低剂量棉酚与甾体激素联合用药抗男性生育协同作用

目的 探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药发挥抗男性生育的药物协同作用.方法 采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式[棉酚12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯125μg(kg·d)+炔雌醇25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)],与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,应用形态学观察、半定量检测和体视学睾丸组织结构定量研究的方法,探讨低剂量棉酚和甾体激素抗生育的药物协同作用. 结果 在睾丸重量、附睾重量、睾丸精子产量和睾丸组织结构定量方面,低剂量棉酚和甾体激素无药物协同作用;在降低附睾精子计数和精子活动度方面,联合用药组的效果强于其他3组,低剂量棉酚和甾体激素具有药物协同作用.结论与单用低剂量棉酚和甾体激素比较,两者联合用药可以更快地减少附睾精子的数量和活动度,从而快速达到避孕效果.     

低剂量棉酚与甾体激素联合应用对大鼠睾丸Cdc25A、cyclinB1及雄激素受体蛋白表达的影响

目的 探讨低剂量棉酚与甾体激素联合应用（棉甾联合用药）对大鼠睾丸Cdc25A、cyclinB1及雄激素受体(AR)蛋白表达的影响。 方法 采用大鼠喂服棉酚12.5mg／(kg&#8226;d)+激素［去氧孕烯125μg／(kg&#8226;d)+炔雌醇25μg／(kg&#8226;d)+十一酸睾丸酮100mg／(kg.d) ］联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察Cdc25A、CyclinB1及AR蛋白表达的变化。 结果 各时间点（6周、8周和10周）激素组和棉甾联合用药组Cdc25A在顶体和间质中的表达较对照组减弱,均有显著性差异（P＜0.05）。用药6周和8周时,棉酚组、激素组和棉甾联合用药组Cdc25A在精母细胞中表达较对照组增强（P＜0.05）;用药10周后,只有激素组显著下降（P＜0.05）。各时间点激素组和棉甾联合用药组中CyclinB1在间质细胞中的表达量明显降低(P<0.05),但在圆形精子细胞中的表达量无明显改变。各时间点激素组和棉甾联合用药组间质细胞的AR阳性出现在细胞核,而对照组定位于细胞质。Western blotting结果显示,各用药组大鼠睾丸组织中Cdc25A的表达量与免疫组织化学染色结果的变化趋势基本一致。CyclinB1的含量在各组中无明显差异。 结论 棉甾联合用药影响Cdc25A、cyclin B1和ＡＲ蛋白在生精细胞和Leydig细胞中的表达,进而影响减数分裂和圆形精子的变态过程;甾体激素的重要作用是抑制间质细胞的功能发挥。     

低剂量棉酚和甾体激素联合用药对精母细胞凋亡和支持细胞吞噬作用的影响

目的 探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药对睾丸精母细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用的影响。 方法 本实验采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式［棉酚125mg/（kg&#8226;d）+去氧孕烯125μg/（kg&#8226;d）+炔雌醇25μg/（kg&#8226;d）+十一酸睾丸酮100mg/（kg&#8226;d）］,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,用药4、6和8周取睾丸组织,应用体视学、原位缺口末端标记(TUNEL)和油红O染色的方法,观察精母细胞和球形精子细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用。 结果 联合用药中,甾体激素成分可明显减少精母细胞和球形精子细胞的数量,精母细胞凋亡增加并同时伴有生精上皮油红O染色的增强。 结论 精母细胞凋亡并被支持细胞吞噬是联合用药抗生育机制之一。     

停服棉酚后恢复的大鼠精母细胞生物活性的研究

棉酚是一种有效的男用避孕药及抗肿瘤药物,但对长期喂服棉酚后,被抑制的精原细胞的生物活性研究尚少。本实验用成年雄性大鼠,喂服棉酚3、4、6、7、8周,停药15天后,被抑制的精原细胞恢复功能,重新进入减数分裂期和粗线期。用流式离心技术,将大鼠睾丸细胞分离成6个组分,组分6,90％以上为第一期恢复的粗线期精母细胞(RPS)。将RPS和对照组细胞(CPS)在体外进行培养,利用~3H-胸腺嘧啶核苷的掺入测定其DNA合成。结果表明,不同时间喂服棉酚,恢复后的粗线期精母细胞与对照组相比,DNA合成明显低于对照组。喂服棉酚3、4、6、7、8周后,RPS组DNA     

低剂量棉酚与激素联合应用的抗生育作用位点的研究

目的 探讨低剂量棉酚与激素联合应用在8周内使大鼠达到不育效果的作用位点.方法 本实验采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg·d) 去氧孕烯125μg/(kg·d) 炔雌醇25μg/(kg·d) 十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)的联合用药方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,通过一系列形态学观察和半定量检测,探讨联合用药的具体作用环节.结果 无论在睾丸组织形态还是睾丸精子数量,联合用药组的变化趋势都与单独应用激素组的相似,而不同于单独应用棉酚组和对照组.而在附睾中,3个用药组在精子活力和精子形态方面,都与对照组有显著差异.结论 联合用药组中激素主要使睾丸精子数量迅速下降;而在精子数量大大下降的基础上,棉酚和激素又对已成熟精子的结构和运动能力进一步破坏,从而使雄性大鼠受精能力迅速下降,联合用药组比单独应用其中一种成分更快、更有效地达到使大鼠不育的目的.     

低剂量棉酚甲基睾丸酮和炔雌醇联合用药作为男性避孕药的安全性检测

目的 探讨低剂量棉酚12mg/(kg·d)、甲基睾丸酮20mg/(kg·d)和炔雌醇100μg/(kg·d)联合用药24周,能否影响大鼠生精干细胞的功能.方法 采用生精细胞原位凋亡、生精干细胞移植和生殖能力自主恢复实验.结果 联合用药24周后,在大鼠睾丸组织切片中发现了凋亡信号阳性细胞,凋亡信号阳性细胞主要是精母细胞和精子细胞,没有发现精原细胞出现凋亡阳性信号.当把用药组大鼠的生精干细胞移植进入受体裸鼠的曲细精管内2～3个月后,在受体裸鼠的曲细精管中观察到了来自供体大鼠的长型精子细胞.停止用药6周后,用药组大鼠的生殖能力与对照组相比完全恢复.由恢复生殖能力的用药组大鼠产生的F1代仔鼠在经过一系列的检测后被证明为身体机能和智力水平正常.结论 此联合用药在24周内没有影响到用药大鼠生精干细胞的生存和分化功能.     

低剂量棉酚与甾体激素联合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响

采用检测细胞凋亡的微核 (MN)、原位末端标记检测 (ISEL)及单细胞凝胶电泳 (SCGE)等方法 ,研究低剂量棉酚与激素组合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响 ,分析不同剂量棉酚 (高剂量 10 0mg/(kg·d)、中剂量 6 0mg/(kg·d)及低剂量 12mg/(kg·d) )及维持量棉酚对生精细胞凋亡及DNA的作用。结果表明不同剂量的棉酚G与单剂量激素H(甲基睾丸素 2 0mg/(kg·d)、炔雌醇 10 0 (g/(kg·d) )合并用药 6周后 ,生精细胞的凋亡系数和微核率随棉酚剂量的增大而增加。高和中剂量棉酚组的凋亡系数分别为 3 5 2 0± 0 4 6 5和 2 0 2 0± 0 0 17,显著高于对照组 (0 2 33± 0 0 88)(P <0 0 5 )。微核率在高剂量组为 2 7 6 33± 3 75 5 ,显著高于对照组 (5 6 0 0± 1 137) (P <0 0 5 ) ;而低剂量组 (3 5 6 7±0 86 9)反而显著低于对照组。服低剂量棉酚G +H 6周后继续服单独低剂量棉酚 (12mg/(kg·d) ) 12周 ,单细胞凝胶电泳未见生精细胞出现DNA单链断裂的彗星状细胞核 ,与高、中剂量组较多的出现率形成明显对照。结果提示低剂量棉酚与甾体激素组合用药在睾丸生精过程中互为调节 ,棉酚引起的生精细胞凋亡效应可在甾体激素的调节下降低而起保护作用     

Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达

目的 探讨转化生长因子－β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达及在精子发生中的作用机理。方法 用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵增强技术,检测成年大鼠睾丸Smad2和Smad4蛋白的表达和定位。结果Smad2蛋白主要表达在大鼠睾丸生精小管的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞中,免疫反应物质主要定位于细胞质,胞核为阴性;而Smad4蛋白同主要表达于间质细胞的胞质中,支持细胞呈弱阳性染色,结论 Smad2蛋白主要表达于睾丸生精小管各级生精细胞,Smad4蛋白表达于间质细胞,为揭示TGF－β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

醋酸棉酚对雌性大鼠抗着床作用的形态学观察

成年wistar雌鼠17只。随机分为对照和实验组。实验组喂服醋酸棉酚(100mg/kg/d)一月后交配。受精后第10天剖腹,观察妊娠动物数与着床胎数,并分别对卵巢组织化学(△~5-3β-羟甾脱氢酶)观察以及和心、肝、子宫等作组织学方法观察。发现醋酸棉酚对大鼠具有明显抗着床作用,抗着床率为100%。此时,阴道涂片显示动情周期紊乱;黄体细胞的△~5-3β-羟甾脱氢酶活性明显下降,子宫内膜相当于间期时的内膜。以上结果提示△~5-3β羟甾脱氢酶活性下降,孕酮合成受阻,可能是醋酸棉酚抗着床作用的机理之一。     

棉酚对大鼠精子细胞碱性核蛋白合成与更新的影响

大鼠喂服棉酚(30毫克/公斤体重/日)3周、4周和6周后,用特异显示精氨酸的坂口反应及显示富于赖氨酸碱性蛋白的肝素-阿尔新蓝(HAB)染色法,结合并合~3H-精氮酸液闪测定,对棉酚影响精子细胞核蛋白在合成与代谢上的改变,进行分析。结果表明: 1.正常大鼠14期以后的晚期精子细胞核坂口反应阳性,HAB染色阴性。相反,精原细胞、精母细胞及14期以前的精子细胞坂口反应为阴性,而HAB染色较深,表明14期前后精子细胞核蛋白有精蛋白合成的转换过程。 2.服棉酚后,部分曲细精管中14期以后的精子细胞及游离精子坂口反应变弱,并能为HAB染色。这是甲绿-焦宁染色异常的原因。也提示棉酚对晚期精子细胞核蛋白转变可能有干扰作用。 3.睾内注射~3H-精氨酸的活体实验和分离后的精子细胞与同位素温育的体外实验,均未见对照组和实验组之间有明显差异。对精子细胞变态过程中核蛋白合成上的转换的细胞化学显示方法,棉酚对这一转换过程的干扰作用的可能性及其意义予以讨论。     

何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β-羟基类固醇脱氢酶的影响

目的 探讨何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为5组,A组为安静对照组;B组为安静何首乌饮组;C组为自然恢复组;D组为何首乌饮治疗组;E组为何首乌饮预防组,每组6只.C组、D和E组大鼠复制力竭运动动物模型,其中的E组每天训练前给何首乌饮20g/(kg...     

丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生长激素/胰岛素样生长因子-1轴的作用

目的 探讨丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生长激素（GH）/胰岛素样生长因子-1（IGF-1）轴的作用。 方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组均为10只。链脲佐菌素连续腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,1周后以血糖≥16.7mmol/L作为成模标准。待模型成功建立后,模型组大鼠不做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃［2.4g/(kg&#8226;d)］,阳性对照组大鼠给予二甲双胍［55.33mg/(kg&#8226;d)］灌胃,均为35d。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测大鼠血清睾酮、GH和IGF-1水平;分别采用免疫组织化学染色、免疫印迹法和RT-PCR法检测睾丸GH、GH受体（GHR）和IGF-1的表达。 结果 丝胶可明显降低糖尿病大鼠血GH水平、下调睾丸GH的表达,升高血IGF-1和睾酮水平,上调睾丸IGF-1和GHR的表达（P＜0.05,P＜0.01）。并且丝胶治疗组各项指标与阳性对照组比较无明显差别（P＞0.05）。 结论 丝胶可通过调节糖尿病时GH/IGF-1轴紊乱改善生精功能,发挥对糖尿病生殖功能损害的保护作用,其作用与二甲双胍相当。     

丙酮酸乙酯对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织的保护作用

 目的： 探讨丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate, EP）对缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）新生大鼠脑组织的作用及其可能机制。方法：165只7日龄SD大鼠随机分为3组:假手术组（n=43）、HIBD模型组（n=61）和HIBD+EP处理组（n=61）,造模前30 min腹腔注射EP（50 mg/kg）1次,此后每天1次,3 d后测定脑组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量以及脑组织含水量,TUNEL法检测脑组织凋亡细胞数;14 d后检测缺血侧和非缺血侧脑重量以判别脑萎缩程度。结果：HIBD+EP组脑组织SOD活性为(125.78±18.35)×103 U/(g protein),较HIBD模型组［(97.84±15.50)×103 U/(g protein)］明显增强（P<0.05）;MDA含量为(4.42±1.04) μmol/(g protein),较HIBD模型组［(6.02±0.89) μmol/(g protein)］明显降低（P<0.05）。此外,HIBD模型组缺血侧（左侧）的脑组织含水量高于非缺血侧（右侧）（P<0.05）,EP治疗后两侧的脑组织含水量无显著差异（P>0.05）,提示EP减轻了缺血侧的脑水肿。同时HIBD+EP组缺血侧脑皮质和海马每个视野的凋亡细胞数目分别为96.63±10.08和41.91±9.96,较模型组（111.54±1.64和51.73±1.77）明显减少,但仍多于假手术组（P<0.05）。HIBD+EP组左脑萎缩程度为(13.25±5.19)%,较HIBD模型组［(20.32±5.10)%］明显减轻（P<0.05）。结论：EP具有抗氧化功能,能减轻脑水肿,减少脑细胞凋亡,减轻脑萎缩,对HIBD新生大鼠脑组织具有保护作用。     

硝基酪氨酸和诱导型一氧化氮合酶在大鼠胎粪吸入性肺损伤中表达的研究

目的：观察大鼠胎粪诱导肺损伤时肺组织硝基化酪氨酸和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的改变，探讨两者在此种损伤中的作用。 方法： 16只雄性SD大鼠，随机分为对照组和胎粪组，分别由气管插管注入生理盐水或20%胎粪生理盐水混悬液1 mL/kg。24 h后取材，观察支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞计数，比色法检测肺组织匀浆髓过氧化物酶（MPO）活性、一氧化氮（NO）含量，Western blot法测定硝基酪氨酸和iNOS蛋白表达改变。 结果： 胎粪组BALF细胞计数、肺组织MPO活性、NO含量分别为(4.04±1.01)×109cells/L、(1.49±0.22)U/g wet lung tissue、(12.77±5.00)mmol/g protein，对照组BALF细胞计数、肺组织MPO活性、NO含量分别为(0.53±0.19)×109cells/L、(0.62±0.16)U/g wet lung tissue、(4.89±1.32)mmol/g protein，两组比较差异显著（均P<0.01）；Western blot结果显示胎粪组肺组织硝基酪氨酸和iNOS蛋白表达明显强于对照组，分别为0.46±0.19和1.49±0.60，与对照组（0.15±0.04和0.09±0.04）比较, 差异显著（均P<0.01）。 结论： 胎粪可诱导iNOS表达增强并产生过量的硝基酪氨酸，两者可能在胎粪性肺损伤发病机制中发挥重要作用。     

黄芪多糖对阿霉素诱导的心力衰竭模型大鼠的保护作用

目的 探讨黄芪多糖对大鼠阿霉素性心衰的保护作用。方法 取雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、心衰模型组和黄芪多糖组,每组10只。黄芪多糖组连续14d黄芪多糖水溶液灌胃［3g/(kg·d)］,正常对照组和心衰模型组灌胃等量蒸馏水。心衰模型组和黄芪多糖组分4次静脉注射阿霉素［10.4mg/(kg·2d)］复制心衰模型。给药全部结束后,检测大鼠心肌重构、细胞凋亡和抗氧化性等指标。结果 阿霉素导致心肌纤维化,肌原纤维溶解断裂,线粒体肿胀变性,应用黄芩多糖能明显改善心衰症状。血流动力学和TUNEL染色进一步证实黄芪多糖能缓解阿霉素对心脏的损伤,这一作用可能是通过降低丙二醛(MDA)含量和Bax的表达,同时增加超氧化物歧化酶（SOD）活性和Bcl-2的表达来实现的。结论 黄芪多糖对阿霉素性心衰有较好的保护作用。     

血管紧张素(1-7)通过抑制中电导钙激活钾离子通道蛋白表达参与肾脏纤维化

目的 探讨血管紧张素（Ang）（1-7）在肾纤维化过程中的保护作用与中电导钙激活钾离子通道（KCa3.1）的关系。 方法 60只雄性小鼠随机分为5组：对照组 (WT)；血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）组：皮下注射 Ang Ⅱ ［1.4 mg/(kg.d)］；注射Ang Ⅱ 的同时给予以下药物干预： Ang Ⅱ阻断剂 洛沙坦（Losartan）组：皮下注射 Losartan［40 mg/(kg.d)］； Ang（1-7）组：皮下注射 Ang（1-7）［0.14 mg/(kg.d)］；血管紧张素转化酶2（ACE2）激动剂重氮氨苯脒乙酰甘氨酸盐（DIZE）组：皮下注射DIZE［10 mg/(kg.d)］。连续给药4周后对相关指标进行检测。Masson染色法检测肾组织胶原沉积变化；Western blotting法检测肾组织 Ⅰ 型胶原、Ⅲ 型胶原和 KCa3.1通道蛋白表达的变化。 结果 与对照组相比，Ang Ⅱ组小鼠肾组织内胶原沉积量明显增加（n=12，P<0.01），表明肾纤维化模型复制成功。Ang Ⅱ使肾组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成显著增多（n=6，P<0.01），同时促进了肾组织KCa3.1通道蛋白的表达（P<0.01），而Ang （1-7）及ACE2激活剂 DIZE 的应用抑制了肾组织内胶原沉积量、Ⅰ/Ⅲ型胶原合成及KCa3.1通道蛋白的表达（n=12或6，P<0.01）。结论 Ang （1-7）在肾纤维化过程中发挥保护作用，这一作用可能与其下调肾组织中KCa3.1通道蛋白表达有关。     

糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的 探讨外源性糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1（HAP1）表达的影响。 方法 成年雄性Wistar大鼠80只,随机分为实验对照组（注射生理盐水）、皮质酮注射组、皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射组、饮用氢化可的松组。皮质酮注射［(5mg/(kg.12h)］组又分为注射持续1d、3d、5d、7d组;皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射［(10mg/(kg.12h)］组注射持续3d;饮用氢化可的松组大鼠饮用水中加氢化可的松（0.01g/L）,连续1个月。应用RT-PCR、免疫印迹法观察大鼠下丘脑HAP1表达的变化。 结果 注射皮质酮1d和3d后,下丘脑HAP1表达明显减少,其mRNA的表达明显下调,5d后HAP1开始回升,7d 后恢复到正常水平,HAP1 mRNA表达5d后明显增加,并高于正常水平;长期(一个月)饮用氢化可的松的大鼠,其下丘脑中HAP1的表达明显减少;在皮质酮注射的同时注射RU38486,可以对抗由皮质酮注射所引起的下丘脑HAP1的变化。 结论 外源性过量糖皮质激素能影响下丘脑HAP1的表达,下丘脑中的HAP1可能参与下丘脑神经元或神经内分泌细胞的功能活动。