砷对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-3表达及血清中黄体生成素浓度的影响

目的研究亚慢性砷中毒对大鼠睾丸生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase-3)表达及血清黄体生成素(LH)的影响。方法将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照组(蒸馏水)组和0.4、2、10 mg/kg亚砷酸钠染毒组,每组10只,采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒14周。测定大鼠血清LH浓度及生精细胞caspase-3阳性率。结果与对照组比较,各剂量亚砷酸钠染毒组大鼠生精细胞caspase-3阳性率均较高,2、10 mg/kg亚砷酸钠染毒组大鼠血清LH浓度均较低,差异有统计学意义(P0.01,P0.05);且随着亚砷酸钠暴露剂量的升高,大鼠生精细胞caspase-3阳性率呈上升趋势,血清LH浓度呈下降趋势。结论砷暴露导致的生精细胞caspase-3表达增加可能是其雄性生殖毒性效应的机制之一。     

烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮和抑制素B水平的影响

目的探讨烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮、抑制素B表达的影响。方法将40只8周龄雄性SD大鼠随机分成4组,分别为对照组及轻、中、重度吸烟组(每天分别暴露于4、8、12支香烟烟雾,早晚各1次),连续染毒8周后成功建立大鼠被动吸烟毒性模型。采用TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡数,分别以直接化学发光和ELISA法检测大鼠血清中睾酮、抑制素B的表达水平。结果对照组及轻、中、重度吸烟组大鼠生精细胞凋亡指数分别为(6.62±0.58)%,(7.08±1.02)%,(8.71±0.76)%,(10.17±1.18)%,各染毒组生精细胞凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。各染毒组大鼠血清睾酮、抑制素B水平均低于对照组,且均随染毒剂量的增加而降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论烟草烟雾可诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡,并影响血清抑制素B及睾酮分泌。     

砷染毒大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力的变化

目的观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力表达的变化。方法将40只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成4组,分别为低、中、高剂量(0.375、0.75、1.5 mg/kg)砷染毒组和对照组,以灌胃法连续染毒16周后计算各组大鼠精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞端粒酶活力的表达。结果与对照组比较,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P<0.01),生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞端粒酶活力表达明显降低(P<0.01);每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);生精细胞凋亡与端粒酶活力呈负相关(r=-0.896,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞端粒酶活力,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量减少,产生雄性生殖毒性。     

氟对雄性大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响的研究

目的探讨氟对大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响。方法将30只4～5周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低剂量组、高剂量组。分别按0、10和20mg/kg染毒剂量隔日灌胃氟化钠(NaF)染毒39天,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,用放射免疫法测定大鼠血清睾酮含量,用免疫组化(ICH)检测睾丸中Fas蛋白表达情况,同时镜检成熟精子质量。结果各染氟组大鼠睾丸氟含量均高于对照组(P0.05)且随染毒剂量的增加而逐渐升高;各染氟组大鼠血清睾酮含量低于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,睾酮含量逐渐降低;各染氟组大鼠生精细胞Fas蛋白阳性表达率高于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,Fas蛋白阳性表达率逐渐升高;各染毒组大鼠精子数量和精子活动率低于对照组(P0.05);精子畸形率高于对照组(P0.05)。结论染氟雄性大鼠血清睾酮水平降低,激活了生精细胞Fas/FasL系统,从而导致生精细胞损伤。     

谷胱甘肽对锰染毒大鼠抗氧化能力的影响

目的研究谷胱甘肽(GSH)对锰染毒大鼠抗氧化能力的影响。方法将48只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为6组,即空白对照组(生理盐水)、拮抗组(1 mmol/kg GSH)、低剂量染毒组(15 mg/kg MnCl2.4H2O)、高剂量染毒组(30mg/kgMnCl2.4H2O)、低剂量染毒拮抗组(15 mg/kgMnCl2.4H2O和1 mmol/kgGSH)和高剂量染毒拮抗组(30 mg/kg MnCl2.4H2O和1 mmol/kgGSH),每组8只。采用化学比色法检测血清和睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力,并对睾丸组织进行病理学检查。结果与空白对照组比较,高剂量染毒组血清和睾丸组织SOD、CAT及GSH-Px活力均下降(P<0.01);低剂量染毒组血清SOD、CAT、GSH-Px活力和睾丸SOD活力均下降(P<0.05,P<0.01);高剂量染毒拮抗组血清和睾丸组织SOD和CAT活力明显下降(P<0.01)。与相同剂量的单纯锰染毒组比较,低剂量染毒拮抗组血清和睾丸组织SOD、CAT、GSH-Px活力均恢复至对照组水平;高剂量染毒拮抗组血清SOD、CAT、GSH-Px活力均明显上升(P<0.01),睾丸组织SOD和GSH-Px活力明显上升(P<0.01)。病理检查可见低剂量染毒组和高剂量染毒组睾丸生精小管呈现不同程度的变性,生精上皮变薄,管腔内精子较少或缺如。低剂量染毒拮抗组睾丸病理学的改变基本恢复正常;高剂量染毒拮抗组睾丸仍然可见变性的生精小管,管腔内精子较少见。结论GSH可拮抗锰染毒大鼠抗氧化能力的降低,对机体起一定的保护作用。     

谷胱甘肽拮抗锰致雄性大鼠生殖损伤的研究

目的:研究谷胱甘肽(GSH)对锰致雄性大鼠睾丸氧化损伤的拮抗作用。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为3组进行急性和亚急性染毒。染锰组腹腔注射30mg/kgMnCl2.4H2O染毒1周(急性染毒)和4周(亚急性染毒),GSH拮抗组染毒后再给予2周1mmol/kgGSH,对照组染毒后给予生理盐水。TUNEL法检测生精细胞凋亡;化学比色法检测睾丸丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:急性锰染毒时,染锰组生精细胞凋亡指数和睾丸丙二醛含量高于对照组和GSH拮抗组(P<0.01);各组间谷胱甘肽过氧化物酶活性无差异。亚急性锰染毒时,染锰组生精细胞凋亡指数和睾丸丙二醛含量高于对照组和GSH拮抗组(P<0.01),GSH拮抗组高于对照组(P<0.01);染锰组睾丸谷胱甘肽过氧化物酶活性低于对照组和GSH拮抗组(P<0.01)。结论:及时补充谷胱甘肽可通过抑制脂质过氧化作用而拮抗锰引起的雄性大鼠生精细胞凋亡。     

砷和氟对大鼠睾丸组织caspase-3和caspase-9表达的影响

目的研究慢性砷染毒、氟染毒及联合染毒大鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-9表达的变化。方法将40只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照(普通饲料)组、砷染毒(高砷饲料,含砷量为10.000 mg/kg)组、氟染毒(高氟饲料,含氟量为16.844 mg/kg)组和砷氟联合染毒(高砷高氟饲料,含砷量为10.000 mg/kg,含氟量为16.844 mg/kg)组,每组10只。采用自由进食饲料方式连续染毒12周。采用TUNEL染色法测定生精小管细胞的凋亡率;采用免疫组化法测定睾丸间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平。结果与对照组比较,各染毒组大鼠生精小管生精细胞的凋亡率均较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。且砷氟联合染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平高于氟染毒组高砷染毒组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论砷及氟联合染毒所致大鼠睾丸组织的损伤及凋亡可能通过激活caspase-3或caspase-9等途径实现。     

氟砷联合染毒对大鼠学习能力的影响

目的观察亚砷酸钠(NaAsO2)与氟化钠(NaF)联合染毒对大鼠学习能力的影响。方法将90只健康成年清洁级SD大鼠按体重随机分为9组,分别为对照(蒸馏水)组和低(1/50 LD50,0.75 mg/kg)、高剂量亚砷酸钠(1/25 LD50,1.5 mg/kg)染毒组及低(1/20 LD50,25 mg/kg)、高剂量氟化钠(1/10 LD50,50 mg/kg)染毒组以及低剂量亚砷酸钠(0.75 mg/kg)+低剂量氟化钠(25 mg/kg)联合染毒组、低剂量亚砷酸钠(0.75 mg/kg)+高剂量氟化钠(50 mg/kg)联合染毒组、高剂量亚砷酸钠(1.5mg/kg)+低剂量氟化钠(25 mg/kg)联合染毒组、高剂量亚砷酸钠(1.5 mg/kg)+高剂量氟化钠(50 mg/kg)联合染毒组,每组10只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒6个月。采用Morris水迷宫试验测定逃避潜伏期,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织中多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量,采用流式细胞仪检测脑组织细胞凋亡率。结果与对照组相比,氟砷联合染毒大鼠的逃避潜伏期延长,脑组织中DA含量下降,细胞凋亡率升高,而脑组织中5-HT含量无明显变化。氟砷联合染毒对大鼠逃避潜伏期、大脑皮质中DA和5-HT含量、脑组织细胞凋亡率的影响均无交互作用(P0.05)。结论氟砷联合有可能通过脑组织中DA含量降低及神经细胞凋亡率升高影响大鼠学习能力。     

溴氰菊酯对成年大鼠睾丸组织的毒性作用

目的为研究溴氰菊酯(deltamethrin,DM)对成年大鼠睾丸组织的毒性作用。方法将60只成年大鼠随机分为5组,即对照(玉米油)组和2.1、4.375、8.75、17.5 mg/kg DM染毒组,每组12只,连续灌胃染毒15 d。测定大鼠每日生精量和雄激素受体(AR)磷酸化蛋白水平,观察睾丸形态的变化。结果与对照组比较,8.75、17.5 mg/kg溴氰菊酯染毒组大鼠睾丸每日生精量均下降;各剂量溴氰菊酯染毒组大鼠睾丸组织中磷酸化AR蛋白表达水平和萎缩生精小管数均较高,生精小管数均减少,生精小管周长均缩短,差异有统计学意义(P0.05)。且随着溴氰菊酯染毒剂量的升高,大鼠睾丸每日生精量、生精小管数和生精小管周长呈逐渐下降的趋势,睾丸组织中磷酸化AR蛋白表达水平和萎缩生精小管数均呈上升趋势。结论 DM可通过提高AR磷酸化水平来抑制AR的活性,导致大鼠睾丸组织损伤及生精能力下降。     

染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系

目的探讨染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为6组,即对照28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组。通过腹腔注射NaF溶液的方法建立氟中毒模型,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,放射免疫的方法检测血清雌二醇水平,采用TUNEL方法检测凋亡的生精细胞。结果随着染毒剂量加大和时间延长,染氟大鼠血清雌二醇水平显著下降(P<005),睾丸氟含量显著升高(P<005),生精细胞凋亡率显著升高(P<005),且血清雌二醇水平与睾丸氟含量和生精细胞凋亡率均呈负相关(P<005)。结论氟在一定剂量和作用时间内可致血清雌二醇水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一。     

Anti-apoptotic effects of curcumin on cadmium-induced apoptosis in rat testes

Cadmium (Cd) is one of the environmental pollutants affecting various tissues and organs including testis. The aim of this study was to investigate the anti-apoptotic effects of curcumin (Cur) on Cd-induced apoptosis in rat testes. The rats were randomly allotted into one of three experimental groups: control, Cd treated and Cd treated with Cur; each group contained 10 animals. The control group received 2 ml/day of dimethyl sulfoxide (DMSO). To induce toxicity, Cd (1 mg/kg body weight) was dissolved in normal saline and subcutaneously injected into rats for 4 weeks. The rats in Cur-treated group was given a daily dose of 100 mg/kg of Cur for 4 weeks. To date, no examinations of the anti-apoptotic properties of Cur on Cd-induced apoptosis in rat testes have been reported. The mean seminiferous tubule diameter, mean testicular biopsy score values and serum testosterone levels were significantly decreased in Cd-treated groups were compared to the control group. Furthermore, the Cur-treated animals showed an improved histological appearance and serum testosterone levels in Cd-treated group. Our data indicate a significant reduction in the activity of in situ identification of apoptosis using terminal dUTP nick end-labeling in testis tissues of the Cd-treated group with Cur therapy. The present study showed that Cur treatment protected testes against toxic effects of Cd. We believe that further preclinical research into the utility of Cur may indicate its usefulness as a potential treatment on the spermatogenesis after testicular injury caused by Cd-treated rats.     

高脂饮食对Sprague Dawley大鼠睾丸发育的影响

目的 研究高脂饮食对青春期雄性Sprague Dawley大鼠睾丸发育过程的影响,并探究该影响是否具有可逆性。方法 将1月龄Sprague Dawley雄性大鼠60只,应用随机数字表法分为对照组（n=10）和营养性肥胖模型组(n=50),分别用普通饲料和高脂饲料喂养8周后,将10只营养性肥胖模型组大鼠和对照组大鼠处死。采用酶联免疫法检测血清睾酮和雌二醇水平,HE染色观察左侧睾丸的组织学改变,Johnsen评分评价睾丸的生精能力。剩余40只大鼠应用随机数字表法分为高脂饮食组(n=13)、正常饮食组(n=13)和减肥组(n=14),后两组大鼠均用普通饲料喂养,高脂饮食组大鼠用高脂饲料喂养,减肥组大鼠在正常饮食的基础上,每日跑步20 min,喂养6周后处死大鼠进行上述睾丸结构和功能研究。结果 高脂饮食8周后,营养性肥胖大鼠的体重明显高于对照组(O=0.006)。营养性肥胖大鼠的血清睾酮水平明显低于对照组(P=0.024),血清雌二醇水平明显高于对照组(P =0.017)。HE染色显示：与对照组比较营养性肥胖大鼠曲精小管细胞层数减少,部分曲精小管萎缩。营养性肥胖大鼠的Johnsen评分明显低于对照组(P=0.000)。高脂饮食组的睾酮水平明显低于正常饮食组(P=0.001)和减肥组(P=0.000),正常饮食组的睾酮水平也明显低于减肥组(P=0.001)。高脂饮食组的雌二醇水平明显高于正常饮食组(P=0.001)和减肥组（P=0.000）,正常饮食组的雌二醇水平也明显高于减肥组(P=0.001)。HE染色显示：高脂饮食组和正常饮食组大鼠睾丸组织的病变无进行性加重;减肥组大鼠睾丸组织的病变较轻。减肥组的Johnsen评分均明显高于其他两组（P=0.000及0.001）。相关性分析显示,Johnsen评分与大鼠体重呈负相关（r=-0.962,P=0.000）;与血清睾酮水平呈正相关(r=0.916,P=0.000)。结论 高脂饮食能导致青春期雄性Sprague Dawley大鼠营养性肥胖。营养性肥胖大鼠表现为睾丸发育不全,生精功能减弱,内分泌功能障碍,运动减肥后以上改变有所改善。肥胖程度与生精功能呈负相关。     

吸烟对雄性大鼠睾丸组织结构及细胞凋亡的影响

目的通过测定吸烟雄鼠睾丸组织结构及细胞凋亡情况,探讨吸烟对雄性生殖系统的损伤机制。方法将清洁级SD雄性大鼠160只随机分为染毒2、4、6、8、12周的低、中、高剂量染毒组及对照组,每组10只。采用呼吸道静式染毒,每日染毒1次,染毒周期为2、4、6、8、12周。采用HE染色及末端转移酶标记技术(TUNEL法)测定大鼠睾丸组织病理学改变及细胞凋亡情况,用ELISA法检测大鼠血浆抑制素B的表达水平。结果吸烟组大鼠睾丸脏器系数从第8周起逐渐减小,与2周各剂量染毒组相比,差异有统计学意义(P0.05)。吸烟组大鼠随着染毒时间的延长和剂量的增加,睾丸组织病理学改变逐渐明显,染毒12周后大鼠睾丸组织支持细胞呈现空泡化,管腔内观察不到游离精子。吸烟组大鼠睾丸细胞凋亡指数随染毒时间及剂量的增加而升高,染毒4周高剂量组、6周中及高剂量组、8周及12周各剂量组睾丸细胞凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。随着染毒时间及剂量的增加,大鼠血浆抑制素B水平逐渐降低,染毒第8周起低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论香烟烟雾中的有害成分可致大鼠睾丸组织结构损伤及睾丸细胞凋亡率增加,并抑制血浆抑制素B分泌。     

Nitric oxide synthase in diabetic rat testicular tissue and the effects of pentoxifylline therapy

Diabetes is known to be associated with erectile dysfunction, retrograde ejaculation, level of testicular hormone, and a decrease in semen quality, respectively. In this project, we aimed to investigate at the molecular level, the effects of NOS on testes pathology in diabetes and examine the effects of pentoxifylline on healing. A total of 50 Wistar albino male rats were divided into five groups: Group I control; Group II only diabetes; Group III and IV diabetes?+?pentoxifylline; Group V only pentoxifylline. Group III rats received 50?mg/kg/day pentoxifylline during two months. In comparison, Group IV rats received saline in the first month followed by 50?mg/kg/day of pentoxifylline for the following month. NOS expression in testicular tissue was assessed using qRT-PCR, western blot, and immunohistochemistry. The mean seminiferous tubule diameter, Johnsen's testicular biopsy score, and serum testosterone levels decreased compared to controls. In contrast, the number of apoptotic cells, the levels of nNOS, iNOS and eNOS mRNA, and protein increased when compared to the control. Upon pentoxifylline therapy NOS decreased suggesting that it contributes to this damage and treatment with pentoxifylline may be effective in reversing this damage.     

Relative and combined effects of ethanol and protein deficiency on gonadal function and histology

The aim of the present study is to analyse the relative and combined effects of ethanol and protein deficiency on serum testosterone and LH, and on gonadal histology, in ethanol fed rats. The study was performed in 32 animals divided into four groups, fed with the Lieber & DeCarli control, 36% ethanol, 2% protein, and 36% ethanol 2% protein containing diets, respectively. Two months later, rats were anaesthetized with pentobarbital and sacrificed, and the right testes and epididymus were carefully removed. Both ethanol and protein deficiency independently lead to a decrease in serum testosterone levels, and to testicular atrophy, lowest testosterone levels and highest degrees of atrophy being observed in the rats receiving the 36% ethanol, 2% protein containing diet. Both serum testosterone and testicular size and weight significantly correlated with final weight and serum albumin. Hypospermia, atrophy of the seminiferous tubules, and reduced epididymal diameter were also observed in this last group of animals. Thus, protein deficiency may contribute to hypogonadism of alcoholics.     

短暂轻度阴囊热应激对小鼠睾丸的损害作用

目的 探讨单次、短暂、轻度阴囊热处理（43℃,15 min）对小鼠睾丸的损害作用。方法 24只成年ICR雄性小鼠,随机分为4组。将热处理组小鼠身体的下1/3部分浸于43℃恒温水浴中15 min,于热处理后0.5 h、2 h和6 h取睾丸组织。将对照组小鼠下腹部浸入22℃水浴15 min,6 h后处死取睾丸组织。采用HE染色对睾丸组织进行病理学检查,采用TUNEL方法检测细胞凋亡,采用western blotting检测睾丸caspase-3蛋白表达。结果 热处理后6 h小鼠睾丸组织生精小管间隙增大,生精小管内细胞排列紊乱,胞浆空泡化明显,核固缩细胞增多,多核精细胞显著增加。与阴性对照组相比,阴囊热处理能够显著诱导小鼠睾丸生殖细胞凋亡,增加睾丸组织裂解型caspase-3蛋白的表达。结论 单次、短暂、轻度阴囊热处理（43℃,15 min）能够明显引起睾丸病理组织学损伤,诱导睾丸生殖细胞凋亡。     

骨髓间充质干细胞移植治疗生精细胞损伤模型大鼠的实验研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MMSCs)在睾丸内定向分化为生精细胞用于治疗实验性雄性不育模型大鼠的可行性。方法:复苏冻存的MMSCs-GFP并培养传代后经睾丸网移植到经白消安处理的生精细胞损伤模型大鼠睾丸曲细精管内,移植后8周采样,观察睾丸质量指数、组织学表现和供体细胞分布,运用免疫荧光检测生殖细胞表面特异标志c-kit的表达。结果:MMSCs-GFP移植组右侧受体睾丸质量指数与模型组大鼠及自体未细胞移植的左侧睾丸相比有差异(P﹤0.01),与正常组大鼠睾丸质量指数相比无差异(P﹥0.05);光镜下显示曲精管内生精上皮明显恢复,荧光显微镜下观察MMSCs-GFP大部分迁移至曲精管基底部,免疫荧光结果显示移植组与自身未移植组相比,睾丸曲细精管内精原细胞表面特异标志基因c-kit表达有差异。结论:细胞冻存不影响MMSCs的增殖能力,MMSCs在体内生精微环境中能够定植并定向分化为生殖细胞。