蒙古沙鼠幽门螺杆菌相关性胃炎Sonic hedgehog基因、IL-1β及TNF-α的表达

目的研究形态基因Sonic hedgehog(Shh)以及IL-1β和TNF-α在H pylori相关性胃炎中表达的相关性及作用.方法♂蒙古沙鼠50只给予悉尼菌株灌胃造成H pylori感染模型,另设50只♂蒙古沙鼠作为对照.应用RT-PCR的方法对沙鼠胃黏膜组织中的Shh,IL-1β以及TNF-α mRNA表达水平进行检测;应用免疫组化的方法对于Shh蛋白进行细胞定位以及半定量分析其表达水平.结果H pylori灌胃36和48 wk后,Shh mRNA表达水平明显降低(0.28 vs 0.48,t=3.24,P＜0.05;0.18 vs 0.45,t=3.01,P＜0.05).Shh mRNA表达水平与IL-1β,TNF-α mRNA表达之间以及与炎症分级之间呈显著负相关(r=-0.37,P＜0.01;r=-0.30,P＜0.05;r=-0.39,P＜0.001).Shh蛋白主要表达于胃体壁细胞胞质中,H pylori灌胃36和46 wk,表达Shh抗原的阳性细胞数明显减少(Z=4.84,P＜0.001;Z=4.57,P＜0.001).Shh蛋白的表达与IL-1βmRNA,TNF-α mRNA的表达以及慢性炎症分级之间也呈显著负相关(r=-0.321,P＜0.05;r=-0.313,P＜0.05;r=-0.371,P＜0.001).结论蒙古沙鼠胃黏膜感染H pylori后,IL-1β和TNF-α表达上调,并与炎症程度呈显著正相关;Shh表达下调,并与炎症分级及IL-1β和TNF-α表达呈显著负相关.     

幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠胃组织NLRP3炎症小体相关因子和自噬相关蛋白表达分析

目的 探究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对蒙古沙鼠胃组织中NLRP3炎症小体相关因子和自噬相关蛋白表达的影响。方法 采用Hp国际标准株11637灌胃处理蒙古沙鼠,隔天一次,共5次,以相同体积无菌脑心浸液肉汤灌胃的沙鼠作为对照组。于感染第3、6、12和24个月后处死沙鼠,取胃黏膜组织并切片,HE染色后作病理学检查;免疫组织化学染色观察Hp定植;试剂盒法检测胃组织NLRP3炎症小体及其相关因子IL-18、IL-β和自噬相关蛋白P62、LC3的表达。结果 Hp感染蒙古沙鼠胃组织检测到Hp的定植,HE染色检查显示不同时间感染组沙鼠胃黏膜均出现糜烂黏膜下层组织水肿、黏膜局部浅表糜烂和淋巴浆细胞浸润等不同程度的慢性胃炎病理改变,感染24月部分区域出现非典型增生甚至癌变。对照组沙鼠均无Hp定植及组织学病变。与未感染对照组比较,Hp感染蒙古沙鼠胃组织中NLRP3、IL-18、IL-1β和LC3、P62的表达水平均显著升高(均P<0.05);其中NLRP3、IL-18、LC3表达3到12个月随着Hp感染时间的延长呈升趋势,12到24个月呈下降趋势。IL-1β表达无显...     

幽门螺杆菌感染者IL-1β分泌与糜烂性食管炎的关系

目的:分析H.pylori感染者中IL-1β表达与糜烂性食管炎(EE)发生的关系,探索H.pylori感染者中EE发生减少的机制.方法:收集2007-05/2009-05武警上海总队医院行胃镜检查者(排除消化性溃疡和消化系肿瘤患者)共456例,行H.pylori和胃窦黏膜活检组织IL-1β检测.结果:根据Los Angeles食管炎分级系统诊断反流性食管炎141例.H.pyloriFn性组中EE的发生率(39/302,12.9%,95%CI:9.1%-16.9%)显著低于H.pylori阴性组(102/154,66.2%,95%CI:58.4%-73.0%)(P=0.000).H.pylori阳性组胃窦活检组织中IL-1β表达明显高于H.pylori阴性组(P=0.007),而且H.pylori阳性组中合并EE患者的IL-1β表达量较不合并EE者低(P=0.032).结论:H.pylori感染对EE发生的"保护"机制可能与IL-1β表达有关.     

国人肿瘤坏死因子的基因多态性与H pylori感染无相关性

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和淋巴毒素-α(lymphotoxin-α, LT-α,即TNF-β)基因多态性与国人幽门螺杆菌(H pylori)感染的相关性,探讨宿主遗传因素对H pylori感染易感性的相关性．方法:采用序列特异性聚合酶链式反应方法分析264例武汉健康正常人外周血白细胞基因组DNA、TNF-α 308、LT-α Nco Ⅰ、LT-α AspH Ⅰ基因多态性．结果:健康正常人H pylori阳性率62．1％ (164/264),TNF-α 308、LT-α AspH Ⅰ、 LT-α Nco Ⅰ基因多态性在H pylori感染组(即 H pylori 组)和无H pylori感染组(即H pylori 组)间分布无显著性差异．中国人TNF-α 308 的基因型和等位基因频率分布与西班牙高加索人接近,但LT-α AspH Ⅰ GG型明显低于高加索人(P<0．000 1,OR=0．207,95％CI: 0．104 6-0．409 6),而CC型却显著高于对方(P =0．005 7,OR=2．043．95％CI:1．241-3．366); LT-α Nco Ⅰ GG型比高加索人明显增高(P= 0．000 4,OR=3．644．95％CI:1．677-7．915),AA 却低于高加索人(P=0．000 1,OR=0．396 3, 95％CI:0．247 1-0．635 7)．结论:中国人TNF-α 308、LT-α Nco Ⅰ、LT-α AspH Ⅰ基因多态性与H pylori的感染无相关性．     

IL-10、COX-2在幽门螺杆菌相关性胃炎组织中的表达及相关性研究

目的了解IL-10、COX-2在幽门螺杆菌（H.pylori）相关性胃炎组织中的表达及相关性,为免疫治疗H.pylori相关性胃炎及预防胃癌发生提供临床和实验依据。方法收集因上腹部不适等症状于我院行胃镜检查诊断为胃炎者110例,取胃窦部黏膜活检标本3块,分别行快速尿素酶试验、Warthin-Starry嗜银染色、HE染色。根据H.pylori科研诊断标准,110例标本中符合实验研究的共74例,其中H.pylori阳性59例,H.pylori阴性15例。免疫组化方法检测74例标本中IL-10、COX-2蛋白的表达情况。结果IL-10、COX-2在H.pylori（＋）胃炎中的阳性表达率分别为49.15%、59.32%,与H.pylori（-）组的13.33%、20.00%相比,两种因子的阳性表达率均显著增加（P〈0.05）。H.pylori（＋）组,IL-10、COX-2在慢性活动性胃炎中的阳性表达率分别为32.26%、74.19%,在非活动性胃炎的阳性表达率分别为67.86%、42.86%。IL-10在慢性活动性胃炎的阳性表达率低于非活动性胃炎（P〈0.02）;COX-2在慢性活动性胃炎的阳性表达率高于非活动性胃炎（P〈0.03）。H.pylori（＋）组,IL-10、COX-2在慢性浅表性胃炎中的阳性表达率分别为64.00%、44.00%,慢性萎缩性胃炎分别为38.10%、61.90%,肠化生及异型增生分别为38.46%、84.62%。IL-10在3组之间差异无显著性（P〉0.05）;COX-2的表达呈递增趋势,在肠化及异型增生组表达显著增高,与浅表性胃炎相比,差异显著（P〈0.05）,其余各组两两相比无显著性差异（P〉0.05）;H.pylori（＋）组,IL-10与COX-2的表达呈显著负相关,相关系数r=-0.566（P〈0.001）。结论 IL-10、COX-2两种因子的产生与H.pylori感染相关;COX-2与胃癌的发生有关,是胃癌发生的早期事件,IL-10可能抑制了COX-2的过度表达及活性,在H.pylori相关胃炎及胃癌癌前病变中发挥保护作用。     

乳酸杆菌对蒙古沙鼠幽门螺杆菌感染性胃炎的疗效及其机制

目的: 观察乳酸杆菌对蒙古沙土鼠H Pylori 感染性胃炎的治疗作用,探讨乳酸杆菌防治H pylori感染的作用机制.方法: 通过接种H pylori,建立蒙古沙土鼠H pylori感染性胃炎动物模型,将造模成功的32只蒙古沙土鼠随机分为4组,每组8只.第1组(抗生素加质子泵抑制剂干预治疗组)、第2组(乳酸杆茵治疗组)、第3组(乳酸杆菌加质子泵抑制剂治疗组)、第4组(生理盐水对照组),用相应干扰剂分别连续灌胃治疗10 d.另8只正常蒙古沙土鼠为第5组(空白对照组).最后1次灌胃4 wk后处死沙鼠,HE染色判断鼠胃黏膜组织学损伤,并用快速尿素酶试验、Giemsa染色和细菌培养进行Hpylori的检测,免疫组化检测胃黏膜中IL-6、COX-2、和TNF-α蛋白的表达.结果: 第1组、第2组和第3组之间蒙古沙土鼠的H pylori根除率无显著差异,但均比第4组的根除率低,之间差异有显著性(87.5%,75%,75%vs100%,均P<0.05).第1组、第2组和第3组蒙古沙土鼠的胃体、胃窦和十二指肠各部位组织胃黏膜慢性炎症评分与第4组相比显著下降(胃体:1.8±0.54,2.0±0.48,1.9±0.50vs4.2±1.06,均P<0.05;胃窦:1.5±0.27,1.4±0.33,1.7±0.46vs4.6±0.74,均P<0.05:十二指肠:1.4±0.41,1.7±0.29,1.6±0.52vs4.1±0.83,均P<0.05).第1组、第2组和第3组蒙古沙土鼠三种炎症因子表达与第4组相比显著下降(COX-2:3.57±0.32,3.89±0.51,2.95±0.76vs6.79±1.68,均P<0.05:IL-6:2.42±0.60,2.28±0.7l,1.93±0.52vs5.61±0.28,均P<0.05;TNF-α:3.30±0.52,3.65±0.35,2.84±0.20vs6.76±1.63,均P<0.05).结论: 乳酸杆菌治疗蒙古沙鼠Hpylori感染性胃炎模型的疗效与PPI加抗生素三联疗法相当;并可显著降低沙鼠胃黏膜的COX-2、IL-6、TNF-α的表达.     

NF-κB在稳定期低体重慢性阻塞性肺病患者中的表达

目的 探讨低体重稳定期慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)患者NF-κB和炎症因子的表达变化及意义.方法 检测30例稳定期低体重COPD患者(COPD组)及30例体检健康者(对照者),测定体重指数(BMI)、血清TNF-α、白介素-8(IL-8)、NF-κB水平,并进行比较分析.结果 COPD组血清NF-κB水平、TNF-α、IL-8浓度均高于对照组(P＜0.05).COPD组NF-κB和IL-8之间存在明显正相关(r=0.763,P＜0.001),与TNF-α也存在正相关趋势(r=0.407,P＜0.05).COPD患者血清TNF-α含量与BMI呈显著负相关(r=-0.433,P＜0.05).结论 稳定期低体重COPD患者存在全身炎症反应,NF-κB激活及炎性因子表达可能与COPD患者体质量下降有关.     

青岛地区支气管哮喘患者TNF-α基因rs1800629位点多态性与表达及TNF-α、内皮素水平相关研究

目的 探讨青岛地区支气管哮喘(简称哮喘)患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区域rs1800629(-308)位点G/A单核苷酸多态性与表达及血浆TNF-α、内皮素1(ET-1)的水平.方法 应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测65例哮喘患者与50例健康者TNF-α基因rs1800629位点G/A单核苷酸多态性,荧光定量PCR检测外周血单个核细胞TNF-α mRNA表达,ELISA测定其TNF-α、ET-1水平.结果 哮喘组和对照组TNF-α基因rs1800629位点基因型及等位基因频率差异有统计学意义(P=0.048;P=0.023).哮喘组与对照组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.001,P＜0.01,P=0.044).哮喘组GA+AA组与GG组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.012,P＜0.01,P=0.041).哮喘组ET-1与TNF-α mRNA表达及浓度分别呈正相关(r=0.607,P＜0.05;r=0.658,P＜0.01).结论 TNF-α基因启动子区rs1800629位点G/A多态性与哮喘的易感性有相关性,A等位基因为哮喘易感基因,并且可以增加TNF-α表达及TNF-α、ET-1含量.TNF-α、ET-1可能参与哮喘患者气道炎症反应,且在哮喘发病时具有相互作用.     

乙肝后肝硬化患者血清IL-1β、TNF-α变化和骨质改变的关系

目的探讨血清IL-1β、TNF-α变化对肝硬化骨代谢异常的影响及病理学改变.方法采用RIA及ELISA分别测定61例乙肝后肝硬化血清IL-1β、TNF-α及骨密度测量,并与30例健康者对照.其中17例患者及12例健康者行骨组织学观察.结果肝硬化组血清IL-1β、TNF-α水平较对照组明显升高(P＜0.001),骨质疏松(OP)组血清IL-1β、TNF-α与非骨质疏松(NOP)组比较差异显著(P＜0.01),且OP组IL-1β、TNF-α与尺桡骨密度均呈负相关性(r=-0.574,P＜0.001;r=-0.418,P＜0.05).组织学发现14例诊断为OP,其重度组血清IL-1β、TNF-α水平较轻度组也明显升高(P＜0.01,P＜0.05).结论肝硬化患者血清IL-1β、TNF-α水平升高可引起骨吸收加强,是肝性骨病(HBD)发生重要因素.     

青岛地区支气管哮喘患者TNF-α基因rs1800629位点多态性与表达及TNF-α、内皮素水平相关研究

目的 探讨青岛地区支气管哮喘(简称哮喘)患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区域rs1800629(-308)位点G/A单核苷酸多态性与表达及血浆TNF-α、内皮素1(ET-1)的水平.方法 应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测65例哮喘患者与50例健康者TNF-α基因rs1800629位点G/A单核苷酸多态性,荧光定量PCR检测外周血单个核细胞TNF-α mRNA表达,ELISA测定其TNF-α、ET-1水平.结果 哮喘组和对照组TNF-α基因rs1800629位点基因型及等位基因频率差异有统计学意义(P=0.048;P=0.023).哮喘组与对照组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.001,P＜0.01,P=0.044).哮喘组GA+ AA组与GG组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.012,P＜0.01,P=0.041).哮喘组ET-1与TNF-α mRNA表达及浓度分别呈正相关(r=0.607,P＜0.05;r=0.658,P＜0.01).结论 TNF-α基因启动子区rs1800629位点G/A多态性与哮喘的易感性有相关性,A等位基因为哮喘易感基因,并且可以增加TNF-α表达及TNF-α、ET-1含量.TNF-α、ET-1可能参与哮喘患者气道炎症反应,且在哮喘发病时具有相互作用.     

胃癌Runx3 mRNA表达与幽门螺杆菌感染的相关性

目的研究胃癌Runx3基因mRNA表达与幽门螺杆菌感染及临床病理特征的关系。方法采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测Runx3基因mRNA表达,快速尿素酶诊断法和Warthin-starry染色法检测H.pylori感染状况。结果 (1)胃癌Runx3基因mRNA表达量分别和癌旁、正常对照相比,差异有统计学意义(t分别为12.653和8.015,P0.001);(2)胃癌中Runx3基因mRNA表达与分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关,差异有显著性(P0.001),而与性别、年龄无关(P0.05);(3)胃癌组H.pylori感染率67.4%(58/86)高于健康对照组40%(8/20),差异有显著性(χ2=5.201,P=0.023)。(4)胃癌Runx3基因mRNA表达在H.pylori感染组和无H.pylori感染组差异有统计学意义(t=2.570,P=0.012)。结论 H.pylori感染影响胃癌Runx3基因mRNA表达。     

幽门螺杆菌相关性十二指肠球溃疡与胃癌中NF-κB、VEGF、Bcl-2、IL-1β的表达及意义

目的 探讨H.pylori相关性十二指肠溃疡与胃癌病例中NF-κB、Bcl-2、VEGF、IL-1β表达的差异及相互关系,进一步了解H.pylori致胃癌与十二指肠溃疡的发病机制.方法 选取胃镜检查的胃黏膜活检标本,十二指肠溃疡患者33例,胃癌患者63例,通过免疫组化SP法测定NF-κB、Bcl-2、VEGF、IL-1β在H.pylori感染与非感染的胃癌及十二指肠溃疡患者胃黏膜中的表达情况.结果 十二指肠溃疡组和胃癌组中,H.pylori感染者NF-κB、VEGF与IL-1β的表达水平高于H.pylori阴性者(P＜0.01或0.05),Bcl-2的表达无显著差异(P＞0.05);H.pylori感染病例中,NF-κB、Bcl-2、VEGF在胃癌组的表达水平高于十二指肠溃疡组(P＜0.01或0.05),IL-1β的表达无显著差异(P＞0.05);胃癌组与球溃疡组中,NF-κB的表达水平与VEGF均呈正相关(P＜0.05);胃癌组中,NF-κB和VEGF的表达水平与Bcl-2呈正相关(P＜0.05),与IL-1β表达水平无明显相关性(P＞0.05);球溃疡组中,NF-κB和VEGF的表达水平与IL-1β表达水平呈正相关(P＜0.05),与Bcl-2表达水平无明显相关性(P＞0.05).结论 幽门螺杆菌感染可上调宿主胃黏膜上皮NF-κB、VEGF及IL-1β的表达,三者表达水平具有协同性,其中NF-κB、VEGF表达的差异与十二指肠溃疡与胃癌两种不同的疾病转归相关.     

幽门螺杆菌感染患者胃癌及癌旁组织中p53、p16和bcl-2基因的表达

目的:研究幽门螺杆菌(H.pylori)感染胃癌患者胃粘膜病变中抑癌基因p53、p16和关键性凋亡调节基因bcl-2蛋白的表达,进一步探讨H.pylori在胃癌发生、发展过程中作用的分子机制.方法:胃镜检查及外科手术中取40例胃癌患者的癌组织和癌旁2 cm处组织各2块,石蜡包埋,切片HE染色作病理诊断及免疫组化检测p53、p16及bcl-2蛋白的表达.H.pylori阳性由快速尿素酶试验结合病理染色/14C-尿素呼气试验确定.结果:40例胃癌患者中,H.pylori阳性23例,阴性17例.p53阳性表达率在H.pylori阳性及阴性胃癌组织中无显著差异(P＞0.05).H.pylori阳性组慢性胃炎或肠化组织中p16的阳性表达率及表达强度均显著低于H.pylori阴性组(表达率:P＜0.05;表达强度:P＜0.001和P＜0.01).而H.pylori阳性组肠化组织中bcl-2的阳性表达率及表达强度均显著高于H.pylori阴性组(P＜0.05).结论:在胃癌发生的早期即存在较明显的p16基因表达低下与bcl-2基因过度表达,并与H.pylori感染有一定关系.p53基因过度表达是胃癌发展过程中较晚期的事件,与H.pylori感染无明显相关性.     

系统性红斑狼疮患者外周血中IFN-α、IL-10、TGF-β的表达变化及意义

目的 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中α干扰素(IFN-α)、白介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)的表达变化,并探讨其意义.方法 采用双抗体夹心ELISA法检测 98例SLE患者(SLE组)及55例健康人(对照组)血清中的IFN-α、IL-10、TGF-β,采用RT-PCR法检测外周血单个核细胞(PBMCs)中的IFN-α、IL-10、TGF-β mRNA.结果 SLE组血清中的IFN-α、IL-10及PBMCs中的IFN-α、IL-10 mRNA均高于对照组(P＜0.05),且活动期高于稳定期(P＜0.05);SLE组血清中的TGF-β及PBMCs中的TGF-β mRNA低于对照组(P＜0.05),且活动期低于稳定期(P＜0.05);SLE组血清及PBMCs中的IFN-α、IL-10及其mRNA呈正相关(r=0.80、0.75,P均＜0.05),IL-10、TGF-β及其mRNA呈负相关(r=-0.45、-0.25,P均＜0.05),IFN-α、TGF-β及其mRNA无相关性.SLE组血清及PBMCs中IFN-α、IL-10、TGF-β与其相应的mRNA呈正相关(r=0.90、0.82、0.91,P均＜0.05).结论 SLE患者外周血中IFN-α、IL-10高表达,TGF-β低表达;三者相互作用参与SLE的发病.     

海尔曼螺杆菌与幽门螺杆菌相关性胃炎的临床病理特征

目的:分析海尔曼螺杆菌(Helicobacter heilmannii,H.heilmannii)相关性胃炎与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)相关性胃炎的胃镜及组织病理学差异.方法:回顾性分析2003-01/2010-01于北京大学第三医院行胃镜及病理检查的53559例病例的相关资料.对H.heilmannii相关性胃炎与H.pylori相关性胃炎在内镜所见、炎症浸润、癌前病变的等方面进行对比分析.结果:H.heilmannii感染病例的检出率为0.1%(46/53559);与H.pylori相关性胃炎相比,H.heilmannii相关性胃炎病例中螺旋杆菌定植量较少(P<0.001),胃黏膜急、慢性炎症程度轻(P<0.001),内镜下溃疡性病变更为少见(P=0.021).此外,两组病例中胃黏膜萎缩、肠上皮化生及上皮内瘤变的检出率及病变程度均无显著性差异.相关分析显示H.heilmannii相关性胃炎病例中细菌定植量仅与胃黏膜急性炎症细胞浸润程度相关(P=0.02).报道1例伴发H.heilmannii感染的胃印戒细胞癌病例.结论:H.heilmannii相关性胃炎非常少见且其炎症反应较轻,但是其癌前病变的检出率及病变程度与H.pylori相关性胃炎相比未见显著性差异,表明H.heilmannii在胃恶性相关性病变的发生过程中可能发挥与H.pylori相似的作用.     

手术创伤对成年鼠和老年鼠海马区炎性因子表达的影响

目的 探讨手术创伤对老年鼠和成年鼠肝部分切除术后海马区炎性因子表达的影响.方法成年和老年SD大鼠随机分为对照组、麻醉组、手术组.对照组SD大鼠不做特殊处理.麻醉组实验动物单纯接受1.5％ ～ 2％异氟醚麻醉,行气管插管和机械通气.手术组SD大鼠行肝部分切除术.检测术后1、3、7d海马区白介素(IL)-1β,IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA和蛋白表达变化.结果 成年鼠海马区IL-1β和IL-6 mRNA仅在手术后第1天(P＜0.001)明显增高,但老年鼠海马区IL-1β和IL-6 mRNA增多持续到手术后3 d(P ＜0.001).IL-1β和IL-6蛋白仅老年鼠在术后第1天表达增加(P＜0.01,P＜0.05),第3天无统计学差异.TNF-α mRNA仅在老年鼠手术后1d明显增加(P ＜0.001),在成年鼠没有明显改变(P=0.095).结论 与成年鼠相比,老年鼠海马区炎性因子表达更强烈,持续时间更长.     

缺血后处理下调脑缺血再灌注大鼠白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α表达

目的 探讨缺血后处理(ischemic postconditioning,IP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠白细胞介素-1β(interleukin- 1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响.方法 110只成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=10)、缺血再灌注组和IP组,后2组根据再灌注时间再分为6、12、24、48和72 h亚组(每亚组n=10).采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.IP方法为在大脑中动脉闭塞2h后实施再灌注15 s/缺血15 s,反复3次.对各组大鼠进行神经行为学评分,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织TNF-α和IL-1β蛋白表达,原位杂交法检测IL-1β和TNF-α mRNA表达.结果 与缺血再灌注组比,IP组神经行为学评分显著降低(P均＜0.05),脑梗死体积显著缩小(P均＜0.05).假手术组额顶叶皮质IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA表达微弱;缺血再灌注组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA在额顶叶皮质大量表达,6h开始上调,24 h达高峰(与其他时间点比较,p均＜0.05),之后逐渐下降;IP组具有相同的动态变化趋势,且各时间点表达量均显著低于缺血再灌注组(P均＜0.05).结论 IP可显著下调脑组织IL-1β和TNF-α表达,缩小缺血再灌注大鼠脑梗死体积,提示IP可通过抑制脑组织缺血再灌注后炎症反应发挥神经保护作用.     

幽门螺杆菌对胃黏膜细胞DNA依赖蛋白激酶催化亚单位和Ku70/Ku80二聚体蛋白体内外表达的影响

目的 探讨H.pylori对胃黏膜细胞DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)和Ku70/Ku80二聚体在体内外表达的影响.方法 应用Western印迹法检测H.pylori作用后1、3、6、12和24 h的胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃腺癌细胞(AGS)中DNA-PKcs和Ku70/Ku80二聚体的蛋白表达情况.采用H.pylori灌胃蒙古沙鼠,于感染第6和12个月处死动物,取胃黏膜组织行免疫组织化学染色,检测DNA-PKcs和Ku70/Ku80二聚体的蛋白表达情况.采用t检验和卡方检验进行统计学分析.结果 H.pylori作用后1h,DNA-PKcs蛋白在GES-1中的相对表达量为1.16±0.09,高于未感染H.pylori组的1.04±0.31,差异有统计学意义(t=4.67,P＜0.05).H.pylori作用后1、3、6、12和24 h,Ku70/Ku80二聚体蛋白在GES-1中的相对表达量分别为1.58±0.32、1.84±0.40、1.97±0.35、3.72±1.42和3.74±1.56,均高于未感染H.pylori组的1.24±0.31,差异均有统计学意义(t=3.57、4.20、5.03、8.11、8.14,P均＜0.05);Ku70/Ku80二聚体蛋白在AGS中的相对表达量分别为4.69±0.87、3.67±0.67、2.41±0.24、1.35±0.35和1.32±0.10,均低于未感染H.pylori组的4.84±0.76,差异均有统计学意义(t=34.13、27.68、19.81、4.47、5.69,P均＜0.05).蒙古沙鼠模型中,DNA PKcs蛋白在未感染H.pylori组不表达(0/25),在感染H.pylori组中的总阳性率为98.1％(53/54),两组差异有统计学意义(x2=74.55,P＜0.01);Ku70/Ku80二聚体蛋白在未感染H.pylori组中的总阳性率为92.0％(23/25),在感染H.pylori组中的总阳性率为68.5％(37/54),两组差异有统计学意义(x2=5.16,P＜0.05).结论 H.pylori感染在体内外能通过改变胃黏膜DNA PKcs和Ku70/Ku80二聚体蛋白的表达水平,影响细胞DNA损伤修复,导致胃黏膜病变.     

Th immune response induced by H pylori vaccine with chitosan as adjuvant and its relation to immune protection

AIM:To study the immunological protective effect of H pylori vaccine with chitosan as an adjuvant and its mechanism.METHODS:Female BALB/c mice were randomly divided into seven groups and orally immunized respectively with PBS,chitosan solution,chitosan particles,H pylori antigen,H pylori antigen plus cholera toxin(CT),H pylori antigen plus chitosan solution,H pylori antigen plus chitosan particles once a week for four weeks.Four weeks after the last immunization,the mice were challenged twice by alive H pylori(1 × 109 CFU/mL)and sacrificed.Part of the gastric mucosa was embedded in paraffin,cut into sections and assayed with Giemsa staining.Part of the gastric mucosa was used to quantitatively culture H pylori.ELISA was used to detect cytokine level in gastric mucosa and anti-H pylori IgG1,IgG2a levels in serum.RESULTS:In the groups with chitosan as an adjuvant,immunological protection was achieved in 60% mice,which was significantly higher than in groups with H pylori antigen alone and without H pylori antigen(P < 0.05 or 0.001).Before challenge,the level of IFN and IL-12 in gastric mucosa was significantly higher in the groups with chitosan as an adjuvant than in the control group and the group without adjuvant(P < 0.05 or 0.005).After challenge,the level of IFN and IL-12 was significantly higher in the groups with adjuvant than in the groups without adjuvant and antigen(P < 0.05 or 0.001).Before challenge,the level of IL-2 in gastric mucosa was not different among different groups.Afterchallenge the level of IL-2 was significantly higher in the groups with adjuvant than in the control group(P < 0.05 or 0.001).Before challenge,the level of IL-10 in gastric mucosa was significantly higher in the groups with chitosan as an adjuvant than in other groups without adjuvant(P < 0.05 or 0.01).After challenge,the level of IL-10 was not different among different groups.Before challenge,the level of IL-4 in gastric mucosa was significantly higher in the groups with chitosan as an adjuvant than in other groups without adjuvant(P < 0.05).After challenge,the level of IL-4 was significantly higher in the groups with chitosan particles as an adjuvant than in the group with CT as an adjuvant(P < 0.05),and in the group with chitosan solution as an adjuvant,the level of IL-4 was significantly higher than that in control group,non-adjuvant group and the groups with CT(P < 0.05 or 0.001).The ratio of anti-H pylori IgG2a/IgG1 in serum was significantly lower in the groups with chitosan as an adjuvant than in the groups with CT as an adjuvant or without adjuvant(P < 0.01).CONCLUSION:H pylori vaccine with chitosan as an adjuvant can protect against H pylori infection and induce both Th1 and Th2 type immune response.     

缺血性与扩张性心肌病终末期心肌白细胞介素-6 mRNA表达与心功能参数间的关系

目的在检测晚期心力衰竭患者心肌组织中白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达的基础上,探讨IL-6mRNA与心功能参数间的关系,为揭示IL-6参与心力衰竭发生发展提供依据.方法以Northern-blot法检测27例接受心脏移植患者(缺血性心肌病12例,扩张性心肌病15例)不同部位心肌组织中IL-6mRNA表达水平,并以线性回归比较IL-6mRNA与移植前血流动力学和超声心动参数间的关系.结果所有患者心肌组织中均有Ⅱ-6mRNA表达,扩张性心肌病左心室IL-6mRNA表达水平高于缺血性心肌病(P=0.006).IL-6mRNA在左心室的表达水平与左心室射血分数负相关(r=-O.62,P＜O.05),在左、右心房的表达水平与左心室舒张末内径正相关(r=0.70,P＜0.05;r=0.93,P＜O.001),在右心室的表达水平与心排指数负相关(r=-O.49,P＜0.05),在右心房的表达水平不但与肺血管阻力正相关(r=0.63,P＜O.05),也与左心室收缩末内径正相关(r=0.82,P＜0.001).结论晚期心力衰竭患者心肌组织中有IL-6mRNA表达,Ⅱ-6mmRNA水平与部分心功能参数相关,提示IL-6可能参与心力衰竭的发生发展.