重楼皂苷Ⅰ通过PI3K/Akt途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡的研究

[目的]评价重楼皂甙I对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。[方法]以体外培养的胰腺癌PANC-1细胞为研究对象。MTr法检测重楼皂甙I对PANC．1细胞增殖的抑制作用,Annexin．V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡,WesternBlot法检测P13K、Akt、pAkt、Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达改变。[结果]不同浓度重楼皂甙I能有效抑制PANC-1细胞的增殖,且呈时间浓度依赖性（P〈0．01）。低、中、高浓度重楼皂甙I作用PANC-1细胞24、d8h后,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,具有统计学差异（P〈0．01）。2μg／ml重楼皂甙I作用PANC．1细胞48h后,P13K、pAkt、Bcl．2蛋白表达降低．caspase-3、Bax蛋白表达增加,与对照组相比,具有统计学差异（P〈0．01）。[结论]重楼皂甙I能抑制胰腺癌PANC．1细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与降低P13K、pAkt、Bcl-2蛋白表达,增加Bax及caspase-3蛋白表达有关。     

COX-2抑制剂NS-398对肝癌细胞放射增敏作用的实验研究

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对肝癌细胞系HCC-9810的放射增敏作用及其机制。方法MTT实验测定NS-398对肝癌细胞系HCC-9810细胞毒性;成克隆实验检测NS- 398对HCC-9810的放射增敏作用;电镜观察细胞形态学改变;流式细胞仪（FCM）分析细胞凋亡率;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、FCM观察Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。结果NS-398对HCC-9810细胞毒性呈现浓度、时间依赖性。10μmol/L NS-398作用24 h细胞增殖抑制率仅为3%,由D_q计算增敏比（SER）为1．29,细胞存活曲线“肩区”减小。NS-398处理HCC-9810细胞后放射诱导凋亡的敏感性增高,Bax mRNA和蛋白表达上调,呈NS-398剂量依赖性关系,而Bcl-2表达无明显变化,Bax/ BcL-2比值增高。结论NS-398对肝癌细胞系HCC-9810有放射增敏作用,且可能是通过上调Bax基因表达增强放射诱导凋亡作用及抑制亚致死损伤修复实现的。     

Apogossypolone对乳腺癌MCF-7细胞株放射增敏的体外实验研究

[目的]探讨Apogossypolone(ApoG2)对乳腺癌MCF-7细胞株的放射增敏作用及其作用机制。[方法]①MTT法检测ApoG2单药对MCF-7细胞的抑制率,确立细胞半数抑制浓度(IC50)。②根据MTT结果选取低浓度(相似文献   

重楼皂苷Ⅰ对肺腺癌A549细胞系放射增敏作用研究

[目的]探讨重楼皂苷Ⅰ对肺腺癌A549细胞的体外放射增敏作用及其可能机制.[方法]以肺腺癌A549细胞系为研究对象,MTT法检测重楼皂苷Ⅰ对A549细胞的抑制率,得到重楼皂苷Ⅰ对A549细胞的半数抑制浓度(IC50)及IC20、IC30,取IC20-30之间的重楼皂苷Ⅰ浓度用于放射增敏,随机分为对照组、单纯照射组、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅰ+照射组,描绘细胞生长曲线、计算克隆形成率、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,Western Blot法检测survivin及p21waf/cip1蛋白表达.[结果]A549细胞在经重楼皂苷Ⅰ处理和照射后重楼皂苷Ⅰ+照射组A549细胞的增殖能力明显受抑(P＜0.01),克隆形成率明显下降(3.3％,P＜0.01),流式细胞术分析显示在重楼皂苷Ⅰ+照射组G2/M期阻滞(37.56％±1.99％,P＜0.01),凋亡率明显升高(9.34％±0.84％,P＜0.01).Western Blot检测survivin蛋白表达降低,而p21waf1/cip1蛋白表达增加.[结论]重楼皂苷Ⅰ具有较好的放射增敏作用,可能通过诱导细胞凋亡,细胞G2/M期阻滞,降低survivin蛋白表达,增加p21蛋白表达,从而产生放射增敏作用.     

STAT3基因沉默对胰腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制

目的:探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因沉默对人胰腺癌细胞AsPC-1和PANC-1放射敏感性的影响及其机制。方法:体外培养人胰腺癌细胞AsPC-1和PANC-1，通过脂质体转染STAT3 shRNA作为实验组（shSTAT3组），设置阴性对照（shNC组）和空白对照组（NC组）。采用qRT-PCR检测转染后各组AsPC-1和PANC-1细胞中STAT3 mRNA表达水平，Western blot检测细胞中STAT3蛋白表达水平。MTT实验检测各组细胞增殖能力，流式细胞仪检测各组细胞电子射线照射后的凋亡情况，qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞电子射线照射后的Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达情况。结果:shSTAT3组AsPC-1和PANC-1细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达水平比NC组和shNC组明显降低（P<0.05）。接受电子射线照射后，shSTAT3组AsPC-1和PANC-1细胞增殖率显著低于shNC组（P<0.05），其细胞凋亡率较shNC组明显升高（P<0.05）。接受电子射线照射后，转染STAT3 shRNA后能够明显上调细胞中Bax和Caspase-3的表达和下调Bcl-2的表达（P<0.05）。结论:沉默STAT3基因能够通过上调Bax和Caspase-3的表达和下调Bcl-2的表达促进细胞凋亡，增强胰腺癌细胞的放射敏感性。     

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

选择性COX-2抑制剂塞来昔布对乳腺癌的放疗增敏作用及其机制研究

[目的]探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人乳腺癌细胞的放疗增敏作用及其可能的机制。[方法]取对数生长期MDA-MB-231细胞株,实验分为对照组、药物组、照射组及实验组（照射线＋塞来昔布）。流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化和各组凋亡率;克隆形成实验检测放射增敏作用;Western blot法检测COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白表达。[结果]不同浓度塞来昔布对MDA-MB-231细胞有明显抑制作用,且呈剂量依赖性（F=5.56,P=0.030）。FCM检测结果显示,随塞来昔布浓度增加,细胞周期明显变化（G0/G1期比例增高,S期比例降低）。实验组凋亡率较照射组明显高（31.20%±1.27%vs 17.99%±1.01%,t=2.43,P=0.025）。克隆形成实验显示,实验组与照射组相比较,反映放射敏感性指标的Dq、Do和SF2显著降低。塞来昔布能抑制COX-2、VEGF和Bcl-2蛋白表达（P〈0.05）。[结论]选择性COX-2抑制剂塞来昔布对人乳腺癌MDA-MB-231细胞有明显的放射增敏作用,其可能的机制是抑制COX-2表达、诱导细胞凋亡、调节细胞周期分布和抑制细胞血管生成因子生成。     

苦参碱对大肠癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

[目的]探讨苦参碱对人大肠癌Lovo细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其对Bax、Bcl-2表达的影响。[方法]0.05~1.6mg/ml不同浓度苦参碱作用Lovo细胞,采用MTT法检测苦参碱对大肠癌Lovo细胞增殖抑制作用,DNAladder、AnnexinⅤ-PI法及TUNEL染色检测细胞凋亡,WesternBlot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的变化。[结果]0.05～1.6mg/ml苦参碱处理Lovo细胞24h或48h后,细胞增殖均明显受抑制;DNAladder、AnnexinⅤ-PI法及TUNEL染色检测结果显示苦参碱呈时间、剂量依赖性诱导细胞凋亡;促凋亡蛋白Bax随着苦参碱剂量增加表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2随着苦参碱剂量增加表达减少。[结论]苦参碱具有抑制大肠癌细胞增殖,诱导其凋亡的作用。苦参碱诱导大肠癌细胞凋亡的机制可能与促凋亡蛋白Bax表达增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少有关。     

苦参碱促进三苯氧胺诱导乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的机制研究

[目的]研究三苯氧胺(TAM)联合低剂量苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制及作用机制.[方法]用MTT法检测各组细胞的抑制率,克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测p53、Bax、Bcl-2蛋白表达.[结果]TAM对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性,与低剂量苦参碱联合,其抑制作用明显增强.药物作用24、48、72h后,与对照组相比,TAM组的凋亡率均明显增高(P＜0.01);与TAM组相比,联合组的凋亡率均明显增高(P＜0.01).Western blot检测发现,与对照组相比,TAM组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低;与TAM组相比,联合组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低.[结论]低剂量苦参碱能促进TAM对Bcap-37细胞增殖抑制作用,其作用机制与增加p53、Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关.     

纳米颗粒对人肝癌HepG2细胞放射增敏效应的实验研究

目的 探讨纳米金、银颗粒对人肝癌HepG₂细胞的放射增敏作用及其机制。方法 选用MTT法、克隆形成法检测纳米金、银颗粒增强X射线杀伤肿瘤细胞的作用,流式细胞仪检测对细胞凋亡及细胞周期分布影响,蛋白印记法检测对细胞Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达变化,酶标仪检测对细胞过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、总谷胱甘肽(GSH)水平改变。结果 纳米金、银颗粒对HepG₂细胞的生长抑制作用 IC₅₀分别为6.51、2.47 μg/ml。由 D₀值得到 1/5 IC₅₀纳米金、银颗粒放射增敏比分别为1.37、1.48,1/10 IC₅₀的分别为1.11、1.09。纳米金、银颗粒增加Caspase-3、Bax表达,降低Bcl-2表达,减少CAT、SOD、总GSH水平。结论 纳米金、银颗粒均能增加HepG₂细胞的放射敏感性,其机制可能为激活线粒体凋亡通路和诱导活性氧产生凋亡。     

RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖、抑制其凋亡的相关研究

目的:探究RNA干扰RhoBTB1基因表达对结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Lipofectamine 2000将siRNA RhoBTB1或siRNA NC转入HT29细胞中，实验分为Control组、转染对照组和siRNA Rho组，噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞的的活力和凋亡率，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中RhoBTB1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组相比，HT29细胞转染siRNA RhoBTB1后，细胞中RhoBTB1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05），细胞活力显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著增加（P<0.05）。结论:RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖，抑制其凋亡，可能通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达量发挥作用。     

吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及分子机制研究

目的 探讨吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分别以吡格列酮（0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L）和吉西他滨（50 μmol/L）作用0 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,采用CCK-8检测各时间点的细胞增殖情况,流式细胞仪检测72 h细胞周期及凋亡情况,4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色检测48 h细胞凋亡形态学变化,Western blot检测48 h细胞凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达。结果 与0 μmol/L吡格列酮相比,吉西他滨及各剂量吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均降低（P＜0.05）;48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均升高（P＜0.05）,而S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）,且细胞逐渐收缩,细胞核逐渐碎裂。与50 μmol/L吉西他滨组相比,10 μmol/L吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞作用48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均降低（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均升高（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞48 h 的S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）。结论 吡格列酮能抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖,诱导其凋亡,可能通过上调MAPK/ERK通路实现。     

Role of Bcl-2 family proteins (Bax, Bcl-2 and Bcl-X) on cellular susceptibility to radiation in pancreatic cancer cells

The aim of this study was to examine Bax, Bcl-2 and Bcl-XL proteins in human pancreatic cancer cell lines and to clarify the mechanism of radiation resistance. PANC-1 and AsPC-1 pancreatic cell lines were used, both having mutated p53. Radioresistant PANC-1/Rad cells and AsPC-1/Rad cells were obtained by repeated 5 Gy irradiation of PANC-1 cells and AsPC-1 cells, respectively. Radiation was found to inhibit the growth of PANC-1 cells and AsPC-1 cells. After exposure to radiation, detached cells were subjected to FITC-TUNEL staining to calcualte the ratio of apoptosis. TUNEL positive ratios increased dose-dependently in both cell lines. Western blotting showed that the basal level of the Bax/Bcl-2 ratio reflected the radiosensitivity of these cell lines, and Bax expression was obviously upregulated after irradiation in the presence of mutated p53, but Bcl-2 expression remained almost constant. Both PANC-1/Rad and AsPC-1/Rad cells had greater Bcl-XL expression than the parental cells, and the basal level of the Bax/Bcl-2 ratio was no longer predictive of radiosensitivity. Upregulated expression of Bax protein after irradiation was not related to induction of apoptosis in these cells, suggesting that overexpression of Bcl-XL and functional reconstruction of Bcl-2 family proteins are important factors in acquired radioresistance.     

冬凌草甲素抑制人肝癌SMMC．7721细胞增殖及诱导细胞凋亡的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用及诱导凋亡机制。方法采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌SMMC-7721细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞抑制率,倒置显微镜观察不同浓度组的细胞形态,RT—PCR法检测细胞Survivin、Bcl-2、BaxmRNA的表达,WesternBlot法检测细胞Survivin、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果MTT比色法显示不同浓度的冬凌草甲素可抑制人肝癌SMMC．7721细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性。冬凌草甲素作用48h后细胞表现出特异性凋亡。RT—PCR法和WesternBlot法显示,人肝癌SMMC-7721细胞的BaxmRNA和Bax蛋白随冬凌草甲素浓度增加而表达增加,Bcl-2、SurvivinmRNA和Bcl-2、Survivin蛋白随药物浓度增加而表达下降。结论冬凌草甲素能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,降低Sur—vivin、Bcl-2表达和上调Bax表达可能是诱导细胞发生凋亡的机制。     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

[目的]探讨黄荆子乙酸乙酯提取物（EVn-50）体外诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用。[方法]体外培养Hela细胞,不同浓度EVn-50（1.0、10.0、100.0μg/ml）作用于Hela细胞。采用PI染色FCM检测EVn-50诱导Hela细胞的凋亡作用;采用间接免疫荧光标记FCM检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。[结果]EVn-501.0、10.0、100.0μg/ml处理Hela细胞48h后,细胞的凋亡率分别为1.06%、8.80%及20.90%,呈浓度依赖性（P〈0.05）。不同浓度EVn-50作用Hela细胞48h,细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达逐渐升高,Bcl-2蛋白表达逐渐降低（P〈0.05）。[结论]EVn-50具有诱导Hela细胞凋亡作用,其作用可能与改变凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达有关。     

下调TSG101基因表达对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响

目的：研究通过siRNA下调TSG101的表达对胰腺癌细胞系PANC-1生长、增殖及细胞周期的影响。方法：将合成的TSG101 siRNA片段插入至带有绿色荧光蛋白基因（GFP）的pGenesil-1质粒中,用lipo-fectamine 2000将质粒转入胰腺癌细胞系PANC-1后,Western blot鉴定siRNA对TSG101蛋白干扰效率。然后用MTT、流式细胞术检测TSG101下调的细胞生长、增殖能力及细胞周期的变化。结果：TSG101 siRNA有效下调其在胰腺癌细胞系PANC-1中的表达,下调TSG101基因的表达后显著抑制了PANC-1细胞的生长、增殖能力。与随机对照siRNA及阴性对照细胞相比,MTT分析显示有效转染TSG101 siRNA的细胞从第4天开始增殖能力明显下降（P〈0.05）,流式细胞术分析示细胞周期阻滞在G1期,增殖指数（PI）下降（P〈0.05）。结论：下调TSG101在胰腺癌细胞系PANC-1表达后能够导致细胞周期的阻滞并有效抑制细胞生长、增殖。利用RNA干涉技术下调内源性TSG101表达有望成为一种有效的胰腺癌基因治疗方法。     

人参皂苷Compound K对慢性粒细胞白血病K562细胞系凋亡诱导作用及其机制的研究

[目的]探讨人参皂苷CompoundK（CK）对慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的诱导作用及其机制。[方法]应用MTT法检测CK对K562细胞增殖的影响,用流式细胞术分析细胞凋亡情况,半定量RT—PCR检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平,WesternBlot检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax蛋白质的表达。[结果]人参皂苷CK能诱导K562细胞的凋亡,细胞凋亡率呈浓度依赖性增加。RT—PCR结果显示Caspase3、Caspase9mRNA的表达上调,Bcl-2mRNA的表达下调,WesternBlot实验显示蛋白质表达情况与RT—PCR结果-致,Caspase3、Caspase9蛋白质的表达上调,Bcl-2的表达下调。[结论]人参皂苷CK诱导K562细胞凋亡作用的机制可能是CK抑制Bcl-2基因的表达,进而使Caspase3、Caspase9表达量上调,启动凋亡途径,引起凋亡。