七氟烷通过影响神经元能量代谢和氧化应激水平促进神经元凋亡

目的研究吸入性麻醉药七氟烷对发育期神经元的凋亡作用,并探究七氟烷对原代神经元线粒体功能的影响。方法体外培养原代神经元,并随机分为对照组和实验组,实验组用4.1%七氟烷处理6 h,western blot检测Cleaved caspase-3凋亡蛋白的变化,流式细胞术检测神经元的凋亡率,DCFH-DA法检测细胞中ROS含量的变化,并检测ATP水平的变化。结果与对照组相比,七氟烷组的凋亡蛋白Cleaved caspase-3上调(P<0.01),凋亡率增加(P<0.05),ROS生成增加(P<0.05)同时ATP生成减少(P<0.05)。结论七氟烷可以诱导原代神经元的凋亡,其作用机制可能是通过线粒体能量代谢和氧化应激水平改变引起。     

骨髓间充质干细胞对七氟烷所致的原代神经元凋亡及细胞活性的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞预处理对于七氟烷导致的原代神经元细胞凋亡、细胞活性,以及TNFα水平的影响。方法 采用Transwell构建非接触性共培养体系,完成骨髓间充质干细胞对原代神经元的预处理。待原代神经元接受4%七氟烷暴露6 h后,观察其细胞形态;利用Western Blot检测凋亡程度;利用MTT和LDH检测细胞活性改变;利用ELISA检测TNFα水平。结果 BMSC预处理可以减少七氟烷对原代神经元导致的形态学改变,降低由七氟烷诱导的原代神经元凋亡(P<0.05)和细胞活性降低(P<0.05),以及TNFα大量释放(P<0.05)。结论 BMSC预处理可以缓解七氟烷暴露导致的神经毒性损伤。     

丙泊酚诱导大鼠原代培养皮层神经元凋亡

目的探讨丙泊酚对原代培养皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为两组:对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂)和丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理12h后,采用MTT法检测两组神经元存活率,Hoechst33258核染色法检测神经元的凋亡,罗丹明染色检测线粒体膜电位,Western blot法检测神经元cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白含量。结果丙泊酚组皮层神经元存活率(54.4%±6.4%),明显低于对照组(99.8%±4.1%)(P0.05);神经元凋亡率(46.5%±5.3%),明显高于对照组(7.2%±0.9%)(P0.05),线粒体膜电位(59.6%±4.3%)明显低于对照组(99.9%±5.7%)(P0.05);cyt-c蛋白含量(0.38±0.03),明显高于对照组(0.15±0.02)(P0.05),cleaved-caspase-3蛋白含量(0.46±0.04)明显高于对照组(0.13±0.02)(P0.05)。结论丙泊酚可诱导发育期原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与抑制线粒体膜电位,增加cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白含量有关。     

抗氧化剂MitoQ对异氟醚诱导大鼠海马神经元损伤的影响及机制

目的探讨抗氧化剂MitoQ对异氟醚诱导的新生大鼠海马神经元细胞损伤的影响及潜在机制。方法 SPF级健康SD大鼠15只,7日龄,体重15~20g。采用随机数字表法分为三组:对照组(C组)、异氟醚组(I组)和异氟醚+MitoQ组(IM组),每组5只。C组吸入空-氧混合气体。Ⅰ组于出生后7、14和21d吸入1.5%异氟醚2h,IM组在每次吸入异氟醚前腹腔注射MitoQ0.4ml/kg。于出生后28d采用HE染色观察各组大鼠海马CA1区海马神经元细胞形态。分离培养新生大鼠原代海马神经元细胞培养并分组处理,采用MTT法和TUNEL原位荧光染色法检测细胞存活率和凋亡率;采用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法检测细胞中丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用Rhodamine 123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(MMP),DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇(ROS)生成量,采用Western blot法检测海马神经元细胞中Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白含量。结果与C组比较,Ⅰ组大鼠海马组织神经细胞受损明显,细胞数目减少,Ⅰ组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显升高,MDA浓度明显升高,SOD活性明显降低,ROS生成量明显增加,MMP水平明显降低,Bax和caspase-3蛋白含量明显升高,Bcl-2蛋白含量明显降低(P0.05);与Ⅰ组比较,IM组大鼠海马组织神经细胞损伤减少,细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,MDA浓度明显降低,SOD活性明显升高,ROS生成量明显减少,MMP水平明显升高,Bax和caspase-3蛋白含量明显降低,Bcl-2蛋白含量明显升高(P0.05)。结论抗氧化剂MitoQ可明显抑制异氟醚诱导的海马神经元细胞损伤,这与其拮抗细胞氧化应激和维持线粒体功能作用密切相关。     

HO-1在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用.方法 出生48 h内的Wistar大鼠,体外培养海马神经元,随机分为6组,每组108孔,正常对照组(C组):不做任何处理;2%七氟烷预处理组(S1组):2%七氟烷预处理60 min后正常培养24 h;OGD组:缺糖缺氧45 min后复糖复氧,再正常培养24 h以制备氧糖剥夺模型;2%七氟烷预处理+OGD 组(S1+OGD组)和4%七氟烷预处理+OGD组(S2+OGD组):分别经2%、4%七氟烷预处理后制备氧糖剥夺模型;4%七氟烷预处理+ZnPPⅨ+OGD(Z组):4%七氟烷预处理同时在培养液中加入ZnPPⅨ(终浓度10 μmol/L),其余处理同S2+OGD组.正常培养24 h时检测神经元存活率、凋亡率和HO-1蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与C组比较,OGD组、S1+OGD组、S2+OGD组和Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,S1组海马神经元HO-1 mRNA 及其蛋白表达上调(P<0.01),神经元存活率、凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与OGD组比较,S1+OGD组、S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,Z组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与S1+OGD组比较,S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与S2+OGD组比较,Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达下调(P<0.01).结论 HO-1可能参与了七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡的机制.     

七氟烷通过ERK1／2／Nrf2信号通路诱导HO-1基因表达抑制神经元凋亡

目的：研究七氟烷（Sevoflurane）诱导神经元血红素氧合酶－1（HO－1）基因表达的信号转导通路，探讨七氟烷脑保护机制。 方法：将培养7d的新生Wistar大鼠海马神元随机分为5组：正常培养组（C组）、氧糖剥夺组（D组）、2％七氟烷＋氧糖剥压组（S1组）、4％七氟烷＋氧糖剥压组（S2组）、4％七氟烷＋U-012＋4％七氟烷＋氧糖剥压组（U组）。C组和S2组神经元分别给予2％或4％七氟烷预处理60min后同D组处理。U组在神经元给予4％七氟烷处理同时在培养液中加入U－0126使其终浓度为10μmol/L后同S2组处理。收集神经元进行HO－1－mRNA和ERK1/2、Nrf2、AP-1和HO－1蛋白表达的检测，检测神经元的存活率和凋亡率。 结果：与C组比较，D组神经无HO－1蛋白表达增加（P〈0.05）,ERK1/2,Nrf2和AP-1蛋白表达增加（P〈0.05），神经元存活率降低、凋亡率增加（P〈0.01）.与D组比较，S1组神经元HO－1－mRNA和HO-1蛋白表达增加（P〈0.01）,ERK1/2和Nrf2蛋白表达增加（P〈0.01）,AP－1蛋白表达变化不明显（P〉0.05），经元存活率长高、凋亡率降低（P〈0.01）.与S2组比较，U组神经元HO-1－mRNA和HO－1蛋白表达降低（P〈0.01）,ERK1/2和Nrf2蛋白表达降低（P〈0.01），AP-1蛋白表达表达变化不明显（P〉0.05）,神经元存活率降低、凋亡率增加（P〈0.01）. 结论：Sevoflurane通过ERK1/2/Nrf2信号通路诱导神经元HO-1-mRNA表达，抑制氧糖剥夺神经元的凋亡。     

MitoTEMPO通过调控PGC-1α/TFAM信号通路减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的研究

目的:探讨MitoTEMPO减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤的作用机制。方法:人近端肾小管上皮细胞分为对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、实验组(10μmol/L的MitoTEMPO+30 mmol/L葡萄糖)。采用CCK-8法检测细胞生存率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA检测各组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组活性氧(ROS)含量,qRT-PCR检测各组PGC-1α、TFAM mRNA表达水平,Westernblot检测各组PGC-1α、TFAM表达水平。结果:与对照组相比,高糖组细胞活性降低,凋亡率增加(P<0.05),MDA、ROS表达水平明显升高(P<0.05),SOD和GSH表达水平明显降低(P<0.05),PGC-1α和TFAM蛋白和mRNA水平降低(P<0.05)。与高糖组比较,实验组细胞存活率升高,凋亡率下降(P<0.05),MDA、ROS表达水平明显降低(P<0.05),SOD和GSH表达水平明显升高(P<0.05),PGC-1α和TFAM蛋白和mRNA...     

地氟烷和七氟烷预处理信号链中活性氧生成和线粒体解偶联的差异

背景麻醉药预处理的信号传导链已被广泛研究，但是许多问题仍然有待解决。本研究拟评价两种现代麻醉药地氟烷和七氰烷进行心肌细胞预处理过程中，活性氧（ROS）和线粒体解偶联的作用。方法酶解分离成年大鼠心室肌细胞，利用细胞存活实验评估地氟烷和七氟垸预处理保护心肌细胞免受氧化应激诱导的细胞死亡的效力。应用共聚焦显微镜实时监测ROS生成和黄素蛋白荧光。黄素蛋白荧光是黄素蛋白氧化和线粒体解偶联的标志。应用ROS清除剂Trolox通过细胞生存和共聚焦实验评估麻醉药导致ROS生成增加的作用。结果地氟烷或七氟烷参与的心肌细胞预处理明显减少氧化应激诱导的细胞死亡。这种效应与心肌细胞急性接触麻醉药过程中增加ROS生成和黄素蛋白氧化相一致。地氟烷诱导较七氟垸明显提高ROS生成和黄素蛋白氧化。ROS清除剂Trolox取消麻醉药的预处理效力，减弱黄素蛋白氧化。结论地氟烷和七氟烷预处理保护大鼠分离心肌细胞免受氧化应激诱导的细胞死亡。ROS清除剂废除两种麻醉药的预处理作用，减弱麻醉药诱导的线粒体解偶联，这表明ROS在麻醉药诱导预处理中起关键作用，提示ROS是线粒体解偶联的上游信号。地氟烷与七氟烷相比，刺激ROS生成和线粒体解偶联的作用更强。     

TWIST2通过调控FGF21介导的AMPK/mTOR通路诱导卵巢癌细胞氧化应激和凋亡

目的探究TWIST2对卵巢癌细胞氧化应激和凋亡的作用及相关机制。方法收集2018年6月至2019年10月在山东省妇幼保健院进行治疗的30例卵巢癌患者的癌组织和癌旁组织,将pcDNA3.1-TWIST2质粒(TWIST2组)和pcDNA3.1阴性对照质粒(阴性对照组)分别转染卵巢癌细胞(SK-OV-3和HO-8910),未转染质粒组为空白对照组。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)实验检测组织和细胞中TWIST2 mRNA和蛋白质的表达量;细胞计数试剂盒CCK-8检测TWIST2组、阴性对照组和空白对照组的细胞活力;Western blot实验检测3组的凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2,AMPK/mTOR通路相关蛋白FGF21、p-AMPK和p-mTOR的蛋白表达水平;试剂盒检测3组活性氧(ROS)基因、ATP的水平和超氧化物歧化酶(SOD)的酶活性。通过检测不同处理组的细胞凋亡率和ROS水平,研究TWIST2与FGF21的相互作用。结果TWIST2在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中的表达量显著低于癌旁组织和正常卵巢上皮细胞的表达量(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,TWIST2组的细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著提高(P<0.05);ROS的水平显著升高,SOD酶活力、ATP水平、NAD~+/NADH水平显著降低(P<0.05)。TWIST2可以抑制FGF21、p-AMPK、p-mTOR蛋白的表达(P<0.05);在TWIST2组中加入FGF21或AMPK激动剂时,p-AMPK、p-mTOR蛋白表达水平显著升高,卵巢癌细胞的凋亡率和ROS水平显著降低(P<0.05),TWIST2与FGF21的表达量呈负相关(r=-0.6254,P<0.01)。结论TWIST2能够促进卵巢癌细胞氧化应激和凋亡,其作用机制是通过调控FGF21介导的AMPK/mTOR通路来实现的。     

七氟醚后处理对脑缺血/再灌注损伤大鼠的脑保护作用及对ROS/TXNIP/NLRP3通路的影响

目的探究七氟醚后处理对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠的脑保护作用及对活性氧(reactive oxygen species,ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3(NOD-like receptor associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组(sham组)、I/R组、七氟醚后处理组(SP组),每组20只。采用大脑中动脉线栓法制备脑I/R模型,SP组造模后即刻吸入2.4%七氟醚30 min。对各组大鼠进行神经功能缺损评分;获取大鼠脑组织,H-E染色和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察组织病理学变化和脑梗死体积;分析大鼠脑水肿程度及血脑屏障通透性;TUNEL法检测脑组织细胞凋亡率;检测血清炎性因子(IL-1β和IL-18)及脑组织氧化应激指标[ROS、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)]的水平;Western blot法检测TXNIP/NLRP3通路相关蛋白[TXNIP、NLRP3、凋亡相关点样蛋白(apotosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(cysteine aspartase,caspase-1)]的表达。结果与sham组比较,I/R组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积明显升高(P<0.05),脑组织水肿程度及血脑屏障通透性也明显增加,脑细胞凋亡率升高(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量明显升高(P<0.05),脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而GPx和SOD活性降低(P<0.05);与I/R组比较,SP组神经功能缺损评分和脑梗死体积降低(P<0.05),脑水肿程度及血脑屏障通透性下降,脑细胞的凋亡率降低(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量明显降低(P<0.05),脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05),而GPx和SOD活性升高(P<0.05)。结论七氟醚后处理能够有效减轻大鼠脑I/R损伤,可能与其对ROS/TXNIP/NLRP3信号通路的抑制有关。     

人参皂苷Rg1对七氟醚麻醉所致幼鼠远期认知功能障碍的保护作用及机制

目的 观察人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)对七氟醚麻醉所致幼鼠远期认知功能障碍的改善作用及其机制.方法 72只新生6日龄C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为4组(每组18只):对照+生理盐水组(Con+NS组)、对照+Rg1组(Con+Rg1组)、七氟醚麻醉+生理盐水组(Sev+NS组)、七氟醚麻醉+Rg1组(Sev+Rg1组).Sev+NS组和Sev+Rg1组分别在出生后6~8 d每天接受3%七氟醚+100%氧气麻醉2 h,Con+NS组及Con+Rg1组小鼠在相应日龄吸入相同时间100%氧气.麻醉前30 min各组分别进行生理盐水(1 ml·kg-1·d-1)或Rg1(10 mg·kg-1·d-1)腹腔注射.各组取12只小鼠于第31~37天行水迷宫实验,行为学测试结束后取海马行Western blot检测突触后密度蛋白95(postsynaptic density 95,PSD-95)含量,其余小鼠(每组6只)于第8天麻醉手术后即刻行ELISA检测海马ATP及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平.结果 与Con+NS组比较,Sev+NS组第35~37天水迷宫实验逃避潜伏期[(35.6±4.5)、(28.3±3.5)、(21.9±2.4)s比(45.7±8.1)、(41.9±8.8)、(35.1±12.4)s]明显延长(P<0.05),平台次数[4(8,2)次比2(6,0)次]明显减少(P<0.05),PSD-95水平[(100±6)%比(77±6)%]明显降低(P<0.05),ROS水平[(100±4)%比(121±11)%]明显升高(P<0.05),ATP水平[(100±6)%比(82±7)%]明显降低(P<0.05).Sev+Rg1组与Con+Rg1组比较,31~37 d水迷宫实验逃避潜伏期、 穿越平台次数、PSD-95水平、ROS水平及ATP水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Rg1可改善七氟醚麻醉所致的幼鼠远期认知功能障碍,其机制可能与抑制氧化应激保护线粒体功能并增强突触可塑性有关.     

七氟醚缺血后处理对心脏瓣膜置换术中血清肌钙蛋白T和心肌细胞内活性氧簇的影响

目的观察七氟醚缺血后处理对风湿性心脏病(RHD)患者单瓣膜置换术中血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)和心肌细胞内活性氧簇(ROS)的影响,探讨其对缺血-再灌注心肌的保护作用。方法择期行心脏单瓣膜置换术的RHD患者24例,随机均分为两组,七氟醚缺血后处理组(S组)行1MAC七氟醚缺血后处理5min,对照组(C组)不予七氟醚缺血后处理。采集动脉血检测cTnT,采用二氯荧光素法测定心肌细胞内ROS水平。结果与术前比较,主动脉开放后1～4h时两组血清cTnT浓度均明显升高(P<0.05),但S组明显低于C组(P<0.05)。与主动脉阻断前比较,主动脉开放后1h两组心肌细胞内ROS水平均显著增加(P<0.05),但S组明显低于C组(P<0.05)。结论七氟醚缺血后处理心肌保护作用可能与抑制缺血-再灌注心肌细胞内ROS过度生成有关。     

Apocynin和DPI通过抑制NOD1信号通路在缺血性AKI中的保护作用

目的NOD样受体可促发炎症反应,夹竹桃麻素(apocynin)和二苯基碘鎓(DPI)均为氧化酶抑制剂。本研究观察在缺血性急性肾损伤中抑制氧化应激产生是否能通过NOD1信号通路减轻肾间质炎症反应与细胞凋亡。 方法将雄性Wistar大鼠随机分为4组：假手术(Sham)组、肾脏缺血再灌注(I/R)组、I/R ＋夹竹桃麻素(apocynin)组、I/R ＋二苯基碘鎓(DPI)组。通过Western印记法分别对肾组织核苷酸结合寡聚域样受体1(NOD1)、半胱天冬酶(caspase-1)及细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达进行检测;实时定量PCR法对NOD1mRNA的表达进行检测;HE染色法观察肾脏组织学改变;免疫组织化学法检测肾组织肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)的表达;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡。采用SPSS 22.0统计软包对实验数据进行统计学处理。 结果与Sham组比较,I/R组大鼠肾组织NOD1、caspase-1、NF-κB、TNF-ɑ蛋白表达增加(t＝16.81, t＝ 7.28, t＝ 11.08, t＝ 10.11;P<0.05);NOD1mRNA表达增加(t＝－7.93, P<0.05);HE染色表现为急性肾小管坏死,肾小管损伤评分明显增加(t＝－11.0, P<0.05);TUNEL染色显示缺血区凋亡细胞数目增加(t＝－18.38, P<0.05)。与I/R组比较,I/R＋ apocynin组的NOD1、caspase-1、NF-κB、TNF-ɑ蛋白表达减少(t＝－10.9, t＝－7.6, t＝－4.9, t＝－9.7;P<0.05);NOD1mRNA表达减少(t＝8.49, P<0.05);HE染色后者较前者急性肾小管坏死减轻,肾小管损伤评分减低(t＝－12, P<0.05);TUNEL染色显示缺血区凋亡细胞数目减少(t＝－11.3, P<0.05)。与I/R组比较,I/R＋DPI组的NOD1、caspase-1、NF-κB、TNF-ɑ蛋白表达减少(t＝－11.4, t＝－6.8, t＝－5.4, t＝－10.6, P<0.05);NOD1mRNA表达减少(t＝7.5, P<0.05);HE染色后者较前者急性肾小管坏死减轻,肾小管损伤评分减低(t＝－11, P<0.05);TUNEL染色显示缺血区凋亡细胞数目减少(t＝－10.8, P<0.05)。 结论抑制氧化应激可阻断NOD1样受体依赖的炎症途径与细胞凋亡,从而减轻肾缺血再灌注损伤。     

短暂性脑缺血对老年大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨短暂性脑缺血对老年大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 健康老年雄性Wistar大鼠100只，按Pusinelli方法建立四动脉阻断法全脑缺血模型，随机分为4组（n=25）：脑缺血1min组（I1组）、脑缺血3min组（I3组）、脑缺血5min组（15组）和假手术组（C组）。每组均于再灌注12h、1d,2d、3d和7d各随机处死5只大鼠。随机取其中4只大鼠的海马组织制作石蜡切片，另1只大鼠断头处死后，冰上提取海马CAl区脑组织，制作电镜标本。透射电镜观察神经元超微结构，TUNEL法检测神经元凋亡，免疫组织化学法检测caspase．3的表达。结果 各组于光镜和电镜下均可见凋亡神经元。与C组、I1组相比，I3组、I5组凋亡细胞数和caspase-3表达阳性细胞数均增高（P〈0．05）；与I3组相比，I5组凋亡细胞数和caspase-3表达阳性细胞数均增高（P〈0．05）。结论 脑缺血3～5min对老年大鼠不产生预处理的效果，可引起脑神经元凋亡。     

Advanced glycation end products induce mitochondrial pathway apoptosis in glomerular mesangial cells

Objective To investigate whether advanced glycation end products (AGEs) can induce the expression of Ros, JC-1 and its apoptosis-related proteins in glomerular mesangial cells under high glucose environment, induce apoptosis and injury of glomerular mesangial cells. Methods Rat glomerular mesangial cell line HBZY-1 was cultured in vitro. The cells were cultured with different concentrations of AGEs for 0, 12, 24 and 48 hours respectively. MTT assay was used to observe the cell proliferation ability. After the optimal time and concentration of AGEs were selected, the caspase enzyme inhibitor Z-VAD-fmk and reactive oxygen species (ROS) scavenger N-acetyl-L-cysteine (NAC) were cultured and the apoptosis rate was detected by cell death detection apoptosis ELISA plus and Annexin V-FITC/PI kit. JC-1 staining was used to detect the changes of mitochondrial membrane potential (MMP). Cell ROX deep red flow cytometry was used to detect the total ROS level. The expression of anti-apoptotic protein Bcl-2, pro-apoptotic protein BAX, caspase-9, caspase-3 and poly ADP-ribose polymerase (PARP)-activated fragments was detected by Western blotting. Results AGEs could decrease the activity of glomerular mesangial cells in a time and concentration-dependent manner, and induce cell death. The percentage of apoptotic cells in glomerular mesangial cells was significantly increased after treatment with 250 mg/L AGEs for 24 h (P＜0.01), and Z-VAD-fmk could significantly alleviate AGEs-induced glomerular mesangial cell apoptosis (P＜0.01). Compared with the control group, AGEs increased the level of intracellular reactive oxygen species and decreased MMP in a time-dependent manner, and the two time points that AGEs significantly caused the change were 1 h and 2 h (all P＜0.01). AGEs also reduced the expression of antiapoptotic protein Bcl-2 and increased the expression of pro-apoptotic protein Bax, cleaved caspase-9, cleaved caspase-3 and cleaved PARP (all P＜0.01). Compared with AGEs group, NAC could significantly stabilize MMP (P＜0.01), increase Bcl-2 expression (P＜0.01), and decrease the expression of BAX, cleaved caspase-9, cleaved caspase-3 and cleaved PARP (all P＜0.01). Conclusion AGEs induce mitochondrial pathway apoptosis in glomerular mesangial cells by increasing intracellular ROS level and destroying MMP.     

白藜芦醇对七氟醚诱导神经细胞损伤的影响

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对七氟醚诱导的离体神经细胞损伤的影响及其机制。方法取SD孕鼠的胎鼠海马组织,分离培养原代神经细胞,然后将细胞随机分为四组:对照组(C组),正常培养的原代神经细胞;3%七氟醚组(S组),3%七氟醚混合气体处理的细胞;3%七氟醚+RES组(SR组),用RES处理细胞6h后,再用3%七氟醚混合气体处理的细胞;RES组(R组),RES处理的细胞。流式细胞仪检测神经细胞的凋亡;CCK-8试剂盒检测神经细胞的增殖;Western blot检测Caspase-3、Bax、Bcl-2和Bace-1的表达水平;ELISA检测APP和Aβ的表达水平。结果 S组的细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Bace-1、APP及Aβ的表达明显高于C组(P0.05);细胞增殖能力和Bcl-2的表达明显低于C组(P0.05)。SR组的细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Bace-1、APP及Aβ的表达明显低于S组(P0.05);细胞增殖能力、Bcl-2的表达明显高于S组(P0.05)。结论白藜芦醇通过减少细胞凋亡,促进细胞增殖以缓解七氟醚诱导的离体神经细胞损伤,这可能与Aβ的表达下调,从而降低神经毒性有关。     

SOX2基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的影响研究

目的 探讨SOX2基因对人骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响及机制。方法 以正常软骨组织作为对照,通过Western blotting检测OA软骨组织SOX2蛋白表达。从人OA中分离软骨细胞,参照Lipofectamine TM2000说明将重组体pcDNA3.1-SOX2及空载体pcDNA3.1转染软骨细胞,并设置空白对照组。AG490作为JAK2/STAT3信号通路抑制剂,各组细胞处理48 h,通过流式细胞术、ROS试剂盒分别检测各组细胞凋亡率及ROS水平。Western blotting检测JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3的蛋白相对表达量。结果 人OA软骨组织SOX2表达明显低于在正常软骨组织表达（0.065±0.009 vs 0.313±0.028, P<0.05）。转染pcDNA3.1-SOX2的OA软骨细胞SOX2表达明显高于空白组（0.556±0.048 vs 0.122±0.013, P<0.05）。pcDNA3.1-SOX2可明显降低OA软骨细胞凋亡率(3.11±0.42 vs 8.54±0.68)及ROS水平(23.46±2.15 vs 52.67±4.41),上调p-JAK2（0.142±0.013 vs 0.065±0.009）和p-STAT3表达（0.218±0.020 vs 0.126±0.015）（P<0.05）,AG490（15.23±1.13 vs 8.15±0.62）可诱导OA软骨细胞凋亡,而pcDNA3.1-SOX2可减弱AG490对OA软骨细胞凋亡促进作用（P<0.05）。结论 SOX2可抑制OA软骨细胞凋亡,其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路有关。