乳酸-羟基乙酸-L-赖氨酸多肽接枝聚复合FK506和神经生长因子缓释膜促进大鼠坐骨神经再生的实验研究

目的 观察乳酸.羟基乙酸-L-赖氨酸(RGD)多肽接枝聚复合FK506和神经生长因子(NGF)缓释膜桥接大鼠坐骨神经5 mm缺损促进神经再生的效果.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分成三组,切断左侧坐骨神经形成5 mm缺损,分别以RGD多肽接枝聚复合FK506和NGF缓释膜(A组)、RGD多肽接枝聚复合FK506缓释膜(B组)和RGD多肽接枝聚膜(C组)桥接缺损;A组膜FK506与NGF的含量分别为0.48 mg和2μg,B组膜FK506的含量为0.72 mg,C组为对照组.术后3个月,采用大体观察、神经电生理、小腿三头肌湿重恢复率、组织学观察和图像分析等方法规查神经再生情况. 结果术后3个月,膜外形完整、质脆;各组再生神经均通过了缺损,且A组的再生神经各项检测指标明显优于B组和C组.结论 RGD多肽接枝聚复合FK506和NGF缓释膜能够有效地促进损伤的大鼠坐骨神经再生,且FK506和NGF联合应用,可减少FK506的用量.     

外消旋聚乳酸复合神经生长因子缓释导管促周围神经再生的形态学研究

目的 建立外消旋聚乳酸复合神经生长因子（poly-D，L-lactic acid／nerve growth factor，PDLLA／NGF）可吸收性缓释导管桥接修复大鼠坐骨神经缺损的动物模型，观察复合导管对大鼠坐骨神经缺损再生的促进作用。方法利用溶剂挥发法制备PDLLA单纯导管和PDLLA／NGF缓释导管，每根缓释导管含NGF450U。SD大鼠40只随机分成4组，每组10只，切除中段坐骨神经10mm之后分别行自体神经移植（A组）、单纯导管桥接（B组）、单纯导管加一次性给药（C组）、PDLLA／NGF缓释导管桥接（D组）修复坐骨神经，除A组外，均保留10mm缺损。术后3个月观察神经再生情况，比较各组光镜、电镜及图像分析等指标。结果术后3个月导管与周围组织粘连松，并开始降解，但外形仍保持完整。再生神经均顺利通过导管腔，组织学观察A组和D组内神经纤维数目多，大小均匀，成熟良好；B组和C组纤维结缔组织多，神经纤维细小，髓鞘薄。图像分析显示除神经纤维计数D组高于A组外，A组和D组在纤维直径、轴突直径和髓鞘厚度方面差异均无统计学意义（P〉0．05），并明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论 PDLLA／NGF缓释导管能够有效促进大鼠坐骨神经缺损再生，组织学观察指标接近自体神经移植。     

PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的:探讨PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织碎屑修复大鼠坐骨神经缺损的修复效果。方法:32只SD大鼠平均分成4组,无菌条件下切断右侧的坐骨神经,制成1 0衄长的大鼠坐骨神经缺损模型,A组采用PLGA神经导管连接缺损神经进行修复,B组由内置自体神经组织碎屑的PLGA神经导管连接,C组由内置ADSCs与自体神经组织碎屑的PLGA神经导管连接,D组采用自体神经移植方式。12周后通过对再生神经桥接体的一般观察、HE染色、免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色来评价神经的再生情况;通过肌电图、腓肠肌的HE和Masson染色来评价神经对靶器官的再支配情况。结果:术后12周,各组的神经导管均已降解,切断神经通过神经导管向两端生长。一般观察、肌电图、组织学观察结果均提示PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织碎屑组C组的修复效果显著优于内置神经组织碎屑的PLGA神经导管组B组和空导管组A组的修复效果,但仍稍差于自体神经移植组D组。结论:PLGA神经导管联合ADSCs与自体神经组织可以比较有效地修复周围神经缺损,为周围神经缺损的修复提供了一种新的方法。     

静电纺纳米聚乳酸己内酮共聚物导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备的聚乳酸己内酮共聚物[Poly(1-lactide-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]导管,移植修复大鼠周围神经缺损的效果.方法 选取健康SD大鼠54只,随机分成3组,每组18只.先造成坐骨神经1.5cm缺损段,然后分别采用P(LLA-CL)导管桥接(A组)、硅胶管桥接(B组)、自体神经逆行原位移植(C组).分别在术后4、8、12周对大鼠进行大体观察、坐骨神经功能指数检查、神经电生理检查、肌肉湿重、再生有髓神经纤维计数、电镜观察,评价各组神经再生.结果 术后4周时A组再生神经已部分生长到导管的中部;8周时再生神经已通过神经导管,但再生的神经纤细;12周时再生神经粘连较轻,直径较粗.A组的坐骨神经功能指数、神经电生理、肌肉湿重和组织学观察等各项指标均略差于C组,但明显优于B组.结论 纳米聚乳酸己内酮神经导管具有促进神经轴突再生的作用,有望成为自体神经移植的替代材料应用于周围神经缺损的修复.     

自组装多肽与神经生长因子导管修复兔周围神经缺损

[目的]探索自组装多肽凝胶复合神经生长因子(NGF)的神经导管修复周围神经损伤的可行性及效果。[方法]以静电纺丝技术制备单纯聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)和PLGA复合NGF的纳米纤维复合神经导管,制备"异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸"(IKVAV)顺序的自组装多肽凝胶。选取新西兰大白兔72只,制备兔坐骨神经10 mm缺损模型。按随机数字法分为4组,每组18只,分别给予以下处理:A组自体神经移植,B组单纯PLGA神经导管+NGF桥接,C组单纯PLGA神经导管+IKVAV多肽凝胶+NGF桥接、D组复合NGF的PLGA导管+IKVAV多肽凝胶桥接。术后1、2、3个月行电生理检测、大体观察、小腿三头肌湿重恢复率测量和组织学检查。[结果]术后复合NGF导管逐渐吸水膨胀并降解,周围组织未见明显炎性反应,无神经卡压。术后1个月,再生神经已通过缺损,但直径细小,随着时间延长逐渐增粗。各组间比较发现,D组神经再生效果接近A组,各项指标优于B组(P0.05),部分指标优于C组(P0.05)。D组和A组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),但小腿三头肌湿重恢复率较A组稍差。[结论]自组装多肽凝胶联合复合神经生长因子的神经导管具有良好的组织相容性,能够有效促进神经生长,效果接近自体神经移植。     

神经导管联合自体变性肌桥修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的探讨PLGA神经导管联合化学萃取的自体骨骼肌肌桥,修复大鼠坐骨神经缺损的可能性。方法SD大鼠45只,建立大鼠左侧坐骨神经缺损模型。随机分为3组．分别采用自体神经（A组）、PLGA神经导管（B组）和PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥（C组）．来修复神经缺损。术后通过大体观察、坐骨神经功能指数测定、腓肠肌湿质量恢复率测定、组织学观察和图像分析对比等,检测神经缺损修复情况。结果神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥能促进坐骨神经再生．各项指标均优于单纯神经导管移植．但是效果略差于自体神经移植。结论PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥．对大鼠坐骨神经缺损具有良好的桥梁作用和促神经生长的作用。     

辐照和绿茶多酚处理同种异体神经移植体的实验研究

[目的]比较经绿茶多酚溶液及辐照预处理的同种异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.[方法] 48只成年雄性Wista大鼠,将坐骨神经在梨状肌孔下5 mm处切除1.0 cm,随机分为4组,每组12只,神经缺损分别用4种移植物桥接.A组:自体神经移植;B组:新鲜异体神经移植;C组:经辐照处理的异体神经移植;D组:绿茶多酚溶液保存的异体神经移植.术后6、12周通过大体、电生理学、组织学、透射电镜观察评价各组修复神经缺损的效果.[结果]A、D组间差异无统计学意义,A、D组的各项指标均优于B、C组.[结论]大鼠坐骨神经缺损模型中,绿茶多酚溶液保存的同种异体神经是良好的神经移植替代材料,移植后神经再生情况优于辐照预处理的异体神经.     

组织工程化人工神经修复周围神经缺损的实验研究

目的　研究雪旺细胞和生物降解支架材料复合后构建成的组织工程化人工神经修复神经缺损的效果。方法　将雪旺细胞制成 1× 1 0 8/ml的ECM (extracellularmatrix,ECM)凝胶 ,与PLA无纺纤维布复合培养 7d ,置入PLA中空纤维管中 ,构建成组织工程化人工神经。建立大鼠坐骨神经缺损 1 0mm的动物模型 ,A组为人工神经组 ;B组为雪旺细胞复合ECM凝胶组 ;C组为单纯ECM凝胶组 ;D组为自体神经移植组。术后 8周、1 2周 ,行神经电生理和组织学检测评价疗效。结果　术后 1 2周A组的再生神经纤维已越过远端缝合口 ,有髓神经纤维数和神经纤维密度稍差于D组 ,但再生神经组织的面积显著高于后者 ;A、D组的髓鞘厚度和dLAT、NCV、AMP、AREA均无显著差别 ,但明显高于B、C组。结论　雪旺细胞、ECM凝胶和PLA多孔材料与PLA中空纤维管组合后构建成的组织工程化人工神经 ,修复周围神经缺损的效果接近于自体神经移植     

同轴共纺复合神经生长因子导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察同轴共纺复合神经生长因子(NGF)导管对大鼠坐骨神经缺损修复的促进作用.方法 以复合NGF的牛血清白蛋白为芯层、乳酸.己内酯共聚物[P(LLA-CL)]为壳层,采用同轴共纺技术制备具有"壳-芯"结构的可降解纳米纤维复合神经导管.取SD大鼠72只,随机分为四组:自体神经移植组(A组),单纯[P(LLA-CL)]导管组(B组),单纯导管内一次性汴射NGF组(C组)和复合NGF导管组(D组),每组18只.制作大鼠坐骨神经10 mm缺损模型,四组大鼠分别采用白体神经移植、单纯[P(LLA-CL)]导管、单纯导管内一次性注射NGF、复合NGF导管桥接修复缺损.于术后第1、2、3个月行大体观察、坐骨神经功能指数、小腿三头肌湿重恢复率测量、电生理检测和组织学检查. 结果术后复合NGF导管逐渐开始吸水膨胀并降解,3个月时,虽然管壁已经出现裂隙,但依然保持良好的外形,没有对再生神经形成卡压.术后1个月,再生神经均已通过缺损,连接两断端,但较细小;随着时间的延长,再生神经逐渐增粗.各组间比较发现,D组再生神经取得了和A组相似的效果,明显优于B组和C组(P<0.05).尽管D组与A组之间比较.差异无统计学意义(P>0.05),甚至D组的有髓神经纤维计数还稍高于A组,但其髓鞘的厚度和直径不如A组,并且坐骨神经功能指数和腓肠肌湿重恢复率也比A纽稍差. 结论同轴共纺复合NGF神经导管具有良好的组织相容性、生物活性和机械强度,能够有效地促进神经再生,效果接近自体神经移植.     

自组装多肽凝胶联合可降解神经导管修复长节段周围神经损伤

[目的]探讨自组装多肽凝胶联合可降解神经导管修复长节段周围神经损伤的可行性及效果。[方法]选取新西兰大白兔48只,体重1 500 g左右,雌雄不限,按随机数字法分为A:自体神经移植组、B:神经导管+NSCs+NGF组、C:神经导管+IKVAV多肽凝胶+NSCs+NGF组;选取兔坐骨神经,暴露后人为造成10 mm缺损损伤,按照分组分别进行移植修复。术后3、6、9、12周观察兔下肢溃疡形成及愈合情况;术后12周对各组动物进行坐骨神经肌电图检查,处死后取标本观察神经再生情况、小腿三头肌湿重、组织学观察及神经干细胞存活情况。[结果]术后3组动物均出现不同程度的足底溃疡,恢复情况以A组最好,C组次之,B组最差。术后12周神经肌电图、肌肉湿重检测均显示自体神经移植组神经功能恢复良好,优于其余两组(P<0.05)。组织学观察显示C组神经再生情况接近自体神经移植组,明显优于B组。术后12周荧光显微镜下观察到在神经损伤处有绿色荧光蛋白(GFP)荧光表达,神经干细胞仍然存活。[结论]自组装多肽凝胶联合可降解神经导管修复长节段周围神经损伤可以取得良好的疗效。     

新型复合生物材料导管修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的 几丁糖、聚乳酸两种材料结合研制一种新的神经导管材料。方法 几丁糖、聚乳酸按照一定的比例反应后，制备内径1．5mm，管壁厚度为200μm的复合生物材料导管，用以桥接5mm的大鼠坐骨神经缺损。硅胶管桥接组及自体神经移植组作为对照组。术后12周进行大体观察(后肢活动、针刺收缩反应、足底溃疡)，组织学观察，肌电图，图像分析及小腿三头肌称重等检查。三组数据两两间进行分组t实验。结果 12周时大体观察结果表明：三组再生神经均成功通过导管，并支配远端肌肉。几丁糖-聚乳酸复合生物材料导管降解明显，但未完全吸收。肌电图、小腿三头肌称重、图像分析结果表明：几丁糖-聚乳酸复合生物材料导管组再生轴突数量及再生神经质量明显优于硅胶管组，与自体神经移植组效果相似。结论 几丁糖-聚乳酸复合生物材料导管能较好修复周围神经缺损，是一种较理想的神经导管材料。     

Nerve regeneration across a 2-cm gap in the rat median nerve using a resorbable nerve conduit filled with Schwann cells

OBJECT: In a rat model, nerve regeneration was evaluated across a 2-cm defect in the median nerve by using a resorbable artificial nerve conduit. The aim of this study was to develop an artificial, biocompatible nerve guide to induce regeneration in the peripheral nervous system. METHODS: The authors compared a nerve conduit of trimethylenecarbonate-co-epsilon-caprolactone (TMC/CL) filled with autologous Schwann cells with both an empty hollow conduit and an autologous nerve graft. Animals that did not undergo surgery served as the control group. Nerve regeneration was evaluated with the grasping test, histological analysis of the nerve, muscle weight analysis (flexor digitorum superficialis muscle), and electrophysiological examination. After an observation period of 9 months, regeneration occurred only in animals that had received an autologous graft or a Schwann cell containing nerve conduit. No signs of regeneration were found in animals supplied with the empty conduit. CONCLUSIONS: Results of this study reveal the important role of Schwann cells in the regeneration process across a 2-cm defect in the rat median nerve. Furthermore, Schwann cell-filled nerve conduits induced functional recovery, as demonstrated in the grasping test, that was comparable with that of the autologous graft 9 months after implantation.     

骨髓干细胞诱导分化构建组织工程神经

[目的]探讨组织工程化神经修复周围神经缺损的作用。[方法]以DMEM为培养基体外诱导人骨髓基质干细胞分化为雪旺细胞，与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经；建立坐骨神经缺损10mm的Wistar大鼠动物模型，A组：经诱导骨髓基质干细胞分化雪旺细胞与天然细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）凝胶及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经桥接神经缺损；B组：单纯将ECM凝胶注入可降解聚乳酸导管桥接神经缺损；C组：自体神经移植组。术后12周进行神经电生理检测、新生神经组织学观察和轴突计数等检测坐骨神经功能恢复情况。[结果]1．诱导后骨髓基质干细胞呈梭形、胞核大、周围有光晕、突起细长呈纵形排列，GAFP及S-100免疫组织化学染色阳性。动物模型各组经移植术后12周，再生神经已通过缺损区长至神经远端。A组、C组组织学及电生理检测指标均优于B组（PAB=0．021，PBC=0．001），A组与C组无显著性差异（PAC=0．065）；A、B组聚乳酸导管降解吸收明显。[结论]骨髓基质干细胞在体外可诱导分化为雪旺氏细胞，利用其与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经可以修复周围神经缺损。     

Diverse types of epineural conduits for bridging short nerve defects. An experimental study in the rabbit

In this study the process of peripheral nerve regeneration through an epineural flap conduit was examined using four groups of 126 New Zealand rabbits. There were three study groups (A, B, and C) and 1 control group (D). A 10-mm long sciatic nerve defect was bridged either with 3 variations of an epineural flap (Groups A, B, and C) or with a nerve autograft (Group D). Animals from all groups were examined 21, 42, and 91 days postoperatively to evaluate nerve regeneration employing light microscopy and immunocytochemistry. Nerve regeneration was studied in transverse sections at 3, 6, and 9 mm from the proximal stump. The gastrocnemius muscle contractility was also examined prior to euthanasia at 91 days postsurgery in all groups using electromyography. Immunohistochemical, histochemical and functional evaluation showed the presence of nerve regeneration resembling the control group D, especially in group A, where an advancement epineural flap was used. In this experimental model an epineural flap can be used to bridge a nerve defect successfully.     

Inside-outl vein graft repair compared with nerve grafting for nerve regeneration in rats

The inside-out vein graft is a vein conduit pulled through itself to invert the normal orientation and place the adventitial layer within the lumen of the conduit. Our study compares regeneration of peripheral nerves in the rat through two conduits: inside-out graft of the jugular vein and autogenous nerve graft. In 10 rats, the right jugular vein was harvested, turned inside out, and used to bridge a 10 mm defect created in the right sciatic nerve. The 10 mm nerve segment from the right was then used as a standard nerve graft to bridge a 10 mm gap created in the left sciatic nerve. Rats were sacrificed at 8 and 12 weeks. Regeneration on the inside-out vein graft side showed superior functional results (faster conduction velocities) and improved histological results (greater axon counts) compared with the nerve grafted side. We feel the adventitial surface of the wall of the vein promotes nerve regeneration by providing an environment rich with collagen, laminin, and Schwann cells and promotes increased vascularization of the new nerve. © 1995 Wiley-Liss, Inc.     

聚乳酸与聚羟基乙酸共聚物三维神经导管内微丝直径对周围神经缺损修复的影响

目的 应用含有微丝的聚乳酸与聚羟基乙酸共聚物(PLGA)三维神经导管修复大鼠周围神经缺损,最终探寻修复周围神经微丝直径的最佳范围.方法 将60只300～350 g健康、雌雄不拘SD大鼠随机均分为6组.制作大鼠12 mm的左侧坐骨神经缺损模型;A、B、C、D、E组PLGA神经导管内纵形放入20根不同直径(分别是60、80、100、120、140μm)微丝,各组神经导管内均注入层黏蛋白+神经生长因子混合液0.3 ml.F组:自体神经移植组.大鼠左后肢为实验侧,右后肢为对照侧.测量术后12周各实验组神经导管内再生神经的运动神经传导速度,通过免疫组织化学检测再生神经纤维的数目.结果 术后12周,再生神经中1/3段的光镜观察,各组再生神经均有通过神经导管长入远端,神经纤维计数以F组最多,B、C、D组次之,而与A组、E组比较差异均有统计学意义(P<0.05),B组、C组、D组、F组的再生神经纤维数量及成熟程度均要明显优于A组和E组.结论 三维立体管状结构中的微丝直径粗细对周围神经的再生有影响,最佳的直径80～120μm.