妊娠早期小鼠卵巢,输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分析

目的 了解胚泡着床前后妊娠昆明系小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ,ｉＮＯＳ）的分布。方法 免疫细胞化学ＬＳＡＢ法。结果 妊娠２～５ｄ小鼠的卵巢内,黄体细胞上有ｉＮＯＳ的阳性表达;输卵管粘膜上有ｉＮＯＳ的分布,肌层则为阴性;妊娠２、３ｄ的小鼠子宫内,阳性标记主要出现在子宫内膜上皮以及子宫内膜中的了宫腺上皮,内膜基质细胞为阴性;妊娠４ｄ的子宫内,子宫腺及蜕膜部分均有ｉＮＯＳ的分布,妊娠５ｄ时,在小鼠胚泡的表面也检测到了ｉＮＯＳ的存在。结论 小鼠胚泡着床前后,在其卵巢、输卵管及子宫内均有ｉＮＯＳ的存在,提示ｉＮＯＳ在小鼠胚胎早期发育及着床过程中起作用。     

白细胞介素-8在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达及对胚泡着床的影响

目的：研究白细胞介素-8（IL-8）在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达及其对小鼠胚泡着床的影响。方法：用免疫组化法及图像分析技术对IL-8在妊娠1～6d小鼠子宫内膜的表达进行定位和测定;子宫角注入IL-8抗体,探讨IL-8对胚泡着床的影响。结果：在子宫内膜腔上皮,IL-8主要定位于细胞的游离面,妊娠1d阳性反应最弱,4d表达最强,5d有所下降,6d又开始增强;在子宫内膜腺上皮,妊娠4d表达最弱,5d和6d最强;在子宫内膜的基质细胞,随妊娠天数增加,IL-8的表达逐渐增强。IL-8Ab明显抑制小鼠胚泡着床。结论：IL-8在妊娠早期小鼠子宫内膜持续表达,并参与胚泡的着床调控过程。     

SA-30诱导的小鼠子宫内诱导型一氧化氮合酶的变化

目的　检测精子膜抗原 SA- 30对小鼠子宫内诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)含量及分布的影响 ,从而了解 SA - 30的抗生育机制。　方法　 SA- 30免疫雌性昆明小鼠后 ,应用免疫组织化学方法 ,对子宫内的 i NOS进行了检测。结果　 SA - 30免疫后对间情期小鼠子宫内的 i NOS没有明显影响 ,无论是免疫组还是对照组 ,在子宫内膜基质中均有大量阳性细胞分布 ,两者无明显差异 ;在妊娠第 3d时 ,对照组的小鼠子宫中有较多 i NOS表达 ,阳性标记主要集中在内膜上皮及固有膜中的子宫腺上 ,经 SA- 30免疫的小鼠子宫中 ,i NOS表达则显著减少 ,整个内膜标记极弱 ,只在子宫肌层内有少量 i NOS阳性细胞分布。　结论　 SA - 30可能通过使妊娠早期小鼠子宫内 i NOS表达显著减少 ,而影响小鼠胚胎植入及早期胚胎的发育     

妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白定位、定量及对胚泡植入的作用

目的　研究妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白（ｌａｍ ｉｎｉｎ,ＬＮ）定位和定量变化及其对胚泡着床的作用。方法　应用间接免疫荧光法、免疫组织化学ＡＢＣ技术及图像分析法进行ＬＮ定位和定量测定;利用子宫内注射ＬＮ抗体的方法探讨ＬＮ对小鼠胚泡植入的作用。　结果　动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜内源性ＬＮ 在上皮和腺基膜及血管内皮基膜均有表达,并随着植入的发生基膜的ＬＮ 表达减弱,而内膜上皮中ＬＮ免疫染色逐渐增强;外源性ＬＮ 对小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜不产生明显影响,层粘连蛋白抗体明显抑制小鼠胚泡着床。　结论　动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜的层粘连蛋白主要存在于基膜,胚泡植入期间内膜上皮细胞内ＬＮ 的含量增加;ＬＮ在促进小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜过程中起重要作用。     

整合素α4、β1 mRNA在着床前小鼠子宫内膜及胚卵的表达

目的 观察着床前小鼠子宫内膜及胚卵整合素α4、β1mRNA的表达。方法 用原位杂交技术检测妊娠1～4d小鼠子宫内膜及胚卵整合素α4、β1mRNA的表达。结果 整合素α4、β1mRNA主要表达在子宫内膜腔上皮，腺上皮，表达强弱不等。妊娠3d基质细胞出现阳性信号，4d增强；胚卵整合素α4、β1mRNA仅在Ⅱ细胞期弱表达，在其他时期表达较强。结论 妊娠1～4d小鼠子宫内膜及胚卵持续表达整合素α4、β1mRNA，提示它们可能参与小鼠胚泡的着床过程。     

小鼠胚泡植入早期FucT-Ⅶ和sLe(X)寡糖抗原表达

目的探讨妊娠第1～5天(d1～5)小鼠子宫内膜唾液酸化的路易斯寡糖[sLe(X)]合成关键酶α-1,3岩藻糖基转移酶基因(FucT-Ⅶ)的表达和其表面sLe(X)寡糖抗原表达对胚胎植入的影响。方法应用RT-PCR和免疫组化方法检测妊娠第1～5天小鼠子宫内膜FucT-Ⅶ及寡糖抗原的表达规律。用子宫角内注射sLe(X)单克隆抗体的方法检测小鼠胚胎着床数。结果妊娠第1～5天小鼠子宫组织均有FucT-Ⅶ的表达,且在妊娠d4表达更强(P<0.05)。妊娠第1～5天sLe(X)寡糖抗原表达在子宫内膜的腔上皮和腺上皮。单侧子宫角sLe(X)抗体注射后胚胎的着床数量明显较对侧(注射等体积生理盐水)减少。结论在小鼠胚胎着床过程中,FucT-Ⅶ及sLe(X)寡糖抗原可能参与了胚泡的定位、黏附及侵袭过程,在胚泡植入的早期发挥作用。     

CXCR2在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达

目的研究CXCR2在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达情况.方法应用免疫组织化学和图像分析技术,观察CXCR2在妊娠1d、4d、5d、6d小鼠子宫内膜的表达部位及蛋白水平的变化规律;HE染色后光镜下观察子宫内膜的形态学变化.结果免疫组化染色结果显示:在子宫内膜腔上皮,CXCR2于妊娠4d表达最强,妊娠5d开始逐渐下降,妊娠6d降至妊娠1d水平;在子宫内膜腺上皮和基质,CXCR2的表达水平随妊娠天数的增加而逐渐升高.HE染色可见妊娠1d子宫内膜腔上皮和基质中有大量中性粒细胞浸润;妊娠4d腔上皮中未见中性粒细胞,基质中则有大量中性粒细胞浸润;妊娠5d和妊娠6d腔上皮中未见中性粒细胞,基质中中性粒细胞数量甚少.结论CXCR2可能通过与其配体白细胞介素-8结合而参与小鼠胚泡着床过程.     

生殖周期中小鼠子宫NOS定位及血清NO水平变化

目的　系统研究 3种一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)在生殖周期中小鼠子宫分布变化 ,探讨内源性一氧化氮 (nitricoxide,NO)在生殖周期中可能的生理作用。　方法　免疫组织化学LSAB法 ,比色法。　结果　神经型一氧化氮合酶 (nNOS ,NOS1)在生殖周期小鼠子宫有较为稳定的表达 ,大量的阳性细胞主要分布在子宫内膜上皮 ,内膜基质 ,血管内皮 ,腺上皮及肌层 ;内皮型一氧化氮合酶 (eNOS ,NOS3)在妊娠中期小鼠子宫表达明显增强 ,蜕膜上皮 ,腺上皮和血管内皮呈强阳性标记 ;诱导型一氧化氮合酶 (iNOS ,NOS2 )在妊娠早期表达最强 ,妊娠中、晚期表达稍下降。阳性标记主要分布在肌层 ,血管内皮 ,腺上皮 ,内膜上皮及内膜基质 ;然而动情期小鼠子宫未见iNOS阳性标记。此外 ,还测定了生殖周期小鼠血清NO水平变化。　结论　 3种NOS同工酶在生殖周期小鼠子宫可能既协作又分工 ,由其产生的内源性NO对雌鼠动情、胚胎植入、分娩前子宫静息状态的维持、分娩始动以及产后子宫修复等生理过程可能均有调节作用。     

小鼠胚胎与子宫内膜中整合素α_5的表达

目的:观察整合素α5在小鼠早期胚胎和子宫内膜中的表达分布状况,探讨整合素在胚胎着床中的可能作用。方法:用免疫组织化学ABC法染色,对发育不同时期的小鼠胚卵和妊娠2 d～6 d、8 d、13 d以及非妊娠期的子宫内膜中整合素α5的表达分布进行形态学观察与半定量分析。结果:整合素α5的阳性反应物质在小鼠早期胚卵胞浆内;非妊娠期子宫内膜和妊娠期的脱膜上皮与基质细胞内均有整合素α5表达,植入前表达相对较弱,植入后随妊娠的进展逐渐增强。结论:提示整合素α5在小鼠胚卵着床中起重要作用:推测它不参与胚卵对母体子宫内膜的识别和粘附,而是参与了粘附后的侵入及胚胎发育过程。     

Effect of estrogen and progestogen on the expression of interleukin-8 in mouse endometrium and blastocyst during preimplantation

目的:研究雌、孕激素对着床前小鼠子宫内膜及胚泡白细胞介素8(IL-8)表达的影响.方法:利用经典小鼠胚泡延迟着床模型,应用免疫组织化学显色、免疫印迹及图像分析技术,对着床前小鼠子宫内膜及胚泡IL-8的蛋白表达进行定位及半定量分析.结果:IL-8主要表达于妊娠小鼠子宫内膜腔上皮细胞及胚泡内细胞群和滋养层细胞的细胞质内.在子宫内膜组织中,切除双侧卵巢后单独给予孕酮组(P4组),IL-8表达低于联合应用雌二醇和孕酮组(E2+P4组)和对照组;E2+P4组IL-8表达上调,但低于对照组.在各组胚泡中,单独给予孕酮获得的静止胚泡、IL-8蛋白含量低于正常胚泡;联合应用雌二醇、孕酮获得的激活胚泡、IL-8的蛋白表达高于静止胚泡.结论:切除卵巢后,联合应用雌、孕激素可上调着床前小鼠子宫内膜及胚泡IL-8蛋白的表达.     

小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶1表达的影响

目的 探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1，Dnmt1）表达的影响。方法 应用免疫组织化学方法确定Dnmt1蛋白在小鼠输卵管的组织学定位；选取植入前胚胎的2细胞期、4细胞期和8细胞期作为3个观察点，采用实时逆转录-聚合酶链反应和Western印迹分别检测正常妊娠和假孕小鼠输卵管上皮Dnmt1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 Dnmt1蛋白主要表达于上皮层；妊娠组小鼠各期Dnmt1 mRNA表达水平均显著性低于同期假孕组（P〈0．05），妊娠组4细胞期Dnmt1蛋白表达水平显著性低于同期假孕组（P〈0．05）。结论 小鼠植入前期的胚胎对母体输卵管上皮Dnmt1 mRNA和蛋白表达存在调节作用，提示胚胎可能通过DNA甲基化间接调控输卵管上皮某些基因的表达，Dnmt1可能参与胚胎-母体交流的部分机制。     

Granulated and non-granulated decidual prolactin-related protein-positive decidual cells in the pregnant mouse endometrium

PROBLEM: Identification of the cell types responsible for the synthesis of decidual prolactin-related protein (dPRP) in the pregnant mouse endometrium. METHOD OF STUDY: Histochemistry and immunocytochemistry were used to determine peri-implantation dPRP and perlecan distribution in the mouse uterus. RESULTS: We identified dPRP in pre-decidual and mature decidual cells from days 5 to 12 of pregnancy. On day 8, dPRP immunoreactivity was detected within cytoplasmic granules of a specific population of granulated decidual cells (GDCs). In mesometrial decidual cells, weak immunoreactivity was seen from days 7 to 14. Between days 11 and 14, dPRP was found in cytoplasm and in the extracellular matrix surrounding islands of spongiotrophoblast. Perlecan, a heparan sulfate proteoglycan, was co-localized with dPRP. CONCLUSION: GDCs are a putative source of dPRP in pregnant mice. Co-localization of perlecan with dPRP suggests that the former acts as a dPRP reservoir and facilitates its paracrine effect in developing placental tissues.     

小鼠附植前胚在子宫内的迁移能力

目的观察小鼠附植前胚在子宫内的迁移能力。方法将CD-1小鼠受精卵、2-细胞胚、桑椹胚、囊胚、四倍体胚、孤雌活化胚等6种胚共1042枚单侧（右侧）移植CD-1假孕母鼠的输卵管或者子宫，观察移植胚在两侧子宫角内的附植情况。结果共得到45只妊娠鼠，在这45只鼠的右侧子宫角都有不同数目的着床胚，而仅在6只鼠的左侧子宫角发现了6枚着床胚。结论小鼠胚在子宫内的迁移能力非常有限，单侧移植的多个胚很少的机率迁移到另一侧子宫角内着床，不能进行胚均匀分布。     

CD57+自然杀伤细胞在妊娠早期小鼠子宫壁内的分布

目的　探索ＣＤ５７＋ 自然杀伤细胞（ＮＫ细胞,ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ）在小鼠妊娠早期子宫壁内的意义。方法　用小鼠抗人ＮＫ细胞ＣＤ５７单克隆抗体,对未经产小鼠妊娠早期子宫壁内ＮＫ细胞进行免疫组织化学标记。结果　孕０ｄ,小鼠子宫壁内见少量ＣＤ５７＋ 细胞,孕２ｄ 时ＮＫ细胞数量剧增,孕４ｄ 时稍下降。孕６ｄ、孕８ｄ 时数量更少（低于０ｄ 值）。孕６ｄ 和８ｄ 均出现妊娠失败个体,其子宫壁内ＮＫ细胞很多,显著高于正常妊娠６ｄ 和８ｄ 小鼠的数量（Ｐ＜ ０．０１）。从分布区域看,胚胎着床（４．５ｄ）前,ＮＫ细胞多位于子宫肌层,胚胎着床后仅存在于着床点以外的子宫内膜和肌层。在妊娠失败个体,ＮＫ细胞广泛存在于子宫内膜和肌层中。　结论　小鼠交配后子宫ＮＫ细胞增多与子宫炎性反应有关。着床期以后子宫ＮＫ 细胞增多与妊娠失败有一定的相关性。     

Experimental infection of laying turkeys with Rhinotracheitis virus: Distribution of virus in the tissues and serological response

Twenty-four laying turkey hens shown to be free of antibodies to turkey rhinotracheitis virus were inoculated intranasally with an isolate of the virus. A mild respiratory disease developed between 5 and 9 days post infection (pi). Two birds were selected at random at intervals between days 1 and 20 pi, killed and tissues examined for the presence of virus. At autopsy between days 2 and 12 abnormalities were found in the oviducts including the deposition of inspissated albumen. Yolk material was occasionally found in the abdominal cavity and there was one instance of egg peritonitis. Eggs with abnormal shells were found in the uterus on days 3 and 9. By direct immunofluorescence (IF) staining, virus was detected in the trachea between days 1 and 7 pi and in the turbinates between days 2 and 5 pi. Virus could also be isolated from these sites using turkey embryo tracheal organ cultures but this method was slightly less sensitive than IF for these tissues. No virus was demonstrated in the lungs or air sacs. Viral antigens were detected by IF in the epithelium of the uterus on day 7 pi and in this and all other regions of the oviduct on day 9 pi. Virus was isolated only from middle magnum and vagina on day 9 pi. On other occasions up to 20 days pi the above tissues and spleen, ovary, liver, kidney and hypothalamus were all negative for virus. Antibodies detected by ELISA and serum neutralisation both reached, high titre by 12 days pi and were maintained at a high level (Iog2 12-15) throughout the period of observation (89 days).     

硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅵ在小鼠卵巢、输卵管和子宫中的分布

目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶VI(PrxVI)卵母细胞生长发育和早期胚胎发育中的可能作用。方法用免疫组织化学方法观察6～8周雌性昆明小鼠卵巢、输卵管和子宫PrxVI的分布。结果在卵巢中,PrxVI免疫阳性见于卵巢卵母细胞和黄体;在输卵管中,输卵管上皮呈PrxVI免疫阳性反应;在子宫中,PrxVI免疫阳性反应见于子宫内膜上皮、腺上皮和子宫内膜基质细胞。结论PrxVI的定位分布提示其可能参与小鼠卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节,并为受精卵和早期胚胎发育提供抗氧化的良好微环境。     

HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用

目的探讨HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用。方法应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)分别检测未孕及早孕小鼠第1、2、3、4、57、d HOXa-10基因表达量的变化规律;同时用可以持续表达HOXa-10的DNA/脂质体复合物质粒和HOXa-10反义寡脱氧核糖核酸分别转染到受孕2d小鼠子宫角内,观察胚泡着床数。结果FQ-PCR结果显示,随着小鼠妊娠天数的增加,HOXa-10基因表达量也逐渐增高,在孕4d达到峰值,孕5d开始下降,孕7d时表达量已接近未孕状态;在用HOXa-10 DNA质粒/脂质体转染孕2d小鼠子宫角后,小鼠的胚泡着床数明显增加;用HOXa-10反义寡脱氧核糖核酸/脂质体转染孕2d小鼠子宫角后,小鼠的胚泡着床数明显减少(P<0.05)。结论在胚泡植入窗口期,子宫内膜HOXa-10基因表达上调,其可能参与了胚泡着床过程。     

Coxsackievirus B infection in pregnant mice and transplacental infection of the fetus.

Direct instillation of coxsackievirus B1 into the gastrointestinal tracts of albino mice caused viremia in more than 85% of the animals within 1 day. In pregnant mice infected early in gestation (7 days), the geometric mean titer of virus in the blood was lower (P = 0.02) and the duration of viremia was shorter (P = 0.07) than in nonpregnant female mice, but infection of the heart, liver, and uterus did not differ on each of 5 days after infection. Although transplacental infection of the placenta or fetus or both occurred, the high spontaneous abortion rate (48%) obviated comparison of transplacental infection in these mice with mice infected later in gestation. Pregnant mice infected in the third trimester had significantly greater geometric mean titers of virus in the blood, heart, liver, and uterus, and infection persisted longer than in nonpregnant mice (P = 0.04). A very high geometric mean titer of virus was recovered from the uteri of these mice for 3 days after infection, whereas simultaneous geometric mean titers of virus in the placentas and fetuses were lower. In the majority of third trimester pregnant mice, virus was found in low titers in the fetuses at 2 and 3 days after maternal infection, and virus was not detected after day 3. We conclude that coxsackievirus B1 infection in late gestational pregnant mice is more severe than in mice at earlier gestational stages and in nonpregnant mice and that transplacental infection of the fetus occurs transiently during maternal infection. This model will prove useful in the study of perinatal enterovirus infection and in examination of the numerous factors that may influence outcome of infection of perinatally infected newborn infants.     

小鼠发育期卵巢成纤维细胞生长因子10的表达

目的 研究小鼠卵巢发育期成纤维细胞生长因子10(FGF10)的表达. 方法 分离孕E14.5、E16.5、E18.5、生后第1天和3周龄小鼠卵巢,每组实验动物6只,应用免疫组织化学技术研究FGF10蛋白在卵巢中的表达;3周龄小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48h后,再注射人绒毛膜促性腺激素(hCG),hCG注射后3h提取总mRNA,应用RT-PCR技术研究卵巢中FGF10、黄体生成素受体(LHR)、成纤维细胞生长因子7(FGF7)和成纤维细胞生长因子受体2Ⅲb(FGFR2Ⅲb)基因的表达变化. 结果 FGF10蛋白表达于卵母细胞,并且FGF10在生后第1天小鼠的卵母细胞上表达最强;两种促性腺激素处理后,FGF10 mRNA 与对照组相比表达下降,LHR mRNA表达升高,FGF7和FGFR2Ⅲb mRNA表达不变. 结论 FGF10蛋白特异表达于小鼠卵母细胞膜,促性腺激素影响卵巢FGF10 mRNA的表达,推测FGF10可能参与调控小鼠卵母细胞的生长和卵泡发育.