当归炮制前后化学成分的HPLC-Q-TOF/MS比较研究

目的 比较当归生品、酒品、炭品及土炒品的各项质控指标及主要化学成分的差异 方法 按照《中国药典》2015版标准,测定当归不同炮制品的水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物及阿魏酸含量,考察HPLC方法的线性、精密度、稳定性、重复性及加样回收率。同时采用HPLC-Q-TOF/MS鉴定当归不同炮制品的9种主要化学成分,并用HPLC方法比较各当归炮制品中9种主要化学成分的相对含量差异。结果 各当归炮制品的水分、总灰分、醇溶性浸出物测定结果均符合《中国药典》2015版的要求。生当归和酒当归的阿魏酸含量分别为0.061 %和0.050 %,符合药典要求。运用高分辨质谱鉴定了9个主要化学成分,分别为邻苯二甲酸、阿魏酸、肉桂酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、(E)-藁苯内酯、(Z)-藁苯内酯、新当归内酯、欧当归内酯A。结论 当归酒炙后挥发油成分含量降低,挥发油成分具有兴奋子宫功能,酒炙后可能有助于舒缓子宫兴奋作用,使子宫收缩平缓,发挥稳定的活血通经作用。当归土炒后挥发油成分含量降低,土炒缓和油润而不滑肠作用可能与此有关。综上所述,当归炮制后挥发油成分含量下降,和传统炮制理论是吻合的。     

不同炮制方法对川芎中化学成分的影响研究

通过测定川芎不同炮制品中浸出物的含量及绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯的含量,研究不同炮制方法对川芎醇溶性浸出物及6种成分含量的影响。浸出物的测定按照2020年版《中国药典》四部2201项下醇溶性浸出物测定法进行;含量测定采用Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.5%醋酸溶液(B),梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL·min-1,检测波长285 nm,进样量10μL。结果表明,与生川芎相比,川芎炮制品的浸出物含量均明显增加,增加程度为蜜川芎>酒川芎>芷川芎>茶川芎。高效液相测定方法便捷、可靠,川芎及其炮制品中绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯线性关系良好,精密度、重复性、稳定性及加样回收率均良好。川芎炮制前后共有色谱峰15个,指认了其中8个,与炮制前相比,川芎蜜炙、酒炙后新增2个色谱峰,白芷提取物炮制后新增了4个色谱峰;酒川芎中绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯的含量均减少;蜜川芎、茶川芎、芷川芎中除阿魏酸含量增加外,其余5种成分含量均减少。黄酒、蜂蜜、茶叶及白芷提取物均能促进川芎中化学成分的溶出,增加浸出物的含量;川芎不同炮制品中6种成分含量的变化可为研究川芎不同炮制品化学成分、药效变化提供一定的依据。     

当归不同炮制工艺的比较

目的:比较当归不同炮制工艺有效成分的含量,确定最佳的炮制工艺。方法:采用HPLC测定当归不同炮制品中阿魏酸和藁本内酯的含量,采用水蒸气蒸馏法测定其总挥发油的含量,并比较不同炮制品有效成分的含量。结果:当归经炮制后,阿魏酸、藁本内酯和总挥发油的含量均有不同程度的降低,其含量的大小顺序为:当归片﹥微波炮制品﹥酒炙当归﹥土炒当归﹥油炒当归当归炭。结论:当归微波炮制法具一定的科学性,可作为当归新的炮制工艺。     

汉派酒当归炮制方法优化及比较

目的优化汉派酒当归炮制方法,并与传统黄酒炮制品进行比较。方法以水溶性浸出物、醇溶性浸出物、挥发油、阿魏酸和藁本内酯含量为综合评价指标,采用正交试验法考察白酒醇含量、白酒用量、闷润时间对工艺的影响确定汉派酒当归的最佳炮制工艺,并与文献报道的其他4种传统黄酒炮制方法进行对比。结果筛选的最佳炮制工艺参数为白酒醇含量56%,白酒用量20%,闷润时间为36h。该工艺炮制的汉派酒当归制成品与其他4种传统黄酒炮制品在检测综合评分上具有显著差异,而4种传统黄酒炮制品之间评分差异不显著。结论汉派酒当归炮制工艺较传统黄酒炮制工艺操作简单易行、成品片型佳、酒香气浓郁、且阿魏酸、藁本内酯含量较高,值得推广应用。     

不同方法炮制当归化学成分分析

目的:分析不同炮制方法炮制当归化学成分的影响。方法:将采购自同一批中药当归分为4个等分,分别以生当归、酒当归、土炒当归和当归炭的形式进行炮制,采用高效液相色谱法(HPLC)依次测定生当归、酒当归、土炒当归与当归炭等炮制样本中阿魏酸、藁本内酯、水分等化学成分的含量。测量不同炮制方法前后当归质量的变化并计算质量变化率。结果:不同炮制方法取得的当归炮制样本中阿魏酸、藁本内酯及多糖含量比较差异均有统计学意义(P0.05)。其中生当归各主要成分均为最高,其中阿魏酸、藁本内酯、多糖含量从高到低排序依次为生当归、酒当归、土炒当归和当归炭。水分含量从高到低排序依次为生当归、土炒当归、酒当归和当归炭。除了生当归外,其他炮制方法炮制前后当归质量及质量变化率比较差异明显(P0.05),酒当归炮制后当归质量增加,土炒当归、当归炭炮制后当归质量减少。结论:不同炮制方法可对当归阿魏酸、藁本内酯、多糖、水分等化学成分产生不同的影响。     

几种川芎炮制工艺的比较

目的:比较川芎不同炮制工艺有效成分的含量,确定最佳的炮制工艺。方法:采用HPLC法测定川芎不同炮制品中阿魏酸、藁本内酯、丁基苯酞、丁烯基苯酞的含量。结果:川芎经炮制后,4种成分的含量有不同程度的降低,以化学成分为指标,微波炮制品和酒烘制品的含量较高。结论:川芎微波炮制法和酒烘法具一定的科学性,可作为川芎新的炮制工艺。     

炮制对补骨脂中12种化学成分含量的影响

目的:比较补骨脂生品及3种炮制品的各项检查指标及化学成分的差异,为补骨脂不同炮制品的临床使用提供参考。方法:按《中国药典》2015年版标准,测定补骨脂生品、炒品、盐炙品及酒炙品的杂质、水分、总灰分和酸不溶性灰分,通过HPLC比较补骨脂不同炮制品中主要化学成分的差异。结果:补骨脂生品及3种炮制品的杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分测定结果均符合《中国药典》2015年版的要求。通过对照品比对及文献查阅确定了12个主要化学成分,即补骨脂苷,异补骨脂苷,补骨脂素,异补骨脂素,新补骨脂异黄酮,补骨脂甲素,补骨脂定,补骨脂乙素,补骨脂二氢黄酮甲醚,corylifol A,4'-O-甲基补骨脂查尔酮和补骨脂酚。结论:补骨脂酚有肾毒性和肝毒性,炮制后补骨脂酚在酒炙品和盐炙品中含量均较生品下降,说明酒炙和盐炙具有炮制减毒的作用;与生品相比,盐炙品中补骨脂素和异补骨脂素含量显著升高,这与补骨脂盐炙后温肾助阳作用增强相关。4'-O-甲基补骨脂查尔酮在炮制品中含量显著升高,而补骨脂二氢黄酮甲醚含量显著降低,这可能是由补骨脂二氢黄酮甲醚在高温下发生降解转化而成。上述这些成分的改变可能是不同炮制品临床功效产生差异的主要原因。     

基于HPLC及化学计量法对当归与欧当归药材的比较研究

目的:建立一种分析当归、欧当归药材中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、藁本内酯含量的方法,并采用化学计量法对两类药材的化学成分进行比较。方法:样品采用超声法提取,高效液相色谱法测定其中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯及藁本内酯的含量,采用主成分分析和正交偏最小二乘法对HPLC图谱进行模式识别。结果:16批当归药材中阿魏酸含量0.012%～0.026%,阿魏酸松柏酯0.149%～0.322%,藁本内酯0.461%～1.012%,洋川芎内酯Ⅰ0.005%～0.018%;4批欧当归药材中阿魏酸含量0.015%～0.023%,阿魏酸松柏酯0.065%～0.175%,藁本内酯0.180%～1.227%,洋川芎内酯Ⅰ0.013%～0.022%。主成分分析和正交偏最小二乘法均表明当归与欧当归在化学成分的组成和含量上有差异。结论:当归和欧当归的化学成分有差异,研究结果可为两类药材的鉴别和质量控制提供依据。     

没药与其配方颗粒的对比研究

目的：通过研究,探讨传统没药的炮制方法,完善蒙药的炮制工艺,评价其最佳质量。方法：用水和醇为溶剂从没药中提取出水溶性成分和醇溶性成分,按挥发油测定法、浸出物测定法（中国药典2010年版一部附录ⅩD、XA）对炮制品进行含量测定;对没药炮制品进行含量比较,评价其品质。结果：没药配方颗粒的挥发油及浸出物百分含量均高于生没药。炮制品易于粉碎。结论：没药配方颗粒品质优于没药生品。但炮制过程中药品干燥较慢,尚需改进。     

当归不同炮制品清除自由基谱效关系研究

目的:研究当归不同炮制品清除自由基的药效物质基础。方法:采用Fenton反应产生羟自由基和邻苯三酚自氧化产生氧自由基模型,研究当归炮制品酒当归、油当归、土当归和当归碳体外清除自由基的作用,HPLC法建立其指纹图谱,鉴定了11个共有峰,多元线性回归法分析当归不同炮制品中化学成分与清除自由基之间的关系。结果:不同浓度当归炮制品醇提液对羟自由基和氧自由基都有一定的清除作用,随浓度的增大,清除率显著增高,呈现良好的剂量依赖关系;回归分析结果表明,峰10所代表的化合物Z-丁烯基酞内酯和峰4所代表的未知化合物与羟自由基和氧自由基的清除密切相关,其中化合物Z-丁烯基酞内酯与抗自由基呈正相关关系,峰4所代表的未知化合物与抗自由基呈负相关关系;阿魏酸、丁基酜内酯与清除羟自由基呈正相关关系,洋川芎内酯H和levistolide A.与清除氧自由基密切相关。结论:Z-丁烯基酞内酯、阿魏酸、丁基酜内酯、洋川芎内酯H、levistolide A.和峰4代表的未知化合物是当归炮制品清除自由基的药效物质基础。     

川芎质量标准的研究

目的建立川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的质量标准。方法对28批不同等级川芎药材开展杂质、水分、灰分、浸出物、重金属和有害元素残留量、农药残留量及主要成分(阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A和藁本内酯)的含量测定,并利用主成分分析各项指标与川芎药材等级之间的相关性。结果不同等级川芎药材的质控指标具有较明显的区分,规定川芎优质药材测定限为每千克药材40个以内,单个质量平均不低于20 g,水分≤12.0%,醇溶性浸出物限度不得小于25.0%;含阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯不得少于0.10%、0.04%、0.02%、0.40%、1.60%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于川芎的质量控制。     

续断酒炙前后化学成分的UPLC-Q-TOF/MS比较研究

比较续断生品、酒品各项质控指标及化学成分的差异。按照《中国药典》2015年版标准,测定续断生品、酒品的水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物,并建立UPLC-Q-TOF/MS方法比较续断不同炮制品主要化学成分的差异,考察方法的线性、精密度、稳定性、重复性及加样回收率。续断生品和酒品的水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物测定结果均符合《中国药典》2015年版的要求,并运用高分辨质谱鉴定了20个主要差异化学成分。续断经酒炙后续断皂苷VI及其乙酰化类似物含量显著上升,而酚酸类成分中的二咖啡酰奎宁酸的含量显著降低,咖啡酸含量显著升高,可能发生了相互转化,上述化学成分的差异可能是2种炮制品临床功效不同的主要原因。     

仙茅炮制品13种化学成分的UPLC-Q-TOF/MS比较研究

目的 比较生仙茅、炒仙茅及酒仙茅的质控指标及主要化学成分的差异。方法 按照《中国药典》（2015年版）标准,测定生仙茅、炒仙茅和酒仙茅的水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物;考察HPLC方法的线性关系、精密度、稳定性、重复性及加样回收率,同时采用液质联用技术鉴定仙茅不同炮制品的主要化学成分。结果 生仙茅的水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物测定结果均符合《中国药典》（2015年版）的要求。生仙茅、炒仙茅及酒仙茅的仙茅苷含量分别为0.087%、0.156%和0.059%。运用高分辨质谱鉴定了13个主要化学成分,分别为愈创木酚、绒叶仙茅苷A、绿原酸、中华仙茅素A、绒叶仙茅苷D、2,6-二甲氧基苯甲酸、1-O-甲基尼亚希木脂素苷、灯盏花素C、大叶仙茅苷、仙茅苷、仙茅皂甙元A、仙茅皂甙元B及仙茅皂甙元C。结论 与生仙茅相比,炒仙茅中11种化学成分含量均显著上升,酒仙茅中的12种化学成分含量均显著降低。本文所建立的HPLC方法具有良好的线性、精密度、准确度,回收率也符合要求,可以应用于仙茅不同炮制品中主要成分的质控。     

加酒量的不同对当归炮制的影响

目的：通过不同加酒量的考察对当归炮制品有效成分的影响。方法：采用药典法，高效液相色谱法测定水溶性、醇溶性浸出物、阿魏酸含量。结果：10％加酒量是炮制当归时最佳的黄酒量。结论：规范当归的炮制时加酒的量是保障当归炮制品质量的必要环节。     

仙茅及其炮制品质控指标的比较研究

目的比较生仙茅、炒仙茅及酒仙茅的质控指标和主要化学成分差异。方法按照《中国药典》(2015年版)标准,测定生仙茅、炒仙茅和酒仙茅的水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物;考察HPLC方法的线性关系、精密度、稳定性、重复性及加样回收率,同时采用液质联用技术鉴定仙茅不同炮制品的主要化学成分。结果生仙茅的水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物测定结果均符合《中国药典》(2015年版)的要求。生仙茅、炒仙茅及酒仙茅的仙茅苷含量分别为0.087%、0.156%和0.059%。运用高分辨质谱鉴定了愈创木酚、绒叶仙茅苷A、绿原酸、中华仙茅素A等13个主要化学成分。在被测的13种化学成分中,与生仙茅比较,炒仙茅中绒叶仙茅苷A、仙茅皂甙元C、绿原酸等11种化学成分显著上升;而酒仙茅中大叶仙茅苷、仙茅苷、绒叶仙茅苷A等12种化学成分显著降低。结论本研究所建立的方法准确可靠、重复性好,可用于仙茅不同炮制品中主要成分的质量控制。炒仙茅中的大多数化学成分高于生仙茅,而酒仙茅中的大多数化学成分则低于生仙茅。     

当归不同炮制品的UPLC指纹图谱与多成分含量测定研究

选择来源于甘肃驮乡、岷县、渭源3个产地的10批当归为研究对象,通过规范的炮制方法分别炮制成生当归、酒当归、土当归。采用UPLC建立当归3种炮制品的指纹图谱,并对其中9种酚酸及苯酞类成分进行指认。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行相似度分析,结果显示当归同一炮制品样品色谱峰基本相似,相似度均大于0. 950;不同炮制品与其对照图谱之间差别不明显,相似度亦均大于0. 950。在采用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析,寻求组间差异性成分的基础上,采用开发的改良距离系数法,可有效的通过指纹图谱相似度对生当归、酒当归、土当归进行区分。同时采用UPLC建立了当归9种酚酸及苯酞类成分含量测定方法,并进行了不同炮制品之间的比较。实验结果显示与生当归相比,各成分均有变化,其中酒当归中阿魏酸松柏酯及藁本内酯含量明显上升;当归土炒之后阿魏酸松柏酯明显上升。该实验建立的方法可有效地对当归不同炮制品进行区分,同时对其中主要成分进行含量测定。     

地黄炮制前后化学成分的UHPLC-Q-TOF/MS比较研究

目的比较地黄生品、酒品、蒸制品各项质控指标及化学成分的差异。方法按照中国药典2010版标准,测定地黄不同炮制品的水分、总灰分、醇溶性浸出物,并建立HPLC方法比较地黄不同炮制品主要化学成分的差异,考察方法的线性、精密度、稳定性、重复性及加样回收率,同时使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)鉴定地黄不同炮制品的主要差异化学成分。结果地黄酒品和蒸品的水分分别为6.06%和10.02%,总灰分分别为6.70%和6.47%,酸不溶性灰分分别为2.63%和2.39%,水溶性浸出物分别为72.62%和77.81%,测定结果均符合中国药典2010版的要求。运用高分辨质谱鉴定了8个主要差异化学成分,即连翘酯苷E、洋地黄叶苷B、焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、异麦角甾苷、连翘酯苷、焦地黄苯乙醇苷D和地黄苷。结论地黄经炮制后梓醇含量显著上升,而其他主要化学成分的含量显著降低,这可能是不同炮制品临床功效存在差异的主要原因。     

基于HPLC指纹图谱结合化学模式识别的川芎炮制前后对比研究

目的建立川芎生品和不同炮制程度的酒炙品HPLC指纹图谱,通过指纹图谱动态变化,从客观上确认最佳炮制时间,同时结合化学模式识别方法比较酒炙前后化学成分指纹峰的差异,寻找差异标志物,为川芎的炮制工艺优化及炮制机制研究提供科学依据。方法采用HPLC法,Hypersil Gold C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.3%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,全波长扫描,检测波长254 nm。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)计算相似度,运用聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)对川芎生品与酒炙品进行化学模式识别研究。结果建立了川芎生品和不同炮制程度酒炙品的指纹图谱,共标定22个共有峰,通过与对照品比对,指认了6个成分,分别为阿魏酸(7号峰)、洋川芎内酯I(8号峰)、阿魏酸松柏酯(15号峰)、洋川芎内酯A(17号峰)、藁本内酯(19号峰)和丁烯基苯酞(20号峰);通过指纹图谱动态变化监测,确定了最佳炮制时间为15~20min;通过HCA、PCA和OPLS-DA可明显将川芎生品与酒炙品分为2类,藁本内酯、丁烯基苯酞等6个成分可能是影响二者质量的差异标志物。结论建立的指纹图谱方法精密度、重复性、稳定性良好,结合化学模式识别可用于川芎炮制前后整体质量控制,进行炮制过程监测和炮制程度判断。     

多指标综合加权评分法结合D-最优设计响应面法优选酒川芎的炮制工艺

目的采用多指标综合加权评分法结合D-最优设计响应面法优选酒川芎的炮制工艺。方法先用单因素实验优化黄酒的稀释倍数及闷润时间,然后以酒川芎炮制工艺的关键因素加酒量、炒制温度和炒制时间为自变量,进行D-最优设计;将川芎炮制后的5种指标成分阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I、3-正丁烯基苯酞的含量进行综合加权评分作为因变量,进行响应面分析,优选酒川芎的炮制工艺。结果确定酒川芎的最优炮制工艺为加酒量20%,闷润75 min,在156℃炒制12 min。同时发现酒炙品中洋川芎内酯A、洋川芎内酯I、3-正丁烯基苯酞的含量有所增加,应该与酒炙有关。结论用多指标综合加权评分法结合D-最优设计响应面法能优选酒川芎的炮制工艺参数,提高炮制工艺的稳定性和重复性,更好地控制酒川芎的内在质量以保证临床用药的有效性。     

当归质量控制成分遴选研究

目的:研究当归水煎液化学成分体内代谢情况,结合肠吸收遴选当归质量控制成分。方法:采用翻转肠囊法与腹主动脉采血试验,结合高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,研究当归水煎液化学成分的肠吸收与入血情况。结果:通过翻转肠囊实验,明确了22种通过肠吸收的成分,其中成分1、3、4、5、6、7、11、12、13、14、15、16(阿魏酸)、17、18(洋川芎内酯I)、19(洋川芎内酯H)、20、21、22以原型成分被肠吸收,成分M1、M2、M3、M4是通过肠壁酶代谢的新成分。分析腹主动脉采血HPLC明确了5种成分化合物12、18(洋川芎内酯I)、19(洋川芎内酯H)、M5、M6入血,其中成分12、18(洋川芎内酯I)、19(洋川芎内酯H)可直接通过肠吸收入血,成分M5、M6为经过代谢吸收入血的新成分。结论:综合肠吸收实验与入血成分分析,初步遴选出成分12、18(洋川芎内酯I)、19(洋川芎内酯H)作为当归的质量控制成分。