成都汉族群体15个短串联重复序列基因座遗传多态性

目的　获得15个短串联重复(short tandem repeat,STR)基因座在成都汉族群体的群体遗传学数据。方法　2 10份EDTA抗凝血样采自成都地区无血缘关系的汉族个体。Chelex法提取DNA,PCR复合扩增,自动基因分析仪电泳收集电泳结果数据,基因扫描分析软件计算扩增产物片段相对大小,基因分型软件进行样本基因型分型。结果　全部样本的每个STR基因座都获得了清晰的基因型分型结果。15个STR基因座的杂合度介于0 .5 2 9～0 .881之间。累计非父排除率和累计个人识别机率为0 .999998和7.3×10 - 1 7。结论　经一次扩增电泳可获得15个STR基因座的基因型分型结果并明确样本性别。累计非父排除率和累计个人识别机率较高,适用于法医学亲权鉴定和个人识别。     

人类毛发的形态学研究及法医学意义

毛发具有抗腐败、不易毁坏、易长期保持原形等特点,其形态特征不同使得毛发形态学检验在各种灾害事件、个人识别、种属鉴定等疑难案件的侦破中愈来愈受到重视。显微镜和电镜等形态学观察技术作为简单、易行的常规方法至今仍被应用于法医物证检验。本文从毛发的形态学结构,观察方法及其在法医学中的应用进行概述。     

22个常染色体单核苷酸多态性的群体遗传学研究

目的 评估非二态单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的遗传多态性及其法医学鉴别效能.方法 采集100名广东东莞汉族个体,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法对22个常染色体SNP进行分型.结果 广东汉族群体中,9个SNP观察到1个等位基因,4个SNP是二态SNP,9个SNP观察到3个等位基因.13个多态性SNP的累积个人识别率和非父排除率分别为0.99998、0.9330,9个非二态SNP的累积个人识别率和非父排除率分别为0.9998、0.8956.单亲鉴定时,13个多态性SNP的累积非父排除率分别为0.7266,9个非二态SNP的累积非父排除率为0.6405.结论 个人识别和亲权鉴定方面,非二态SNP具有较高的鉴别效能.     

中国辽宁锡伯族群体3个短串联重复位点的遗传多态性分析

背景：对常染色体STR基因座的多态性的研究可为法医学亲权鉴定提供基础数据。 目的：探索辽宁锡伯族D16S539,THO1,D13S317 3个常染色体基因座的遗传多态性,建立锡伯族群体的遗传学基础数据。 方法：采集辽宁省沈阳市新城子区黄家乡锡伯族中小学的150名中小学生口腔黏膜细胞,Chelex 100法提取DNA,进行荧光标记PCR扩增,产物在Li-COR 4300基因分析仪上进行电泳,E-seq分析软件计算扩增产物片段相对大小,进行基因型分型。调查辽宁地区锡伯族群体 3个 STR基因座等位基因频率,进行遗传多态性分析。 结果与结论：辽宁锡伯族群体中3个STR基因座具有遗传多态性,其基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。辽宁锡伯族群体中3个STR基因座的杂合度分布在0.769~0.810;个人识别力分布在0.824~0.929,累积个人识别能力为0.999;多态信息量分布在 0.650~0.790;非父排除率分布在0.565~0.790,累积非父排除率为0.979。说明辽宁锡伯族群体3个常染色体STR基因座有较高的非父排除率和个体识别能力,可为法医学亲子鉴定和个体识别及移植配型等遗传学研究提供依据。     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究

目的 纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法 大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2H4效价及抗体亚类;Western blot鉴定其特异性;免疫荧光试验(IFA)检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果 纯化后2H4抗体的纯度高达93％;效价为1:1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体(MoPn)、鹦鹉热嗜农原体(6BC)质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体(Cpn).结论 获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.     

补体C6 T1674C单核苷酸多态性在中国汉族人群中的分布

目的获得人类补体第六成分(C6)T1674C多态性在中国汉族人群的分布特征。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism PCR-SSCP)结合核酸测序方法检测150例中国四川泸州汉族人群C6基因T1674C的基因型频率及等位基因频率。结果基因型TT、TC、CC的频率分别为44.67%、23.33%、32.00%,等位基因T、C频率分别为56.33%和43.67%,其基因型频率分布符合Hardy-weinberg平衡定律,个人识别机率为61.7%。结论中国汉族人群C6基因T1674C多态性个人识别能力高,重复性好,在人类遗传学研究及法医学个人识别中有较好的应用价值。     

抗沙眼衣原体MIP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备小鼠抗沙眼衣原体MIP蛋白单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法:重组MIP蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,间接ELISA法筛选阳性克隆并进行有限稀释克隆化,建立分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步采用ELISA法鉴定单克隆抗体的效价、类别及抗MIP蛋白特异性,IFA法鉴定单克隆抗体的衣原体种属特异性及中和能力。结果:建立了2株能稳定分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1R6H6、2L9D2),ELISA法测得培养上清效价均为1:1 600,免疫球蛋白类型分别为IgG2a和IgG1;2株单克隆抗体不仅能特异性的识别MIP重组蛋白,而且能特异性识别沙眼衣原体血清型A、D、L2所编码的内源性MIP蛋白,但不识别其他衣原体优势蛋白及MoPn、AR39和6BC;体外中和试验表明,2株单克隆抗体均能有效中和衣原体的感染性。结论:获得了有活性的能特异性识别MIP蛋白的单克隆抗体,为深入研究MIP蛋白的结构和功能奠定了基础。     

X染色体四个STR基因座的遗传多态性及法医学意义

目的 建立X染色体短串联重复序列DXS7133、GATA198A10、DXS9896、DXS6797基因座的复合扩增系统，调查成都汉族人群的遗传多态性并探讨其法医学应用价值。方法 应用PCR和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分型技术，并检验各基因座女性基因型频率分布是否符合hardy-Weinberg平衡，计算法医学常用各种概率。结果 DXS7133、GATA198A10、DXS9896、DXS6797基因座在成都地区汉族群体中(男100，女120)分别发现6、6、11、8个等位基因，女性个人识别几率分别达0．7962、0．8021、0．9675和0．9444。X^2检验表明各基因座女性的基因型频率分布符合Hardy-Weinherg平衡。32个亲子鉴定案例调查表明这4个基因座符合X染色体伴性遗传方式，未发现突变。结论 DXS7133、GATA198A10、DXS9896、DXS6797基因座在成都汉族群体中具有较高的遗传多态性，适用于个人识别和女孩的亲权鉴定。     

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。方法利用重组Derf1蛋白为免疫原,免疫BALB／c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western—blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Derf1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Derf1检测及纯化方法奠定了基础。     

鼠抗人B7-H4单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

研制鼠抗人B7-H4单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步研究。采用稳定高表达B7-H4分子的基因转染细胞株293T/B7-H4为免疫原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术融合、流式细胞术筛选和克隆化培养后,最终获得一株鼠抗人B7-H4单克隆抗体(mAb),建立了稳定的杂交瘤细胞株;采用快速试纸条定性法鉴定其抗体亚型,通过western blot和细胞免疫组化鉴定其识别特异性,并与商品化抗人B7-H4抗体(美国BioLegend.克隆号MIH43)进行位点竞争;T细胞体外增殖抑制实验初步鉴定其生物学特性。成功获得的杂交瘤细胞株命名为287;快速试纸条鉴定其Ig亚型为IgG1,K链;western blot和细胞免疫组化结果显示,2B7能特异性识别B7-H4分子;位点竞争实验表明,287与商品化抗体MIH43识别不同的抗原表位。生物学功能实验结果显示,287能阻断B7-H4对T细胞体外增殖的抑制效应。单克隆抗体2B7的成功研制,为深入研究B7-H4的生物学功能和临床应用提供了有价值的工具。     

两株鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的: 制备鼠抗人PD-1单克隆抗体(mAb)及鉴定其生物学特性.方法: 以基因转染细胞PD-1/L929为免疫原, 免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合, 经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析, 筛选分泌鼠抗人PD-1分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、 Western blot、竞争结合抑制试验及肿瘤细胞株测定等方法对mAb进行生物学特性鉴定.结果: 获得了2株持续稳定分泌鼠抗人PD-1mAb的杂交瘤细胞株, 命名为1F2和5F10.对其生物学特性的鉴定结果表明, 均为条带相对分子质量在(Mr)55 000左右的免疫球蛋白, 具有不同的PD-1结合位点;1F2 mAb可识别SKHep-1和7721细胞株表面的PD-1分子, 而5F10可识别Raji细胞株的PD-1分子.结论: 成功获得了2株鼠抗人PD-1杂交瘤及其分泌的mAb.     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白（hLN）的单克隆抗体（McAb）。方法用纯化的人层粘连蛋白（hLN）作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株（2A1、3B5、2C4、4D1）,培养上清的ELISA效价分别为：1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为：1×10^6、1×10^7、1×10^6、1×10^5;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。     

平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。     

抗rhG-CSF单克隆抗体的制备和初步鉴定

<正> 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种造血调控因子,为鉴定、检测和纯化人G-CSF,制备了四株特异识别人G—CSF的单克隆抗体(单抗,McAb)。1 材料和方法1.1 rhG-CSF和rhG-CSF融合蛋白 均由本实验室克隆、表达和纯化。纯化后的样品经SDS—PAGE鉴定,纯度大于95％。1.2 单抗制备 以rhG-CSF融合蛋白为抗原,按常规方法制备单抗。1.3 单抗识别抗原表位鉴定试验 用15μg/ml的抗原包被检测板(50μl/孔),对杂交瘤细胞的培养上清及其系列倍比稀释液进行间接ELISA检测,找出使抗原饱含的各McAb的最大稀释度。     

兔抗人PON2抗体的制备与初步应用

目的:制备兔抗人PON2(paraoxonase-2)的多克隆抗体并进行初步鉴定.方法:生物信息学方法分析人PON2蛋白序列,选取人兔同源性较低,亲水性及免疫原性较强的片段,通过大肠杆菌原核表达系统进行重组表达,获得GST-PON2融合蛋白用于免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,通过XX方法分离纯化得到的抗PON2多克隆抗体,用West-ern blot、间接免疫荧光对其进行特异性及灵敏度鉴定.结果:成功获得了高表达的相对分子质量(Mr)为46 000的PON2重组融合蛋白;Western blot鉴定结果显示此多克隆抗体可特异识别肝脏总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中Mr为39 000的天然PON2蛋白;间接免疫荧光结果显示此多克隆抗体所识别的蛋白定位于SY5Y细胞胞质中.结论:抗人PON2的多克隆抗体特异识别肝总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中的天然蛋白,可用于PON2的研究及临床检测.     

肿瘤抗原鉴定研究进展

肿瘤抗原的鉴定是设计肿瘤疫苗用于肿瘤免疫治疗的前提。随着对机体抗肿瘤免疫机制的深入了解,发现CD8+、CD4+T细胞识别肿瘤抗原具有MHC分子约束性,CD8+、CD4+T细胞协同作用以清除肿瘤细胞。本文就CD8+、CD4+T细胞识别的肿瘤抗原鉴定方法以及肿瘤抗原特性作一综述。     

兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定

目的: 制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb), 并对抗体进行特性鉴定.方法: 以人正常肝cDNA文库为模板, 构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His).CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb, 辛酸-硫酸铵法纯化抗体, 采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性.结果: CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达.兔抗人CES1 pAb效价为1∶ 64 000.Western blot鉴定表明, 该抗体可识别重组人CES1蛋白, 也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基.免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白.结论: 成功地制备了兔抗人CES1 pAb, 该抗体可应用于ELISA、 Western blot、免疫组化等实验, 为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具.     

延边地区汉族群体线粒体DNA编码区五个部分序列多态性

目的 了解中国汉族群体线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)5个编码区3954～4506nt、5218～5974nt、7942～8711nt、10296～10653nt及14496～14867nt的序列多态性.方法 采用PCR产物直接测序方法,对200名吉林省延边地区汉族无关个体进行序列多态性变化和单倍型分布调查.结果 在200名无关个体中,共分出110种单体型.遗传变异度为0.9879,偶合概率为0.0171.测序结果与Anderson标准序列比较,共检测出81个变异位点,其中66个与MITOMAP收录的基因突变相同,15个未见收录.结论 mtDNA编码区多态性位点作为mtDNA控制区多态性位点的补充,联合应用可以提高mtDNA的个体识别能力.而且可为中国汉族群体的法医学个人识别、亲权鉴定及民族遗传学研究提供宝贵的基础数据资料.     

CD4~+T细胞识别的肿瘤抗原的研究进展

在以往的肿瘤免疫研究中 ,人们往往关注肿瘤特异性CD8+ T细胞的抗肿瘤效应 ,并由此鉴定出许多CD8+ T细胞识别的肿瘤抗原。随着研究的深入 ,CD4 + T细胞在抗肿瘤免疫中的作用逐渐为人们所关注。联合应用MHCⅠ类和MHCⅡ类限制性抗原的肿瘤疫苗将有可能取得更好的抗肿瘤效果。本文就近年来鉴定的CD4 + T细胞识别的肿瘤特异性抗原进行了综述。     

032 CD4+T细胞识别的肿瘤抗原的研究进展

在以往的肿瘤免疫研究中，人们往往关注肿瘤特异性CD8+T细胞的抗肿瘤效应，并由此鉴定出许多CD8+T细胞识别的肿瘤抗原。随着研究的深入，CD4+T细胞在抗肿瘤免疫中的作用逐渐为人们所关注。联合应用MHCⅠ类和MHCⅡ类限制性抗原的肿瘤疫苗将有可能取得更好的抗肿瘤效果。本文就近年来鉴定的CD4+T细胞识别的肿瘤特异性抗原进行了综述。