

小细胞肺癌阿霉素多药耐药细胞模型的建立及其与Bcl-2家族蛋白表达的关系

目的建立人小细胞肺癌（SCLC）阿霉素（ADM）多药耐药细胞系H446／ADM模型,分析凋亡相关基因Bcl-2家族在SCLC耐药性产生中的可能作用。方法采用ADM高浓度反复间歇诱导的方法,建立人SCLC的ADM多药耐药细胞系H446／ADM模型,流式细胞术分析细胞周期变化;MTT法分析细胞系的耐药谱。流式细胞术和Western blot法检测Bcl-2、Bcl-xL、Bak及Bax蛋白表达的变化。结果相对于亲代H446细胞,H446／ADM的生长速度减慢,细胞倍增时间延长,细胞周期分布G0／G1期细胞增加,G2／M期细胞减少;MTT法耐药谱分析示该细胞系对ADM的耐药倍数为33．09,此外,该细胞系对其他化疗药物如DNR、VCR、TAX、DDP、VP-16、MIT亦有交叉耐药。流式细胞术及Western blot法检测示H446／ADM细胞中Bcl-2和Bcl—xL表达明显高于H446,而Bak和Bax的表达水平明显降低（P〈0．05）。结论人SCLC耐药细胞系H446／ADM成功建立,有多药耐药性;Bcl-2家族蛋白表达的变化可能与耐药性产生有关。     

抑制干扰素诱导蛋白16表达减少人主动脉外膜成纤维细胞凋亡

目的:研究干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达抑制后对人主动脉外膜成纤维细胞(HAAFs)凋亡的影响。方法:应用IFI16基因小干扰RNA(siRNA)转染HAAFs使IFI16基因沉默(IFI16-siRNA组),以非特异性siRNA转染作为其转染阴性对照组(Con-siRNA组),未经处理的HAAFs作为未干预阴性对照组(Neg组)。应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,实时定量逆转录-聚合酶链反应(Realtime qRT-PCR)检测细胞中IFI16 mRNA表达变化,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测IFI16、抑癌因子(p53)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21~(WAF)(p21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)及Bcl-2蛋白表达。结果:IFI16-siRNA组与Con-siRNA组、Neg组相比,细胞凋亡率[(3.33±0.41)%vs(7.42±1.51)%(、6.49±1.10)%,P0.05]与G_0/G_1期细胞比例[(56.64±4.77)%vs(69.67±3.54)%、(68.29±4.14)%,P0.05]减少;而S期细胞比例[(25.23±5.19)%vs(13.76±2.07)%、(14.04±3.00)%,P0.05]增加;伴随着IFI16mRNA表达减少(P0.05),以及IFI16-siRNA组IFI16、p53、p21、Bax蛋白表达量减少(P0.05);同时Bcl-2蛋白表达量增加(P0.05)。结论:抑制IFI16表达可减少HAAFs细胞凋亡,促进细胞周期G_1/S转换,其机制部分与抑制p53/p21信号通路及调控Bax/Bcl-2表达有关。     

高糖环境对乏氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响及脑神康胶囊的干预作用

目的 研究高糖环境对体外培养的大鼠海马神经元乏氧损伤时凋亡的影响以及脑神康胶囊对损伤神经元的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,将细胞随机分成8组:对照组、高糖组、黄嘌呤(X)/黄嘌呤氧化酶(XO)组、川芎嗪组、生理盐水组、脑神康低、中、高剂量组.干预后测细胞存活率及凋亡率,采用Real-time PCR法检测各组海马神经元HIF-1α mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达及Bc-2/Bax比值.结果 与对照组相比,高糖组及X/XO组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达水平和Bcl-2/Bax的水平均显著下降,神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达水平均显著升高(均P<0.01);与X/XO组比较,川芎嗪组及脑神康各浓度组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax的水平均明显上升,而神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达均明显下降.结论 脑神康胶囊能够明显抑制高糖环境下大鼠海马神经元的凋亡,对高糖环境下海马神经元的乏氧损伤有保护作用,其作用机制之一是下调HIF-1α mRNA表达、上调Bcl-2 mRNA表达、改善乏氧环境及抗细胞凋亡.     

PPARγ pathway activation results in apoptosis and COX－2 inhibition in HepG2 cells

AIM: To investigate whether troglitazone (TGZ), the peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) gamma ligand, can induce apoptosis and inhibit cell proliferation in human liver cancer cell line HepG2 and to explore the molecular mechanisms. METHODS: (3-(4,5)-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), ((3)H) Thymidine incorporation, Hochest33258 staining, DNA ladder, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), RT-PCR, Northern and Western blotting analyses were employed to investigate the effect of TGZ on HepG2 cells and related molecular mechanisms.RESULTS: TGZ was found to inhibit the growth of HepG2 cells and to induce apoptosis. During the process, the expression of COX-2 mRNA and protein and Bcl-2 protein was down-regulated, while that of Bax and Bak proteins was up-regulated, and the activity of caspase-3 was elevated. Furthermore, the level of PGE(2) was decreased transiently after 12 h of treatment with 30 microM troglitazone. CONCLUSION: TGZ inhibits cell proliferation and induces apoptosis in HepG2 cells, which may be associated with the activation of caspase-3-like proteases, down-regulation of the expression of COX-2 mRNA and protein, Bcl-2 protein, the elevation of PGE2 levels, and up-regulation of the expressions of Bax and Bak proteins.     

PPARγ pathway activation results in apoptosis and COX-2 inhibition in HepG2 cells

AIM: To investigate whether troglitazone (TGZ), theperoxisome proliferator-activated receptor (PPAR) gammaligand, can induce apoptosis and inhibit cell proliferation inhuman liver cancer cell line HepG2 and to explore themolecular mechanisms. METHODS: [3-(4,5)-dimethyithiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (NTT), [3H] Thymidine incorporation,Hochest33258 staining, DNA ladder, enzyme-linkedimmunosorbent assay (ELISA), RT-PCR, Northern and Western blotting analyses were employed to investigate the effect of TGZ on HepG2 cells and related molecular mechanisms.RESULTS: TGZ was found to inhibit the growth of HepG2cells and to induce apoptosis. During the process, the expression of COX-2 mRNA and protein and Bcl-2 protein was down-regulated, while that of Bax and Bak proteins was up-regulated, and the activity of caspase-3 was elevated.Furthermore, the level of PGE2 was decreased transiently after 12 h of treatment with 30 gM troglitazone. CONCLUSION: TGZ inhibits cell proliferation and induces apoptosis in HepG2 cells, which may be associated with the activation of caspase-3-like proteases, down-regulation of the expression of COX-2 mRNA and protein, Bcl-2 protein,the elevation of PGE2 levels, and up-regulation of the expressions of Bax and Bak proteins.     

TMS对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 观察细胞色素酶P4501B1( CYP1B1)抑制剂2,3',4,5'-四甲氧基二苯乙烯(TMS)对人子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 采用免疫细胞化学方法检测Ishikawa细胞中的CYP1B1蛋白.采用MTT法检测10、20、40、80 μmol/L TMS培养24、48、72 h后Ishikawa细胞增殖抑制率,并于培养48 h时用倒置显微镜对Ishikawa细胞进行形态学观察.采用流式细胞术检测10、20、40、80 μmol/L TMS培养48 h后的Ishikawa细胞凋亡率、细胞周期以及细胞中的Bcl-2、Bax及Survivin.结果 CYP1B1蛋白在Ishikawa细胞中为阳性表达.TMS可呈时间和剂量依赖性抑制Ishikawa细胞增殖(P均＜0.05).用不同TMS培养48 h后镜下观察可见部分Ishikawa细胞皱缩变形,崩解坏死,细胞脱壁悬浮,并出现细胞核浓缩、核碎裂等细胞凋亡特征性形态学改变.TMS可剂量依赖性促进Ishikawa细胞凋亡,并使细胞周期中G0/G1期比例降低,G2/M期比例增高(P均＜0.05),同时降低凋亡相关蛋白Bcl-2和Surivin的表达(P均＜0.05),升高Bax的表达(P均＜0.05).结论 TMS能抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,其机制可能是通过下调凋亡抑制蛋白Bcl-2、Survivin,上调促凋亡蛋白Bax而实现的.     

Guggulsterone induces apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells through intrinsic mitochondrial pathway

AIM: To investigate the effects of guggulsterone on the proliferation and apoptosis of human hepatoma Hep G2 cells in vitro and relevant mechanisms.METHODS: Human hepatocellular carcinoma Hep G2 cells and normal human liver L-02 cells were treated with different concentrations of guggulsterone(5-100 μmol/L) for 24-72 h. Cell proliferation was tested by MTT assay. Cell cycle and apoptosis were investigated using flow cytometry(FACS). Bcl-2 and Bax m RNA and protein expression was detected by real-time PCR and Western blot, respectively. TGF-β1, TNF-α, and VEGF contents were determined by ELISA.RESULTS: Guggulsterone significantly inhibited Hep G2 cell proliferation in a dose- and time-dependent manner. FACS showed that guggulsterone arrested Hep G2 cell cycle at G0/G1 phase. Guggulsterone induced apoptosis was also observed in Hep G2 cells, with 24.91% ± 2.41% and 53.03% ± 2.28% of apoptotic cells in response to the treatment with 50 μmol/L and 75 μmol/L guggulsterone, respectively. Bax m RNA and protein expression was significantly increased and Bcl-2 m RNA and protein expression was decreased. ELISA analysis showed that the concentrations of TGF-β1 and VEGF were significantly decreased and TNF-α concentration was increased.CONCLUSION: Guggulsterone exerts its anticancer effects by inhibiting cell proliferation and inducing apoptosis in Hep G2 cells. Guggulsterone induces apoptosis by activation of the intrinsic mitochondrial pathway.     

吲哚美辛与埃罗替尼对胰腺癌细胞生长的协同抑制作用

背景：目前胰腺癌药物化疗疗效不佳。既往研究提示环氧合酶（COX）-2和表皮生长因子受体（EGFR）信号途径均参与了胰腺癌的发生、发展，COX-2抑制剂和EGFR抑制剂联用对胰腺癌的生长可能具有协同抑制作用。目的：观察COX-2抑制剂吲哚美辛与EGFR酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼对胰腺癌细胞生长的协同抑制作用。方法：以甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测胰腺癌细胞株BxPC-3的增殖情况，以流式细胞分析和原位末端标记（TUNEL）法观察用药前后细胞凋亡和细胞周期的变化，以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）观察用药前后细胞中COX-2、EGFR以及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bak mRNA表达的变化。结果：BxPC-3细胞中可观察到COX-2和EGFRmRNA表达．吲哚美辛和埃罗替尼单用均可下调COX-2和EGFRmRNA的表达，两者联用时下调作用更明显。吲哚美辛和埃罗替尼单用均可抑制BxPC-3细胞增殖，促进细胞凋亡，诱导细胞周期阻滞于G0／G1期，减少抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xL的表达，轻微上调促凋亡基因Bax的表达，两者联用对细胞生长的抑制作用增强。结论：吲哚美辛和埃罗替尼均可抑制COX-2和EGFR的表达，下调Bcl-2／Bax比值，两者联用对胰腺癌细胞生长具有协同抑制作用。     

姜黄素上调NF-κB诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡

目的观察姜黄素诱导人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞凋亡的作用,并探讨作用机制。方法用台盼蓝计数观察姜黄素对HL-60细胞生长的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA的表达,Western blot检测细胞内NF-κB p65蛋白的表达。结果姜黄素对HL-60细胞生长有抑制作用,并诱导细胞凋亡。姜黄素作用前后HL-60细胞中抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl表达无明显变化;促凋亡基因Bax和Bid表达增高;P53基因均不表达;NF-κB mRNA和蛋白表达均增高,并呈剂量依赖性。结论姜黄素能诱导HL-60细胞凋亡和上调促凋亡基因Bax和Bid,这可能与NF-κB表达上调有关。     

硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990生长抑制作用的体外研究

目的 观察硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990增殖、凋亡的影响,探讨硼替佐米杀伤癌细胞的可能机制.方法 应用1、10、50、100、500 nmol/L及1、10 μmol/L的硼替佐米干预BxPC3、SW1990细胞,以硼替佐米未干预的细胞作为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR法检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、survivin mRNA表达;蛋白质印迹法检测pro-caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、surviving蛋白表达.结果 大于50 nmol/L的硼替佐米干预胰腺癌BxPC3、SW1990细胞时,呈浓度及时间依赖性抑制细胞的增殖,其中硼替佐米对BxPC3细胞的生长抑制作用显著大于对SW1990细胞的作用,两者差异有统计学意义（P值均＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预组BxPC3和SW1990细胞凋亡率分别为（22.56±4.23）％和（（12.71±2.23）％,显著高于对照组的（2.15±0.47）％和（2.32±0.54）％（P值均＜0.05）,且BxPC3细胞的凋亡率显著高于SW1990细胞（P＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预48 h后BxPC3和SW1990细胞的Bak mRNA表达无显著变化,Bax mRNA及蛋白表达显著增加（P值均＜0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-xl mRNA表达均减少（P值均＜0.05）.survivin mRNA和蛋白表达在BxPC3细胞中均减少,而在SW1990细胞中均增加（P值均＜0.05）.2株细胞的pro-caspase-3蛋白表达减少,而cleaved-caspase-3蛋白表达增加（P值均＜0.05）.结论 硼替佐米可抑制胰腺癌细胞BxPC3、SW1990的增殖、诱导凋亡,对BxPC3细胞的作用高于对SW1990细胞,其机制可能与激活线粒体内源性凋亡途径及survivin参与的肿瘤耐药相关.     

Specific COX-2 inhibitor NS398 induces apoptosis in human liver cancer cell line HepG2 through BCL-2

AIM: To evaluate the effects of NS-398, a cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor, on the proliferation and apoptosis of HepG2 cells. METHODS: The effects of NS-398 on the proliferation of HepG2 cells were evaluated by MTT. DNA fragmentation gel analysis was used to analyze the apoptotic cells. DNA ploidy and apoptotic cell percentage were calculated by flow cytornetry. The expression of COX-2 and Bcl-2 mRNA was identified by competitive RT-PCR. Furthermore, expression level of Bcl-2 was detected using Western blot in HepG2 after treated with NS-398. RESULTS: NS-398 inhibited cell proliferation and induced apoptosis of HepG2 cells in a concentration-dependent manner. DNA ploidy analysis showed that S phase cells were significantly decreased with increase of NS-398 concentration. The quiescent GO/G1 phase was accumulated with decrease of Bcl-2 mRNA. Whereas NS-398 had no effect on the expression of COX-2 mRNA, and no correlations were found between COX-2 mRNA and HepG2 cell proliferation and apoptosis induced by NS-398 (r=0.056 and r=0.119, respectively). Bcl-2 protein level was inhibited after treated with NS-398. CONCLUSION: NS-398 significantly inhibits the proliferation and induces apoptosis of HepG2 cells. Mechanisms involved may be accumulation of quiescent GO/G1 phase and decrease of Bcl-2 expression.     

环氧合酶-2抑制剂对结肠癌细胞株的体外研究

目的 观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂对COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响，明确以COX2为靶点治疗结肠癌的作用途径以及与COX-2活性、表达水平的相关关系。方法 将选择性COX-2抑制剂NS-398作用于结肠癌细胞系HT29，运用MTT法检测细胞增殖状态。流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响。进一步用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测药物作用前后HT-29中COX-2mRNA表达。ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）水平。Western blot检测药物作用前后细胞周期素D1、Bcl-2的表达。结果 结肠癌细胞系HT-29中COX-2 mRNA高表达，NS-398呈时间和剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖，促进其凋亡。加入NS-398的HT-29细胞中COX-2mRNA表达水平无明显变化（P〉0．05），PGE2却显著下降（P〈0．01）。72h时空白组与NS-398（75μmol／L）处理组细胞周期素D1、Bcl-2表达水平比值分别为2．21和3．25（P〈0．01），两者表达水平随作用时间延长而下降。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398不影响结肠癌细胞COX-2 mRNA表达水平，而与其活性相关（PGE2水平）．可能通过细胞周期素D1、Bcl-2影响结肠癌细胞系HT-29的增殖与凋亡，揭示了COX-2为靶点治疗结肠癌的分子机制。