异烟肼通过ROS/Caspase-3信号通路诱导L-02细胞凋亡及槲皮素的保护作用

目的：探讨ROS/Caspase-3信号通路在异烟肼（INH）诱导人正常肝细胞（L-02细胞）凋亡中的作用及槲皮素的保护效应。方法：将L-02细胞随机分为对照组、INH组（10 mmol/L INH）、25 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和25 μmol/L槲皮素）、50 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）。各组均处理24 h后,应用MTT法检测L-02细胞存活率,分光光度法检测细胞上清液中LDH活性,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡率;制备L-02细胞线粒体,利用DCFH-DA和Rho-123荧光探针检测活性氧（ROS）水平及线粒体膜电位（△Ψm）,应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果：与对照组比较,INH组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,与INH组比较,50 μmol/L槲皮素处理组细胞存活率明显增加（P < 0.01）;INH组细胞LDH活性、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较对照组显著升高（P < 0.01）,25和50 μmol/L槲皮素组细胞LDH活力、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较INH组明显降低（P < 0.05或P < 0.01）,且50 μmol/L槲皮素组作用更显著;INH组细胞线粒体△Ψm较对照组显著降低（P < 0.01）,25和50 μmol/L槲皮素组细胞线粒体△Ψm较INH组明显升高（P < 0.05或P < 0.01）,50 μmol/L槲皮素组的作用更加明显;与对照组比较,INH组细胞Caspase-3蛋白表达显著增加（P < 0.01）,与INH组比较,25和50 μmol/L槲皮素组细胞Caspase-3蛋白表达明显减少（P < 0.05或P < 0.01）,且50 μmol/L槲皮素组作用更明显。结论：INH可以诱导L-02细胞发生凋亡,ROS/Caspase-3信号通路参与了其凋亡的过程;槲皮素对INH诱导的细胞凋亡具有保护效应,机制可能与其减少ROS释放,抑制ROS/Caspase-3信号通路有关。     

PM2.5对HK-2肾细胞部分癌基因和凋亡基因表达的影响

目的： 探讨PM_2.5对人肾上皮细胞（HK-2）部分癌基因和凋亡基因表达的影响。方法： 利用CCK-8试剂盒测定PM_2.5混悬液对HK-2细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）;实验设阴性对照组、PM_2.5混悬液低剂量（10 μg/mL）、高剂量（50 μg/mL）染毒组和阳性对照组（Cr⁶⁺ 10 μmol/L）,分别对HK-2细胞处理24 h后利用实时荧光定量PCR （qPCR）和Western blot检测癌基因（c-myc、c-fos、p53）和凋亡基因（Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2） mRNA和蛋白的表达水平。结果： PM_2.5混悬液对HK-2细胞的IC₅₀为95.98 μg/mL;经PM_2.5混悬液染毒24 h,qPCR结果显示,与阴性对照组比较,PM_2.5混悬液高剂量组和阳性对照组c-myc、c-fos、Caspase-8、Caspase-9 mRNA表达均升高,差异均有统计学意义（P < 0.01）;p53和Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义（P < 0.01）。Western blot结果显示,与阴性对照组比较,PM_2.5混悬液高剂量组和阳性对照组c-myc、c-fos、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P < 0.01）;p53和Bcl-2蛋白表达均降低,差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论： PM_2.5可引起HK-2细胞中部分癌基因表达上升、抑癌基因表达下降、促凋亡基因表达上升和抑凋亡基因表达下降,提示PM_2.5对HK-2肾细胞部分癌基因和凋亡基因具有一定的促进与激活作用。     

白藜芦醇对肺癌紫杉醇耐药细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：研究白藜芦醇作用后人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇敏感性的改变,并探讨其作用机制。方法：建立人肺腺癌紫杉醇耐药细胞A549/Taxol-R,用不同浓度白藜芦醇、紫杉醇单独或联合干预A549/Taxol-R细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;概率单位法计算半数抑制浓度（IC₅₀）;观察不同浓度白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞IC₅₀的变化;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：白藜芦醇对A549/Taxol-R细胞增殖的抑制率具有浓度和时间的双重依赖性（P均 < 0.05）。白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞的IC₅₀值下降,从（17.50±1.24）μg/mL降低至（4.18±0.62）μg/mL。白藜芦醇和紫杉醇联合干预的A549/Taxol-R细胞凋亡率、坏死率高于单独干预组（P < 0.05）,联合干预组A549/Taxol-R细胞的Bax、Caspase-3的表达较单独干预组上调,而Bcl-2的表达则相对下调（P < 0.05）。结论：白藜芦醇可能通过促进细胞的凋亡来增强人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的敏感性,其机制可能和促进Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达有关。     

沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的： 探讨沉默c-fos基因对PM_2.5染毒人支气管上皮细胞（HBE细胞）癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法： 采用RNA干扰技术，根据GenBank提供的c-fos mRNA序列，设计合成shRNA干扰序列，将重组慢病毒载体转染HBE细胞，构建c-fos基因沉默细胞株。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot对c-fos基因沉默效果进行鉴定。以HBE细胞、c-fos基因沉默细胞为实验对象，用浓度为50 μg/mL的PM_2.5混悬液染毒24 h，同时设立阴性对照组，qPCR和Western blot分别检测部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白质表达水平的变化。结果： 转染c-fos-shRNA慢病毒的HBE细胞中，经qPCR和Western blot检测发现，与对照组HBE细胞相比，c-fos mRNA表达水平下降70.1%，c-fos蛋白表达水平下降53.7%。PM_2.5染毒HBE细胞后，与未染毒的对照组比较，c-myc和k-ras mRNA表达水平分别升高30.46%、27.17%，差异均有统计学意义（P < 0.05），c-fos、Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别升高50.78%、71.91%、74.16%，p53 mRNA表达水平下降12.27%，差异均有统计学意义（P < 0.01）。PM_2.5染毒c-fos基因沉默细胞后，与未染毒组比较，c-myc、k-ras mRNA表达水平分别下降13.08%、5.39%，Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别下降25.03%、21.37%（P < 0.05），p53 mRNA下降53.39%（P < 0.01）。此外，c-fos基因沉默细胞染毒后，与HBE正常细胞染毒后比较，c-myc、k-ras、p53、c-fos、Caspase-3和Caspase-8的mRNA表达水平均有所下降（P < 0.05）；仅c-myc蛋白表达下降（P < 0.01）。结论： 成功构建c-fos基因沉默细胞株；PM_2.5可引起HBE细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平明显升高，c-fos基因沉默在一定程度上能抑制PM_2.5对癌基因和凋亡相关基因的激活作用。     

甘草提取物的有效部位诱导人宫颈癌HeLa细胞株凋亡及对凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响

目的 研究甘草提取物的有效部位(GL)体外诱导HeLa细胞凋亡情况及对Caspase家族蛋白表达的调控,进一步阐明GL的抑癌机制。方法 将25 μg/mL的GL作用于HeLa细胞24 h后,采取MTT比色法,吖啶橙/溴乙锭荧光双染法,透射电子显微镜法,观察GL诱导HeLa细胞凋亡情况,并采用Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示,GL可以有效抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量-时间相关性。AO/EB双染色及透射电镜观察发现GL作用HeLa细胞24 h后,可见大量早期凋亡细胞。Western blot测定结果显示,药物组Pro-caspase-9蛋白表达量与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);Cleaved-caspase-3蛋白表达量高于对照组。结论 GL能够促进Caspase-3、Caspase-9酶原活化,具有体外诱导HeLa细胞凋亡的作用。     

沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的： 探讨沉默c-fos基因对PM_2.5染毒人支气管上皮细胞（HBE细胞）癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法： 采用RNA干扰技术，根据GenBank提供的c-fos mRNA序列，设计合成shRNA干扰序列，将重组慢病毒载体转染HBE细胞，构建c-fos基因沉默细胞株。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot对c-fos基因沉默效果进行鉴定。以HBE细胞、c-fos基因沉默细胞为实验对象，用浓度为50 μg/mL的PM_2.5混悬液染毒24 h，同时设立阴性对照组，qPCR和Western blot分别检测部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白质表达水平的变化。结果： 转染c-fos-shRNA慢病毒的HBE细胞中，经qPCR和Western blot检测发现，与对照组HBE细胞相比，c-fos mRNA表达水平下降70.1%，c-fos蛋白表达水平下降53.7%。PM_2.5染毒HBE细胞后，与未染毒的对照组比较，c-myc和k-ras mRNA表达水平分别升高30.46%、27.17%，差异均有统计学意义（P < 0.05），c-fos、Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别升高50.78%、71.91%、74.16%，p53 mRNA表达水平下降12.27%，差异均有统计学意义（P < 0.01）。PM_2.5染毒c-fos基因沉默细胞后，与未染毒组比较，c-myc、k-ras mRNA表达水平分别下降13.08%、5.39%，Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别下降25.03%、21.37%（P < 0.05），p53 mRNA下降53.39%（P < 0.01）。此外，c-fos基因沉默细胞染毒后，与HBE正常细胞染毒后比较，c-myc、k-ras、p53、c-fos、Caspase-3和Caspase-8的mRNA表达水平均有所下降（P < 0.05）；仅c-myc蛋白表达下降（P < 0.01）。结论： 成功构建c-fos基因沉默细胞株；PM_2.5可引起HBE细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平明显升高，c-fos基因沉默在一定程度上能抑制PM_2.5对癌基因和凋亡相关基因的激活作用。     

纳米氧化石墨烯诱导人类支气管上皮细胞DNA氧化与甲基化的实验研究

目的：通过分析体外培养的人类支气管上皮细胞（16HBE）在纳米氧化石墨烯（NGO）染毒后细胞DNA中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷（8-OHdG）和5-甲基胞嘧啶（5-mC）比例的变化规律,探讨DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法：分别以1.25、2.5、5、10 μg/mL的NGO溶液染毒16HBE细胞24 h,采用高效液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA中8-OHdG比例,高效毛细管电泳（HPCE）法检测细胞全基因组DNA甲基化水平。结果：在2.5、5、10 μg/mL的NGO溶液染毒后,细胞DNA中8-OHdG比例显著高于对照组（P < 0.05或P < 0.01）,以10 μg/mL浓度时为最高。NGO可引起16HBE细胞甲基化程度降低,与对照组细胞相比,2.5、5和10 μg/mL NGO组分别降低37.1%、49.7%和46.3%,与对照组间的差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。DNA氧化水平与DNA甲基化水平间呈负相关（r=-0.69,P < 0.01）。结论：本研究提示,在体外NGO可导致人支气管上皮细胞16HBE的DNA氧化水平升高,DNA甲基化水平降低,我们推测细胞DNA氧化程度可能影响DNA甲基化过程。     

PM2.5对HK-2细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的：探讨深圳和太原市PM_2.5对人肾上皮细胞（HK-2）氧化损伤和凋亡的影响。方法：用中流量采样器分别采集太原某大学校园和深圳市疾病预防控制中心楼顶空气,将吸附有PM_2.5的滤膜洗脱后制备PM_2.5混悬液。设置阴性对照组、50 μg/mL深圳PM_2.5样品组、50 μg/mL太原PM_2.5样品组和10 μmol/L Cr⁶⁺阳性对照组,分别处理HK-2细胞24 h,测定4组细胞氧化损伤指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的变化,并应用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果：与阴性对照组相比,深圳PM_2.5样品组、太原PM_2.5样品组和阳性对照组中MDA含量分别升高8.16%、34.51%和72.23%;SOD活性分别降低7.49%、19.67%和29.55%;GSH含量分别降低10.43%、16.39%和37.43%。太原PM_2.5样品组与阴性对照组的差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。GSH-PX活性分别降低42.70%、61.62%和60.98%,细胞凋亡率分别升高197.25%、301.22%和399.08%,上述3组与阴性对照组间的差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：深圳和太原市PM_2.5均可引起HK-2细胞发生氧化损伤和细胞凋亡率增加,且太原市PM_2.5的作用更为明显。     

解旋酶DDX46 基因对食管鳞癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨RNA解旋酶DDX46基因对食管鳞癌细胞株Eca-109增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法：以人永生化食管鳞状上皮细胞Het-1A为对照,实时荧光定量PCR（qPCR）检测DDX46 mRNA在Eca-109细胞中的相对表达水平。应用shRNA干扰技术沉默Eca-109细胞DDX46基因后,分别采用MTT实验、克隆形成实验及流式细胞术检测细胞增殖情况、克隆形成能力以及细胞周期和细胞凋亡情况。并用Western blot检测DDX46基因沉默后Eca-109细胞DDX46蛋白和凋亡信号转导通路关键分子Caspase-3和PARP-1蛋白表达的变化。结果：与Het-1A细胞相比,Eca-109细胞DDX46 mRNA的表达水平显著升高（P < 0.01）。与对照组相比,靶向沉默DDX46基因后MTT实验显示Eca-109细胞活力明显减弱,增殖能力被显著抑制（P < 0.01）;克隆形成实验显示Eca-109细胞克隆形成能力被显著抑制（P < 0.01）;流式细胞术检测显示处于G1期的细胞增加,而处于S期的细胞减少（P < 0.05）,细胞周期停滞于G0/G1期;凋亡实验显示细胞凋亡率显著增加（P < 0.01）。Western blot检测显示,与对照组比较,DDX46-shRNA干扰使Eca-109细胞DDX46蛋白表达水平显著下降（P < 0.01）,而cleaved Caspase-3和cleaved PARP-1蛋白表达水平显著上升（P < 0.01）。结论：DDX46 mRNA在食管鳞癌Eca-109细胞中高表达,DDX46基因沉默可能通过激活细胞凋亡信号转导通路而发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

纳米镍对大鼠睾丸生精-支持共培养细胞的凋亡作用及机制研究

目的：研究纳米镍对大鼠睾丸生精-支持共培养细胞的作用及其相关机制。方法：以体外共培养的大鼠睾丸生精-支持共培养细胞为实验对象,分别加入不同浓度的纳米镍（0、25、50、100、200、400和800 μg/mL）染毒24 h后,采用MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡形态及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;lncRNA基因芯片检测细胞凋亡相关lncRNA的差异表达。结果：与对照组相比,不同浓度纳米镍染毒后,细胞存活率均降低（P < 0.01）,并呈剂量效应关系（P < 0.01）。Hoechst33258染色结果显示,与对照组比较,纳米镍染毒组细胞核或细胞质内显示出浓染致密的颗粒块状荧光及明显核形态变化。Annexin V/PI双染法流式检测结果显示,染毒浓度为25、50、100、200、400 μg/mL时,细胞凋亡率分别为8.80%±0.50%、11.00%±0.70%、12.53%±0.71%、15.95%±0.54%和17.80%±0.76%,各浓度组细胞凋亡率与对照组比较均明显增加（P < 0.01）,且呈浓度效应关系（P < 0.01）。LncRNA基因芯片检测结果显示,与凋亡相关的lncRNA共169个,其中,100 μg/mL纳米镍染毒组与对照组比较,上调的有117个,下调的有52个。结论：纳米镍能引起大鼠睾丸生精-支持共培养细胞凋亡,lncRNA可能在其中起重要作用。     

虫草素抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究

目的:探讨虫草素对食管癌细胞Eca-109的作用及其潜在的机制。方法:不同浓度（35、70、140、280 μg/mL）虫草素分别处理Eca-109细胞24 h、48 h、72 h和96 h,CCK-8检测细胞活力,筛选虫草素最佳作用浓度（70 μg/mL）和时间（24 h）。实验分为4组:对照组、虫草素组（70 μg/mL虫草素）、SB203580组（10 μg/mL SB203580）和虫草素+SB203580组（70 μg/mL虫草素+10 μg/mL SB203580）。培养24 h后,CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;qRT-PCR和Western blot分别检测细胞周期相关、凋亡相关和p38 MAPK信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组相比,虫草素组、SB203580组和虫草素+SB203580组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞发生G2期阻滞,凋亡率显著升高（P＜0.05）,cyclinB1、CDK4、p-p38、ERK1和ERK2的表达下调（P＜0.05）,CKI和Caspase-3的表达上调（P＜0.05）。结论:虫草素可抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制与p38 MAPK信号通路有关。     

脂多糖(LPS)刺激NLRP3/Caspase-1炎症信号通路促进口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激NLRP3/Caspase-1炎症信号通路促进口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞的增殖和迁移作用。方法:qRT-PCR、WB和ELISA检测OSCC患者癌旁组织及癌组织、正常口腔黏膜上皮细胞系（NOK）和OSCC细胞系SCC25和HSC3中NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA及蛋白表达;采用qRT-PCR、WB、CCK-8和划痕愈合实验检测LPS刺激前后SCC25和HSC3中NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白表达及其对细胞增殖和迁移生物学特性的影响。结果:OSCC患者癌组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1β mRNA和蛋白表达较癌旁组织明显升高,P值分别为:0.035 3、0.024、0.036 2、0.035 4、0.041 3 和 0.014 8;SCC25 与 HSC3 细胞系中mRNA及蛋白表达较NOK细胞系明显升高,分别为NLRP3（P＜0.000 1,P＜0.000 1,P＜0.01,P＜0.01）、Caspase-1（P＜0.000 1,P=0.000 1,P＜0.01,P＜0.01）、IL-1β（P=0.000 3,P=0.001 2,P＜0.001,P＜0.001）;1 μg/mL LPS刺激12 h后,SCC25细胞系中NLRP3（P＜0.05,P＜0.001）、Caspase-1（P＜0.05,P＜0.001）和 IL-1β（P＜0.01,P＜0.01）的mRNA及蛋白表达均明显升高。10 μg/mL LPS刺激12 h后,HSC3中NLRP3（P=0.009,P＜0.01）、Caspase-1（P=0.018 1,P＜0.05）、IL-1β（P=0.016,P＜0.01）的mRNA及蛋白表达均明显升高;经LPS刺激后,SCC25（P＜0.000 1,P＜0.000 1）与HSC3（P＜0.000 1,P＜0.000 1）中细胞的增殖以及迁移能力均明显增强。结论:与癌旁正常组织相比,NLRP3/Caspase-1炎症信号通路在OSCC癌组织中表达明显增高,提示其可能在OSCC的发生发展中起着重要作用。 LPS可通过激活NLRP3/Caspase-1炎症信号通路进一步促进口腔癌细胞的增殖和迁移,提示口腔致病菌可通过分泌LPS促进OSCC的发生发展。     

三氧化二砷诱导乳腺癌细胞凋亡以及对Survivin、Caspase-3蛋白表达的影响

背景与目的:探讨不同浓度As2O3在诱导人乳腺癌细胞MDA_MB₂31凋亡过程中的作用,并研究其对Survivin和Caspase₃蛋白表达的影响。材料与方法:将3种不同浓度的As2O3（10.0、20.0、40.0μmol/L）与MDA_MB₂31细胞共培养不同时间后,采用流式细胞术检测MDA_MB₂31细胞凋亡;用免疫细胞化学技术及Westernblot检测Survivin和Caspase₃蛋白的表达。各实验均设相应的对照组。结果:经10.0、20.0、40.0μmol/LAs2O3作用后,MDA_MB₂31细胞凋亡率分别为（28.89±2.47）%、（46.73±3.82）%和（56.44±4.16）%,细胞凋亡率在各浓度组间的差异均具有统计学意义（P均<0.01）;免疫细胞化学染色显示Survivin蛋白表达减少,而Caspase₃蛋白被激活;Westernblot条带显示Survivin蛋白表达量降低,而Caspase₃蛋白则出现被激活的小片段。As2O3上述的3种作用均存在剂量依赖关系。结论:As2O3可能通过抑制Survivin蛋白活性,激活Caspase₃蛋白的表达而诱导MDA_MB₂31细胞凋亡。     

Caspase-3在苦参碱诱导鼻咽癌CNE2细胞凋亡中的作用

目的：探讨苦参碱对鼻咽癌CNE2细胞生长和凋亡的影响以及Caspase-3在其中的作用。方法：将不同浓度（0、0.25、1.00、4.00g/L）的苦参碱分别作用于体外培养的CNE2细胞48h;采用MTT法检测细胞的存活与增殖,采用Annexin-Ⅴ和PI双染法测定细胞凋亡,采用Westernblot法检测细胞中Caspase-3蛋白的含量。结果：在苦参碱1.00和4.00g/L浓度作用下,CNE2细胞存活和增殖受到影响,其存活率分别为对照组的65.1%和50%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）;且CNE2细胞的凋亡频率明显增加,分别达到15.78%和28.44%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。苦参碱1.00和4.00g/L浓度组细胞的Caspase-3蛋白水平分别为1.22±0.34和1.69±0.46,均比对照组0.87±0.26明显增高（P均〈0.05）。结论：苦参碱能够引起鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制和凋亡增加,并对Caspase途径有激活作用。     

吲哚美辛诱导食管癌EC109细胞凋亡的Smac依赖性机制

目的:研究Smac表达下调对吲哚美辛诱导的食管癌EC109细胞凋亡的影响,并探索其内在分子机制。方法:使用Smac-siRNA脂质体法转染食管癌EC109细胞,将细胞分为空白对照组, siRNA-control阴性对照组和siRNA-Smac组。使用不同浓度的吲哚美辛处理各组细胞,MTT检测细胞活力变化,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,Western blot法检测Caspase-9、3以及XIAP、survivin表达情况。结果:采用不同浓度吲哚美辛处理后,细胞活力明显受到抑制;Smac siRNA可明显降低Smac在RNA水平和蛋白水平的表达;吲哚美辛可引起各组凋亡率明显增加,单纯导入siRNA-Smac片段并不能引起细胞凋亡变化,siRNA-Smac联合药物能明显降低EC109细胞凋亡率（P＜0.05）。在蛋白水平,siRNA-Smac组的survivin表达无明显变化,XIAP表达明显增强;Caspase-9及Caspase-3的活性片段明显表达减弱（P＜0.05）。结论:NSAIDs药物吲哚美辛可诱导食管癌EC109细胞凋亡,这种作用一定程度上依赖于Smac的正常表达;Smac表达降低后其对XIAP的抑制减弱,Caspase-9和Caspase-3的活化受到抑制,而survivin在其中并不起决定性作用。     

Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

背景与目的:雷帕霉素是从吸水性链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)发酵液中提取,最近研究发现雷帕霉素具有免疫抑制作用和广泛的抗肿瘤作用。本研究主要探讨Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用。方法:以不同浓度(5、10、20、30、40、50nmol/L)的雷帕霉素作用于BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,采用Caspase-3试剂盒和Westernblot蛋白电泳测定Caspase-3活性。结果:雷帕霉素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,具有量-效与时-效关系;雷帕霉素作用BEL-7402细胞48h后,Hoechst33258荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;凋亡过程中Caspase-3酶原蛋白的激活,出现20ku亚单位,Caspase-3特异性抑制剂z-DEVD-FMK能阻断凋亡的发生。结论:雷帕霉素能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3酶的激活在雷帕霉素诱导细胞凋亡机制中起到重要作用。     

顺铂联合迷迭香酸抑制Huh7细胞增殖诱导凋亡

目的:探讨含铂抗癌药物顺铂（Cisplatin,CDDP）联合中药单体迷迭香酸（Rosmarinic acid,RA）对人原发性肝癌Huh7细胞系增殖与凋亡的影响。方法:通过CCK-8细胞增殖实验检测并计算CDDP和RA治疗24 h、48 h、72 h后的IC50值,随后设置未经药物处理组（control组）、5 μg/mL CDDP处理组、200 μg/mL RA处理组以及5 μg/mL CDDP联合200 μg/mL RA处理组。采用流式细胞术检测control组、CDDP处理组、RA处理组以及联合用药组的细胞凋亡率分别为（7.28±0.56）%、（18.23±2.53）%、（26.44±1.99）%和（37.27±0.28）%。最后,利用免疫印迹试验(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3以及Procaspase-3凋亡相关蛋白的表达水平。结果:RA可增强CDDP对Huh7细胞增殖的抑制能力并呈现出浓度依赖性（P＜0.05）,在CDDP联合RA处理组中Huh7细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,CDDP联合RA作用后促凋亡蛋白Bax与Cleaved-caspase-3的表达水平增加,而Bcl-2的表达水平下降（P＜0.05）。结论:RA能抑制Huh7细胞增殖并且诱导细胞凋亡,与顺铂联用具有协同作用,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性影响研究

目的 研究GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性的影响。方法 以qRT-PCR和蛋白印迹法分别检测食管癌细胞系和正常食管上皮细胞GOLPH3 mRNA和蛋白水平,在OE33细胞中转染GOLPH3 siRNA,同时给予照射处理。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放射敏感性,蛋白印迹法检测活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果 食管癌细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平明显高于正常食管上皮细胞(P<0.05)。GOLPH3 siRNA可明显下调食管癌OE33细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平。下调GOLPH3或者照射处理以后的食管癌细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率升高,并且细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高(P<0.05)。下调GOLPH3后的OE33细胞经照射处理以后,细胞增殖活性下降更多,细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高更多(P<0.05)。下调GOLPH3后OE33细胞经照射处理后,细胞放射增敏比为1.673。结论 GOLPH3在食管癌细胞中高表达,下调其表达可以增加OE33细胞放射敏感性,诱导细胞凋亡并抑制其增殖。     

华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路调控肺癌细胞的增殖、凋亡及血管生成

目的:探讨华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路对肺癌细胞增殖、凋亡及血管生成的影响。方法:选取肺癌细胞株A549、H460为研究对象,以不同浓度华蟾素（0、25、50、75、100、125、150 μg/mL）作用细胞株,采用MTT检测细胞活力。随后,设置组别为空白组、华蟾素组（100 μg/mL华蟾素）、华蟾素+inhibitor NC组、华蟾素+miR-497-5p inhibitor组,通过MTT检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中VEGF、VEGFA蛋白表达;RT-qPCR检测细胞中miR-497-5p表达;并采用荧光素酶报告实验确定miR-497-5p靶向VEGFA。结果:随着华蟾素浓度的升高,A549、H460细胞增殖活力明显下降（P＜0.01）;与空白组相比,华蟾素组A549、H460细胞克隆形成能力明显降低、细胞凋亡明显增加、VEGF和VEGFA蛋白表达明显降低、miR-497-5p mRNA表达明显升高（P＜0.01）;荧光素酶报告实验显示miR-497-5p靶向VEGFA;与华蟾素+inhibitor NC组相比,华蟾素+miR-497-5p inhibitor组A549、H460细胞中miR-497-5p mRNA表达明显降低、VEGF和VEGFA蛋白表达明显升高、细胞克隆形成能力明显增加、细胞凋亡明显被抑制、细胞增殖活力明显增加（P＜0.05）。结论:华蟾素可能通过调控miR-497-5p/VEGFA通路从而抑制肺癌细胞增殖和血管生成,并诱导细胞凋亡。