不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的　探讨不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）表达的影响及其调节作用。方法　SD大鼠右眼制备成角膜碱烧伤模型，随机分为对照组、0.5 g·L^-1多西环素组和1.0 g·L^-1多西环素组，每组15只。3组分别于造模后每天给予20 μL眼液溶媒、0.5 g·L^-1多西环素、1.0 g·L^-1多西环素滴眼至观察期末。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天对角膜混浊程度进行评分，并行RT-PCR和ELISA检测角膜组织中TGF-β1、MMP-9 mRNA和蛋白的表达情况。结果　与对照组相比，碱烧伤后第7天、第14天，0.5 g·L^-1多西环素组［（2.80±0.45）分、（2.20±0.45）分］和1.0 g·L^-1多西环素组［（2.00±0.00）分、（0.60±0.55）分］角膜混浊程度评分降低，且1.0 g·L^-1多西环素组更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天、第14 天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组MMP-9 mRNA及蛋白表达均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　多西环素可下调碱烧伤大鼠角膜中TGF-β1和MMP-9的表达，促进角膜愈合，并呈一定程度的剂量依赖性。     

吴茱萸碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响

目的　探讨吴茱萸碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,分析整合素β2-反义RNA1（ITGB2-AS1）在视网膜母细胞瘤中的表达和作用。方法　取对数生长期HXO-Rb44细胞铺在96孔板上,用终浓度为1 μmol·L^-1、2 μmol·L^-1、4 μmol·L^-1吴茱萸碱处理细胞24 h,记为吴茱萸碱1 μmol·L^-1组、吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组,同时将不经吴茱萸碱处理的细胞设为对照组;按照Lipofectamine 2000试剂盒说明书将si-NC、si-ITGB2-AS1转染细胞,记为si-NC组、si-ITGB2-AS1组;将pcDNA、pcDNA-ITGB2-AS1转染细胞,再用4 μmol·L^-1吴茱萸碱处理,记为吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA-ITGB2-AS1组。采用MTT法测定细胞存活率,平板克隆实验计数克隆形成数, 流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,qRT-PCR检测ITGB2-AS1表达。结果　吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞存活率和克隆形成数较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组减小,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞存活率和克隆形成数较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组减小,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组G₀-G₁期细胞比例较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组下降,G₂-M期细胞比例较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;吴茱萸碱4 μmol·L^-1组G₀-G₁期细胞比例较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组下降,G₂-M期细胞比例较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞凋亡率较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组升高,ITGB2-AS1表达量较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞凋亡率较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组升高,ITGB2-AS1表达量较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。si-ITGB2-AS1组ITGB2-AS1表达量、细胞存活率、克隆形成数和G₀-G₁期细胞比例均较si-NC组降低,G₂-M期细胞比例、细胞凋亡率均较si-NC组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA-ITGB2-AS1组细胞ITGB2-AS1表达量、细胞存活率和克隆形成数均较吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA-ITGB2-AS1组G₀-G₁期细胞比例较吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组高, G₂-M期细胞比例、细胞凋亡率较吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　吴茱萸碱通过抑制ITGB2-AS1表达降低视网膜母细胞瘤细胞增殖,阻滞G₂-M期细胞周期,并促进细胞凋亡。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的　探讨槲皮素对转化生长因子β1（TGF-β1）介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响。方法　取人RPE细胞系（ARPE-19细胞）进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L^-1TGF-β1组、10.0 mg·L^-1TGF-β1+25 μmol·L^-1槲皮素组、10.0 mg·L^-1TGF-β1+50 μmol·L^-1槲皮素组,ARPE-19细胞在4种不同的条件下培养24 h和48 h。采用CCK-8法测定各组细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移情况,ELISA检测细胞中I型胶原蛋白含量,Western blot 检测各组细胞上皮-间质转化标志物表达情况及Smad2/3磷酸化情况。结果　处理细胞24 h或48 h,10.0 mg·L^-1TGF-β1组细胞存活率均高于其他各组（均为P<0.05）;10.0 mg·L^-1TGF-β1+25 μmol·L^-1槲皮素组细胞存活率高于10.0 mg·L^-1TGF-β1+50 μmol·L^-1槲皮素组（P<0.05）。处理细胞24 h或48 h,10.0 mg·L^-1TGF-β1组细胞迁移数均多于其他各组（均为P<0.05）;10.0 mg·L^-1TGF-β1+25 μmol·L^-1槲皮素组细胞迁移数多于10.0 mg·L^-1TGF-β1+50 μmol·L^-1槲皮素组（P<0.05）。10 mg·L^-1 TGF-β1处理细胞48 h后,培养基上清液I型胶原蛋白含量升高（P<0.05）,而加入不同浓度槲皮素均能够有效抑制I型胶原蛋白含量的升高（均为P<0.05）。槲皮素以浓度依赖的方式显著降低了TGF-β1所引起的N-钙黏合素和α平滑肌肌动蛋白的表达增高作用;槲皮素可以使紧密连接蛋白ZO-1和E-钙黏合素的表达增高。10 mg·L^-1 TGF-β1处理细胞48 h后,Smad2/3磷酸化显著增加,而槲皮素可以抑制Smad2/3磷酸化。结论　槲皮素能够显著抑制TGF-β1介导的RPE细胞增殖、迁移和胶原分泌,通过调节Smad2/3磷酸化来抑制TGF-β1介导的RPE细胞的上皮-间质转化过程。     

阿柏西普对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的　探讨阿柏西普对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用。方法　制备SD大鼠角膜碱烧伤动物模型,随机分成4组,每组各9只,A组、B组与C组分别给予20 g·L^-1、25 g·L^-1、30 g·L^-1的阿柏西普滴眼液,D组为生理盐水组（给予生理盐水）,每组每天2次滴眼治疗,共14 d。分别于碱烧伤后第3天、7天、14天,观察角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV)情况并计算CNV面积。碱烧伤后第14天,处死全部小鼠,进行组织学和免疫组织化学检测各组CD34、VEGF蛋白表达情况。结果　碱烧伤后第 3天、7天和14天,A组、B组与C组的CNV面积均小于D组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;B组与C组在各时间点上CNV面积差异均无统计学意义（均为P>0.05）;但B组和C组与A组相比,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。HE 染色及免疫组织化学染色结果显示:角膜碱烧伤后第14天,各组角膜CD34和VEGF蛋白表达增强,与A组、B组、C组比较,D组CNV旺盛致密,CD34和VEGF蛋白表达较强。A组CNV较B组和C组多,CD34和VEGF蛋白表达增强;B组和C组棕黄色颗粒分布无明显差异。碱烧伤后第14天,酶联免疫吸附试验测定结果显示:A组、B组和C组房水中TNF-α蛋白表达水平均低于D组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）,B组、C组与A组比较,房水中TNF-α蛋白表达水平差异均有统计学意义（均为P<0.05）,但是B组和C组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论　阿柏西普对碱烧伤后大鼠CNV形成具有抑制作用,且25 g·L^-1阿柏西普的治疗效果最佳。     

木犀草素对人脉络膜黑色素瘤细胞株C918血管生成拟态形成的影响

目的　探讨木犀草素对人脉络膜黑色素瘤细胞株C918血管生成拟态形成的影响及其可能的分子机制。方法　体外培养C918细胞,木犀草素0 μmol·L^-1、0.10 μmol·L^-1、6.25 μmol·L^-1、12.50 μmol·L^-1、25.00 μmol·L^-1、50.00 μmol·L^-1、100.00 μmol·L^-1、200.00 μmol·L^-1、400.00 μmol·L^-1作用细胞12 h、24 h后,CCK-8法测定光密度值,通过GraphPad Prism软件拟合量效曲线。根据IC₅₀值及实验目的,确定分组为对照组（木犀草素0 μmol·L^-1组）、木犀草素12.50 μmol·L^-1组、木犀草素25.00 μmol·L^-1组、木犀草素50.00 μmol·L^-1组。应用划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移、侵袭能力。在Matrigel基质胶上三维培养C918细胞并行PAS染色,显微镜下观察各组细胞血管生成拟态形成情况。Western blot检测p-PI3K P85、AKT、p-AKT蛋白表达。结果　CCK-8实验结果显示,木犀草素呈浓度依赖性和时间依赖性抑制C918细胞活力,GraphPad Prism软件拟合量效曲线,确定木犀草素作用C918细胞12 h及24 h的IC₅₀值分别为163.70 μmol·L^-1和51.46 μmol·L^-1。划痕实验及Transwell细胞侵袭实验结果显示,各浓度木犀草素组细胞迁移速率、侵袭能力均明显低于对照组,差异有统计学意义（均为P<0.001）;木犀草素12.50 μmol·L^-1组和木犀草素25.00 μmol·L^-1组相比,细胞迁移速率差异无统计学意义（P＞0.05）;木犀草素25.00 μmol·L^-1组和木犀草素50.00 μmol·L^-1组相比,细胞侵袭能力差异无统计学意义（P＞0.05）;其余实验组间两两相比细胞迁移速率、侵袭能力差异均有统计学意义（均为P>0.05)。显微镜下观察发现,对照组和木犀草素12.50 μmol·L^-1组C918细胞形成环状结构,且糖原PAS染色阳性,两组之间环状结构数差异无统计学意义（P＞0.05）;木犀草素25.00 μmol·L^-1组和木犀草素50.00 μmol·L^-1组仅有部分细胞形成树枝样结构,无明显环状结构形成。Western blot检测结果显示,各浓度木犀草素组p-PI3K P85、p-AKT蛋白水平均较对照组明显下调,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　木犀草素可能是通过PI3K/AKT信号通路抑制C918细胞血管生成拟态形成的。     

氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1（HINT1）表达的影响

目的　探讨过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）诱导人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞氧化损伤对三联组氨酸核苷结合蛋白1（histidine triad nucleotide binding protein 1,HINT1）表达的影响。方法　将人ARPE-19细胞系分别用0 μmol·L^-1 H₂O₂（对照组）、50 μmol·L^-1 H₂O₂、100 μmol·L^-1 H₂O₂、200 μmol·L^-1 H₂O₂、400 μmol·L^-1 H₂O₂、600 μmol·L^-1 H₂O₂ 6个浓度梯度处理。采用Live/Dead荧光双染法和MTT法分别检测细胞活力和增殖能力;采用Western blot检测RPE细胞内BAX、BCL-2以及HINT1的表达水平。结果　H₂O₂处理6 h后,对照组及50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1及600 μmol·L^-1 H₂O₂组RPE细胞死亡率分别为（0.35±0.11）%、（2.03±0.87）%、（3.76±1.41）%、（12.17±1.26）%、（17.69±2.24）%、（25.22±0.59）%,RPE细胞死亡率呈剂量依赖性升高（P<0.05）。H₂O₂作用后对照组及50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1、600 μmol·L^-1 H₂O₂组RPE细胞生存率分别为（40.72±2.71）%、（37.75±0.62）%、（35.30±0.68）%、（34.10±0.74）%、（33.61±0.71）%、（31.05±1.41）%,RPE细胞增殖明显减少（P<0.05）,具有剂量-效应关系。随着H₂O₂浓度的增加,BAX蛋白表达逐渐上升（P<0.01）,而抗凋亡BCL-2蛋白表达则逐渐下降（P<0.01）,BAX/BCL-2比值相比对照组分别升高1.85倍（50 μmol·L^-1 H₂O₂组）、2.35倍（100 μmol·L^-1 H₂O₂组）、2.86倍（200 μmol·L^-1 H₂O₂组）、3.97倍（400 μmol·L^-1 H₂O₂组）、8.50倍（600 μmol·L^-1 H₂O₂组）;HINT1在H₂O₂处理的RPE细胞中以剂量依赖性方式逐渐下降（P<0.01）,分别下降0.78倍（50 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.59倍（100 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.45倍（200 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.42倍（400 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.38倍（600 μmol·L^-1 H₂O₂组）。结论　H₂O₂氧化损伤诱导RPE细胞活力显著减弱,细胞凋亡相关蛋白BAX表达升高;同时,细胞中HINT1表达下调,表明HINT1可能通过影响细胞凋亡参与年龄相关性黄斑变性的发生,为其药物作用的潜在靶点。     

PPAR-γ受体激动剂罗格列酮对兔准分子激光角膜切削术后角膜上皮下雾状混浊的影响

目的　探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARγ）激动剂罗格列酮对兔准分子激光角膜切削术（photorefractive keratectomy，PRK）术后角膜上皮下雾状混浊（haze）的影响。方法　选取普通级新西兰大白兔64只（64眼），随机分为28 μmol·L^-1罗格列酮组、14 μmol·L^-1罗格列酮组、1 g·L^-1二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）+生理盐水组、单纯PRK组，每组16只（16眼）。均行右眼PRK手术，术后分别给予28 μmol·L^-1罗格列酮、14 μmol·L^-1罗格列酮、1 g·L^-1DMSO+生理盐水滴眼，单纯PRK组未作任何特殊处理。术后各组用裂隙灯观察并比较角膜上皮愈合情况；分别于PRK术后7 d、28 d比较各组haze情况并行眼前节照相；每组分别于PRK术后7 d、28 d分批处死8只兔，取角膜行免疫组织化学法比较各组转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinases-2，MMP-2）的表达。结果　PRK术后角膜上皮愈合时间组间差异无统计学意义（P＞0.05）；PRK术后7 d、28 d，各组haze分级及TGF-β1、α-SMA、MMP-2的表达情况，组间差异均有统计学意义（均为P＜0.05），其中28 μmol·L^-1罗格列酮组haze最轻，14 μmol·L^-1罗格列酮组其次，明显轻于1 g·L^-1 DMSO+生理盐水组及单纯PRK组，除1 g·L^-1DMSO+生理盐水组及单纯PRK组组间差异均无统计学意义（均为P＞0.05）外，其余组间两两比较差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　PPAR-γ受体激动剂罗格列酮对兔PRK术后haze有抑制作用，呈浓度依赖性，可能由TGF-β1/Smad通路介导。     

藤黄酸通过CYLD/NF-κB信号通路抑制高糖环境下RPE细胞上皮-间充质转化的作用

目的　基于去泛素化酶圆柱瘤蛋白/核因子κB（CYLD/NF-κB）通路,研究藤黄酸（GA）对高糖环境下视网膜色素上皮(RPE)细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用。方法　体外培养ARPE-19 细胞,高糖诱导,实验分为NC组（含5.5 mmol·L^-1葡萄糖）,HG组(含30 mmol·L^-1葡萄糖),HG+不同剂量GA组(2 μmol·L^-1、4 μmol·L^-1、8 μmol·L^-1 GA分别预处理RPE细胞1 h,加30 mmol·L^-1葡萄糖)。CCK-8检测各组RPE细胞增殖活力,免疫荧光染色检测RPE细胞中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、去泛素化酶圆柱瘤蛋白(CYLD)表达;Western blot检测RPE细胞中α-SMA、CYLD、磷酸化核转录因子κB（p-NF-κB）蛋白表达。结果　与NC组相比,HG组RPE细胞出现明显增殖,RPE细胞中α-SMA、p-NF-κB蛋白表达均增加,CYLD蛋白表达减少（均为P<0.01）;与HG组相比,HG+不同剂量GA组RPE细胞增殖均明显受到抑制,RPE细胞中α-SMA、p-NF-κB蛋白表达均减少,CYLD表达均增加（均为P<0.01）,且均呈剂量依赖性。结论　GA可抑制高糖环境下RPE细胞EMT,其抑制作用与上调CYLD,抑制NF-κB活化有关。     

米诺环素对碱烧伤大鼠角膜新生血管生成的影响及其作用机制

目的　探讨米诺环素对碱烧伤大鼠角膜新生血管生成的影响及其作用机制。方法　选取SPF级健康SD大鼠72只（取右眼为实验眼）,从中随机选取24只（24眼）作为空白对照组（不做任何干预）,其余48只采用1 mol·L^-1 NaOH浸润过的实验滤纸建立角膜碱烧伤模型,然后随机分为溶剂对照组和米诺环素组,每组24只（24眼）。溶剂对照组在大鼠角膜碱烧伤后给予9 g·L^-1 NaCl溶液（10 mL·kg^-1）腹腔注射,米诺环素组在大鼠角膜碱烧伤后给予米诺环素溶液（45 mg·kg^-1）腹腔注射。各组于角膜碱烧伤后1 d、4 d、7 d、14 d随机抽取6只大鼠,在裂隙灯下观察眼前节情况,并测量各时间点大鼠角膜新生血管长度及面积。采用HE染色对角膜炎症细胞计数,实时荧光定量PCR检测角膜组织中一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶-1（Arg-1）mRNA的相对表达量,免疫组织化学染色法分析角膜组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、CD206的表达,对所得数据进行统计学分析。结果　整个实验过程中,空白对照组大鼠角膜透明,无角膜新生血管。碱烧伤后4 d、7 d、14 d,米诺环素组及溶剂对照组均可见角膜新生血管长出,但米诺环素组角膜新生血管长度及面积均小于溶剂对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。HE染色发现,空白对照组角膜结构清晰,上皮细胞排列整齐,无血管结构。碱烧伤后4 d、7 d、14 d,溶剂对照组与米诺环素组每个视野（×200)炎症细胞数分别为（119.83±7.28）个、（81.83±8.30）个,（92.50±7.34）个、（42.33±9.11）个,（48.33±7.76）个、（16.67±4.93）个,各时间点两组间比较差异均有统计学意义（均为P<0.01）。与空白对照组相比,碱烧伤后1 d、4 d、7 d、14 d,溶剂对照组iNOS、Arg-1 mRNA相对表达量均升高（均为P<0.05）;与溶剂对照组相比,碱烧伤后4 d、 7 d,米诺环素组iNOS mRNA相对表达量均明显减少（均为P<0.05）,而在碱烧伤后1 d、14 d,两组间差异均无统计学意义（均为P＞0.05）;与溶剂对照组相比,米诺环素组Arg-1 mRNA相对表达量在碱烧伤后14 d显著减少（P<0.01）,而在碱烧伤后1 d、4 d、7 d,两组间差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。溶剂对照组碱烧伤后4 d、7 d、14 d,Arg-1和iNOS mRNA相对表达量比值分别为0.73±0.14、0.82±0.90、1.71±0.21,与空白对照组相比差异均有统计学意义（均为P<0.01）。溶剂对照组Arg-1 mRNA相对表达量与角膜新生血管长度和面积之间均呈显著正相关,相关系数分别为0.898(P=0.000)、0.781(P=0.000）。碱烧伤后7 d、14 d,溶剂对照组TNF-α、CD206蛋白表达的累积光密度值均高于米诺环素组（均为P<0.05）。结论　巨噬细胞极化调控角膜碱烧伤后新生血管的生成,米诺环素可能通过调控巨噬细胞极化,减轻碱烧伤后角膜新生血管生成。     

丹参酮ⅡA对人角膜基质细胞纤维化的抑制作用

目的　研究丹参酮ⅡA （tanshinoneⅡA,TSN） 对转化生长因子β1 （transforming growth factor-β1,TGF-β1） 诱导的人角膜基质细胞 （human keratocyte,HK） 纤维化的作用,探索该药物是否具有防治角膜瘢痕的潜能。方法　采用胰蛋白酶消化培养HK,并传代至4-7代用于实验。通过TGF-β1诱导建立HK纤维化模型,并分别用5.0 μg·L^-1 TGF-β1和不同浓度的TSN联合给药方法对HK进行处理。采用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）与Vimentin的表达,qPCR检测纤连蛋白 （fibronectin,FN） 和I型胶原（collgen I,COL I） mRNA的表达;利用细胞免疫荧光染色观察HK细胞形态的改变。结果　5.0 μg·L^-1 TGF-β1可以显著上调α-SMA与Vimentin蛋白的表达和胞外基质成分FN mRNA（2.238±0.227）、COL I mRNA（3.554±0.526）的表达。2.5 μmol·L^-1和5.0 μmol·L^-1 TSN均能抑制α-SMA蛋白的表达和FN mRNA（0.619±0.017、0.263±0.006）、COL I mRNA（0.631±0.011、0.275±0.081）的表达。5.0 μg·L^-1 TGF-β1诱导组HK形态呈长梭形,具有两极,细胞呈极性分布;5.0 μmol·L^-1 TSN联合5.0 μg·L^-1 TGF-β1培养HK形态同原始细胞形态,细胞呈三角形或星形。结论　TSN可抑制TGF-β1诱导的HK纤维化,具有抗角膜瘢痕的潜力。     

分泌粒蛋白Ⅲ(Scg3)抗体对角膜新生血管的抑制作用北大核心

目的分析分泌粒蛋白III(Scg3)抗体对兔角膜新生血管(CNV)的干预作用。方法选取健康新西兰白兔45只,未做碱烧伤的5只作为对照组,剩余40只白兔用碱烧伤法构建CNV模型,随机分为模型组(20只)和干预组(20只),自碱烧伤之日起每隔2 d结膜下分别注射0.1 mL 1×PBS溶液或0.5 mg·L^(-1)的Scg3抗体工作液。碱烧伤后14 d,Western blot检测对照组与模型组兔角膜组织中Scg3的蛋白表达。分别在碱烧伤后1 d、7 d、14 d应用眼前段分析仪测量CNV的面积和长度,应用角膜共聚焦显微镜观察眼表变化,利用蛋白芯片法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-10(IL^(-1)0)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等炎症相关细胞因子的表达。结果角膜碱烧伤后14 d,模型组兔烧伤区域出现大量CNV,而干预组兔角膜无明显CNV生长。Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组兔角膜中Scg3蛋白表达显著升高(P<0.05)。角膜共聚焦显微镜下观察可见,模型组兔的角膜缘内出现大量活动性CNV。角膜碱烧伤后7 d和14 d,干预组兔角膜中CNV的长度和面积均显著低于模型组(均为P<0.001)。蛋白芯片法检测结果发现,碱烧伤后7 d、14 d,干预组兔眼表泪液中ICAM-1、IL^(-1)0、TGF-β1等炎症因子表达均显著低于模型组(均为P<0.05)。结论0.5 mg·L^(-1)的Scg3抗体能够降低兔角膜碱烧伤后的炎症反应,抑制CNV的生长。     

槲皮素对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导损伤的视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

目的　探讨槲皮素对N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid,NMDA）诱导的视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）损伤的保护作用及其机制。方法　将小鼠RGC随机分为对照组,NMDA组,NMDA+1 μmol·L^-1、10 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1槲皮素处理组,槲皮素处理组,NMDA+槲皮素+茴香霉素（anisomycin,ANISO）处理组,NMDA+槲皮素+P79350处理组。NMDA组细胞加入100 μmol·L^-1的NMDA作用24 h,NMDA+1 μmol·L^-1、10 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1槲皮素处理组则在NMDA作用前分别加入相应浓度槲皮素预处理2 h,槲皮素处理组只加入10 μmol·L^-1槲皮素处理,NMDA+槲皮素+ANISO处理组和NMDA+槲皮素+P79350处理组在NMDA和槲皮素处理后分别加入25 μg·L^-1的ANISO和50 μmol·L^-1的P79350处理。随后利用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）试剂盒检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞培养上清液中活性氧（reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和一氧化氮（nitric oxide,NO）水平,RT-PCR检测细胞中神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）mRNA表达,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK（phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）和p-JNK蛋白表达水平,Caspase-3活性试剂盒检测Caspase-3活性。结果　与对照组比较,NMDA组细胞活性、SOD、Bcl-2 mRNA表达水平降低,LDH,ROS,MDA,NO,iNOS mRNA、nNOS mRNA、Bax mRNA和蛋白表达水平,Caspase-3活性,p-JNK蛋白表达水平,p-p38 MAPK蛋白表达水平,细胞凋亡率均升高（均为P<0.05）。相比于NMDA组,NMDA+槲皮素处理组则提高细胞活性和SOD水平,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,降低LDH、ROS、MDA和NO,下调iNOS mRNA、nNOS mRNA、Bax mRNA和蛋白,p-JNK蛋白以及p-p38 MAPK蛋白表达,并降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（均为P<0.05）。ANISO和P79350抵消槲皮素的作用。结论　槲皮素通过JNK/p38 MAPK信号通路防止NMDA诱导的RGC损伤。     

石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用及其可能机制

目的　探讨石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用，并分析其可能机制。方法　取B16F10葡萄膜黑色素瘤细胞株，按石蒜碱浓度为0 μmol·L^-1（对照组）、1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1进行分组培养,24 h后，CCK-8法检测各组B16F10细胞的存活率；RT-PCR分析各组B16F10细胞VEGF-A mRNA的表达，ELISA检测各组B16F10细胞VEGF-A蛋白表达；流式细胞仪检测各组B16F10细胞的细胞周期及凋亡情况。结果　与对照组相比，1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1石蒜碱作用于B16F10细胞 24 h 后，能够呈浓度依赖性抑制B16F10细胞生长（其半数抑制浓度为7.950 μmol·L^-1），下调B16F10细胞中VEGF-A mRNA的表达，抑制 VEGF-A蛋白分泌，其中25.000 μmol·L^-1石蒜碱抑制效果最显著。流式细胞仪检测结果显示，1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1石蒜碱干预B16F10细胞24 h后，细胞凋亡率由对照组0.00%，分别上升为12.80%、12.86%、16.68%、18.54%、22.20%；G1期细胞比例由对照组（30.86±0.69）%，分别上升为（56.55±0.95）%、（60.92±0.85）%、（62.65±0.53）%、（67.55±0.92）%、（74.18±0.45）%，与对照组相比，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　石蒜碱在体外能够呈浓度依赖性抑制葡萄膜黑色素瘤细胞B16F10的VEGF水平，引发细胞S期阻滞，诱导细胞凋亡，从而显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖。